CAMS/PUMC细菌学实习细菌学实习-临床常用染色方法及细菌培养临床常用染色方法及细菌培养物的初步鉴定物的初步鉴定CAMS/PUMC实验材料实验材料q细菌采样培养物细菌采样培养物 q模拟结核杆菌感染标本菌液模拟结核杆菌感染标本菌液 &奴卡菌奴卡菌 q载玻片载玻片qNS q滤纸滤纸 q革兰氏染液革兰氏染液q抗酸染液抗酸染液q弱抗酸染液弱抗酸染液 CAMS/PUMC实验目的实验目的q掌握机体常见部位及环境中的细菌培养物掌握机体常见部位及环境中的细菌培养物的初步鉴定的初步鉴定q掌握抗酸染色、弱抗酸染色的技能掌握抗酸染色、弱抗酸染色的技能CAMS/PUMC实验内容实验内容q抗酸染色抗酸染色q弱抗酸染色弱抗酸染色q细菌采样培养物初步细菌采样培养物初步鉴定（革兰氏染鉴定（革兰氏染色法）色法）v报告内容报告内容细菌来源细菌来源细菌形态细菌形态染色结果染色结果细菌采样物初步鉴定细菌采样物初步鉴定q取单个感兴趣（有特点）的菌落取单个感兴趣（有特点）的菌落q制备细菌涂片制备细菌涂片q革兰氏染色革兰氏染色q镜下观察镜下观察q记录结果记录结果CAMS/PUMCCAMS/PUMC细菌涂片制备程序细菌涂片制备程序q取一干净玻片，火焰上方缓缓通过三次去取一干净玻片，火焰上方缓缓通过三次去油油q蜡笔画线将玻片分为若干区域蜡笔画线将玻片分为若干区域q接种环取接种环取NS分别滴入若干区域各一滴分别滴入若干区域各一滴q分别取少许待检菌分别取少许待检菌 ，与，与NS充分混匀成菌液，充分混匀成菌液，扩展成菌膜后风干扩展成菌膜后风干q固定（火焰上方缓缓通过三次）固定（火焰上方缓缓通过三次）q革兰氏染色革兰氏染色q滤纸吸干水分，油镜观察滤纸吸干水分，油镜观察CAMS/PUMCCAMS/PUMCCAMS/PUMCThe StreptococcusCAMS/PUMCStreptococcusCAMS/PUMCCAMS/PUMC口咽部及皮肤正常菌群口咽部及皮肤正常菌群q鼻咽部及扁桃体鼻咽部及扁桃体v葡萄球菌、类白喉杆菌、肺链、溶血及非溶血葡萄球菌、类白喉杆菌、肺链、溶血及非溶血性链球菌、奈瑟菌等性链球菌、奈瑟菌等q口腔口腔v链球菌多见、放线菌、螺旋体、链球菌多见、放线菌、螺旋体、G-杆菌等杆菌等q皮肤皮肤v表皮葡萄球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌、铜绿表皮葡萄球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌、铜绿假单胞菌假单胞菌CAMS/PUMCCAMS/PUMCCAMS/PUMCCapsuleLPSN. meningitidisVirulence FactorsSimilar, but Differencesin utilizationHemolysinIgA proteasePILIOpacity (OPA) proteinsOuter Membrane ProteinsN. gonorrhoeaeLPSPILIOpacity (OPA) proteinsOuter Membrane ProteinsIgA proteaseNO capsuleNO hemolysinXCAMS/PUMC溶血类型溶血类型 q溶血溶血 草绿色溶血环草绿色溶血环 （甲链、肺链（甲链、肺链 ）q溶血溶血 透明溶血环透明溶血环 （乙链等（乙链等 ) )CAMS/PUMCHemolysis alpha beta gammaCAMS/PUMCCAMS/PUMCStreptococci on sheep blood agarCAMS/PUMCCAMS/PUMCCAMS/PUMC临床常用细菌染色法临床常用细菌染色法q革兰氏染色革兰氏染色q抗酸染色抗酸染色q弱抗酸染色弱抗酸染色q墨汁染色墨汁染色CAMS/PUMC放线菌放线菌q厌氧、微需养厌氧、微需养20-25 不生长，不生长，35-37 生生长长q非抗酸丝状菌非抗酸丝状菌q口腔、上呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道口腔、上呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道q内源性感染内源性感染q衣氏、龋齿、牛型衣氏、龋齿、牛型CAMS/PUMC奴卡菌奴卡菌q需氧菌，需氧菌，20-25 、35-37 均均生长生长q弱抗酸弱抗酸q外环境（土壤）、多为腐生菌外环境（土壤）、多为腐生菌q外源性感染外源性感染q星形奴卡星形奴卡&巴西奴卡巴西奴卡CAMS/PUMCCAMS/PUMC抗酸染色抗酸染色（Acid-fast）q5%5%石炭酸复红石炭酸复红1010分钟分钟q3%3%盐酸乙醇脱色盐酸乙醇脱色3 3分钟分钟q美兰染色美兰染色1 1分钟分钟v结果判定：结果判定：分枝杆菌属细菌为分枝杆菌属细菌为红色红色 非分之杆菌属细菌为非分之杆菌属细菌为兰色兰色抗酸染色原理抗酸染色原理q分枝杆菌细胞壁含脂质较多，并含分枝菌分枝杆菌细胞壁含脂质较多，并含分枝菌酸酸q分枝菌酸具有抗酸性分枝菌酸具有抗酸性q染色时与石炭酸复红结合牢固，能抵抗酸染色时与石炭酸复红结合牢固，能抵抗酸性乙醇的脱色作用性乙醇的脱色作用q抗酸菌能保持复红的颜色抗酸菌能保持复红的颜色 CAMS/PUMC结核杆菌结核杆菌q培养特性培养特性v专性需氧专性需氧(obligate aerobes )v营养要求高营养要求高罗氏培养基罗氏培养基v生长缓慢生长缓慢v固体培基固体培基粗糙、菜花状粗糙、菜花状 液体培基液体培基表面生长成菌膜表面生长成菌膜CAMS/PUMCCAMS/PUMCCAMS/PUMCCAMS/PUMC弱抗酸染色弱抗酸染色q5%5%石炭酸复红石炭酸复红1010分钟分钟q1%1%硫酸水溶液脱色硫酸水溶液脱色2 2分钟分钟q美兰染色美兰染色1 1分钟分钟v结果判定：结果判定：奴卡菌为奴卡菌为红色红色 非奴卡菌为非奴卡菌为兰色兰色CAMS/PUMCCAMS/PUMC墨汁染色墨汁染色q1-3%墨汁水溶液墨汁水溶液q脑脊液标本脑脊液标本q新型隐球菌新型隐球菌CAMS/PUMCCAMS/PUMC涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色镜检镜检CAMS/PUMCCAMS/PUMC环境微生物群环境微生物群q土壤土壤q空气空气CAMS/PUMC双屝预真空式高压灭菌器双屝预真空式高压灭菌器CAMS/PUMCCAMS/PUMCCAMS/PUMCCAMS/PUMCFiltration 过滤过滤 qsterilize solutions that may be damaged or denatured by high temperatures or chemical agents CAMS/PUMC冷冻真空干燥法：在低温状态下真空冷冻真空干燥法：在低温状态下真空抽去水分抽去水分