中药化学典型实验多媒体课件1;.实验二实验二 虎杖中蒽醌类成分虎杖中蒽醌类成分 提取、分离、提取、分离、 鉴定及含量测定鉴定及含量测定2一、教学要求一、教学要求l l、掌握梯度掌握梯度pHpH萃取法分离酸性成分的方法。萃取法分离酸性成分的方法。2 2、学习脂溶性成分和水溶性成分分离的方法。、学习脂溶性成分和水溶性成分分离的方法。3、了解蒽醌类化合物的一般性质和鉴别反应。、了解蒽醌类化合物的一般性质和鉴别反应。 3二、实验原理二、实验原理 本本实实验验是是根根据据虎虎杖杖中中的的羟羟基基蒽蒽醌醌类类化化合合物物及及二二苯苯乙乙烯烯类类成成分分均均可可溶溶于于乙乙醇醇，故故采采用用乙乙醇醇将将它它们们提提取取出出来来。羟羟基基蒽蒽醌醌类类苷苷元元成成分分能能溶溶于于乙乙醚醚等等弱弱亲亲脂脂性性溶溶剂剂，采采用用乙乙醚醚使使苷苷元元和和苷苷类类成成分分分离，又利用羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用梯度分离，又利用羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用梯度pHpH萃取法进行分离。萃取法进行分离。4三、实验内容三、实验内容( (一一) )虎杖中蒽醌苷元的提取与分离虎杖中蒽醌苷元的提取与分离 1 1、虎杖中蒽醌类成分的提取：、虎杖中蒽醌类成分的提取： 2 2、蒽醌苷与苷元的分离：、蒽醌苷与苷元的分离： 3、不同酸性蒽醌苷元的分离（梯度、不同酸性蒽醌苷元的分离（梯度pH萃取法）萃取法） 5流程图流程图67（二）鉴定（二）鉴定 1 1、颜色反应、颜色反应 ( (l)l)、取取以以上上a,b,ca,b,c少少量量，分分别别置置于于三三支支试试管管中中，加加少少量量乙乙醇醇溶溶解解后后，加加2 2NaOHNaOH溶溶液液数数滴，观察颜色变化。滴，观察颜色变化。 （2 2）、取取以以上上a,b,ca,b,c少少量量，分分别别置置于于三三支支试试管管中中，加加少少量量乙乙醇醇溶溶解解后后，再再滴滴加加1%1%醋醋酸酸镁镁的乙醇溶液数滴，观察颜色变化。的乙醇溶液数滴，观察颜色变化。 （3 3）、取取以以上上a,b,ca,b,c少少量量，分分别别置置于于三三支支试试管管中中，加加少少量量乙乙醇醇溶溶解解后后，再再滴滴加加1%1%三三氯氯化化铁的乙醇溶液数滴，观察颜色变化。铁的乙醇溶液数滴，观察颜色变化。8 2 2、薄层色谱、薄层色谱( (TLC)TLC)： 吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶G GCMCNaCMCNa板，用前活化板，用前活化 展开剂：石油醚展开剂：石油醚乙酸乙酯乙酸乙酯 (2 (2：1)1) 样样 品：品：a,b,ca,b,c乙醇液，大黄素标准品乙醇液，大黄素标准品 显显 色：色：先置可见光下观察色斑，先置可见光下观察色斑， 后紫外灯下观察荧光斑点后紫外灯下观察荧光斑点 再用再用2%2%NaOHNaOH喷洒显色喷洒显色 结果及计算比移值结果及计算比移值9（三）含量测定（三）含量测定虎杖中游离蒽醌的测定虎杖中游离蒽醌的测定1. 标准曲线的制备标准曲线的制备 称取称取1,8-二羟基蒽醌二羟基蒽醌25mg置于置于200ml容量瓶中，乙醚溶解并定容，取此溶液容量瓶中，乙醚溶解并定容，取此溶液0.055.00ml，分别置于分别置于25ml容量瓶中，水浴上挥去乙醚，加容量瓶中，水浴上挥去乙醚，加5%氢氧化铝氢氧化铝-2%氢氧氢氧化铵混合碱液至刻度，在化铵混合碱液至刻度，在490nm测定光密度，绘制标准曲线。测定光密度，绘制标准曲线。2. 样品测定样品测定 取生药粉末（过取生药粉末（过40目）目）0.2g置于索氏提取器中，氯仿回流提取至无色，将氯仿液置于置于索氏提取器中，氯仿回流提取至无色，将氯仿液置于分液漏斗中，分液漏斗中， 以以5%氢氧化铝氢氧化铝-2%氢氧化铵混合碱分次提取至无色，合并碱液，用氢氧化铵混合碱分次提取至无色，合并碱液，用少量氯仿洗涤，碱液调整至一定体积，碱液若不澄清，垂熔漏斗过滤，滤液在沸水少量氯仿洗涤，碱液调整至一定体积，碱液若不澄清，垂熔漏斗过滤，滤液在沸水浴中加热浴中加热4分钟，用冷水冷却至室温，分钟，用冷水冷却至室温，30分钟后在分钟后在490nm比色，由标准曲线计算含量。比色，由标准曲线计算含量。10四、四、 实验讨论及注意事项实验讨论及注意事项1.1.常压蒸馏回收溶剂之前，应该加入沸石，以免暴沸。常压蒸馏回收溶剂之前，应该加入沸石，以免暴沸。2.2.什什么么是是梯梯度度pHpH萃萃取取法法，适适用用于于哪哪些些物物质质的的分分离离？试试解解释释本本次次试试验验中中pHpH萃萃取取法法应应该该注注意意哪哪些事项？些事项？3.3.两两相相萃萃取取时时，不不可可猛猛力力振振摇摇，只只能能轻轻轻轻旋旋转转摇摇动动，以以免免造造成成严严重重乳乳化化现现象象而而影影响响分分层层。如果出现乳化现象，如何破除？如果出现乳化现象，如何破除？4.4.TLCTLC鉴定鉴定a,b,ca,b,c时，解释三者相对比移值的大小关系？时，解释三者相对比移值的大小关系？11