杂杂种种植植株株筛选融筛选融合合AB的原生的原生质体质体再再生生出出细细胞胞壁壁脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物细胞的融合植物细胞的融合植物组织培养植物组织培养植物细胞植物细胞A原生质体原生质体B原生质体原生质体A杂种杂种细胞细胞AB去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导方法？方法？促进融合促进融合的方法的方法？融合融合完成完成的的标志标志植物细胞植物细胞B植物体细胞杂交技术过程植物体细胞杂交技术过程原理？原理？原理原理？成果和未解决的问题成果和未解决的问题 成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出 现自然界没有的新品种现自然界没有的新品种。未解决的问题：未能让杂种植物按照人们未解决的问题：未能让杂种植物按照人们 的需要表的需要表现出亲代的优良。现出亲代的优良。如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！动物细胞也能融合吗？动物细胞也能融合吗？一、动物细胞融合1、动物融合的过程请同学们阅读课本P52动物融合不同不同DNADNA的两个细胞的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞融合后的细胞进行有丝分裂进行有丝分裂1、动物细胞融合过程思考题思考题1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？酶解法，如纤维素酶或果胶酶酶解法，如纤维素酶或果胶酶2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁无需，因为动物细胞无细胞壁3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；离心、电激等物理方法；PEG等化学方法等化学方法4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能能 还可以利用灭活的病毒进行诱导还可以利用灭活的病毒进行诱导5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能不能6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？2、动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程细胞的过程主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振动、电刺激）动、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？思考题思考题 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？ 生产单克隆抗体生产单克隆抗体提提问问？1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？、一个淋巴细胞、一个淋巴细胞(浆细胞浆细胞)能分泌多种能分泌多种抗体吗？抗体吗？、一种抗原侵入机体之后，引起机体免、一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？疫反应产生的抗体只有一种吗？. 简述获得抗体的传统途径？简述获得抗体的传统途径？、这种方法获得的抗体有什么缺陷？、这种方法获得的抗体有什么缺陷？二、单克隆抗体二、单克隆抗体 抗原抗原 动物体动物体刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗体不纯抗体不纯特异性差、纯度低；特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏产量低、反应不够灵敏传统血清抗体的制备传统血清抗体的制备抗原不纯抗原不纯 每个淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个淋巴细胞每个淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？体外培养淋巴细胞能无限增殖吗体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? 体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体怎样解决这个问题？怎样解决这个问题？设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖杂种细胞杂种细胞二、单克隆抗体二、单克隆抗体2.2.制备过程：制备过程：诱导其融合的方法有哪些？诱导其融合的方法有哪些？融合后培养液中有几种细胞融合后培养液中有几种细胞怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点瘤细胞有何优点注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么为何要进行克隆化培养和专为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选一抗体检测，多次筛选大量增殖杂交瘤细胞获得单大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法抗的方法3.单克隆抗体的应用： 在基础理论研究中具有重要意义在基础理论研究中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 特异性高、灵敏度高等优越性特异性高、灵敏度高等优越性。生物导弹生物导弹二、单克隆抗体二、单克隆抗体思考题 制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ 假如你掌握了动物细胞融合技术，你想用它来解决什么问题？B BB B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤细胞融合后培养液中有几种细胞？细胞融合后培养液中有几种细胞？筛选杂种细胞筛选杂种细胞已知细胞合成已知细胞合成DNADNA有有D D和和S S两条途径，其中两条途径，其中D D途途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条条DNADNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有瘤细胞中尽管没有S S途径，但能不断分裂增殖，途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加将这两种细胞在试管中混合，加PEGPEG促融，在促融，在筛选培养基上筛选获得杂种细胞。筛选培养基上筛选获得杂种细胞。幻灯片 15