112014年年12月月13日日19:13:182目的要求目的要求1.掌握掌握moisture、crudeash测定；测定；2.掌握掌握P(crudeprotein),crudelipidetherextract(EE)的测定；的测定；3.掌握掌握Ca、P的测定。的测定。2014年年12月月13日日19:13:183一、一、饲料水分的测定饲料水分的测定（GB6435-86）1、饲料中初水的测定、饲料中初水的测定鲜样鲜样在在6065的恒温干燥箱中烘的恒温干燥箱中烘812h，失，失去部分水份后，再回潮与空气湿度保持平衡，失去部分水份后，再回潮与空气湿度保持平衡，失去的水分为去的水分为饲料的游离水饲料的游离水即初水即初水。2014年年12月月13日日19:13:1842、饲料中吸附水的测定、饲料中吸附水的测定A、原理：、原理：1052、一个大气压、一个大气压下烘干，试样至恒重，逸下烘干，试样至恒重，逸失的重量为水分失的重量为水分【奶制品、动物和植物油脂及矿【奶制品、动物和植物油脂及矿物质除外】物质除外】。2014年年12月月13日日19:13:185电子天平电子天平B、水分测定相关设备、水分测定相关设备冷冻真空干燥仪冷冻真空干燥仪干燥箱干燥箱冷冻干燥仪冷冻干燥仪2014年年12月月13日日19:13:186C、测定步骤、测定步骤称样皿编号并称样皿编号并恒重恒重精确精确称取试样称取试样25g，用用已恒重的滤纸已恒重的滤纸包好包好并放入称样皿并放入称样皿不盖称样不盖称样皿盖皿盖，105烘烘3h盖好称样皿盖好称样皿盖，盖，燥器冷燥器冷却却30min称重称重 粉碎试样，过粉碎试样，过40目目脱脂滤纸脱脂滤纸恒重恒重恒重恒重 2014年年12月月13日日19:13:187D、计算、计算式中：式中：W1105烘干前试样、滤纸及称样皿重，烘干前试样、滤纸及称样皿重，g；W2105烘干后试样、滤纸及称样皿重，烘干后试样、滤纸及称样皿重，g；W0已恒重的滤纸及称样皿重，已恒重的滤纸及称样皿重，g。水分（）水分（）W1W2W1W01002014年年12月月13日日19:13:188E、注意、注意1、重复性：、重复性：两个平行样测定值相差不得超过两个平行样测定值相差不得超过0.2%；u含水量在含水量在10%以上，允许偏差为以上，允许偏差为1%；u含水量在含水量在5%10%以上，允许偏差为以上，允许偏差为3%；u含水量在含水量在5%以下，允许偏差为以下，允许偏差为5%；2014年年12月月13日日19:13:1892、含、含脂肪高脂肪高的样品，烘干时间过长反而增重的样品，烘干时间过长反而增重;3、含、含糖分高糖分高，易分解或焦化试样，应用减压干，易分解或焦化试样，应用减压干燥法测定水分燥法测定水分;4、含、含挥发性物质挥发性物质的样品，测定结果偏大。的样品，测定结果偏大。2014年年12月月13日日19:13:18103、其他测定方法、其他测定方法真空干燥法；真空干燥法；冷冻干燥法；冷冻干燥法；蒸馏法；蒸馏法；离心浓缩法离心浓缩法2014年年12月月13日日19:13:18111、原理：、原理：样品在样品在550600高温下灼烧后，有机物质被高温下灼烧后，有机物质被氧化逸失，所剩残渣为氧化逸失，所剩残渣为粗灰分粗灰分（含氧化物、无含氧化物、无机物、砂石机物、砂石）。）。二、饲料粗灰分的测定二、饲料粗灰分的测定（GB/T643892）2014年年12月月13日日19:13:18122、仪器、仪器茂茂福福炉炉（高高温温炉炉）2014年年12月月13日日19:13:18133、测定步骤、测定步骤550600下灼烧坩埚下灼烧坩埚(恒重）恒重）称取样品称取样品25g，装入已恒重的坩埚，装入已恒重的坩埚空气中冷却空气中冷却1min，放入干燥器中，放入干燥器中冷却冷却30min称量称量 高温炉中灼烧高温炉中灼烧24h（灰化灰化）直接灰化法直接灰化法醋酸镁灰化法醋酸镁灰化法硫酸灰化法硫酸灰化法样品粉碎过样品粉碎过40目目炭化炭化至无烟至无烟 恒重恒重 2014年年12月月13日日19:13:18144、计算、计算式中：式中：m0恒质空坩埚质量，恒质空坩埚质量，gm1坩埚加试料的质量，坩埚加试料的质量，gm2灰化后坩埚加灰分的质量，灰化后坩埚加灰分的质量，g粗灰分（粗灰分（%）=m2-m0m1-m01002014年年12月月13日日19:13:18155 5、注意及误差、注意及误差A、重复性、重复性粗灰分含量在粗灰分含量在5%以上，允许相对偏差为以上，允许相对偏差为1%；粗灰分含量在粗灰分含量在5%以下，允许相对偏差为以下，允许相对偏差为5%。B、灰化温度灰化温度550-600，若低于，若低于550，结果，结果偏高；若大于偏高；若大于600，结果偏低；，结果偏低；2014年年12月月13日日19:13:1816C、灼烧残渣颜色与试样中各元素含量有关灼烧残渣颜色与试样中各元素含量有关。灰化后如能观察到炭粒，须加灰化后如能观察到炭粒，须加蒸馏水或过氧化蒸馏水或过氧化氢氢进行处理。进行处理。D、样本重量据粗灰分含量定，粗灰分含量高、样本重量据粗灰分含量定，粗灰分含量高的称少点。反之，则称多点。的称少点。反之，则称多点。2014年年12月月13日日19:13:1817三、饲料粗蛋白的测定三、饲料粗蛋白的测定（GB/T643294）1.测定原理测定原理2NH2(CH2)COOH+13H2SO4(NH4)2SO4+6CO2+12SO2+16H2(NH4)2SO4+2NaOH2NH3+2H2O+Na2SO44H3BO3+NH3NH4HB4O7+5H2ONH4HB4O7+HCl+5H2ONH4Cl+4H3BO3CuSO4CuSO4或硒或硒粗蛋白含量粗蛋白含量=N%6.252014年年12月月13日日19:13:18182.仪器设备仪器设备2014年年12月月13日日19:13:1819凯氏蒸凯氏蒸凯氏蒸凯氏蒸馏装置馏装置馏装置馏装置2014年年12月月13日日19:13:18202014年年12月月13日日19:13:1821消化炉消化炉2014年年12月月13日日19:13:18223.试剂试剂(1)硫酸：化学纯，含量为硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。，无氮。(2)混合催化剂混合催化剂(K2SO4/Na2SO4+CuSO4)(3)氢氧化钠：化学纯，氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（水溶液（m/v）。）。(4)硼酸：化学纯，硼酸：化学纯，20g/L水溶液（水溶液（m/v）。）。2014年年12月月13日日19:13:1823(5)混合指示剂：甲基红混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液乙醇溶液，溴甲酚，溴甲酚绿绿0.5%乙醇溶液乙醇溶液，两溶液等体积混合。，两溶液等体积混合。(6)0.02mol/L盐酸标准溶液：用盐酸标准溶液：用无水碳酸钠标定无水碳酸钠标定。c（HCl）0.02mol/L。【1.67mL盐酸（分析纯）盐酸（分析纯），注入，注入1000mL蒸馏水中】蒸馏水中】。(7)蔗糖：分析纯。蔗糖：分析纯。(8)硫酸铵：分析纯，干燥。硫酸铵：分析纯，干燥。2014年年12月月13日日19:13:18244.饲料粗蛋白的测定步骤饲料粗蛋白的测定步骤试样消化试样消化氨的蒸馏氨的蒸馏滴定滴定空白滴定空白滴定计算计算前进前进2014年年12月月13日日19:13:18251）试样消化）试样消化A、样品粉碎过、样品粉碎过40目目;B、称重，、称重，准确至准确至0.0002g，放入消化管底部，放入消化管底部;高蛋白样品：高蛋白样品：0.51g；低蛋白样品：低蛋白样品：23g。C、加催化剂、加催化剂(6gK2SO4或或Na2SO4和和0.4gCuSO4)、10ml浓硫酸，浓硫酸，2粒玻璃珠粒玻璃珠;D、消化至透明的、消化至透明的蓝绿色蓝绿色，再继续消化，再继续消化15min;E、空白消化空白消化同同B、C，将样品换为，将样品换为0.5g蔗糖蔗糖（或用（或用蒸馏水蒸馏水）返回返回2014年年12月月13日日19:13:18262）氨的蒸馏）氨的蒸馏常量蒸馏法常量蒸馏法半微量蒸馏法半微量蒸馏法a、将试样消煮液冷却，加入、将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，定蒸馏水，定容至容至100mL为为试样分解液试样分解液；b、将蒸馏装置的冷凝管末端、将蒸馏装置的冷凝管末端浸入浸入有有20mL硼酸硼酸和和2滴混合指示剂滴混合指示剂的锥形瓶内；的锥形瓶内；2014年年12月月13日日19:13:1827c、蒸汽发生器的水中加入、蒸汽发生器的水中加入甲基红指示剂数滴，硫甲基红指示剂数滴，硫酸数滴酸数滴，并加热产生蒸汽；，并加热产生蒸汽；d、准确移取、准确移取试样分解液试样分解液1020mL注入蒸馏装置注入蒸馏装置的反应室中，加的反应室中，加10mL氢氧化钠溶液，塞好玻璃塞，氢氧化钠溶液，塞好玻璃塞，且且加水密封加水密封；e、蒸馏、蒸馏4min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏馏1min，停止蒸馏。，停止蒸馏。返回返回2014年年12月月13日日19:13:18283）滴定：）滴定：用用0.1mol/L的盐酸标液滴定吸收液，溶液由的盐酸标液滴定吸收液，溶液由蓝绿蓝绿色变成灰红色为终点色变成灰红色为终点。返回返回2014年年12月月13日日19:13:18294）空白滴定）空白滴定空白消化液空白消化液蒸馏后进行滴定。蒸馏后进行滴定。消耗消耗0.1mol/L盐酸标液不得超过盐酸标液不得超过0.2mL。消耗消耗0.02mol/L盐酸标液不得超过盐酸标液不得超过0.3mL。返回返回2014年年12月月13日日19:13:1830粗蛋白质（粗蛋白质（%）=（V1-V2）C0.01406.25mV/V5、计、计算算式中：式中：V1滴定滴定试样试样时所需盐酸标液，时所需盐酸标液，ml；V2滴定滴定空白空白所需盐酸标液，所需盐酸标液，ml；C盐酸标液浓度，盐酸标液浓度，mol/L；m试样质量，试样质量，g；V试样分解液总体积，试样分解液总体积，ml；V试样分解液蒸馏用体积，试样分解液蒸馏用体积，m/L；0.0140每毫克当量氮的克数；每毫克当量氮的克数；6.25氮换算成蛋白质的平均系数。氮换算成蛋白质的平均系数。返回返回2014年年12月月13日日19:13:18316、注意及误差、注意及误差1）重复性）重复性CP在在25%以上，允许相对偏差为以上，允许相对偏差为1%；CP在在10%25%之间，允许相对偏差为之间，允许相对偏差为2%；CP在在10%以下，允许相对偏差为以下，允许相对偏差为3%。2014年年12月月13日日19:13:18322）试样的粉碎粒度）试样的粉碎粒度3）试样的用量）试样的用量4）样品的消化）样品的消化硫酸硫酸用量，据样品用量确定；用量，据样品用量确定；硫酸钾或硫酸钠硫酸钾或硫酸钠的用量不能过大；的用量不能过大；消化液冷却后呈固态，则说明硫酸钾用量过大或消化液冷却后呈固态，则说明硫酸钾用量过大或硫酸不足；硫酸不足；消化液浑浊，应冷却后加入消化液浑浊，应冷却后加入H2O2再加热；再加热；消化时，应在瓶底加热。消化时，应在瓶底加热。2014年年12月月13日日19:13:18335）蒸馏的方法和时间）蒸馏的方法和时间6）盐酸标液的浓度）盐酸标液的浓度常量法中标液取常量法中标液取0.1M较合适；较合适；半微量法中标液在半微量法中标液在0.020.05M较合适。较合适。2014年年12月月13日日19:13:1834l紫外分光光度法紫外分光光度法l双缩脲法双缩脲法6.6.粗蛋白的其他测定方法粗蛋白的其他测定方法2014年年12月月13日日19:13:1835四、饲料粗脂肪的测定四、饲料粗脂肪的测定（GB/T 643394）1、测定原理、测定原理在在Soxhlet脂肪提取器中用脂肪提取器中用乙醚乙醚提取试样，据试样提取试样，据试样质量和残渣质量之差计算脂肪含量。脂肪中质量和残渣质量之差计算脂肪含量。脂肪中含有机含有机酸、磷脂、脂溶性维生素、叶绿素酸、磷脂、脂溶性维生素、叶绿素等。等。u测出的脂肪含量即为测出的脂肪含量即为乙醚浸出物乙醚浸出物etherextract（EE)2014年年12月月13日日19:13:18362 2、仪器、仪器2014年年12月月13日日19:13:1837索氏脂肪抽取仪索氏脂肪抽取仪脂肪测定仪脂肪测定仪2014年年12月月13日日19:13:18383、操作步骤、操作步骤滤纸恒重滤纸恒重 105下下样品恒重样品恒重取样并包于已取样并包于已恒重的滤纸恒重的滤纸将将恒重的滤纸包恒重的滤纸包放入放入抽提瓶，在抽提瓶，在6075下浸提下浸提57h105下下干燥干燥2h称重称重 试样粉碎至试样粉碎至40目目测定水分测定水分后的样品后的样品 取出滤纸包取出滤纸包使乙醚挥发使乙醚挥发恒重恒重 2014年年12月月13日日19:13:18394、计算、计算式中：式中：试样质量，试样质量，g1装有试样滤纸包浸提前质量装有试样滤纸包浸提前质量,g2装有试样滤纸包浸提后质量装有试样滤纸包浸提后质量,g粗脂肪（）粗脂肪（）=211002014年年12月月13日日19:13:18405、注意及误差、注意及误差1、重复性；、重复性；EE在在10%，允许相对偏差为，允许相对偏差为3%。EE10%，允许相对偏差为，允许相对偏差为5%。2、试样粗细度适宜；、试样粗细度适宜；3、测定时应在通风处进行。、测定时应在通风处进行。2014年年12月月13日日19:13:1841五、饲料中钙的测定五、饲料中钙的测定（GBT643692）1、测定原理、测定原理CaCl2+(NH4)2C2O4CaC2O4+2NH4ClCaC2O4+H2SO4CaSO4+H2C2O4KMnO4+5H2C2O4+3H2SO410CO2+MnSO4+8H2O+K2SO42014年年12月月13日日19:13:18422、试剂、试剂（1）硝酸）硝酸（2）盐酸溶液：）盐酸溶液：1+3（3）硫酸溶液：）硫酸溶液：1+3（4）氨水溶液：）氨水溶液：1+1；1+50（5）草酸胺溶液（）草酸胺溶液（42g/L）：）：4.2g草酸胺溶于草酸胺溶于100mL水水溶液溶液中中（6）高锰酸钾标准高锰酸钾标准c（1/5KMnO4）=0.05mol/L（Na2C2O4标标定定）（7）甲基红指示剂（）甲基红指示剂（1g/L）：）：0.1g甲基红溶于甲基红溶于100mL95%乙醇乙醇中中2014年年12月月13日日19:13:18433、仪器、仪器（1）实验室用样品粉碎机或研钵。）实验室用样品粉碎机或研钵。（2）析筛：孔径）析筛：孔径0.42mm（40目）。目）。（3）分析天平：感量）分析天平：感量0.0001g。（4）高温炉）高温炉（5）坩埚：瓷制。）坩埚：瓷制。（6）容量瓶：）容量瓶：100mL。（7）玻璃漏斗：直径）玻璃漏斗：直径6cm。（8）定量滤纸：中速，）定量滤纸：中速，79cm.（9）移液管：）移液管：10，20mL。2014年年12月月13日日19:13:18443、操作步骤、操作步骤550600下样下样品灰化并品灰化并恒重恒重制备制备试样试样分解液分解液过滤，并用氨过滤，并用氨水洗涤沉淀水洗涤沉淀滴定滴定 试样粉碎至试样粉碎至40目目测定灰测定灰分后的分后的样品样品 坩埚坩埚恒重恒重样品装入恒重样品装入恒重坩埚并炭化坩埚并炭化将将沉淀及滤纸沉淀及滤纸转转入烧杯中，加入烧杯中，加H2SO4溶解沉淀溶解沉淀空白空白取取试样分解液试样分解液1020ml，加蒸馏水、指示剂、氨加蒸馏水、指示剂、氨水，煮沸，加草酸铵，水，煮沸，加草酸铵，搅拌煮沸并搅拌煮沸并过夜过夜2014年年12月月13日日19:13:18456、计算、计算 式中：式中：X以质量分数表示的钙含量，以质量分数表示的钙含量，%；V1样品灰化液定溶体积，样品灰化液定溶体积，mlV2测定时样品液用量，测定时样品液用量，mlV3试样消耗试样消耗KMnO4标液的体积，标液的体积，mlV0空白消耗空白消耗KMnO4标液的体积，标液的体积，mlcKMnO4标液的浓度，标液的浓度，mol/L0.02与与1.00mlKMnO4标液相当的钙的质量标液相当的钙的质量X（%）=(V3-V0)c0.02 mV1V22014年年12月月13日日19:13:18467、注意及误差、注意及误差1、重复性、重复性含钙量含钙量10%以上，允许相对偏差以上，允许相对偏差2%；含钙量在含钙量在5%10%时，允许相对偏差时，允许相对偏差3%；含钙量含钙量1%5%时，允许相对偏差时，允许相对偏差5%；含钙量含钙量1%以下时，允许相对偏差以下时，允许相对偏差10%。2、高锰酸钾液浓度不稳定、高锰酸钾液浓度不稳定3、每种滤纸的空白值不同、每种滤纸的空白值不同2014年年12月月13日日19:13:18474、洗涤时须等上次洗涤液完全滤净后再加氨水；、洗涤时须等上次洗涤液完全滤净后再加氨水；5、干法分解的样品应冷却至、干法分解的样品应冷却至室温室温时再加盐酸，且时再加盐酸，且沿坩埚壁滴加沿坩埚壁滴加；6、测定中，滴加氨水至溶液、测定中，滴加氨水至溶液橙色橙色时需小心慢滴，时需小心慢滴，且边加边搅拌；且边加边搅拌；7、含钙较高时，应用、含钙较高时，应用250ml容量瓶定溶。容量瓶定溶。2014年年12月月13日日19:13:18488、其他测定方法、其他测定方法乙二胺四乙酸二钠（乙二胺四乙酸二钠（EDTA）络合滴定法）络合滴定法2014年年12月月13日日19:13:1849六、饲料总磷量的测定（钼黄法）六、饲料总磷量的测定（钼黄法）1、测定原理：、测定原理：将试样的有机物破坏，使磷游离出来，在酸性将试样的有机物破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用溶液中，用钒钼酸铵钒钼酸铵处理，生成黄色的处理，生成黄色的（NH4）3PO4NH4VO316MoO3络合物络合物，在，在波长波长420nm下进行比色测定。下进行比色测定。2014年年12月月13日日19:13:18502、试剂、试剂（1）盐酸溶液：）盐酸溶液：1+1（2）硝酸）硝酸（4）钒钼酸铵显色剂）钒钼酸铵显色剂（5）磷标准液：磷标准液：KH2PO4105下下干燥干燥1h，冷却，冷却后称取后称取0.2195g溶于水，加硝酸溶于水，加硝酸3mL，定量至，定量至1000mL摇匀，即为摇匀，即为50g/mL的磷标准液的磷标准液。2014年年12月月13日日19:13:18513、仪器、仪器（1）分光光度计）分光光度计（2）高温炉：可控温度在（）高温炉：可控温度在（55020）（3）瓷坩埚：）瓷坩埚：50mL（4）容量瓶：）容量瓶：50、100、1000mL（5）移液管：）移液管：1.0、2.0、5.0、10.0mL（6）三角瓶：）三角瓶：250mL（7）可调温电炉：）可调温电炉：1000W2014年年12月月13日日19:13:18524 4、磷标准曲线的绘制：、磷标准曲线的绘制：准确吸取磷准确吸取磷标液标液07.0ml分别放入分别放入8个个50ml容量瓶容量瓶分别加入钒分别加入钒钼酸铵钼酸铵10ml用水稀释用水稀释至刻度至刻度静置静置10min分光光度计在分光光度计在400nm波长下比色波长下比色作标准曲线作标准曲线2014年年12月月13日日19:13:18535、试样的测定、试样的测定550600下样下样品灰化并恒重品灰化并恒重制备制备试样试样分解液分解液加钒钼酸加钒钼酸铵铵10ml并并定容定容在标准曲线上查得分在标准曲线上查得分解液的磷含量解液的磷含量试样粉碎至试样粉碎至40目目测定灰分测定灰分后的样品后的样品取试样分解取试样分解液液110ml于于50ml容量瓶容量瓶坩埚恒重坩埚恒重样品装入恒重样品装入恒重坩埚中炭化坩埚中炭化放置放置10min420nm波长下比色波长下比色2014年年12月月13日日19:13:18546、计算、计算X=aVV1m式中：式中：X磷的含量，磷的含量，%a由标准曲线查得试样中磷含量，由标准曲线查得试样中磷含量，gV试样分解液总体积，试样分解液总体积，mlm试样质量，试样质量，gV1比色测定试样分解液的体积，比色测定试样分解液的体积，ml 2014年年12月月13日日19:13:18557、注意及误差、注意及误差1、重复性、重复性含磷量含磷量0.5%以下，允许相对偏差以下，允许相对偏差10%；含磷量含磷量0.5%以上，允许相对偏差以上，允许相对偏差3%。2、比色时待测液不能过浓；、比色时待测液不能过浓；3、待测液加入试液后应、待测液加入试液后应静置静置10min再比色，再比色，但不能静止过久；但不能静止过久；2014年年12月月13日日19:13:18564、比色时以、比色时以0ml分解液分解液为参比，每做一批要重为参比，每做一批要重新配，间隔时间不能太长；新配，间隔时间不能太长；5、测定样品时要集中在上午或下午进行；、测定样品时要集中在上午或下午进行；6、样本含磷较低时适宜用、样本含磷较低时适宜用钼蓝法钼蓝法；7、磷含量高时，应用、磷含量高时，应用250ml容量瓶容量瓶定容。定容。2014年年12月月13日日19:13:18578、其他测定方法、其他测定方法钼蓝比色法钼蓝比色法TCA法（植酸磷）法（植酸磷）喹钼柠酮法喹钼柠酮法2014年年12月月13日日19:13:1858Bye-bye!