牛乳大肠菌群复发酵牛乳大肠菌群复发酵(f jio)实验实验BGLB液体接种操作液体接种操作第一页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点实训目的实训目的(md)进一步理解大肠菌群检测的操作流程了解(lioji)大肠菌群液体接种方法 进一步熟悉无菌操作要点第二页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点实训仪器实训仪器(yq)与设备与设备酒精灯、接种针、火柴(huchi)、75%酒精棉、LST肉汤培养物、BGLB肉汤培养基第三页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点实训步骤实训步骤(bzhu)1、LST肉汤培养基的产气检查(jinch)观察培养完毕的LST肉汤培养液，观察小倒管中是否有气体产生。若有气体产生，则疑似疑似大肠菌群，需要进行BGLB肉汤培养基接种。第四页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点 LST肉汤肉汤BGLB肉汤肉汤结果结果(jigu)(jigu)1：10 产气产气阳性1：100 产气产气阳性1：1000 产气产气阳性第五页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点2、BGLB液体接种将产气的LST肉汤培养基进行(jnxng)液体接种。在酒精灯上灼烧接种环，从LST肉汤培养基中挑取一环菌液，接种于BGLB肉汤培养基中，36培养48小时后。观察产气情况。第六页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点液体接种操作要点液体接种操作要点(yodin)(yodin)：1、操作前消毒2、接种环灼烧完全，镍丝要烧红。3、棉塞夹于拿接种针手的无名指和小指之间4、打开棉塞后试管口要在酒精灯旁，避免杂菌进入。第七页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点BGLB接种操作接种操作(cozu)(cozu)问题：问题：1、如何进行、如何进行LST肉汤培养基的产气检查？肉汤培养基的产气检查？2、如何用接种针进行挑菌操作？、如何用接种针进行挑菌操作？3、液体接种过程中如何使用才能保证无菌状态？、液体接种过程中如何使用才能保证无菌状态？第八页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点1、观察试管内的小倒管，如果小倒管有气泡存在或者小导管上漂，说明试管产气。2、首先点燃酒精灯，在酒精灯旁进行操作(cozu)。其次接种前充分灼烧接种针，将镍丝烧红为止。接种时将试管放于酒精灯上方火焰外焰处，棉塞加于无名指和小指之间。3、吸量管在使用前进行灼烧，拿管要求远离实训服，使用前检查是否包扎完好无玻璃外露。第九页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点思考题：1、大肠菌群检测流程、大肠菌群检测流程2、回顾初发酵试验步骤、回顾初发酵试验步骤3、大肠菌群检测涉及到几种、大肠菌群检测涉及到几种(jzhn)(jzhn)培养基？培养基？LST肉汤培养基的制肉汤培养基的制备步骤、配方是什么？备步骤、配方是什么？第十页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点2、初发酵实验步骤1）称取25g固体样品，加入225mL无菌水中，均质制备成1：10 样品溶液。2）用1只1mL无菌吸量管吸取1：10样品溶液，用无菌方法(fngf)各取1mL，分别加入到3只LST肉汤培养基中。3）吸取1mL1：10样品溶液，加入到装有9mL无菌试管中摇匀，制备成1：100样品溶液。4）换1只吸量管各取1mL1：100溶液，加入到3只LST肉汤培养基中。5）吸取1mL1：100样品溶液，加入到装有9mL无菌试管中摇匀，制备成1：1000样品溶液。6）换1只支吸量管各取1mL1：1000溶液，加入到3只LST肉汤培养基中。7）36度1度，48小时2小时培养后观察第十一页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点3、2种培养基，LST肉汤培养基和BGLB肉汤培养基。LST肉汤培养基：肉汤培养基：胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g氯化钠5.0 g 乳糖5.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75 g 月桂基硫酸钠0.1 g 蒸馏水1 000 mL pH 6.80.2 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121 高压(goy)灭菌15 min。第十二页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点内容(nirng)总结牛乳大肠菌群复发酵(f jio)实验BGLB液体接种操作。观察培养完毕的LST肉汤培养液，观察小倒管中是否有气体产生。2、首先点燃酒精灯，在酒精灯旁进行操作。其次接种前充分灼烧接种针，将镍丝烧红为止。接种时将试管放于酒精灯上方火焰外焰处，棉塞加于无名指和小指之间。4）换1只吸量管各取1mL1：100溶液，加入到3只LST肉汤培养基中。7）36度1度，48小时2小时培养后观察。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL第十三页，共十三页。大肠菌群检测(三)重点