植物植物(zhw)组织培组织培养养植物体细胞植物体细胞(xbo)杂杂交交回顾回顾(hug)：v植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？v植物组织培养技术的原理是什么？植物组织培养技术的原理是什么？细胞的全能性细胞的全能性第一页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)第二页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)专题(zh(zhununt)t)2细胞工程动物细胞工程(gngchng)(gngchng)课题课题(kt)(kt)(kt)(kt)2 2第三页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)动物动物(dngw)细胞培养细胞培养动物动物(dngw)细胞融合细胞融合单克隆抗体单克隆抗体(kngt)技技术术核移植核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术其它动物细胞工程的基础其它动物细胞工程的基础第四页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)一、动物一、动物(dngw)(dngw)细胞培养的应用和概念：细胞培养的应用和概念：1 1、概念：、概念：动物细胞动物细胞培养就是从动物有机培养就是从动物有机体中取出相关的体中取出相关的组织组织(zzh)(zzh), ,将它分散成将它分散成单单个细胞个细胞, ,然后然后, ,放在放在适宜的适宜的培养基培养基中中, ,让让这些这些细胞生长和增殖细胞生长和增殖. .2、原理：、原理：细胞细胞(xbo)(xbo)增殖增殖第五页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)动物胚胎或幼龄动物胚胎或幼龄(yu ln)(yu ln)动物的组织、器官动物的组织、器官细胞细胞(xbo)(xbo)悬悬浮液浮液10代细胞代细胞(xbo)(xbo)50代细胞代细胞传代培养传代培养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液加培养液原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎细胞株细胞株细胞系细胞系遗传物质遗传物质未未改变改变遗传物质遗传物质已已改变改变3、过程、过程第六页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)（1 1）细胞贴壁：）细胞贴壁： 悬液中分散悬液中分散(fnsn)(fnsn)的细胞很快就贴附在瓶的细胞很快就贴附在瓶壁上（单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面壁上（单层）。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。光滑、无毒、易于贴附。（2 2）接触抑制：）接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触(jich)(jich)时，细时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触(jich)(jich)抑制。抑制。动物动物(dngw)细胞培养特点细胞培养特点：贴壁生长、接触抑制贴壁生长、接触抑制第七页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)细胞细胞(xbo)贴壁过程贴壁过程培养瓶或培养皿壁要求：培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑表面光滑(gung hu)(gung hu)、无毒、易、无毒、易于帖附。于帖附。第八页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)(3)原代培养(piyng) (primary culture)定义：定义：指将要培养的动物细胞取出后，先用指将要培养的动物细胞取出后，先用胰胰蛋白酶蛋白酶等使组织分散等使组织分散(fnsn)(fnsn)成单个细胞，然后配成单个细胞，然后配制成一定浓度的制成一定浓度的细胞悬液细胞悬液，再将该悬液放入，再将该悬液放入培培养瓶中养瓶中培养。培养。过程：从动物机体中取出组织过程：从动物机体中取出组织 剪碎剪碎 加胰蛋加胰蛋白酶白酶 细胞游离细胞游离 制成细胞悬液制成细胞悬液 将细胞将细胞接种到接种到培养培养(piyng)(piyng)瓶内瓶内 培养（培养（1-21-2天换一次培养液）天换一次培养液） 细胞贴壁生长细胞贴壁生长 长成单层细胞长成单层细胞第九页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)定义：定义：当原代培养的当原代培养的细胞生长停止细胞生长停止，这时如，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白胰蛋白酶酶等等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接养瓶内转接(zhun ji)(zhun ji)到新的培养瓶内，这个过程到新的培养瓶内，这个过程称传代培养称传代培养(4)(4)传代培养传代培养 (subculture)(subculture)第十页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)细胞细胞(xbo)(xbo)(xbo)(xbo)株：传代细胞株：传代细胞(xbo)(xbo)(xbo)(xbo)一般能传到一般能传到40-40-5050代，代，遗传物质一般不会发生改变遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。，叫细胞株。强调：细胞系、细胞株（强调：细胞系、细胞株（了解即可，老课本了解即可，老课本(kbn)(kbn)体系体系）细胞系：传代细胞系：传代5050代以后不能再传下去，部分代以后不能再传下去，部分(b fen)(b fen)(b fen)(b fen)细胞细胞遗传物质发生了改变遗传物质发生了改变，能连续传代，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。获得不死性，叫细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。传代培养。第十一页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)细胞悬细胞悬浮液浮液培养瓶培养瓶中培养中培养5050代代细胞细胞无限传无限传代代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系知识点小结：各个知识点小结：各个(gg)(gg)(gg)(gg)新名词之间的联系新名词之间的联系多数组织细胞固定在表面多数组织细胞固定在表面生长和分裂。生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质改变(gibin)第十二页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等微量元素等）3、温度、温度(wnd)和和PH 温度温度36.5+0.5度，pH7.27.44、气体环境、气体环境 O2和和CO2（95%空气和空气和5% CO2 ）4、动物、动物(dngw)细胞培养条件细胞培养条件保证保证(bozhng)(bozhng)细细胞顺利的生长增胞顺利的生长增殖殖离体培养的细胞对离体培养的细胞对微生物和有毒物质微生物和有毒物质没有防御能力没有防御能力能否用胃蛋白酶代替能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？胰蛋白酶？第十三页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)第十四页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)问题问题(wnt)(wnt)3 3：为什么用胰蛋白酶处理？：为什么用胰蛋白酶处理？问题问题1 1：、为什么选用：、为什么选用(xunyng)(xunyng)动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？培养材料？因为其细胞生命力旺盛，分裂能力因为其细胞生命力旺盛，分裂能力(nngl)(nngl)强，分化程度低。强，分化程度低。问题问题2 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。 问题问题4 4：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？动物细胞培养的最适动物细胞培养的最适PHPH值为值为，胰蛋白酶作用的适宜，胰蛋白酶作用的适宜PHPH为为，胃，胃蛋白酶适宜蛋白酶适宜PHPH为为2.2.胃蛋白酶在胃蛋白酶在PHPH为的动物细胞培养中无活性。为的动物细胞培养中无活性。问题问题5 5：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。第十五页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)问题问题6 6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物(zhw)(zhw)组培培组培培养基有何独特之处？养基有何独特之处？问题问题7 7、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样(nyng)(nyng)最终最终培养成新个体？培养成新个体？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清动物血清(xuqng)(xuqng)等。独特之处有：等。独特之处有：1 1、液体培养基、液体培养基 2 2、成分、成分中有动物血清等中有动物血清等不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体动物个体问题问题8 8、动物细胞培养的原理：、动物细胞培养的原理：细胞增殖。细胞增殖。问题问题9 9、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在1010代以内，代以内，为什么？为什么？1010代以内的细胞代以内的细胞遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。第十六页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)5.5.动物细胞培养技术动物细胞培养技术(jsh)(jsh)的应用的应用: :1.1.蛋白质生物制品的生产蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.2.应用于基因工程应用于基因工程 主要用于作为受体细胞主要用于作为受体细胞3.3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.4.细胞的生理、药理、病理研究细胞的生理、药理、病理研究(ynji)(ynji) 如用于筛选抗癌药物如用于筛选抗癌药物 第十七页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)6、植物、植物(zhw)组织培养和动物细胞培养的比较：组织培养和动物细胞培养的比较：比比较项目目植物植物组织培养培养动物物细胞培养胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成分培养基特有成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 促促- - - - 动物血清动物血清培养培养结果果植物体植物体细胞株、细胞系细胞株、细胞系培养目的培养目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株无病毒植株获得细胞或细胞获得细胞或细胞分泌蛋白分泌蛋白取材取材植物幼嫩部分或植物幼嫩部分或花药花药胚胎或幼龄动物胚胎或幼龄动物的器官或组织的器官或组织其他条件其他条件无菌无毒，适宜无菌无毒，适宜条件条件无菌无毒，适宜无菌无毒，适宜条件条件第十八页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)复习复习(fx)(fx)回顾回顾1 1、动物、动物(dngw)(dngw)细胞培养的过程、特点及细胞培养的过程、特点及原理？原理？2 2、植物组织培养与动物细胞培养的比、植物组织培养与动物细胞培养的比较？较？第十九页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)二、动物体细胞核移植技术二、动物体细胞核移植技术(jsh)(jsh)和克隆动物和克隆动物1、定义：定义： 动物核移植是将动物的动物核移植是将动物的一个细胞的细一个细胞的细胞核胞核, ,移入一个已经移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中去掉细胞核的卵母细胞中. .使使其重组其重组(zhn z)(zhn z)并发育成一个并发育成一个新的胚胎新的胚胎, ,这个新这个新的胚胎最终发育为的胚胎最终发育为动物个体动物个体. .3、分类分类(fn li)： 胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎细胞分化程胚胎细胞分化程度低，恢复其全度低，恢复其全能性相对容易。能性相对容易。动物体细胞分化程动物体细胞分化程度高，恢复其全能度高，恢复其全能性十分困难性十分困难2、原理：原理： 动物细胞核具有全能性动物细胞核具有全能性第二十一页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)4、体细胞核移植过程、体细胞核移植过程-示动物示动物(dngw)克隆克隆-无性繁殖无性繁殖1.）克隆羊多利）克隆羊多利培育培育(piy)过程：过程：黑面绵羊去黑面绵羊去核卵母细胞核卵母细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核细胞核移植细胞核移植重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期重组胚胎早期重组胚胎胚胎移植胚胎移植另一头绵羊另一头绵羊(minyng)的子宫的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利特别注意：特别注意：克隆动物性状与供克隆动物性状与供体动物完全一样吗？体动物完全一样吗？不可能！不可能！因为：因为：一、供体动物只提供细胞核，一、供体动物只提供细胞核，而细胞质中的遗传物质（如线而细胞质中的遗传物质（如线粒体粒体DNADNA）来自于受体卵母细胞）来自于受体卵母细胞. .二、生物的性状不仅与遗传物质有二、生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境的影响。关，还受环境的影响。供体供体受体受体代孕代孕受体受体第二十二页，共五十八页。动物细胞工程(优质课) 取供体细胞传取供体细胞传代培养代培养1010代以内代以内(y ni)(y ni)的细胞的细胞. .为为什么？什么？用的是去用的是去核的减数核的减数(jin sh)第二第二次分裂中期次分裂中期细胞（细胞（M中期）为什中期）为什么？么？激活激活(j hu)方法：方法：激活目的：激活目的：促融方法：促融方法：电刺激电刺激胚胎移植至代胚胎移植至代孕受体内孕受体内 妊娠、分娩妊娠、分娩2.）核移植流程）核移植流程供体：优质高产奶牛供体：优质高产奶牛受体：普通奶牛（卵受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）母细胞的采集与培养） 1.体积大，易体积大，易操作。操作。2.含有含有促使细胞核表促使细胞核表达全能性的物达全能性的物质和营养条件。质和营养条件。有人说它三个母亲，有人说它三个母亲，对吗？对吗？第二十三页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)供体细胞供体细胞（供核）（供核）细胞培养细胞培养体细胞体细胞卵巢卵巢(luncho)(luncho)卵母卵母细胞细胞（MM中期：中期：供质）供质）去核去核无核卵无核卵母细胞母细胞注入注入(zh r)细胞融细胞融合合重重组组(zh(zhn n z)z)细细胞胞构建重构建重组胚胎组胚胎胚胎胚胎移植移植代孕母代孕母体体生出与供体奶牛生出与供体奶牛遗传基础相同的遗传基础相同的犊牛犊牛归纳归纳:1.1.共分成两大阶段：共分成两大阶段：核移植和胚胎移植核移植和胚胎移植2.2.取卵细胞作受体细胞的原因是取卵细胞作受体细胞的原因是: :它是最大的细胞它是最大的细胞, ,易操作易操作, ,它发它发育可直接表达性状育可直接表达性状3.3.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状性状小结：核移植过程小结：核移植过程第二十四页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)5.体细胞核移植技术的应用体细胞核移植技术的应用(yngyng)前景前景第二十五页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)克隆动物的研究克隆动物的研究(ynji)(ynji)意意义义1.1.克隆动物作为克隆动物作为(zuwi)(zuwi)生物反应器，生产医用蛋白生物反应器，生产医用蛋白2.2.加速改良动物品种加速改良动物品种 3.3.治疗人类疾病提供供体（器官、细胞、组织）治疗人类疾病提供供体（器官、细胞、组织）4.4.保护濒危动物保护濒危动物体细胞核移植技术存在体细胞核移植技术存在(cnzi)的问题的问题1.1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。异常肥胖，发育困难，免疫失调等。2.2.成功率非常低成功率非常低3.3.克隆动物食品的安全性问题。克隆动物食品的安全性问题。第二十六页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)2-2 2-2 动物动物(dngw)(dngw)(dngw)(dngw)细胞融合与细胞融合与单克隆抗体单克隆抗体第二十七页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)一、动物一、动物(dngw)细胞融合（细胞杂交）细胞融合（细胞杂交）1、概念(ginin)(ginin)：指两个或多个指两个或多个(du )(du )动物细胞结合形成一动物细胞结合形成一个细胞的过程。个细胞的过程。2、结果、结果:形成形成单核单核的杂交细胞的杂交细胞3、原理：、原理： 细胞膜的流动性细胞膜的流动性4、诱导方式：、诱导方式：物理法物理法：离心、振动、电激：离心、振动、电激化学法：化学法：聚乙二醇（聚乙二醇（PEG)PEG)生物法生物法：灭活的病毒：灭活的病毒第二十八页，共五十八页。动物细胞工程(优质课) 细胞融合是正常的生命细胞融合是正常的生命(shngmng)活动活动两个细胞两个细胞(xbo)(xbo)正在融正在融合合 受精受精(shu jng)(shu jng)作用作用第二十九页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)诱导融合的方式诱导融合的方式生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒诱导融合诱导融合. .( (利用灭活仙台病毒是动物细胞融合利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。所特有的。 这是由于病毒的磷脂外这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些病毒外壳上的某些(mu xi)(mu xi)糖蛋白可糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。能还有促进细胞融合的功能。) ) 化学法：化学法：聚乙二醇聚乙二醇PEGPEG诱导融合诱导融合. . 物理法：物理法：电激电激融合融合病毒颗粒病毒颗粒(kl)(kl)黏黏 附细胞表面附细胞表面细胞膜连接细胞膜连接(linji)(linji)细胞膜被细胞膜被 病毒颗粒穿通病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞细胞融合、形成杂种细胞第三十页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)5、过程、过程(guchng)(guchng)：动物细胞动物细胞A动物细胞动物细胞B诱导诱导(yudo)，融，融合合1个完整的杂交个完整的杂交(zjio)细胞细胞AB（膜融合、质融合膜融合、质融合）（核融合（核融合）v细胞融合完成的胞融合完成的标志志:细胞核融合成一个核胞核融合成一个核第三十一页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)6、意义：、意义：突破了有性杂交突破了有性杂交(yuxng zjio)(yuxng zjio)方法的局限，使远缘杂方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7、应用：、应用：成为研究细胞遗传成为研究细胞遗传(ychun)(ychun)、细胞免疫、肿瘤和生物、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。新品种培育等的重要手段。最有价值最有价值(jizh)(jizh)的应用的应用制备单克隆抗体制备单克隆抗体第三十二页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)动物动物(dngw)细胞融合细胞融合杂种杂种(zzhng)细胞细胞愈伤组织愈伤组织(zzh)杂种植株杂种植株植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B 原生质体原生质体A原生质体原生质体B植物体细胞杂交植物体细胞杂交去壁去壁原生原生质体质体融合融合植物植物组织组织培养培养物理法物理法化学法化学法生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒动物细胞动物细胞A动物细胞动物细胞B杂种细胞杂种细胞常用方法第三十三页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)主要主要(zhyo)(zhyo)用于制备用于制备单克隆抗体单克隆抗体(kngt)(kngt)获得杂种获得杂种(zzhng)(zzhng)植株植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电刺激）荡、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较第三十四页，共五十八页。动物细胞工程(优质课) 1 1. .动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于(ziy)(ziy)-（ ） A.A.培养基不同；培养基不同； B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。A课堂练习：课堂练习：第三十五页，共五十八页。动物细胞工程(优质课) 2 2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生、在动物细胞培养过程中遗传物质发生(fshng)(fshng)改改变的细胞是变的细胞是 - -（ ） A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞3 3、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 - -（）（） A.A.动物动物(dngw)(dngw)细胞融合细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD第三十六页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)4 4、用于动物细胞、用于动物细胞(xbo)(xbo)培养的组织和细胞培养的组织和细胞(xbo)(xbo)大都取自胚大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞样的组织细胞(xbo)(xbo) （ ） A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B B具有更强的全能性具有更强的全能性 C. C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D第三十七页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)5.5.下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1 1）容器）容器A A中放置的是动物器官或组织。它一般取自中放置的是动物器官或组织。它一般取自 _。（2 2）容器）容器A A中的动物器官或组织首先要进行的处理是中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ，然后用，然后用 酶处理，这是为了使细胞酶处理，这是为了使细胞(xbo)(xbo)分散开来，这样做的目的是分散开来，这样做的目的是 （3 3）培养首先在）培养首先在B B瓶中进行，瓶中的培养基成分有瓶中进行，瓶中的培养基成分有 _等。等。幼龄动物或胚胎的组织幼龄动物或胚胎的组织(zzh)(zzh)或器官或器官剪碎组织剪碎组织(zzh)(zzh) 胰蛋白胰蛋白 使细胞与培养液充分接触使细胞与培养液充分接触 葡萄糖、氨基酸、水、无机盐、促生长因子葡萄糖、氨基酸、水、无机盐、促生长因子与微量元素和动物血清与微量元素和动物血清 第三十八页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第养到第 代，到这时的培养称为代，到这时的培养称为_。为了为了(wi le)(wi le)把把B B瓶中的细胞分装到瓶中的细胞分装到C C瓶中，用瓶中，用 处理处理然后配置成然后配置成 ，再分装。，再分装。在在C C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡，瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡，原因是原因是 10 10 原代培养原代培养(piyng)(piyng) 胰蛋白酶胰蛋白酶(y dn bi mi) 细胞悬液细胞悬液 细胞没有发生癌变细胞没有发生癌变 第三十九页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)（20082008宁夏）宁夏）6.6.生物生物选修选修3 3现代生物科技专题（现代生物科技专题（1515分）回答下列有关动物细胞培养的问题：分）回答下列有关动物细胞培养的问题：(1)(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面胞表面 时，细胞会停止分裂增殖，这种现象时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的称为细胞的 。此时，瓶壁上形成的细胞层数。此时，瓶壁上形成的细胞层数是是 。要使贴壁细胞从瓶壁上分离下来，需。要使贴壁细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是要用酶处理，可用的酶是 。 (2)(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现进而出现 的现象；但极少数细胞可以连续的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成 细胞，该种细胞的黏着性细胞，该种细胞的黏着性 ，细胞，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量膜表面蛋白质（糖蛋白）的量 。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，不得以任何形式用于商业目的。2012 年1月15日，汉水丑生标记。相互相互(xingh)(xingh)接触接触 接触抑制接触抑制 单层（或一层）单层（或一层） 胰蛋白酶胰蛋白酶(y dn bi (y dn bi mi)mi) 衰老甚至衰老甚至(shnzh)(shnzh)死亡死亡 不死性不死性 降低降低 减少减少 第四十页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)（2007宁夏）宁夏）7 B B生物生物选修选修3 3现代生物科技专题现有现代生物科技专题现有A A和和B B两个肉牛品种，两个肉牛品种，A A品种牛的细胞组成可表示为品种牛的细胞组成可表示为A A细胞核、细胞核、A A细细胞质，胞质，B B品种牛则为品种牛则为B B细胞核、细胞核、B B细胞质。细胞质。（1 1）如果要获得一头克隆牛，使其细胞由）如果要获得一头克隆牛，使其细胞由A A细胞核和细胞核和B B细胞质组成，基本步骤是，从细胞质组成，基本步骤是，从A A品种牛体内取出体细胞，品种牛体内取出体细胞，进行体外培养。然后再从培养细胞中取出进行体外培养。然后再从培养细胞中取出_注入注入B B品种牛的品种牛的_卵母细胞，经过某处刺激和培卵母细胞，经过某处刺激和培养后，可形成胚胎，该胚胎被称为养后，可形成胚胎，该胚胎被称为_ _，将该胚胎移入代孕母牛的，将该胚胎移入代孕母牛的_中，通过培育可达到目的。中，通过培育可达到目的。“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012 年1月15日，汉水丑生标记。子宫子宫(zgng)(zgng)细胞核细胞核重组重组(zhn z)(zhn z)胚胎胚胎去核去核第四十一页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)第四十二页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)二、单克隆抗体二、单克隆抗体(kngt)什么是抗体？什么是抗体？由何种细胞产生？由何种细胞产生？主要分布主要分布(fnb)在哪里？在哪里？起何作用？起何作用？效应效应(xioyng)(xioyng)B B细细胞胞血清血清特异性免疫作用特异性免疫作用抗体：抗体：机体受抗原刺激后产生机体受抗原刺激后产生的，并且能与该抗原发生特异性的，并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。结合的具有免疫功能的球蛋白。第四十三页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)克隆克隆(k ln)概念：概念：是指从一个共同的祖先(zxin)，通过无性繁无性繁殖殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体不同层次的克隆：不同层次的克隆：a.分子水平分子水平：如DNA的复制b.细胞水平细胞水平：动物细胞的培养c.个体水平：个体水平：“多莉”羊的产生第四十四页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)接接受受抗抗原原刺刺激激后后，能能分分泌泌针针对对该该抗抗原原的的特特异性抗体异性抗体，在体液免疫中具有重要功能，在体液免疫中具有重要功能(gngnng)(gngnng)(gngnng)(gngnng)。B B淋淋巴巴细细胞胞本本身身是是一一种种终终末末分分化化细细胞胞，通通常常不不再再进进行行细细胞胞分分裂裂，存存活活一一段段时时间间后后便便会会死死亡亡短命细胞短命细胞B淋巴细胞淋巴细胞 所以所以B B淋巴细胞在体外培养时不能无限淋巴细胞在体外培养时不能无限(wxin)(wxin)增殖，而癌细胞是可以无限增殖，而癌细胞是可以无限(wxin)(wxin)增殖的。增殖的。第四十五页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞(xbo)(xbo) 恶恶性性增增殖殖(zngzh)(zngzh)的的转转化化细细胞胞，只只要要营营养养条条件件适适合合可可永永远分裂和存活远分裂和存活长命细胞长命细胞。经经筛筛选选与与驯驯化化，现现已已建建立立多多种种骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞株株没有抗体分泌物没有抗体分泌物。 因此可以因此可以(ky)(ky)利用小鼠骨髓瘤细胞与之融合，利用小鼠骨髓瘤细胞与之融合，就可获得既能无限增殖又能产生单一抗体的细胞。就可获得既能无限增殖又能产生单一抗体的细胞。第四十六页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备极富创造性的方案极富创造性的方案 将能够将能够(nnggu)(nnggu)产生特定抗体的产生特定抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞和具有无限增殖能和具有无限增殖能力的力的骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。子，就是单克隆抗体。米尔斯坦米尔斯坦( (阿根廷阿根廷) )和科勒和科勒( (德国德国) )因此在因此在19841984年获诺贝尔奖。年获诺贝尔奖。第四十七页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)特点：产量低、特异性差、纯度低、反应特点：产量低、特异性差、纯度低、反应(fnyng)(fnyng)不够灵不够灵敏敏1、常、常规(chnggu)(chnggu)抗体制抗体制备一个一个B B淋巴细胞淋巴细胞：只分泌：只分泌(fnm)(fnm)一种一种特异性抗体特异性抗体2、单克隆抗体克隆抗体杂交瘤细胞杂交瘤细胞 小鼠小鼠骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞：能：能无限增殖无限增殖融合融合 单克隆抗体单克隆抗体 培养培养 向动物体内反复注射抗原，使动物产生抗体，然后从血清中分离向动物体内反复注射抗原，使动物产生抗体，然后从血清中分离所需抗体。所需抗体。优点优点：特异性强，灵敏度高，可大量制备。特异性强，灵敏度高，可大量制备。第四十八页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定抗注射特定抗原原(kngyu(kngyun)n)蛋白蛋白骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞(xbo)(xbo)培养培养(piyng)(piyng)骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞融合融合多种多种杂交细胞杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞检验阳性细胞单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养3 3、单克隆抗体的制备过程、单克隆抗体的制备过程第第第第1 1 1 1次筛选目的：得到杂交瘤次筛选目的：得到杂交瘤次筛选目的：得到杂交瘤次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。细胞（多种）。细胞（多种）。细胞（多种）。第第第第2 2 2 2次筛选目的：在杂交瘤次筛选目的：在杂交瘤次筛选目的：在杂交瘤次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需细胞中筛选出能产生所需细胞中筛选出能产生所需细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。抗体的杂交瘤细胞。抗体的杂交瘤细胞。抗体的杂交瘤细胞。 该细胞继承该细胞继承双亲细胞双亲细胞的遗的遗传特性，既能传特性，既能产生专一抗体产生专一抗体又又能能无限增殖无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高第四十九页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能产生足够数量的单一大量增殖，又能产生足够数量的单一(dny)(dny)抗体。抗体。过程(guchng)B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞(xbo)诱导融诱导融合合B-B细胞细胞B-瘤细胞瘤细胞瘤瘤-瘤细胞瘤细胞选择培养选择培养杂交瘤细胞杂交瘤细胞（ B-瘤细胞）瘤细胞）克隆化培养克隆化培养抗体检测抗体检测杂交瘤细胞杂交瘤细胞体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体第五十页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)（1）为什么用小鼠骨髓瘤细胞）为什么用小鼠骨髓瘤细胞(xbo)与与B淋巴细胞淋巴细胞融合？融合？思考思考(sko)： 因为因为B淋巴细胞具有淋巴细胞具有分泌特异性抗体分泌特异性抗体的能力，而的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养骨髓瘤细胞具有在体外培养(piyng)条件下条件下大量增殖大量增殖的的本领，所以由某种本领，所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，的杂交瘤细胞，能够在体外大量繁殖，并且产生特能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。定的单克隆抗体。第五十一页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)（2）单克隆抗体制备过程中应用）单克隆抗体制备过程中应用(yngyng)哪些细哪些细胞胞 工程技术手段？工程技术手段？动物动物(dngw)细胞融合技术细胞融合技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术第五十二页，共五十八页。动物细胞工程(优质课) 4、应用(yngyng)可用于作为诊断试剂： 准确，高效，简易,快速。可用于疾病治疗。可用于运载药物（作为运载对应(duyng)疾病的药物的 “生物导弹“。位置准确,副作用小,疗效高）生物导弹：生物导弹：抗癌细胞抗癌细胞(xbo)(xbo)的单克隆抗体的单克隆抗体+ +放射性放射性同位素同位素+ +化学药物或细胞毒素化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）第五十三页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)1在动物细胞在动物细胞(xbo)融合和植物体细胞融合和植物体细胞(xbo)杂交的比较中，杂交的比较中，正确的是（）正确的是（）A结果是相同的结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同第五十四页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)2. 单克隆抗体单克隆抗体(kngt)制备过程中，骨髓瘤细胞和制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞A BC D C第五十五页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC 3、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌单、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体克隆抗体(kngt)的实验方案的实验方案3、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_2、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_4、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备制备(zhbi)单克隆单克隆抗体抗体B细胞细胞(xbo)抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50第五十六页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)再见(zijin)第五十七页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)内容(nirng)总结植物组织培养。(4)传代培养 (subculture)。3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性。2-2 动物细胞融合与。幼龄动物或胚胎的组织或器官(qgun)。所以B淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖，而癌细胞是可以无限增殖的。经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞株没有抗体分泌物。米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。瘤-瘤细胞。位置准确,副作用小,疗效高）。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。再见第五十八页，共五十八页。动物细胞工程(优质课)