猪肠道健康的营养调控猪肠道健康的营养调控l饲料营养价值评价与营养需要饲料营养价值评价与营养需要l猪肠道健康的营养调控猪肠道健康的营养调控l母猪营养母猪营养l饲料加工工艺饲料加工工艺l营养与肉品质营养与肉品质lIUGRIUGR猪的发生机制及其营养调控猪的发生机制及其营养调控l饲料安全与有效性评价饲料安全与有效性评价l发酵饲料研究开发发酵饲料研究开发l生物饲料添加剂（酶制剂、微生物制剂、抗菌肽）研究开发生物饲料添加剂（酶制剂、微生物制剂、抗菌肽）研究开发农业部饲料工业中心的研究领域农业部饲料工业中心的研究领域l农业部饲料工业中心农业部饲料工业中心l国家饲料工程技术研究中心国家饲料工程技术研究中心l农业部饲料效价与安全监督检验测试中心（北京）农业部饲料效价与安全监督检验测试中心（北京）l生物饲料添加剂北京市重点实验室生物饲料添加剂北京市重点实验室l饲用抗菌肽北京市重点实验室饲用抗菌肽北京市重点实验室农业部饲料工业中心的研究平台农业部饲料工业中心的研究平台l功能性氨基酸的营养生理功能功能性氨基酸的营养生理功能l生长肥育猪低氮排放日粮技术体系研究生长肥育猪低氮排放日粮技术体系研究l益生菌及微生物制剂益生菌及微生物制剂l抗菌肽抗菌肽主要内容主要内容一、功能性氨基酸的营养生理一、功能性氨基酸的营养生理功能功能1 1、精氨酸与、精氨酸与NCGNCG初产母猪初产母猪(n=53)(n=53)妊娠第妊娠第30-11430-114天添加天添加1 1L-L-精氨酸盐酸盐对繁殖性能影响精氨酸盐酸盐对繁殖性能影响Mateo et al. (2006) J. Anim. Sci. 84 (Suppl. 2): 7-8精氨酸提高大鼠繁殖性能精氨酸提高大鼠繁殖性能Zeng等，等，2008，J. Nutr.精氨酸通过精氨酸通过PI3K/ PKB/mTOR/NO 信号途径提高大鼠早期胚胎着床Zeng等，等，2013, ReproductionZeng等，等，2013, Reproduction猪小肠中精氨酸的内源合成途径猪小肠中精氨酸的内源合成途径lN-乙酰谷氨酸乙酰谷氨酸（NAG）是精氨酸内是精氨酸内源合成的限速酶源合成的限速酶-氨基氨基甲酰磷酸合成酶甲酰磷酸合成酶-1（CPS-1）的变构催）的变构催化剂，是精氨酸合成途化剂，是精氨酸合成途径的必需辅助因子径的必需辅助因子Wu和和Morris, 1998NCG与与NAGl20052005年开始研究合成工艺，年开始研究合成工艺，20082008年年5 5月实验室成月实验室成功功合成合成纯度达到纯度达到97%97%的的NCGNCG产品，并于同年申请专产品，并于同年申请专利利l20082008年年1010月委托农业部兽药安全监督检验测试中月委托农业部兽药安全监督检验测试中心开展安全评价试验心开展安全评价试验l20092009年年8 8月完成中试工艺月完成中试工艺，20102010年年6 6月稳定生产工月稳定生产工艺艺l20102010年年8 8月委托四川农业大学动物营养研究所开月委托四川农业大学动物营养研究所开展有效性性评价试验展有效性性评价试验l20112011年年底向农业部全国饲料评审委员会申请新年年底向农业部全国饲料评审委员会申请新饲料添加剂，饲料添加剂，20122012年年2 2月全国饲料评审委员会组月全国饲料评审委员会组织了会议评审织了会议评审l2012-20132012-2013：补试验：补试验l20142014年年4 4月：获农业部新饲料添加剂证书月：获农业部新饲料添加剂证书国家饲料工程技术研究中心对国家饲料工程技术研究中心对NCG的研发历程的研发历程吴德等，吴德等，2013日粮添加不同水平日粮添加不同水平NCG对妊娠母猪体血妊娠母猪体血浆尿素氮和血氨尿素氮和血氨浓度的影响度的影响吴德等，吴德等，2013日粮添加不同水平日粮添加不同水平NCG对妊娠母猪体血液妊娠母猪体血液NO浓度的影响度的影响吴德等，吴德等，2013 饲粮添加不同水平饲粮添加不同水平NCG对妊娠母猪血浆对妊娠母猪血浆中血管生成相关因子的影响中血管生成相关因子的影响项目项目对照组对照组0.05%NCG0.1%NCG0.15%NCG0.2%NCGSEMVEGF-A（血管内皮生长因子）（血管内皮生长因子）（ng/L）第第30天天129.99132.85130.12132.2130.340.55第第60天天137.11140.53137.27139.67139.130.69第第90天天142.72145.87143.5145.24144.190.49第第110天天145.15c169.46a156.21b159.88b147.84c2.25eNOS （内皮型一氧化氮合酶）（内皮型一氧化氮合酶）(U/L)第第30天天7.987.797.87.87.870.03第第60天天9.018.148.348.38.860.15第第90天天9.879.279.369.299.680.1第第110天天11.12a8.62c10.22b9.73b11.06a0.24ANG-2（血管生长素（血管生长素-2）（）（ng/mL）第第30天天126.83136.26131.26133.76128.941.4第第60天天133.41140.5136.48137.3134.71.08第第90天天142.9155.64149.57153.18150.621.87第第110天天131.63c167.46a154.28b158.10b136.74c3.25PLGF（胎盘生长因子）（胎盘生长因子）（ng/L）第第30天天53.654.3753.6454.1953.630.18第第60天天59.963.2160.4662.5861.50.55第第90天天63.4868.5366.6567.4464.150.92第第110天天70.84c87.56a77.99b81.08b73.01c1.44吴德等，吴德等，2013饲粮添加不同水平饲粮添加不同水平NCG对妊娠母猪胎盘绒毛膜组织对妊娠母猪胎盘绒毛膜组织中血管生成相关中血管生成相关基因表达的影响基因表达的影响 饲粮添加不同水平饲粮添加不同水平NCGNCG对妊娠母猪胎盘绒毛膜组织对妊娠母猪胎盘绒毛膜组织FGF-2FGF-2、 eNOS eNOS、VEGFAVEGFA、ANG-1ANG-1、ANG-2ANG-2和和PlGF mRNAPlGF mRNA表达量的影响（数值采用表达量的影响（数值采用meansSEMmeansSEM表示，表示，n=8n=8，以，以* *表示表示P0.05P0.05，*表示表示P0.01P0.01）。）。注：注：eNOSeNOS：内皮型一氧化氮合酶；：内皮型一氧化氮合酶； VEGFA VEGFA：血管内皮生长因子；：血管内皮生长因子； FGF-2 FGF-2：碱性成纤维细胞生：碱性成纤维细胞生长因子；长因子；PlGF PlGF ：胎盘生长因子；：胎盘生长因子； ANG-1 ANG-1：血管生长因子：血管生长因子1 1； ANG-2 ANG-2：血管生长因子：血管生长因子1 1吴德等，吴德等，2013母猪母猪饲粮添加不同水平饲粮添加不同水平NCG对新生仔猪血浆游离氨基酸浓度的影响对新生仔猪血浆游离氨基酸浓度的影响项目项目对照组对照组0.05%NCG0.1%NCG0.15%NCG0.2%NCGSEM氨基酸（氨基酸（umol/L）ASP87.30 88.33 89.06 88.05 88.14 0.94 Thr129.87 127.40 126.23 145.72 137.05 3.15 Glu231.91 249.42 232.20 232.03 251.73 5.12 Gly889.77 859.46 869.84 871.46 915.39 26.46 Ala580.10 566.08 589.23 567.63 549.87 19.03 Cit82.27c 100.60a 90.46b 91.85b 83.13c 1.89 Val291.96 289.63 297.13 289.36 285.21 4.35 Cys178.85 174.78 180.67 177.93 176.56 1.65 Met68.89 77.30 67.55 72.48 68.36 1.50 Ile103.83 117.15 115.46 115.46 102.45 2.51 Leu188.37 181.66 185.54 189.44 191.14 3.22 Phe96.47 100.76 103.93 105.94 98.61 1.69 Orn92.63c 108.41a 100.29b 102.69b 95.99c 1.54 Lys195.15 208.28 211.42 209.47 200.66 3.85 His93.81 95.80 97.29 97.00 92.16 1.69 Arg152.99c 181.27a 166.72b 168.11b 153.06c 3.04 pro584.05 579.93 580.28 575.65 583.60 8.51 注：同行数据标注不同小写字母表示差异显著（注：同行数据标注不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）NCG通过通过P13K/PKB/mTOR信号途径提高大鼠妊娠早期胚胎信号途径提高大鼠妊娠早期胚胎着床着床Zeng等，等，2012，Plos One 教槽料中添加教槽料中添加NCG对新生和断奶后仔猪生长性能的影响对新生和断奶后仔猪生长性能的影响黄志敏，黄志敏，2012，中国，中国农业大学大学硕士学位士学位论文呢文呢氨基酸氨基酸对照照组0.6% L-arginineHCl0.04% NCGSEMP值L-精氨酸精氨酸L-Arginine 156.30a185.60b190.00c0.41 0.01瓜氨酸瓜氨酸Citrulline63.40c79.20a76.30b0.40 0.01鸟氨酸氨酸Ornithine61.60c62.70b63.70a0.26 0.05 E. coli P = 0.06 互作 P = 0.07IgG浓浓度度日粮日粮TID苏氨酸水平苏氨酸水平 (g/kg)(g/g)Wang etal, J. Nutr., 2007 日粮日粮日粮日粮TID ThrTID ThrTID ThrTID Thr与仔猪肠绒毛发育和粘上皮细胞凋亡与仔猪肠绒毛发育和粘上皮细胞凋亡与仔猪肠绒毛发育和粘上皮细胞凋亡与仔猪肠绒毛发育和粘上皮细胞凋亡Weiwei Wang，Shiyan Qiao, etal., 2009, J. Nutr.日粮日粮TID ThrTID Thr与仔猪肠粘液蛋白质合成量与仔猪肠粘液蛋白质合成量 断奶仔猪肠粘膜完整性对日粮断奶仔猪肠粘膜完整性对日粮TID Thr的需要量为的需要量为0.89%，此时此时TID Thr/TID Lys为为74.8%，是，是NRC（1998）推荐量的）推荐量的120%Weiwei Wang，Shiyan Qiao, etal., 2009, J. Nutr.项目项目真可消化苏氨酸水平真可消化苏氨酸水平（%）SEM1P值值0.370.740.891.11 十二指肠十二指肠0.313b0.466b0.806a0.396b0.0630.0004 空肠空肠0.196b 0.429ab0.598a0.229b0.0830.0156 回肠回肠0.124b0.345a0.367a 0.240ab0.0440.0086 日粮真可消化苏氨酸对仔猪小肠黏液蛋白基因表达的影响日粮真可消化苏氨酸对仔猪小肠黏液蛋白基因表达的影响 Weiwei Wang，Shiyan Qiao, etal., 2009, J. Nutr.010203040506070805-10kg10-20kg20-50kg50-120kgLactation sowTID Thr/ TID Lys（%）65%Mao, X. B., X. F. Zeng, S. Y. Qiao, D. F. Li, Frontiers in Bioscience 3 3、亮氨酸、亮氨酸Mao等，等，2011，Mol Biol Rep亮氨酸通亮氨酸通过mTOR通路提高大鼠通路提高大鼠C2C12肌管肌管Leptin 表达表达Mao等，等，2012，Brit J NutrMao等，等，2012，Brit J Nutr亮氨酸和亮氨酸和Leptin协同同调节C2C12肌管肌管和大鼠骨骼肌蛋白和大鼠骨骼肌蛋白质代代谢低蛋白日粮添加亮氨酸对成年大鼠骨骼肌中低蛋白日粮添加亮氨酸对成年大鼠骨骼肌中4E-BP1磷酸化的影响磷酸化的影响S6K1Translation InitiationmTOR4EBP1eIF4E eIF4GeIF4E4EBP1PmRNA Protein Synthesis LeucineP图图6 低蛋白日粮添加亮氨酸对成年大鼠骨骼肌中低蛋白日粮添加亮氨酸对成年大鼠骨骼肌中S6K1磷酸化的影响磷酸化的影响S6K1Translation InitiationmTORmRNA Protein Synthesis LeucineP亮氨酸主要是通过提高亮氨酸主要是通过提高mTOR通路中通路中S6K1磷酸化程度磷酸化程度来提高成年大鼠骨骼肌蛋白质合成来提高成年大鼠骨骼肌蛋白质合成低蛋白日粮添加亮氨酸对成年育肥猪氮平衡的影响低蛋白日粮添加亮氨酸对成年育肥猪氮平衡的影响项目项目14.5% CP10%CP SEMP 值值AlaLeu干物质采食量干物质采食量 (kg/d) 2.11 2.10 2.090.01 0.98氮摄入量氮摄入量 (g/d) 56.34a 38.87b 39.29b2.45 0.01尿氮排出尿氮排出 (g/d) 28.74a 15.08b 11.83b1.08 0.01粪氮排出粪氮排出 (g/d) 5.37 4.85 4.520.56 0.59氮排出氮排出 (g/d) 34.11a 19.93b 16.35b1.17 0.01氮沉积氮沉积 (g/d) 22.24ab 18.94b 22.95a1.17 0.04氮沉积率氮沉积率 (%) 39.47c 48.72b 58.40a2.38 0.01低蛋白日粮添加亮氨酸对成年育肥猪全身蛋白质周转的影响低蛋白日粮添加亮氨酸对成年育肥猪全身蛋白质周转的影响项目项目14.5% CP10%CPSEMP值值AlaLeu体重体重 (kg) 79.87 78.78 79.242.19 0.94蛋白质合成速度蛋白质合成速度 (g/kg BW0.75/d) 18.75a 11.06b 19.33a1.79 0.01蛋白质降解速度蛋白质降解速度 (g/kg BW0.75/d) 10.83a 6.48b 11.82a1.47 0.04蛋白质沉积速度蛋白质沉积速度 (g/kg BW0.75/d) 7.92a 4.68b 7.50a0.92 0.01图图7 低蛋白日粮添加亮氨酸对成年育肥猪全身蛋白质周转的影响低蛋白日粮添加亮氨酸对成年育肥猪全身蛋白质周转的影响低蛋白日粮添加亮氨酸对成年育肥猪胴体性状的影响低蛋白日粮添加亮氨酸对成年育肥猪胴体性状的影响项目项目14.5% CP10%CP SEMP 值值AlaLeu胴体重胴体重 (kg)67.69 66.8465.932.240.86屠宰率屠宰率 (%) 0.73 0.75 0.720.010.18平均背膘厚平均背膘厚 (cm) 2.21 2.14 1.960.130.13眼肌面积眼肌面积 (cm2) 40.76a 37.75b 40.03a1.910.05无脂瘦肉指数无脂瘦肉指数 (%) 49.18 49.25 49.490.480.09无脂瘦肉增重无脂瘦肉增重 (kg/d) 0.39 0.36 0.380.060.16项目项目14.5%CP10%CPSEMP 值值AlaLeu眼肌色差眼肌色差亮度亮度 L*57.82 59.0955.361.890.39红度红度 a*11.23 10.49 9.990.640.41黄度黄度 b* 2.63 2.38 1.820.580.61肌肉肌肉pH值值pH45min 6.51 6.46 6.590.040.15pH24h 5.51 5.51 5.530.040.92滴水损失滴水损失 (%) 9.25c 13.93a 11.28b1.210.04肌内脂肪含量肌内脂肪含量 (%) 3.36b 4.73a 3.56b0.250.02剪切力剪切力 (kg) 4.32a 3.78b 4.23a0.070.06肌纤维直径肌纤维直径 (m)背最长肌背最长肌 47.70 44.62 44.292.210.41半膜肌半膜肌 40.88 39.26 36.811.160.21 低蛋白日粮添加亮氨酸对成年育肥猪肉品质和肌肉发育的影响低蛋白日粮添加亮氨酸对成年育肥猪肉品质和肌肉发育的影响14.5%CP 10%CP + Ala 10%CP + Leu14.5%CP 10%CP + Ala 10%CP + Leu背最长肌纤维染色图背最长肌纤维染色图半膜肌纤维染色图半膜肌纤维染色图4 4、支链氨基酸、支链氨基酸日粮蛋白质水平：生长性能日粮蛋白质水平：生长性能日粮日粮CP水平水平(%)23.121.218.917.2SEMP值值始重始重(kg)6.806.756.756.720.030.935末重末重(kg)10.5210.6110.279.650.280.042ADG(g/d)266275252209170.027采食量采食量(g/d)357370342307220.134饲料饲料/增重增重1.351.341.361.490.040.036粪指数粪指数0.610.490.420.380.020.015血浆尿素氮血浆尿素氮(mg/L)139.394.480.460.55.80.01氮排放（氮排放（g/d）6.064.884.023.470.26 90%91.84%7.35%Wang and Qiao, J. Appl. Microboil., 2009Liu等，等，2013，J Agri Food Chem葡萄糖、果糖等单糖葡萄糖、果糖等单糖EMP、HMP等途径等途径彻底氧化分解提供能量彻底氧化分解提供能量 糖原糖原肠道微生物氧化分解氧化分解提供少量能量提供少量能量CO2 , H2O后肠段寡糖寡糖增殖增殖糖异生糖异生多糖（淀粉、糖原）多糖（淀粉、糖原）消化酶、肠道微生物葡萄糖、葡萄糖、果糖等单糖果糖等单糖挥发性脂肪酸挥发性脂肪酸降低肠道降低肠道pH纤维素、单糖纤维素、单糖 等等肠道微生物与糖代谢的关系肠道微生物与糖代谢的关系The obese microbiome has an increased capacity to harvest energy from the diet “胖微生物”（厚壁菌门）能提高宿主从日粮中获取能量的能力除酵母菌外，其他益生菌都属于厚壁菌门微生除酵母菌外，其他益生菌都属于厚壁菌门微生物！物！Turnbaugh, et al, Nature, 2006, 444:1027-1031 EGFR: epidermal growth factor receptor ERK:extracellular-signal-regulated kinaseslipoteichoic acidPI3K: phosphoinositide 3kinase STAT: transducer and activator of transcription Lipoteichoic acid and surface layer protein A NLRP: NOD-, LRR- and pyrin domain-containing Bron等，等，2011, Nature Review Micorobiology. 微生物制剂微生物制剂-作为治疗药的应用前景作为治疗药的应用前景l新生儿坏死性肠炎（新生儿坏死性肠炎（neonetal necrotizing enterocolitis）l极低初生重（极低初生重（ELBW）婴儿）婴儿l急性肠炎急性肠炎l与抗生素相关的腹泻（与抗生素相关的腹泻（associated-antibiotics diarrhoea AAD）l湿疹（湿疹（eczema）l肥胖症（肥胖症（obesity）l肠道易激综合症（肠道易激综合症（irritable bowel syndrome, IBS）l抗氨苄青霉素粪肠球菌与抗万古霉素粪肠球菌抗氨苄青霉素粪肠球菌与抗万古霉素粪肠球菌l溃疡性结肠炎（溃疡性结肠炎（ulcerative colitis）l.益生菌存在的问题与对策益生菌存在的问题与对策存在的问题作用效果不连续制剂的稳定性差安全性问题菌种的筛选控制产品质量加入协同剂菌种的筛选包被或包囊发酵过程监测安全性评价l安全性安全性l有效性评价手段：体有效性评价手段：体内外评价模型内外评价模型l菌种的抗逆性：选育菌种的抗逆性：选育技术技术l制剂的稳定性：后处制剂的稳定性：后处理工艺理工艺l作用机制作用机制微生物制剂选育技术的发展微生物制剂选育技术的发展l高通量筛选技术高通量筛选技术l自然选育自然选育l原生质体诱变技术原生质体诱变技术 l原生质体融合育种技术原生质体融合育种技术l基因工程育种技术基因工程育种技术 产酶、氨基酸、酸产酶、氨基酸、酸产细菌素产细菌素抗逆性能：酸、氧、温度抗逆性能：酸、氧、温度微生物制剂的开发微生物制剂的开发l建立了较为完整的微生物选育、发酵、后处理工艺平台建立了较为完整的微生物选育、发酵、后处理工艺平台l建设了近建设了近3000个菌株的菌种资源库：芽孢杆菌、乳酸菌、酵个菌株的菌种资源库：芽孢杆菌、乳酸菌、酵母母l建立了初步的微生物制剂安全性和有效性评价细胞模型和动建立了初步的微生物制剂安全性和有效性评价细胞模型和动物模型物模型四、抗菌肽四、抗菌肽1. 1. 抗菌肽的定义抗菌肽的定义l 抗菌肽：是生物体内经诱导产生的具有生物学活抗菌肽：是生物体内经诱导产生的具有生物学活性的小分子性的小分子 多肽，它们与机体先天性免疫功能密切多肽，它们与机体先天性免疫功能密切相关的，由相关的，由20-5020-50个氨基酸残基，具有强碱性、热稳个氨基酸残基，具有强碱性、热稳定性和广谱抗菌活性。定性和广谱抗菌活性。在核糖体中合成在核糖体中合成经过蛋白质的著录和翻译经过蛋白质的著录和翻译l 微生物产生的具有抑制或杀灭其它微生物的代谢微生物产生的具有抑制或杀灭其它微生物的代谢产物或次级代谢产物。产物或次级代谢产物。92抗菌肽是动物体免疫组成的实例抗菌肽是动物体免疫组成的实例始作俑者：始作俑者：甲类链球菌甲类链球菌受害者：受害者：人类皮肤人类皮肤92正常对照组小鼠组织正常对照组小鼠组织培养物内病菌极少培养物内病菌极少敲除基因但添加抗菌肽小鼠敲除基因但添加抗菌肽小鼠组织培养物内病菌数量较少，组织培养物内病菌数量较少，病菌受到抗菌肽抑制病菌受到抗菌肽抑制敲除基因未添加抗菌肽小鼠敲除基因未添加抗菌肽小鼠组织培养物内病菌数量最多组织培养物内病菌数量最多短短链脂肪酸可脂肪酸可诱导动物体物体内内抗菌抗菌肽的的产生生Short chain fatty acidEnergySourceWoundHealingCellProliferationpHMucousSodium & WaterAbsorptionAMP Production and Immune Regulation 丁酸使空肠和结肠丁酸使空肠和结肠 防御素产量增加防御素产量增加短链脂肪酸诱导猪小肠防御素的表达短链脂肪酸诱导猪小肠防御素的表达Zeng etal，2013, PloS Onel 是是CACA与与CDCD融合表达的产物。融合表达的产物。l 氨基酸序列：氨基酸序列：KWKLFKKIEKVGQRVRDAVISAGPAVATVAQATALAKl 分子量：分子量：3866.64DaChen et al 2009, Antimicrob Agents Chemothe1 1、天蚕素抗菌肽的表达与结构、天蚕素抗菌肽的表达与结构制得标准品，建立了制得标准品，建立了HPLC检测方法和纯化中试工艺检测方法和纯化中试工艺建立了抗菌谱建立了抗菌谱菌种菌种革兰氏属性革兰氏属性最小抑菌浓度（最小抑菌浓度（g/ml）金黄色葡萄球菌CMCC26003G+1.3金黄色葡萄球菌CVCC1882G+4.69金黄色葡萄球菌ATCC29213G+23.43金黄色葡萄球菌ATCC25923G+11.7金黄色葡萄球菌ATCC43300G+58.75金黄色葡萄球菌野生株（吉林）G+23.43金黄色葡萄球菌野生株（华中）G+11.7嗜水气单胞菌（A.hydrophila ）G-46.9蜡样芽孢杆菌（B.cereus）G+0.2鳗弧菌（Vibrio anguillarum ）G-12.8魏氏梭菌（C.perfringens）G+1.42 2、天蚕素抗菌肽对细菌细胞的作、天蚕素抗菌肽对细菌细胞的作用机制用机制 Time-killing curves of AMP on S.aureus CVCC1882 (a) and ATCC43300 (b)王庆伟，谯仕彦，王庆伟，谯仕彦，2014Effects of AMP on the appearance of MRSA as seen by scanning electron microscopy王庆伟，谯仕彦，王庆伟，谯仕彦，2014王庆伟，谯仕彦，王庆伟，谯仕彦，2014Effects of AMP on the appearance of MRSA as seen by transmission electron microscopy103Effects of 0.125MIC AMPon cell size in MRSA王庆伟，谯仕彦，王庆伟，谯仕彦，2014对照组对照组 Sublancin处理组处理组对照组对照组 Sublancin处理组处理组Differentially expressed proteins of MRSA cells treated with 0.125MIC AMP(right) or without AMP(left). 王庆伟，谯仕彦，王庆伟，谯仕彦，2014王庆伟，谯仕彦，2014mRNA levels of differentially expressed proteins of MRSA cells after 0.125 MIC AMP treatment1（D-lactate dehydrogenase）2（putative translaldolase）3（phosphoenolpyruvate carboxykinase） 4（1-Pyrroline-5-carboxylate dehydrogenase）5（NAD-specific glutamate dehydrogenase）6（alanine dehydrogenase）7（alkyl hydroperoxide reductase subunit C）8（superoxide dismutase）9（chain A, S. aureus thioredoxin）3 3、抗菌肽对金葡菌、抗菌肽对金葡菌CVCC1882CVCC1882感染小感染小鼠的治疗作用鼠的治疗作用Q. W. Wang etal. Anatomic Record. 2014治疗天数Days after inoculation0123累积死亡率（%）Cumulative mortality（%）Control0000金葡菌0104555金葡菌 + 0.5 mg Sublancin0102535金葡菌 + 1.0 mg Sublancin0102530金葡菌 + 2.0 mg Sublancin051010金葡菌 + 4.0 mg Sublancin0101010金葡菌 + 1.0 mg 氨苄西林051025金葡菌 + 2.0 mg 氨苄西林001010Effects of AMP on the clinical features and mortality in S.aureus CVCC1882 infected miceQ. W. Wang etal. Anatomic Record. 2014Histograms demonstrating the height of villi (a) and intestine cell proliferation (b) in responsible to S.aureus challenge and AMP treatmentQ. W. Wang etal. Anatomic Record. 2014 Pictures of PCNA-specific immunostaining of the intestinesQ. W. Wang etal. Anatomic Record. 2014Western Blot for NF-B (P65) and iNOS in intestinal samplesEffects of AMP on the caspase-3 positive cells in S. aureus infected micea: control; b: S. aureus; c: 4.0 mg/kg Sublancin; d: 2.0 mg/kg ampicillin.Q. W. Wang etal. Anatomic Record. 2014Effects of AMP on CD4 positive cells in S. aureus infected micea: control; b: S. aureus; c: 4.0 mg/kg Sublancin; d: 2.0 mg/kg ampicillin.Q. W. Wang etal. Anatomic Record. 2014Effects of AMP on CD8 positive cells in S. aureus infected micea: control; b: S. aureus; c: 4.0 mg/kg Sublancin; d: 2.0 mg/kg ampicillin.Q. W. Wang etal. Anatomic Record. 20144 4、抗菌肽对金葡菌、抗菌肽对金葡菌CVCC43300CVCC43300感染感染小鼠的治疗作用小鼠的治疗作用王庆伟，谯仕彦， 2014治疗天数Days after inoculation0123累积死亡率（%）Cumulative mortality（%）对照组0000金葡菌0103565金葡菌 + 0.5 mg Sublancin002035金葡菌 + 1.0 mg Sublancin001025金葡菌 + 2.0 mg Sublancin00515金葡菌 + 4.0 mg Sublancin00010金葡菌 + 1.0 mg 氨苄西林001030金葡菌 + 2.0 mg 氨苄西林001020Effects of AMP on the clinical features and mortality in S.aureus ATCC43300 infected mice王庆伟，谯仕彦， 2014Effects of AMP on the clinical features and mortality in S.aureus ATCC43300 infected mice治疗天数Days after inoculation0123体重（g）Body weight (g)对照组18.66 0.4420.14 0.4021.34 0.4722.89 0.59金葡菌18.66 0.3817.10 0.57*17.97 0.53*19.20 0.62*金葡菌 + 0.5mg Sublancin18.81 0.3118.35 0.39*19.06 0.49*20.17 0.65*金葡菌 + 1.0mg Sublancin18.63 0.3118.30 0.38*19.20 0.43*20.20 0.51*金葡菌 + 2.0mg Sublancin18.45 0.3718.57 0.47*19.72 0.51*,#20.62 0.63*,#金葡菌 + 4.0mg Sublancin18.72 0.3218.86 0.50*19.94 0.52*,#21.37 0.38*,#金葡菌 + 1.0mg 氨苄西林18.75 0.2718.25 0.36*18.63 0.40*19.51 0.43*金葡菌 + 2.0mg 氨苄西林18.53 0.3117.57 0.38*19.49 0.41*,#20.28 0.51*,#王庆伟，谯仕彦， 2014Histograms demonstrating the height of villi (a) and intestine cell proliferation (b) in responsible to S.aureus challenge and AMP treatment王庆伟，谯仕彦， 2014aWestern Blot for NF-B (P65) and iNOS in intestinal samples王庆伟，谯仕彦， 2014Effects of AMP on the caspase-3 positive cells in S. aureus infected mice王庆伟，谯仕彦， 2014Effects of AMP on the CD4 positive cells in S. aureus infected mice王庆伟，谯仕彦， 2014Effects of AMP on the CD8 positive cells in S. aureus infected mice5 5、抗菌肽对肉鸡坏死性肠炎的治疗、抗菌肽对肉鸡坏死性肠炎的治疗作用作用王帅，谯仕彦， 2014The effect of AMP and Clostridium perfringenschallenge on broiler performance Uninfected controlInfected controlSublancin (mg/L)Lincomycin (mg/L)p value2.885.7611.5275Bodyweight on Day 14 (g)446.8 12.9450.2 12.4455.2 16.2461.4 8.0439.3 18.5447.5 19.90.226Days 14 to 28weight gain (g)910.5 33.8a837.2 19.2b897.5 32.5a944.3 29.3a899.0 52.1a887.7 28.3a0.001Feed intake (g)1424.6 59.71405.8 78.21450.7 62.21462.1 81.31402.7 101.21428.9 45.90.696FCR1.56 0.03a1.68 0.07b1.62 0.02ab1.54 0.08a1.56 0.12a1.61 0.03ab0.031王帅，谯仕彦， 2014Uninfected controlInfected controlSublancin (mg/L)Lincomycin (mg/L)p value2.885.7611.5275Duodenum Villus height (m)910.41 69.43a880.18 27.27a906.61 77.06a1103.98 114.94b1016.28 88.62ab1143.98 90.41b0.001 Crypt depth (m)188.70 24.40197.13 2.00177.80 17.53186.81 13.38192.35 12.09179.20 16.200.349 Villus height to crypt depth ratio4.85 0.31ab4.46 0.13a5.14 0.70ab5.92 0.60bc5.29 0.41ab6.44 0.91c0.001Jejunum Villus height (m)805.17 64.47776.44 71.37873.58 122.26903.19 80.59918.80 54.00927.45 88.890.068 Crypt depth (m)159.05 20.71180.08 13.77146.50 32.58168.72 19.65174.84 9.56158.38 15.240.136 Villus height to crypt depth ratio5.14 0.83ab4.32 0.43a6.11 1.17c5.45 1.06ab5.26 0.39ab5.88 0.56c0.028Ileum Villus height (m)576.04 59.72588.01 43.60608.71 96.37624.14 68.27651.39 150.94544.60 44.020.405 Crypt depth (m)146.71 18.19a134.91 15.03ab130.40 22.55ab136.08 27.41ab123.62 19.70ab100.43 19.63b0.024 Villus height to crypt depth ratio3.97 0.584.40 0.554.79 1.224.74 1.005.30 1.255.55 0.90 0.135The effect of AMP and Clostridium perfringens challenge on small intestinal morphology王庆伟，谯仕彦， 2014The clinical signs and pathological changes of Clostridium perfringens-infected broilers and control broilers. (A) No gross lesion was detected in the intestine of control broilers euthanized on d 28 of trial. (B) Depression, bristling fethers and whitish-yellow diarrhea were observed in the infected bird at 5 d after first C. perfringensinoculation. (C) Hyperemia and hemorrhage of intestinal mucosa, (D) needle-like bleeding points in the gut wall, (E) ballooning of intestine and (F) necrotic lesions in the liver were observed in the birds of infected control group necropsied on d 28. 图图1-3 28日龄肉鸡肝脏外观变化日龄肉鸡肝脏外观变化A：对照；：对照；B：未治疗组；：未治疗组；C：抗菌肽治疗：抗菌肽治疗王帅，谯仕彦， 2014 Intestinal lesion scores of different treatments groups on d 28 of trial. Groups that are significantly different from each other at P 0.05 are indicated by different letters (a, b).王帅，谯仕彦， 2014Clostridium perfringens, Escherichia coli, Lactobacillus counts in the caecum of broiler chickens on d 28 of trial. Groups that are significantly different from each other at P 0.05 are indicated by different letters (a-c).王帅，谯仕彦， 2014The effect of sublancin and Clostridium perfringens challenge on immune response of broiler chickens. (A) Serum immunoglobulin G (IgG). (B) Interleukin-1 (IL-1), (C) IL-6 and (D) tumor necrosis factor in the ileum of broiler chickens. Error bars indicate SD.Groups that are significantly different from each other at P 0.05 are indicated by different letters (a-d)6 6、抗菌肽对大肠杆菌攻毒仔猪和、抗菌肽对大肠杆菌攻毒仔猪和肉鸡的作用肉鸡的作用日粮中添加不同水平抗菌肽对断奶仔猪生产性能的影响日粮中添加不同水平抗菌肽对断奶仔猪生产性能的影响 项目项目空白组空白组抗生素组抗生素组150 mg/kg抗菌肽抗菌肽250 mg/kg抗菌肽抗菌肽350 mg/kg抗菌肽抗菌肽SEMP值值试验前期试验前期 (0-14 d) 平均日采食量平均日采食量 508 474 476 495 46816.900.60 平均日增重平均日增重 232 248 222 252 245 10.210.26 料肉比料肉比 F/G 2.19 1.91 2.14 1.96 1.92 0.130.31试验后期试验后期 (15-28 d) 平均日采食量平均日采食量 776 793 783 821 81018.920.58 平均日增重平均日增重 394 435 416 444 427 17.220.17 料肉比料肉比 F/G 1.92 1.82 1.88 1.86 1.90 0.040.43试验全期试验全期 (0-28 d) 平均日采食量平均日采食量 625 614 610 638 61711.040.85 平均日增重平均日增重 281 330 307 336 32519.320.24 料肉比料肉比 F/G 2.22 1.86 1.99 1.90 1.90 0.180.0610%10%硫酸粘杆菌素硫酸粘杆菌素300 mg/kg + 300 mg/kg + 10%10%杆菌肽锌杆菌肽锌1 15 500 mg/kg00 mg/kg；Wu Wu 等，等，2012, Peptides2012, Peptides项目项目对照组对照组抗生素组抗生素组抗菌肽抗菌肽SEMSEMP P值值攻毒前攻毒前（012 d）平均日采食量平均日采食量 ADFI (g) 455 462 4594.20.45 平均日增重平均日增重 ADG (g) 328b 354a 340ab5.3 0.04 饲料转化率饲料转化率 G/F 0.72b 0.77a 0.74ab 0.010.03 攻毒后攻毒后（1319 d）平均日采食量平均日采食量 ADFI (g) 566 597 592 10.8 0.08 平均日增重平均日增重 ADG (g) 312b 367a 358a 6.4 0.01 饲料转化率饲料转化率 G/F 0.55b 0.62a 0.61a 0.01 0.01 腹泻率腹泻率 (%) 37.50 17.86 19.64氮沉积和能量沉积氮沉积和能量沉积 氮沉积氮沉积 (g/d) 10.1b 11.5a 10.7ab 0.38 0.04 氮消化率氮消化率 (%) 73.2 76.9 75.0 1.25 0.17 能量沉积能量沉积 (MJ/kg) 2.5b 3.0a 2.8ab 0.13 0.04 能量消化率能量消化率 (%) 84.6 88.2 86.4 1.71 0.14 日粮中添加抗菌肽或抗生素对攻毒前后断奶仔猪生长性能的影响日粮中添加抗菌肽或抗生素对攻毒前后断奶仔猪生长性能的影响50%50% 吉他吉他 霉素霉素100 100 mg/kg + mg/kg + 10%10%硫酸粘杆菌素硫酸粘杆菌素8 800 mg/kg00 mg/kg；Wu Wu 等，等，2012, Peptides2012, Peptides项目项目对照组对照组抗生素组抗生素组抗菌肽组抗菌肽组SEMP值值绒毛高度绒毛高度 m 十二指肠十二指肠 417.6 438.8 430.5 10.7 0.53 空肠空肠 401.3 447.9 419.7 18.4 0.37 回肠回肠 357.3b 396.5a 384.1a 7.4 0.04隐窝深度隐窝深度 m 十二指肠十二指肠 233.3 227.1 231.5 5.3 0.41 空肠空肠 212.1b 232.9a 219.0b 3.8 0.04 回肠回肠 211.5 217.1 212.8 5.6 0.37绒毛高度：隐窝深度绒毛高度：隐窝深度 十二指肠十二指肠 1.83 1.96 1.89 0.24 0.18 空肠空肠 1.89b 1.97a 1.91ab 0.02 0.03 回肠回肠 1.74b 1.85a 1.82ab 0.03 0.04大肠杆菌大肠杆菌K88K88攻毒条件下，攻毒条件下，日粮中添加抗菌肽或抗生素对断奶仔猪肠道形态的影响日粮中添加抗菌肽或抗生素对断奶仔猪肠道形态的影响50%50% 吉他吉他 霉素霉素100 100 mg/kg + mg/kg + 10%10%硫酸粘杆菌素硫酸粘杆菌素8 800 mg/kg00 mg/kg；Wu Wu 等，等，2012, Peptides2012, Peptides项目项目对照组对照组 抗生素组抗生素组抗菌肽组抗菌肽组SEMP值值回肠回肠 大肠杆菌大肠杆菌 4.37 4.14 4.250.180.85 乳酸杆菌乳酸杆菌 9.38 10.00 9.620.200.42 总好氧菌总好氧菌 6.69a 6.60ab 6.43b0.080.04 总厌氧菌总厌氧菌 9.36b 9.87ab 10.12a0.230.03盲肠盲肠 大肠杆菌大肠杆菌 3.37a 3.09b 3.22ab0.070.04 乳酸杆菌乳酸杆菌 8.89b 9.47a 9.23a0.090.03 总好氧菌总好氧菌 3.88 3.77 3.490.440.63 总厌氧菌总厌氧菌 8.79 9.37 9.260.280.38大肠杆菌大肠杆菌K88攻毒条件下攻毒条件下日粮添加抗菌肽或抗生素对肠道微生物的影响（单位：日粮添加抗菌肽或抗生素对肠道微生物的影响（单位：loglogCFUCFU/g/g）50%50% 吉他吉他 霉素霉素100 100 mg/kg + mg/kg + 10%10%硫酸粘杆菌素硫酸粘杆菌素8 800 mg/kg00 mg/kg；抗菌肽，；抗菌肽，400mg/kg400mg/kg。Wu Wu 等，等，2012, Peptides2012, Peptides人工感染大肠杆菌猪的试验人工感染大肠杆菌猪的试验对照对照杆菌肽锌杆菌肽锌+硫硫酸粘杆菌素酸粘杆菌素抗菌肽抗菌肽SEMP-value血清血清 IgA (ug/ml)167.8b165.1b185.4a5.570.04 IgG (ug/ml)868.4b925.3b1020.7a29.620.005 白介素白介素-(pg/ml)4.58c7.88b9.77a0.060.001 白介素白介素-6 (pg/ml)1.97c2.84b5.04a0.090.001分泌性分泌性 IgA (ug/g) 十二指肠十二指肠54.355.453.02.600.81 空场空场65.1b71.5a74.5a1.710.005 回肠回肠78.677.175.02.050.4950%50% 吉他吉他 霉素霉素100 100 mg/kg + mg/kg + 10%10%硫酸粘杆菌素硫酸粘杆菌素8 800 mg/kg00 mg/kg；抗菌肽，；抗菌肽，400mg/kg400mg/kg。Wu Wu 等，等，2012, Peptides2012, Peptides项目项目SEM P value阴性对阴性对照照粘杆菌粘杆菌素素100抗菌肽抗菌肽150抗菌肽抗菌肽300抗菌肽抗菌肽150+粘杆粘杆菌素菌素1000-21d ADG, g 30c 31b 31b 32b 33a0.290.01 ADFI, g 50 51 50 51 500.310.38 FCR 1.67a 1.62b 1.62b 1.59b 1.53c0.020.0121-42d ADG, g 67c 68bc 67bc 69b 71a0.540.01 ADFI, g 130 129 131 129 1310.810.17 FCR 1.94a 1.88b 1.94a 1.87b 1.85b0.020.020-42d ADG, g 48c 50b 49c 50b 52a0.290.01 ADFI, g 90 90 91 90 910.450.42 FCR 1.86a 1.80b 1.84a 1.78b 1.75c 0.01 0.02生理条件下生理条件下日粮中添加抗菌肽或抗生素对肉鸡生产性能的影响日粮中添加抗菌肽或抗生素对肉鸡生产性能的影响生理条件下生理条件下日粮中添加抗菌肽或抗生素对肉鸡生产性能的影响日粮中添加抗菌肽或抗生素对肉鸡生产性能的影响0.400.080.760.710.770.890.70法氏囊指数0.070.171.421.531.482.271.72脾脏指数0.910.343.272.934.303.703.51胸腺指数第42天0.080.232.791.942.702.762.64法氏囊指数0.060.060.740.870.670.680.90脾脏指数0.660.443.603.954.324.363.64胸腺指数第21天抗菌肽150+粘杆菌素100抗菌肽150粘杆菌素100阴性对照P值SEM处理项目生理条件下生理条件下日粮中添加抗菌肽对肉鸡免疫器官指数（日粮中添加抗菌肽对肉鸡免疫器官指数（g/kg体重）的影响体重）的影响抗菌肽300陈红雨，谯仕彦. 2011项目项目处理处理SEMP value阴性阴性对照对照粘杆菌粘杆菌素素100抗菌肽抗菌肽150抗菌肽抗菌肽300抗菌肽抗菌肽150+粘杆粘杆菌素菌素100试验试验 d 21 乳酸杆菌乳酸杆菌 7.217.397.337.607.410.23 0.82 大肠杆菌大肠杆菌 4.59a 3.99c 4.33b 4.28b 3.93c0.06 0.03 总耗氧菌总耗氧菌 8.95a 8.32c 8.61b 8.49bc 8.25c0.08 0.01试验试验 d 42 乳酸杆菌乳酸杆菌7.357.51 7.417.617.560.20 0.91 大肠杆菌大肠杆菌 4.67a 4.18bc 4.35b 4.24bc 4.06c0.09 0.02 总耗氧菌总耗氧菌 8.91a 8.40c 8.63b 8.54b 8.31d0.080.01表 4 日粮中添加抗菌肽（CAD）对肉鸡盲肠微生物数目（log CFU/g湿重）的影响生理条件下生理条件下日粮中添加抗菌肽或抗生素对肉鸡肠道菌群结构的影响日粮中添加抗菌肽或抗生素对肉鸡肠道菌群结构的影响陈红雨，谯仕彦. 2011日粮中添加抗菌肽对肉鸡血浆日粮中添加抗菌肽对肉鸡血浆IL-6水平的影响水平的影响 NC：阴性对照阴性对照AC：粘杆菌素：粘杆菌素150C150：抗菌肽：抗菌肽150 mg/kgC300：抗菌肽：抗菌肽300mg/kgCC：抗菌肽：抗菌肽150+粘杆菌素粘杆菌素100mg/kg陈红雨，谯仕彦. 2011l饲料营养价值评价与营养需要饲料营养价值评价与营养需要l猪肠道健康的营养调控猪肠道健康的营养调控l母猪营养母猪营养lIUGRIUGR猪的发生机制及其营养调控猪的发生机制及其营养调控l饲料安全与有效性评价饲料安全与有效性评价l发酵饲料研究开发发酵饲料研究开发l生物饲料添加剂（酶制剂、微生物制剂、抗菌肽）研究开发生物饲料添加剂（酶制剂、微生物制剂、抗菌肽）研究开发农业部饲料工业中心的研究领域农业部饲料工业中心的研究领域国家饲料工程技术研究中心南口基地国家饲料工程技术研究中心南口基地8/15/2024抗菌肽抗菌肽抗菌肽抗菌肽CADCADCADCAD生产基地生产基地生产基地生产基地（年产（年产（年产（年产5000500050005000吨）吨）吨）吨）生产发酵设备生产发酵设备生产发酵设备生产发酵设备8/15/2024河南林州抗菌肽生产基地河南林州抗菌肽生产基地 8/15/2024谢谢！谢谢！进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。记忆中的故那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑了，快来我给你扇扇强子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，“你看热的，跑什么？你看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！蒲扇是中国传统工艺品，在是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，圆，轻巧又便宜的蒲扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅长的时间隧道，袅结束