欢迎您阅读并下载本文档，本文档来源于互联网，如有侵权请联系删除！我们将竭诚为您提供优质的文档！粗多糖的测定： 按王光亚主编， 保健食品功效成分检测方法 P19（分光光度法测定粗多糖的含量） 1、适用范围 本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量 1104的水溶液性粗多糖的测定。本方法最低检测浓度为 5.0mg/L。 2、原理 食品中相对分子质量1104的高分子物质在 80%乙醇溶液中沉淀， 与水溶液中单糖和低聚糖分离， 用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。 3、主要仪器 （1）分光光度计 （2）离心机（3000r/min） （3）旋转混匀器 4、试剂 本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。 （1）乙醇溶液（80%） ：20ml 水中加入无水乙醇 80mL，混匀。 （2）NaOH 溶液（100g/L） ：称取 100g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至 1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。 （3）铜试剂储备液：称取 3.0gCuSO45H2O，30.0g 柠檬酸钠，加水溶解并稀释至 1L，混匀，备用。 （4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液 50mL，加水 50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠 12.5g 并使其溶解。临用新配。 （5）洗涤剂：取水 50mL，加入 10mL 铜试剂溶液、10mL 氢氧化钠溶液，混匀。 （6）硫酸溶液（10%） ：取 100mL 浓硫酸加入到 800mL 左右水中，混匀，冷却后稀释至 1L。 （7）苯酚溶液（50g/L） ：称取精制苯酚 5.0g，加水溶解并稀释至 100mL，混匀。溶液置冰箱中可保存 1 个月。 欢迎您阅读并下载本文档，本文档来源于互联网，如有侵权请联系删除！我们将竭诚为您提供优质的文档！（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量 5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品 0.5000g，加水溶解，并定容至 50mL，混匀，置冰箱保存。此溶液 1mL含 10.0mg 葡聚糖。 （9） 葡聚糖标准使用液： 吸取葡聚糖标准储备液 1.0mL， 置于 100mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。此溶液 1mL 含葡聚糖 0.10mg。 5、测定步骤 （1）样品处理 a、 样品提取： 取胶囊内容物 2.0g 混匀， 置于 100mL 容量瓶中， 加水 80mL 左右，于沸水浴上加热 2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。 b、 沉淀粗多糖：准确吸取 a 项终滤液 5.0mL 或液体样品以 3000r/min 离心 5min，弃去上清液。残渣用 80%（体积分数）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复操作 34 次。残渣用水溶解并定容至 5.0mL，混匀后，供沉淀葡聚糖。 c、沉淀葡聚糖：准确吸取 b 项终溶液 2mL 置于 20mL 离心管中，加入 100g/L氢氧化钠溶液 2.0mL 铜试剂溶液 2.0mL， 沸水浴中煮沸 2min， 冷却， 以 3000r/min离心 5min，弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作 3 次，残渣用 10%（体积分数）硫酸溶液 2.0mL 溶解并转移至 50mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液为样品测定液。 （2）标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液 0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL（相当于葡聚糖 0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg）分别置于 25mL 比色管中，准确补充水至 2.0mL，加入 50g/L 苯酚溶液 1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸 10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸 2min，冷却后用分光光度计在 485nm 波长处以试剂空白溶液为参比，1cm 比色皿测定吸光度值。以葡聚糖为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 （3）样品测定：准确吸取样品测定液 2.0mL 置于 25mL 比色管中，加入 50g/L苯酚溶液 1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸 10.0mL 于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸 2min，冷却至室温，用分光光度计在 485nm 波长处，以试剂空白为参比，1cm 比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡聚糖含欢迎您阅读并下载本文档，本文档来源于互联网，如有侵权请联系删除！我们将竭诚为您提供优质的文档！量，计算样品中粗多糖含量。同时做样品空白实验。 6、计算结果 （m1m2）V1V3V5 X= m3V2V4V6 式中 X样品中粗多糖含量（以葡聚糖计） （mg/g） ： m1样品测定液中葡聚糖的质量（mg） ； m2样品空白液中葡聚糖质量（mg） ； m3样品质量（g） ； V1样品提取液总体积（mL） ； V2沉淀粗多糖所用样品提取液体积（mL） ； V3粗多糖溶液体积（mL） ； V4沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液体积（mL） ； V5样品测定掖总体积（mL） ； V6测定用样品测定溶液体积（mL） 。