知识内容展示知识内容展示核心素养对接核心素养对接1.大肠杆菌的培养大肠杆菌的培养和分离和分离2.分离以尿素为氮分离以尿素为氮源的微生物源的微生物科学思维科学思维分析培养基的成分及其作用，比较分析培养基的成分及其作用，比较划线分离法和涂布分离法的异同划线分离法和涂布分离法的异同科学探究科学探究设计实验探究微生物培养的条件设计实验探究微生物培养的条件社会责任社会责任关注有害微生物的控制及宣传健康关注有害微生物的控制及宣传健康生活生活考点一微生物的培养和利用考点一微生物的培养和利用第第29讲微生物的培养、利用及浅尝现代生物技术讲微生物的培养、利用及浅尝现代生物技术1.(2018浙江浙江11月月选考考)回答与微生物培养及应用有关的问题：回答与微生物培养及应用有关的问题：(1)对对培培养养基基进进行行高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌时时，灭灭菌菌时时间间应应从从_时时开开始始计计时时。对对于于不不耐耐热热的的液液体体培培养养基基，一一般般可可将将其其转转入入G6玻玻璃璃砂砂漏漏斗斗中中，采采用用_方式可较快地进行过滤灭菌。方式可较快地进行过滤灭菌。(2)与与酿酿造造果果醋醋相相比比，利利用用大大米米、高高粱粱等等富富含含淀淀粉粉的的原原料料制制醋醋，需需增增加加_的的过过程程。某某醋醋化化醋醋杆杆菌菌培培养养基基由由蛋蛋白白质质胨胨、酵酵母母提提取取物物和和甘甘露露醇醇组组成成，其其中中甘甘露露醇醇的主要作用是的主要作用是_。(3)为为筛筛选选胞胞外外淀淀粉粉酶酶分分泌泌型型菌菌种种，一一般般从从_(A.果果园园树树下下B.肉肉类类加加工工厂厂周周围围C.米米酒酒厂厂周周围围D.枯枯树树周周围围)获获得得土土样样，用用无无菌菌水水稀稀释释，涂涂布布到到含含有有淀淀粉粉的的选选择择培培养养基基上上培培养养，一一段段时时间间后后在在培培养养基基表表面面滴滴加加碘碘液液，可可在在菌菌落落周周围围观观察察到到透透明明的的水水解解圈圈。若若要要筛筛选选酶酶活活性性较较高高的的菌菌种种，需需挑挑选选若若干干个个_比比值值大大的的菌菌落落，分分别别利利用用液液体体培培养养基基振振荡荡培培养养进进行行扩扩增增。然然后后将将培培养养液液离离心心，取取_用于检测酶活性。用于检测酶活性。解析解析 (1)(1)由于高压蒸汽灭菌锅的升温升压需要一定时间，而未达设定温度和压由于高压蒸汽灭菌锅的升温升压需要一定时间，而未达设定温度和压力将导致灭菌不彻底，因此对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从达到设力将导致灭菌不彻底，因此对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从达到设定的温度或压力值时开始计时。对于不耐热的液体培养基，如尿素培养基，一般定的温度或压力值时开始计时。对于不耐热的液体培养基，如尿素培养基，一般可将其转入可将其转入G6玻璃砂漏斗中过滤灭菌，采用抽滤方式可加快过滤速度。玻璃砂漏斗中过滤灭菌，采用抽滤方式可加快过滤速度。(2)相比果相比果醋制作中先利用葡萄糖进行酒精发酵，再进行醋酸发酵，以淀粉为原料制醋，需醋制作中先利用葡萄糖进行酒精发酵，再进行醋酸发酵，以淀粉为原料制醋，需增增加加淀淀粉粉分分解解成成糖糖的的过过程程。醋醋化化醋醋杆杆菌菌培培养养基基由由蛋蛋白白胨胨、酵酵母母提提取取物物和和甘甘露露醇醇组组成成，其其中中甘甘露露醇醇的的主主要要作作用用是是作作为为碳碳源源。(3)结结合合生生物物具具有有适适应应性性的的规规律律，米米酒酒厂厂周周围围的的淀淀粉粉量量相相对对较较多多，因因此此存存在在可可分分泌泌淀淀粉粉酶酶的的分分泌泌型型菌菌种种。分分泌泌的的淀淀粉粉酶酶活活性性越越高高，数数量量越越多多，菌菌落落周周围围的的透透明明水水解解圈圈越越大大。由由于于水水解解圈圈越越大大，表表明明淀淀粉粉分分解解量量越越多多，因因此此水水解解圈圈直直径径与与菌菌落落直直径径比比值值大大的的菌菌落落，分分泌泌的的酶酶活活性性较较高高。经经液液体体培培养养基基振振荡荡培培养养进进行行扩扩增增后后，再再将将培培养养液液离离心心，菌菌种种会会分分布布于于沉沉淀淀，而而分分泌泌的的胞胞外外酶酶分布于上清液，可取上清液测定酶活性。分布于上清液，可取上清液测定酶活性。答案答案 (1)(1)达到设定的温度或压力值抽滤达到设定的温度或压力值抽滤(2)将淀粉分解成糖作为碳源将淀粉分解成糖作为碳源(3)C水解圈直径与菌落直径上清液水解圈直径与菌落直径上清液2.(2018浙浙江江4月月选考考节选)在在淀淀粉粉分分离离生生产产工工艺艺研研究究中中，为为促促进进淀淀粉粉絮絮凝凝沉沉降降，添添加加生生物物絮絮凝凝剂剂(乳乳酸酸菌菌菌菌液液)，其其菌菌株株起起重重要要作作用用。为为了了消消除除絮絮凝凝剂剂中中的的杂杂菌菌，通通常常将将生生产产上上使使用用的的菌菌液液，采采用用_，进进行行单单菌菌落落分分离离，然然后后将将其其_，并进行特性鉴定，筛选得到纯的菌株。并进行特性鉴定，筛选得到纯的菌株。答案答案划线分离法划线分离法(或涂布分离法或涂布分离法)扩大培养扩大培养3.(2017浙浙江江11月月选考考节选)为为了了获获得得优优良良的的酿酿酒酒红红曲曲霉霉菌菌株株，将将原原菌菌株株的的孢孢子子诱诱变变处处理理后后制制成成较较稀稀浓浓度度的的单单孢孢子子悬悬液液，这这样样做做的的目目的的是是在在培培养养时时有有利利于于获获得得_。答案答案单菌落单菌落4.(2017浙江浙江4月月选考考节选)回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：制制作作泡泡菜菜时时，为为缩缩短短发发酵酵周周期期，腌腌制制前前可可加加入入乳乳酸酸菌菌。取取少少量量酸酸奶奶，用用无无菌菌蒸蒸馏馏水水稀稀释释后后，再再用用_蘸蘸取取少少量量的的稀稀释释液液，在在MRS乳乳酸酸菌菌专专用用培培养养基基的的平平板板上上划划线线，以获得乳酸菌单菌落。下图所示的划线分离操作，正确的是以获得乳酸菌单菌落。下图所示的划线分离操作，正确的是_。解解析析从从酸酸奶奶中中分分离离乳乳酸酸菌菌时时，可可采采用用划划线线分分离离法法，方方法法是是用用接接种种环环蘸蘸取取少少量量的的稀稀释释液液，在在MRS乳乳酸酸菌菌专专用用培培养养基基的的平平板板上上划划线线，以以获获得得乳乳酸酸菌菌单单菌菌落落。图图示示的的划划线线分分离离中中B图图方方法法是是正正确确的的，A图图不不分分区区划划线线，但但划划线线太太稀稀疏疏，分分离离效效果果很很差差，B、C、D都都采采用用了了分分区区划划线线，但但C、D都都没没有有注注意意除除第第一一区区外外，之之后后每每区区划划线线的的第第一一条条线线都都需需要要从从上上一区划线的末端开始。一区划线的末端开始。答案答案接种环接种环B5.(2016浙浙江江10月月选考考节选)请请回回答答从从土土壤壤中中分分离离产产脲脲酶酶细细菌菌和和脲脲酶酶固固定定化化实实验验的的有有关关问题：问题：(1)LB固固体体培培养养基基：取取适适量量的的蛋蛋白白胨胨、酵酵母母提提取取物物、NaCl，加加入入一一定定量量的的蒸蒸馏馏水水溶溶解解，再加再加_，灭菌备用。，灭菌备用。(2)尿尿素素固固体体培培养养基基：先先将将适适宜宜浓浓度度的的尿尿素素溶溶液液用用_灭灭菌菌过过的的G6玻玻璃璃砂砂漏漏斗斗过过滤滤，因因为为G6玻玻璃璃砂砂漏漏斗斗_，故故用用于于过过滤滤除除菌菌。然然后后将将尿尿素素溶溶液液加加到到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。(3)取取适适量量含含产产脲脲酶酶细细菌菌的的104、105两两种种土土壤壤稀稀释释液液，分分别别涂涂布布接接种种到到LB固固体体培培养养基基和和尿尿素素固固体体培培养养基基上上，培培养养48h，推推测测固固体体培培养养基基上上生生长长的的菌菌落落数数量量最最少少的的是是_。A.105稀释液尿素固体培养基稀释液尿素固体培养基B.105稀释液稀释液LB固体培养基固体培养基C.104稀释液尿素固体培养基稀释液尿素固体培养基D.104稀释液稀释液LB固体培养基固体培养基在在尿尿素素固固体体培培养养基基上上产产脲脲酶酶细细菌菌菌菌落落周周围围出出现现_，其其原原因因是是细细菌菌产产生生的的脲脲酶酶催化尿素分解产生催化尿素分解产生_所致。所致。解解析析(1)本本实实验验中中的的LB培培养养基基是是要要与与尿尿素素培培养养基基作作对对比比的的，所所以以要要用用琼琼脂脂糖糖替替换换琼琼脂脂。(2)尿尿素素培培养养基基的的灭灭菌菌要要分分开开进进行行，除除尿尿素素外外的的其其他他成成分分仍仍用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌，尿尿素素溶溶液液用用G6玻玻璃璃砂砂漏漏斗斗过过滤滤除除菌菌，再再将将除除菌菌的的尿尿素素加加到到已已灭灭菌菌的的其其他他成成分分中中。G6玻玻璃璃砂砂漏漏斗斗由由于于孔孔径径小小，细细菌菌不不能能滤滤过过，可可用用于于过过滤滤除除菌菌，但但需需要要在在使使用用前前进进行行高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌。(3)由由于于在在土土壤壤中中产产脲脲酶酶的的细细菌菌远远少少于于普普通通细细菌菌，所所以以在在尿尿素素培培养养基基上上的的菌菌落落数数相相对对少少得得多多，另另外外稀稀释释倍倍数数高高的的土土壤壤稀稀释释液液中中细细菌菌数数量量少少，在在培培养养基基上上菌菌落落数数也也相相对对少少。在在尿尿素素固固体体培培养养基基上上产产脲脲酶酶细细菌菌菌菌落落周周围围出出现现红红色色环环带带，这这是是因因为为脲脲酶酶催催化化尿尿素素分分解解产产生氨，使培养基呈碱性，酚红指示剂在碱性下呈红色。生氨，使培养基呈碱性，酚红指示剂在碱性下呈红色。答案答案(1)琼脂糖琼脂糖(2)高压蒸汽孔径小，细菌不能滤过高压蒸汽孔径小，细菌不能滤过(3)A红色环带氨红色环带氨(或或NH3)本本题组对应与与选修修一一P1928，微微生生物物的的利利用用。考考查了了微微生生物物的的培培养养和分离方法。和分离方法。一、大肠杆菌的培养和分离一、大肠杆菌的培养和分离1.大肠杆菌大肠杆菌(1)特性：大肠杆菌是革兰氏特性：大肠杆菌是革兰氏性、性、(代代谢谢类类型型)的的肠肠道道杆杆菌菌，在在肠肠道道中一般对人无害，但若进入人的中一般对人无害，但若进入人的系统，就会对人体产生危害。系统，就会对人体产生危害。(2)用途：是用途：是技术中被广泛采用的工具。技术中被广泛采用的工具。2.实验内容和过程实验内容和过程(1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用培培养养基基扩扩大大培培养大肠杆菌，培养后再在养大肠杆菌，培养后再在培培养养基基上上划划线线进进行行分分离离，随随后后培培养养基基上上就就会形成一个个单独的菌落。会形成一个个单独的菌落。阴阴兼性厌氧兼性厌氧泌尿泌尿基因工程基因工程LB液体液体LB固体平面固体平面(2)实验过程实验过程培养基灭菌培养基灭菌_50mLLB液体培养基和液体培养基和50mLLB固体培养基及培养皿固体培养基及培养皿_灭菌灭菌将培养基分别倒入将培养基分别倒入4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面在装有液体培养基的在装有液体培养基的_中接种大肠杆菌，在摇床上振荡培养中接种大肠杆菌，在摇床上振荡培养12h倒平板倒平板接种接种高压蒸汽高压蒸汽三角瓶三角瓶划线分离划线分离培养观察培养观察菌种保存菌种保存用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液_，在固体培养基，在固体培养基的平板上的平板上_，盖好培养皿，盖好培养皿培养皿培养皿_(盖在下面盖在下面)，放在，放在37恒温培养箱中培养恒温培养箱中培养1224h，可看，可看到划线的末端出现不连续的到划线的末端出现不连续的_在无菌操作下将单菌落用在无菌操作下将单菌落用_取出，再用取出，再用_法接种在法接种在_上，上，_培养培养24h后，置于后，置于_中保存中保存一次一次连续划线连续划线倒置倒置单个菌落单个菌落接种环接种环划线划线斜面斜面374冰箱冰箱二、分离以尿素为氮源的微生物二、分离以尿素为氮源的微生物1.菌种特点菌种特点含有含有_，可以通过降解，可以通过降解_作为其生长的氮源。作为其生长的氮源。2.培养基培养基用以用以_为唯一氮源的培养基培养，以为唯一氮源的培养基培养，以_培养基为对照。培养基为对照。3.实验原理实验原理(1)筛筛选选以以尿尿素素为为氮氮源源的的微微生生物物，可可使使用用以以尿尿素素为为唯唯一一氮氮源源的的_培培养养基基进进行行培培养选择。养选择。(2)细细菌菌合合成成的的脲脲酶酶能能将将尿尿素素分分解解成成_，致致使使pH升升高高，使使酚酚红红指指示示剂剂_。脲酶脲酶尿素尿素尿素尿素LB全营养全营养选择选择NH3变红变红4.实验过程实验过程无菌水无菌水涂布分离涂布分离三个三个玻璃刮刀玻璃刮刀24485.反应的鉴定反应的鉴定在在配配制制培培养养基基时时，加加入入指指示示剂剂_，培培养养时时细细菌菌将将尿尿素素分分解解产产生生碱碱性性的的氨氨，使使培养基上菌落周围出现培养基上菌落周围出现_。酚红酚红红色的环带红色的环带1.培养基培养基(1)培培养养基基是是指指微微生生物物生生存存的的环环境境和和营营养养物物质质，一一般般都都含含有有五五大大营营养养要要素素：即即：_、_、_、_、_。一一般般来来讲讲，“细细菌菌喜喜、霉菌喜、霉菌喜”，大大肠肠杆杆菌菌一一般般采采用用_培培养养基基，其其主主要要成成分分为为_、_、氯氯化化钠钠、水水等等，若若要要扩扩大大培培养养，则则采采用用_培培养养基基，若若要要分分离离获获得得纯纯种种，则则采采用用_培培养养基基，这这两两者者的的主主要要区区别别在在于于后后者者加加入入了了_。霉菌培养基一般用。霉菌培养基一般用_配制成或添加配制成或添加_的豆芽汁。的豆芽汁。水水无机盐无机盐碳源碳源氮源氮源生长因子生长因子荤荤素素LB蛋白胨蛋白胨酵母提取物酵母提取物LB液体液体LB固体固体琼脂琼脂无机物无机物蔗糖蔗糖(2)种类种类划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理性质物理性质液体培养基液体培养基不加凝固剂不加凝固剂工业生产、扩大培养工业生产、扩大培养半固体半固体培养基培养基加凝固剂，如加凝固剂，如_观察微生物的运动、观察微生物的运动、分类、鉴定分类、鉴定固体培养基固体培养基微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种活菌计数、保藏菌种琼脂琼脂化学成分化学成分天然培养基天然培养基 含化学成分不明确的天然物质含化学成分不明确的天然物质工业生产工业生产合成培养基合成培养基培养基成分明确培养基成分明确(用化学成分已知的化用化学成分已知的化学物质配成学物质配成)分类、鉴定分类、鉴定用途用途选择培养基选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长生物的生长培养、分离出特定微培养、分离出特定微生物生物(如尿素固体培养如尿素固体培养基基)鉴别培养基鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生鉴别不同种类的微生物物(3)微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用对照组对照组作用作用现象现象结论结论未接种培养基未接种培养基有无杂菌污染的判有无杂菌污染的判断断未接种的培养皿中无未接种的培养皿中无菌落生长菌落生长未被杂菌污染未被杂菌污染接种的接种的LB全营养培全营养培养基养基选择培养基筛选作选择培养基筛选作用的确认用的确认LB全营养培养基上全营养培养基上的菌落数大于选择培的菌落数大于选择培养基上的数目养基上的数目选择培养基具有选择培养基具有筛选作用筛选作用2.无菌操作无菌操作(1)通通 常常 在在 _中中 进进 行行 ， 超超 净净 台台 使使 用用 前前 _ min， 打打 开开 _和和_，注意打开紫外灯后，注意打开紫外灯后_，使用时必须关闭，使用时必须关闭_。(2)消消毒毒和和灭灭菌菌：培培养养基基、培培养养皿皿、试试管管、三三角角瓶瓶、枪枪头头、接接种种环环、镊镊子子等等用用具具通通常常用用_灭菌，这些用具通常需要用灭菌，这些用具通常需要用或或报报纸纸包包好好，其其中中容容器器先先要要用用_封口再包好，放入灭菌锅中，在封口再包好，放入灭菌锅中，在_(压压力力)下下灭灭菌菌_min。实验用的棉花不能用。实验用的棉花不能用，因，因易易吸吸水水，吸吸水水后后容容易易引引起污染。如果培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用起污染。如果培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用g/cm2压压力力(以上以上)灭菌灭菌min。由于尿素加热会分解，只能用。由于尿素加热会分解，只能用过过滤滤除除菌菌，但但玻璃砂漏斗使用前也要在玻璃砂漏斗使用前也要在下用纸包好灭菌，用后还需用下用纸包好灭菌，用后还需用1mol/L的的浸浸泡，并泡，并，再用，再用洗至洗出液呈中性，洗至洗出液呈中性，后后保保存存。将培养基转移到三角瓶和试管中时必须用将培养基转移到三角瓶和试管中时必须用，以免培养基沾到，以免培养基沾到和和，发生污染。，发生污染。超净台超净台30紫外灯紫外灯过滤风过滤风人必须离开人必须离开紫外灯紫外灯高压蒸汽高压蒸汽牛皮纸牛皮纸棉塞或封口膜棉塞或封口膜1211kg/cm215脱脂棉脱脂棉脱脂棉脱脂棉5009030G6玻璃砂漏斗玻璃砂漏斗121HCl抽滤去酸抽滤去酸蒸馏水蒸馏水干燥干燥三角漏斗三角漏斗三角漏斗三角漏斗试管口试管口(3)消毒和灭菌比较消毒和灭菌比较条件条件结果结果常用方法常用方法应用范围应用范围消毒消毒较为温和的较为温和的物理或化学物理或化学方法方法仅杀死物体表面或仅杀死物体表面或内部的部分对人体内部的部分对人体有害的微生物有害的微生物紫外线消毒法紫外线消毒法接种室、接种室、_化学药剂消毒法化学药剂消毒法用用_擦拭双手，擦拭双手，用氯气消毒水源用氯气消毒水源超净台超净台酒精酒精灭菌灭菌强烈的理强烈的理化因素化因素杀死物体内外杀死物体内外_的微生物，包括的微生物，包括_灭菌法灭菌法_干热灭菌法干热灭菌法玻璃器皿、金属工具玻璃器皿、金属工具_灭菌法灭菌法_及容器的灭菌及容器的灭菌过滤除菌过滤除菌不能不能_的化合的化合物，要用物，要用G6_过滤过滤所有所有芽孢和孢子芽孢和孢子灼烧灼烧接种工具接种工具高压蒸汽高压蒸汽培养基培养基加热灭菌加热灭菌玻璃砂漏斗玻璃砂漏斗3.微生物接种的两种常用方法比较微生物接种的两种常用方法比较比较比较划线分离法划线分离法涂布分离法涂布分离法工具工具_原理原理通过通过_在固体培养基表面在固体培养基表面_划线的操作，将聚集的菌划线的操作，将聚集的菌种逐步种逐步_到培养基表面。在到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由一数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即细胞群体，即_将菌液用将菌液用_进行梯度稀释，然后将不同进行梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别用稀释度的菌液分别用_涂布到固体培养涂布到固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成细胞，从而能在培养基表面形成_特点特点方法简单，但方法简单，但_计数计数单菌落单菌落_，可用于计数，但操作复，可用于计数，但操作复杂些杂些目的目的使培养基上形成单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体使培养基上形成单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体菌落菌落接种环接种环玻璃刮刀玻璃刮刀接种环接种环连续连续稀释分散稀释分散菌落菌落无菌水无菌水玻璃刮刀玻璃刮刀单个的菌落单个的菌落不适宜不适宜更易分开更易分开4.菌种保存菌种保存选用选用培养基，于培养基，于中中保保存存。用用灼灼烧烧后后的的接接种种环环从从斜斜面面取取菌种时，往往要先使接种环接触菌种时，往往要先使接种环接触以达到以达到的的目目的的，然然后后再再取取菌菌体。体。5.接种完成后应将培养皿接种完成后应将培养皿培养，目的是：防止水蒸气凝结成的水滴落入培养，目的是：防止水蒸气凝结成的水滴落入冲散菌落，影响单菌落的冲散菌落，影响单菌落的。固体斜面固体斜面4冰箱冰箱培养基培养基冷却冷却倒置倒置培养基培养基基表面基表面形成和分离形成和分离角度围绕微生物的利用考查科学实践的能力角度围绕微生物的利用考查科学实践的能力1.(2018浙浙江江五五校校联考考)某某村村庄庄有有一一条条小小溪溪，近近几几年年由由于于上上游游几几家家乳乳胶胶厂厂不不断断向向其其中中排排放放废废水水，小小溪溪变变得得不不再再清清澈澈。某某同同学学想想测测定定该该溪溪水水中中的的细细菌菌含含量量情情况况。回回答答下下列问题：列问题：(1)先先根根据据所所学学知知识识制制备备LB培培养养基基。制制备备该该培培养养基基的的步步骤骤是是：计计算算称称量量溶溶化化灭菌灭菌倒平板，下列关于制备倒平板，下列关于制备LB培养基的叙述，错误的是培养基的叙述，错误的是_。A.培养基应先调培养基应先调pH再进行灭菌再进行灭菌B.培养基应先灭菌再分装到培养皿培养基应先灭菌再分装到培养皿C.溶化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦溶化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦D.灭菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在灭菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在121，500g/cm2压力下灭菌压力下灭菌15分钟分钟(2)该该同同学学利利用用上上述述制制备备的的培培养养基基来来检检测测水水样样中中的的细细菌菌数数量量，他他所所选选择择的的分分离离方方法法应应是是_；该该同同学学在在接接种种前前，随随机机取取若若干干灭灭菌菌后后的的空空白白平平板板先先行行培培养养了了一一段段时时间间，这这样样做做的的目目的的是是_。接接种种在在超超净净工工作作台台上上进进行行，工工作作台台上上实实验验前前一一段时间需打开，实验中需关闭的是段时间需打开，实验中需关闭的是_(A.酒精灯酒精灯B.照明灯照明灯C.紫外线紫外线D.过滤风过滤风)(3)值值得得注注意意的的是是，他他所所选选择择的的这这种种方方法法统统计计的的结结果果往往往往比比实实际际细细菌菌的的数数目目要要低低，这这是是因为因为_ (不不考考虑虑实实验验操作原因引起的细菌数目的变化操作原因引起的细菌数目的变化)(4)该该同同学学欲欲将将所所分分离离出出的的某某种种细细菌菌临临时时保保藏藏，应应接接种种到到试试管管的的_培培养养基基上上，等等菌菌落长成后，放入冰箱低温保藏。落长成后，放入冰箱低温保藏。解解析析如如果果培培养养基基中中有有葡葡萄萄糖糖，为为防防止止葡葡萄萄糖糖分分解解碳碳化化，要要用用500g/cm2压压力力(90以以上上)灭灭菌菌30min，题题中中培培养养基基为为LB培培养养基基，高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌锅锅在在121，1kg/cm2压压力力下下灭灭菌菌15分分钟钟；微微生生物物的的分分离离方方法法有有划划线线分分离离法法和和涂涂布布分分离离法法，划划线线分分离离法法不不能能计计活活菌菌数数，涂涂布布分分离离法法只只能能计计活活菌菌数数，所所以以统统计计的的结结果果往往往往比比实实际际细细菌菌的的数数目目要要低低，接接种种前前，随随机机取取若若干干灭灭菌菌后后的的空空白白平平板板先先行行培培养养了了一一段段时时间间，可可以以检检测测灭灭菌菌是是否否彻彻底底；菌菌种种的的保存应接种在斜面上，保存应接种在斜面上，37培养培养24h后，于后，于4冰箱中保存。冰箱中保存。答案答案(1)D(2)(稀释稀释)涂布分离法检查平板灭菌是否彻底涂布分离法检查平板灭菌是否彻底C(3)该方法只能统计样品中活菌的数目，死菌无法统计该方法只能统计样品中活菌的数目，死菌无法统计当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落(4)斜面斜面2.(2018金金丽衢衢十十二二校校联考考)普普通通酵酵母母菌菌直直接接利利用用淀淀粉粉的的能能力力很很弱弱，有有人人将将地地衣衣芽芽孢孢杆杆菌菌的的淀淀粉粉酶酶基基因因转转入入酵酵母母菌菌中中，经经筛筛选选得得到到了了可可高高效效利利用用淀淀粉粉的的工工程程酵酵母母菌菌菌菌种种(过程如图过程如图1所示所示)(1)图图1中中，为为达达到到筛筛选选目目的的，平平板板内内的的固固体体培培养养基基应应以以_作作为为唯唯一一碳碳源源。过程需重复几次，目的是过程需重复几次，目的是_。(2)某某同同学学尝尝试试过过程程的的操操作作，其其中中一一个个平平板板经经培培养养后后的的菌菌落落分分布布如如图图2所所示示。该该同学的接种方法是同学的接种方法是_；推测该同学接种时可能的操作失误是；推测该同学接种时可能的操作失误是_。(3)上述工程酵母菌培养过程中，有关操作正确的是上述工程酵母菌培养过程中，有关操作正确的是_。A.玻璃刮刀用火焰灼烧进行灭菌玻璃刮刀用火焰灼烧进行灭菌B.培养基分装到培养皿后进行灭菌培养基分装到培养皿后进行灭菌C.倒平板和取菌液都必须在酒精灯火焰旁进行倒平板和取菌液都必须在酒精灯火焰旁进行D.获得的菌种如果需要保存，可置于获得的菌种如果需要保存，可置于37恒温保存恒温保存解解析析(1)为为筛筛选选得得到到高高效效利利用用淀淀粉粉的的工工程程酵酵母母菌菌菌菌种种，固固体体培培养养基基应应以以淀淀粉粉作作为为唯唯一一碳碳源源。多多次次重重复复筛筛选选是是为为获获得得高高效效利利用用淀淀粉粉的的工工程程酵酵母母菌菌的的纯纯化化菌菌种种。(2)由由图图2的的结结果果表表明明，该该同同学学采采用用的的是是涂涂布布分分离离法法，其其操操作作的的失失误误是是涂涂布布不不均均匀匀，造造成成平平板板上上菌菌落落未未均均匀匀分分布布。(3)涂涂布布操操作作用用的的玻玻璃璃刮刮刀刀通通常常保保存存在在70%酒酒精精中中，使使用用前前引引燃燃酒酒精精，火火焰焰熄熄灭灭后后待待其其冷冷却却后后使使用用；培培养养基基通通常常先先灭灭菌菌，后后趁趁热热倒倒平平板板；保保存存菌菌种种通通常常使使用用斜斜面面培培养养基基，在在4冰冰箱箱中中保保存存；倒倒平平板板和和取取菌菌液液都都必必须须在在酒酒精精灯灯火火焰焰旁旁进进行行，这这是是无无菌操作要求。菌操作要求。答案答案(1)淀粉筛选出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌种淀粉筛选出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(2)涂布分离法涂布不涂布分离法涂布不均匀均匀(3)C考点二浅尝现代生物技术考点二浅尝现代生物技术 (2015(2015浙浙江江10月月选考考节选)科科研研人人员员拟拟将将已已知知的的花花色色基基因因(目目的的基基因因)转转入入矮矮牵牵牛牛的的核基因组中，培育新花色的矮牵牛。请回答：核基因组中，培育新花色的矮牵牛。请回答：(1)取取田田间间矮矮牵牵牛牛的的幼幼嫩嫩叶叶片片，经经自自来来水水冲冲洗洗，先先用用70%_浸浸泡泡，再再用用5%次次氯酸钠浸泡，最后用氯酸钠浸泡，最后用_清洗，作为转基因的受体材料。清洗，作为转基因的受体材料。(2)取出试管苗，在适宜的光照、温度和取出试管苗，在适宜的光照、温度和80%以上的以上的_等条件下进行炼苗。等条件下进行炼苗。解解析析(1)用用作作组组培培的的外外植植体体若若取取自自自自然然环环境境则则需需要要消消毒毒，方方法法是是外外植植体体经经自自来来水水冲冲洗洗，先先用用70%酒酒精精浸浸泡泡，再再用用5%次次氯氯酸酸钠钠浸浸泡泡，最最后后用用无无菌菌水水清清洗洗，才才能能用用于于接接种种。(2)组组培培时时，试试管管苗苗需需经经炼炼苗苗才才能能定定植植，炼炼苗苗时时需需将将试试管管苗苗从从培培养养瓶瓶中中取取出出，移栽至具适宜的光照、温度和较高湿度的环境中。移栽至具适宜的光照、温度和较高湿度的环境中。答案答案(1)酒精无菌水酒精无菌水(2)湿度湿度1.组织培养就是取一部分组织培养就是取一部分，如根、茎、花瓣、叶或花粉等，在，如根、茎、花瓣、叶或花粉等，在的的条件下接种在三角瓶中的条件下接种在三角瓶中的上，给予一定的上，给予一定的，使使之之产产生生，或进而，或进而。组织培养必须在培养基中加入。组织培养必须在培养基中加入和和。两者的。两者的决决定定组组织织是是生生根根还还是是生生芽芽。当当细细胞胞分分裂裂素素与生长素的比例与生长素的比例 时，诱导时，诱导的生成，两者比例大致的生成，两者比例大致时时，愈愈伤伤组组织织继继续续；当细胞分裂素与生长素的比例较；当细胞分裂素与生长素的比例较时，会趋于生时，会趋于生。2.本实验首先用细胞分裂素相对较本实验首先用细胞分裂素相对较 和生长素相对较和生长素相对较的的培培养养基基进进行培养，获得行培养，获得；然后将丛状苗；然后将丛状苗培培养养。分分株株后后，再再移移入入含含较较多多的的培养基中，使其生根；将生根的苗从三角瓶中移至培养基中，使其生根；将生根的苗从三角瓶中移至或或中继续生长；苗健壮后再移至中继续生长；苗健壮后再移至。本本题组对应选修一修一P59P61，植物的，植物的组织培养培养植物组织植物组织无菌无菌琼脂培养基琼脂培养基光照和温度光照和温度愈伤组织愈伤组织生根发芽生根发芽生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素摩尔浓度比摩尔浓度比高高芽芽相等相等生长而不分化生长而不分化低低根根多多少少发芽发芽丛状苗丛状苗分株分株生长素生长素生根生根草炭土草炭土蛭石蛭石土中土中1.植物组织培养的原理植物组织培养的原理(1)理论基础：植物细胞具有理论基础：植物细胞具有。(2)植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程全能性全能性脱分化脱分化再分化再分化(3)植物组织培养影响因素植物组织培养影响因素选材：菊花幼苗的茎段，每段至少带有一片叶。选材：菊花幼苗的茎段，每段至少带有一片叶。培培养养基基：植植物物组组织织培培养养需需要要适适宜宜的的培培养养基基，常常用用的的是是MS培培养养基基，在在配配制制好好的的培培养养基基中中，常常常常需需要要添添加加生生长长素素和和细细胞胞分分裂裂素素两两种种植植物物激激素素。实实验验中中使使用用的的生长素类似物是生长素类似物是，细胞分裂素类似物是，细胞分裂素类似物是。其他条件：其他条件：pH、温度和光照等条件对植物组织培养也很重要。、温度和光照等条件对植物组织培养也很重要。萘乙酸（萘乙酸（NAA）苄基腺嘌呤（苄基腺嘌呤（BA）2.菊花组织培养过程菊花组织培养过程高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌消毒消毒乙醇乙醇次氯酸钠次氯酸钠无菌水无菌水酒精灯火焰酒精灯火焰灼烧灭菌灼烧灭菌发芽发芽蔗糖蔗糖BANAA1825丛状苗丛状苗生根生根蔗糖蔗糖NAA蛭石蛭石80%自然湿度自然湿度角度围绕植物组织培养考查科学实践的能力角度围绕植物组织培养考查科学实践的能力1.某某愈愈伤伤组组织织在在如如下下图图甲甲所所示示的的培培养养基基中中培培养养一一段段时时间间后后得得到到如如图图乙乙所所示示的的结结构构，经经分析可知该培养基中分析可知该培养基中()A.细胞分裂素多，生长素少细胞分裂素多，生长素少B.细胞分裂素少，生长素多细胞分裂素少，生长素多C.细胞分裂素和生长素用量相等细胞分裂素和生长素用量相等D.只有生长素只有生长素解解析析从从图图乙乙中中可可知知该该培培养养基基有有利利于于生生根根且且抑抑制制芽芽的的形形成成，所所以以可可推推断断该该培培养养基基中中生生长素多，细胞分裂素少，长素多，细胞分裂素少，B正确。正确。答案答案B2.(2018温州模温州模拟节选)菊花组织培养的部分过程如下图所示：菊花组织培养的部分过程如下图所示：(1)过过程程利利用用_(填填“较较高高”或或“较较低低”)渗渗透透压压，使使原原生生质质体体产产量量大大幅幅提提高高，但但存存活活率率却却因因此此而而降降低低，分分析析降降低低的的原原因因可可能能是是_。过过程程细细胞胞壁壁形形成后，可逐渐成后，可逐渐_渗透压。渗透压。(2)幼幼苗苗带带有有芽芽结结构构，也也就就有有了了_组组织织，所所以以不不通通过过_阶阶段段就就可可直直接接形形成成丛丛状状苗苗。过过程程应应在在_(从从具具体体功功能能角角度度)培培养养基基中中进进行行，全全过过程程对对光光照照要求是要求是_。A.早期每天早期每天24h光照，后期每天光照，后期每天24h黑暗黑暗B.每天一定时长的光照每天一定时长的光照C.早期每天早期每天24h黑暗，后期每天黑暗，后期每天24h光照光照D.每天每天24h黑暗黑暗解解析析植植物物原原生生质质体体的的获获得得方方法法是是：在在0.50.6mol/L的的甘甘露露醇醇溶溶液液环环境境(较较高高渗渗透透压压)下下用用纤纤维维素素酶酶和和果果胶胶酶酶混混合合液液处处理理，外外界界溶溶液液浓浓度度高高于于细细胞胞液液浓浓度度，细细胞胞失失水水，形形成成细细胞胞壁壁后后，应应降降低低渗渗透透压压。植植物物的的顶顶芽芽具具有有分分生生组组织织，不不需需要要脱脱分分化化就就可可以以形形成成丛丛状状苗苗，植植物物组组织织培培养养是是在在无无菌菌条条件件下下，取取一一部部分分植植物物的的组组织织接接种种在在琼琼脂脂培培养养基基上上，给给予予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽，全过程需要光照。一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽，全过程需要光照。答案答案(1)较高细胞失水死亡降低较高细胞失水死亡降低(2)分生脱分化发芽分生脱分化发芽B生长素和细胞分裂素用量比例与根、芽的分化生长素和细胞分裂素用量比例与根、芽的分化生长素和细胞分裂素比值生长素和细胞分裂素比值结果结果比值高时比值高时促进根的分化，抑制芽的形成促进根的分化，抑制芽的形成比值低时比值低时促进芽的分化，抑制根的形成促进芽的分化，抑制根的形成比值适中比值适中促进愈伤组织的生长促进愈伤组织的生长【特别提醒】【特别提醒】1.菊菊花花茎茎段段至至少少带有有一一片片叶叶的的原原因因：易易区区分分形形态学学上上端端和和下下端端；腋腋芽芽处有有分分生生组织，不，不经过脱分化就可以形成脱分化就可以形成丛状苗。状苗。2.植物植物组织培养用人工合成的激素培养用人工合成的激素类似物而不是天然的植物激素的原因：似物而不是天然的植物激素的原因： 植物体内植物体内存在使天然激素分解的存在使天然激素分解的酶，天然激素的作用和存在，天然激素的作用和存在时间较短。而植物体内没有使人短。而植物体内没有使人工合成的激素工合成的激素类似物分解的似物分解的酶，所以存在，所以存在时间长，作用效果明，作用效果明显。