食食 品品 理理 化化 检检 验验 实实 验验 教教 程程 武威市药品检验所 辛虎平实验一实验一 常压干燥法测定面粉的水分含量常压干燥法测定面粉的水分含量 n n一、原理一、原理 n n食品中的水分一般是指食品中的水分一般是指100100左右直接干燥下所失去的物左右直接干燥下所失去的物质的总量。直接干燥法适用于在质的总量。直接干燥法适用于在95-10595-105温度下，不含或温度下，不含或含其它挥发性物质甚微的食品。含其它挥发性物质甚微的食品。n n二、试剂和仪器二、试剂和仪器 n n玻璃扁形称量瓶玻璃扁形称量瓶 1 1个个 烘箱烘箱 1 1台台n n干燥器干燥器 1 1个个 分析天平分析天平 1 1台台n n台称台称 1 1台台n n三、操作方法三、操作方法 n n11取洁净玻璃扁形称量瓶取洁净玻璃扁形称量瓶, ,置于置于95-10595-105烘箱中烘箱中, ,瓶盖斜支瓶盖斜支于瓶边于瓶边, , 加热加热0.5-10.5-1小时小时, ,取出盖好取出盖好; ;置干燥器内冷却置干燥器内冷却3030分钟分钟, ,称量称量m0,m0,并重复干燥至恒重并重复干燥至恒重. . 实验一实验一 常压干燥法测定面粉的水分含量常压干燥法测定面粉的水分含量n n22将面粉加入称量瓶内将面粉加入称量瓶内, ,使其厚度为使其厚度为5mm5mm，加盖，精密称，加盖，精密称取其质量取其质量m1m1后，置后，置95-10595-105烘箱内，瓶盖斜支于瓶边，干烘箱内，瓶盖斜支于瓶边，干燥燥2-42-4小时后，盖好取出，放入干燥器内冷却小时后，盖好取出，放入干燥器内冷却0.50.5小时后称小时后称量。然后再放入量。然后再放入95-10595-105烘箱内干燥烘箱内干燥1 1小时左右，取出放入小时左右，取出放入干燥器内干燥器内0.50.5小时后再称量。如此反复操作，至前后两次质小时后再称量。如此反复操作，至前后两次质量差不超过量差不超过2mg,2mg,即为恒量即为恒量m2m2。n n33计算计算n nm0 m0 称量瓶恒量质量称量瓶恒量质量 g g n nm1 m1 称量瓶称量瓶+ +样品质量样品质量 g g n nm2 m2 称量瓶称量瓶+ +样品干燥后恒量质量样品干燥后恒量质量 g g 实验二实验二 大米（或面粉）总灰分的测定大米（或面粉）总灰分的测定 n n一、原理一、原理n n食品的灰分食品的灰分, ,是指食品经高温灼烧后所留下的无机物质是指食品经高温灼烧后所留下的无机物质, ,主要为氧化物或盐类。若灰分含量过高时，往往表示主要为氧化物或盐类。若灰分含量过高时，往往表示食品受到污染，影响质量。食品受到污染，影响质量。n n二、仪器二、仪器 n n高温炉高温炉 瓷坩埚瓷坩埚 电炉电炉 坩埚钳坩埚钳 台称台称 干燥器干燥器 分析天平分析天平n n三、操作方法：三、操作方法： n n1 1、取大小适宜的瓷坩埚置高温炉中，在、取大小适宜的瓷坩埚置高温炉中，在600600下灼烧下灼烧30min30min，冷至，冷至200200以后，取出，放入干燥器中冷至室温，以后，取出，放入干燥器中冷至室温，精密称量，并重复灼烧至恒量精密称量，并重复灼烧至恒量m0m0。n n2 2加入面粉加入面粉2g2g左右，并精密称量质量左右，并精密称量质量m1m1。n n3 3在电炉上以小火加热使样品充分炭化至无烟。然后在电炉上以小火加热使样品充分炭化至无烟。然后实验二实验二 大米（或面粉）总灰分的测定大米（或面粉）总灰分的测定 置于高温炉中，在置于高温炉中，在550550下灼烧至灰白色（一般为下灼烧至灰白色（一般为2-42-4小小时，如灰化不完全，可沿壁滴加几滴浓硝酸或双氧水，时，如灰化不完全，可沿壁滴加几滴浓硝酸或双氧水，以湿润样品即可，再灼烧）。冷至以湿润样品即可，再灼烧）。冷至200200以下后取出，以下后取出，放入干燥器中冷至室温，称量。放入干燥器中冷至室温，称量。n n4 4再放入再放入550550高温炉中灼烧高温炉中灼烧1 1小时，冷却，称重。重小时，冷却，称重。重复灼烧至前后两次称量相差不超过复灼烧至前后两次称量相差不超过0.5mg(0.0005g)0.5mg(0.0005g)为恒量为恒量m2m2。n n四计算：四计算： n nm0 m0 坩埚质量坩埚质量 g g n nm1 m1 坩埚质量坩埚质量+ +面粉质量面粉质量 g g n nm2 m2 坩埚质量坩埚质量+ +总灰分质量总灰分质量 g g 实验三实验三 比重瓶法测定酱油的相对密度比重瓶法测定酱油的相对密度 n n一、原理一、原理n n密度瓶具有一定的容积，在一定温度下，用同一密度密度瓶具有一定的容积，在一定温度下，用同一密度瓶分别称量等体积的酱油和蒸馏水的质量，两者之比瓶分别称量等体积的酱油和蒸馏水的质量，两者之比即为酱油的相对密度。即为酱油的相对密度。n n二、仪器和试剂二、仪器和试剂 n n普通密度瓶普通密度瓶 水浴锅水浴锅 温度计温度计 滤纸条滤纸条 分析天平分析天平 酱油酱油 蒸馏水蒸馏水 n n三、操作方法三、操作方法 n n1 1把密度瓶用自来水洗净，再依次用乙醇、乙醚洗涤，把密度瓶用自来水洗净，再依次用乙醇、乙醚洗涤，烘干并冷却后，精密称重烘干并冷却后，精密称重m0m0。n n2 2、将密度瓶装满酱油，盖上瓶盖，置于、将密度瓶装满酱油，盖上瓶盖，置于2020水浴中浸水浴中浸实验三实验三 比重瓶法测定酱油的相对密度比重瓶法测定酱油的相对密度 0.50.5小时，使瓶内酱油的温度达到小时，使瓶内酱油的温度达到2020，用滤纸条吸去，用滤纸条吸去毛细管溢出的酱油后取出。用滤纸小心把瓶外擦干，毛细管溢出的酱油后取出。用滤纸小心把瓶外擦干，置天平室内置天平室内3030分钟后称量分钟后称量m2 m2 。n n 3 3、将酱油倾出，洗净密度瓶，装入煮沸、将酱油倾出，洗净密度瓶，装入煮沸3030分钟并冷却分钟并冷却到到2020以下的蒸馏水，按上法操作。测出同体积以下的蒸馏水，按上法操作。测出同体积2020蒸蒸馏水的质量馏水的质量m1m1。 n n4 4、计算：、计算：n nm0 m0 空密度瓶质量空密度瓶质量 g g n nm1 m1 密度瓶和水的质量密度瓶和水的质量 g g n nm2 m2 密度瓶和酱油的质量密度瓶和酱油的质量 g g n n0.998230.99823为为2020时水的密度时水的密度 g/cm3 g/cm3 实验四实验四 滴定法测定健力宝饮料的总酸度滴定法测定健力宝饮料的总酸度 n n一、原理 n n食品中所含的酸主要是有机弱酸或其酸式盐，食品中所含的酸主要是有机弱酸或其酸式盐，测定时主要是根据酸碱中和原理，用强碱溶液测定时主要是根据酸碱中和原理，用强碱溶液进行滴定，通过计算便可求出该食品的总酸度。进行滴定，通过计算便可求出该食品的总酸度。 n n二、仪器与试剂 n n碱式滴定管碱式滴定管 三角瓶三角瓶 滴定台滴定台 烧杯烧杯 移液管移液管 电炉电炉 玻棒玻棒 洗瓶洗瓶 水浴锅水浴锅 0.1mol/L 0.1mol/L NaOHNaOH标准溶液标准溶液 1%1%的酚酞乙醇溶液的酚酞乙醇溶液 实验四实验四 滴定法测定健力宝饮料的总酸度滴定法测定健力宝饮料的总酸度n n三、操作方法 n n1、样液制备： n n吸取健力宝牌饮料吸取健力宝牌饮料50mL,50mL,放入干净的烧杯中，置放入干净的烧杯中，置于于70-8070-80水浴水浴20-3020-30分钟，除去二氧化碳后取出，分钟，除去二氧化碳后取出，冷却后加入活性炭进行脱色，过滤，弃去初滤冷却后加入活性炭进行脱色，过滤，弃去初滤液液8-10 8-10 mLmL，收集滤液备用。，收集滤液备用。 n n2、滴定： n n吸取滤液吸取滤液20.00mL20.00mL于锥形瓶中，加入于锥形瓶中，加入2 2滴酚酞指滴酚酞指示剂，用示剂，用NaOHNaOH标准溶液滴定到粉红色为终点，标准溶液滴定到粉红色为终点，记录消耗的碱液体积。平行测定记录消耗的碱液体积。平行测定2 2次。次。 实验四实验四 滴定法测定健力宝饮料的总酸度滴定法测定健力宝饮料的总酸度n n四、计算：n nV V 吸取的饮料滤液体积吸取的饮料滤液体积 mLmL 实验五实验五 凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量 n n一、原理一、原理 n n利用硫酸及催化剂与食品试样一同加热消化，使蛋白质分利用硫酸及催化剂与食品试样一同加热消化，使蛋白质分解，其中解，其中C C、HH形成形成CO2CO2、H2OH2O逸出，而氮以氨的形式与逸出，而氮以氨的形式与硫酸作用，形成硫酸铵留在酸液中。然后将消化液碱化，硫酸作用，形成硫酸铵留在酸液中。然后将消化液碱化，蒸馏，使氨游离，用水蒸气蒸出，被硼酸吸收。用标准盐蒸馏，使氨游离，用水蒸气蒸出，被硼酸吸收。用标准盐酸溶液滴定所生成的硼酸铵，从消耗的盐酸标准液计算出酸溶液滴定所生成的硼酸铵，从消耗的盐酸标准液计算出总氮量，再折算为粗蛋白含量。总氮量，再折算为粗蛋白含量。 n n2NH2-(CH2)2-COOH + 13H2SO4 (NH4)2 SO4 + 6CO2 + 2NH2-(CH2)2-COOH + 13H2SO4 (NH4)2 SO4 + 6CO2 + 12SO2 + 16H2O 12SO2 + 16H2O n n(NH4)2 SO4 + 2NaOH 2NH3 + Na2SO4 + 2H2O (NH4)2 SO4 + 2NaOH 2NH3 + Na2SO4 + 2H2O n n2NH3 + 4H3BO3 (NH4)2 B4O7 + 5H2O 2NH3 + 4H3BO3 (NH4)2 B4O7 + 5H2O n n(NH4)2 B4O7 + 2HCl + 5H2O 2NH4Cl + 4H3BO3(NH4)2 B4O7 + 2HCl + 5H2O 2NH4Cl + 4H3BO3实验五实验五 凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量n n二、仪器与试剂二、仪器与试剂 n n1 1、100mL100mL凯氏烧瓶凯氏烧瓶 n n2 2、微量凯氏定氮装置、微量凯氏定氮装置 n n3 3、试剂、试剂 n n硫酸铜硫酸铜 硫酸钾硫酸钾 硫酸硫酸 2%2%硼酸溶液硼酸溶液 混合指示剂混合指示剂:0.1%:0.1%甲基红乙醇溶液与甲基红乙醇溶液与0.1%0.1%甲基蓝乙醇溶液甲基蓝乙醇溶液, ,临用时按临用时按2:12:1的比例混合的比例混合. .或或0.1%0.1%甲基红乙醇溶液与甲基红乙醇溶液与0.1%0.1%溴溴甲酚绿乙醇溶液甲酚绿乙醇溶液, ,临用时按临用时按1:51:5的比例混合。的比例混合。 20%NaOH20%NaOH溶液溶液 0.01mol/L 0.01mol/L HClHCl标准溶液标准溶液三、测定方法三、测定方法 n n1 1、样品消化：、样品消化： 实验五实验五 凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量n n准确称取粉碎均匀的黄豆粉准确称取粉碎均匀的黄豆粉0.3g0.3g左右，小心移入干燥的凯左右，小心移入干燥的凯氏烧瓶中（勿粘附在瓶壁上），加入氏烧瓶中（勿粘附在瓶壁上），加入0.5g CuSO40.5g CuSO4、3g 3g K2SO4K2SO4及及10mL10mL浓硫酸，于瓶口倒插入一口径适宜的干燥管，浓硫酸，于瓶口倒插入一口径适宜的干燥管，用胶管与水力真空管相连接，利用水力抽出消化过程所产用胶管与水力真空管相连接，利用水力抽出消化过程所产生的烟气。先以小火缓慢加热，待内容物完全炭化，泡沫生的烟气。先以小火缓慢加热，待内容物完全炭化，泡沫消失后再加大火力，消化至溶液透明呈蓝绿色。取下抽气消失后再加大火力，消化至溶液透明呈蓝绿色。取下抽气管，继续加热管，继续加热 0.5h,6 0.5h,6 冷却至室温。取冷却至室温。取20mL20mL蒸馏水，徐徐加蒸馏水，徐徐加入烧瓶中，待样品冷至室温，移入入烧瓶中，待样品冷至室温，移入100mL100mL的容量瓶中，用的容量瓶中，用蒸馏水冲洗烧瓶数次，并入容量瓶，旋转混匀放冷，再用蒸馏水冲洗烧瓶数次，并入容量瓶，旋转混匀放冷，再用蒸馏水定容，备用。蒸馏水定容，备用。 实验五实验五 凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量n n2 2、蒸馏与吸收：、蒸馏与吸收： n n11按蒸馏装置图安装好装置，将所有的夹子打开。按蒸馏装置图安装好装置，将所有的夹子打开。取下样品加入口的磨口塞，从样品加入口加入取下样品加入口的磨口塞，从样品加入口加入50mL50mL的蒸馏水，再插回塞好。并给冷凝管接通冷的蒸馏水，再插回塞好。并给冷凝管接通冷凝水。凝水。 n n22往蒸汽发生瓶加入蒸馏水至其体积的三分之二往蒸汽发生瓶加入蒸馏水至其体积的三分之二处，加入几粒沸石和处，加入几粒沸石和4 4滴甲基橙，再加入滴甲基橙，再加入3mL3mL浓硫浓硫酸，然后置于电炉上加热使水沸腾。酸，然后置于电炉上加热使水沸腾。 实验五实验五 凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量n n33产生蒸汽后，夹上夹子产生蒸汽后，夹上夹子1 1，让蒸汽经导管进入反应管外，让蒸汽经导管进入反应管外套，待废液排放口排出蒸汽后，夹上夹子套，待废液排放口排出蒸汽后，夹上夹子3 3，使蒸汽进入，使蒸汽进入反应管，蒸馏洗涤反应管，蒸馏洗涤1010分钟。打开夹子分钟。打开夹子1 1，同时夹上夹子，同时夹上夹子2 2，待反应管内的水全部排出到外套后，打开夹子待反应管内的水全部排出到外套后，打开夹子3 3，排出废，排出废水。马上从进样口加入蒸馏水约水。马上从进样口加入蒸馏水约20mL20mL，立即再夹上夹子，立即再夹上夹子3 3，待水排出，反复操作，待水排出，反复操作3 3次，洗涤完毕。次，洗涤完毕。 n n44将全部夹子打开，吸取将全部夹子打开，吸取10mL10mL样液（或空白液）从样品样液（或空白液）从样品加入口加入到反应管内，插上磨口塞。量取加入口加入到反应管内，插上磨口塞。量取25mL2%25mL2%硼酸硼酸置于置于250mL250mL锥形瓶内，然后将此吸收液置于冷凝管下端，锥形瓶内，然后将此吸收液置于冷凝管下端，冷凝管下端应插入到液面以下。再从样品加入口加入约冷凝管下端应插入到液面以下。再从样品加入口加入约20mL20%NaOH20mL20%NaOH溶液使反应管内的样液有黑色沉淀生成或溶液使反应管内的样液有黑色沉淀生成或变成深蓝色，用少量水洗涤加入口，插好磨口塞，并用少变成深蓝色，用少量水洗涤加入口，插好磨口塞，并用少量水封口。同时做一空白消化。量水封口。同时做一空白消化。 实验五实验五 凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量n n55夹上夹子夹上夹子1 1，让蒸汽经导管进入反应管外套，待废液排，让蒸汽经导管进入反应管外套，待废液排放口排出蒸汽后，夹上夹子放口排出蒸汽后，夹上夹子3 3，使蒸汽进入反应管，蒸馏，使蒸汽进入反应管，蒸馏开始，待吸收液变蓝后计时蒸馏开始，待吸收液变蓝后计时蒸馏1010分钟分钟, ,将冷凝管下端提将冷凝管下端提离吸收液面，再蒸馏离吸收液面，再蒸馏1 1分钟，用萘氏试剂检查无氨后，停分钟，用萘氏试剂检查无氨后，停止承接蒸馏液。打开夹子止承接蒸馏液。打开夹子1 1，同时夹上夹子，同时夹上夹子2 2，待反应管内，待反应管内的样品废液全部排出到外套后，打开夹子的样品废液全部排出到外套后，打开夹子3 3，排出废液。，排出废液。马上从进样口加入蒸馏水约马上从进样口加入蒸馏水约20mL20mL，立即再夹上夹子，立即再夹上夹子3 3，待，待水排出，反复操作洗涤水排出，反复操作洗涤3 3次，再作样品平行测定。测定完次，再作样品平行测定。测定完毕，打开全部夹子，停止加热，待冷却后拆除装置并洗涤毕，打开全部夹子，停止加热，待冷却后拆除装置并洗涤干净。干净。 n n3 3滴定：滴定： n n用用0.01mol/L 0.01mol/L HClHCl滴定吸收液至变为红色为终点，记下消耗滴定吸收液至变为红色为终点，记下消耗的的HClHCl体积。体积。 实验五实验五 凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量n n四、计算：四、计算： n nC C HClHCl标准溶液的浓度标准溶液的浓度mol/L mol/L n nV1 V1 滴定样品吸收液消耗的滴定样品吸收液消耗的HClHCl标准溶液的体积标准溶液的体积mLmL n nV2 V2 滴定样品空白液消耗的滴定样品空白液消耗的HClHCl标准溶液的体积标准溶液的体积mLmL n nm m 黄豆粉的质量黄豆粉的质量 g g n nF F 黄豆的蛋白质含量换算系数黄豆的蛋白质含量换算系数5.71 5.71 实验六实验六 电位滴定法测定酱油中电位滴定法测定酱油中 氨基酸态氮的含量氨基酸态氮的含量 n n一、原理一、原理 n n根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极（或复羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极（或复合电极）插入被测液中构成电池，用碱液滴定，根据酸度合电极）插入被测液中构成电池，用碱液滴定，根据酸度计指示的计指示的pHpH值判断和控制滴定终点。值判断和控制滴定终点。 n n二、仪器与试剂二、仪器与试剂 n n1 1、仪器、仪器 n n酸度计酸度计 磁力搅拌器磁力搅拌器 烧杯（烧杯（250mL250mL） 微量滴定管微量滴定管 n n2 2、试剂、试剂 n npH=6.18pH=6.18标准缓冲溶液标准缓冲溶液 n n20%20%中性甲醛溶液中性甲醛溶液 n n0.05mol/L0.05mol/L左右的左右的NaOHNaOH标准溶液标准溶液 实验六实验六 电位滴定法测定酱油中电位滴定法测定酱油中 氨基酸态氮的含量氨基酸态氮的含量n n三、测定操作三、测定操作 n n1 1、样品处理、样品处理 n n先根据实验四测出待测酱油的比重先根据实验四测出待测酱油的比重, ,然后吸取酱油然后吸取酱油5.00mL5.00mL于于100mL100mL容量瓶中容量瓶中, ,加水定容。吸取定容液加水定容。吸取定容液20.00mL20.00mL于于250mL250mL烧杯中烧杯中, ,加水加水60mL60mL，放入磁力转子，开动磁力搅拌，放入磁力转子，开动磁力搅拌器使转速适当。用器使转速适当。用pH6.18pH6.18的标准缓冲液校正好酸度计，然的标准缓冲液校正好酸度计，然后将电极清洗干净，再插入到上述酱油液中，用后将电极清洗干净，再插入到上述酱油液中，用NaOHNaOH标标准溶液滴定至酸度计指示准溶液滴定至酸度计指示pH8.2,pH8.2,记下消耗的记下消耗的NaOHNaOH溶液体溶液体积。积。 n n2 2、氨基酸的滴定、氨基酸的滴定 n n在上述滴定至在上述滴定至pH8.2pH8.2的溶液中加入的溶液中加入10.00mL10.00mL的中性甲醛溶液，的中性甲醛溶液，再用再用NaOHNaOH标准溶液滴定至标准溶液滴定至pH9.2,pH9.2,记下消耗的记下消耗的NaOHNaOH溶液体溶液体积。积。 实验六实验六 电位滴定法测定酱油中电位滴定法测定酱油中 氨基酸态氮的含量氨基酸态氮的含量n n3 3、空白滴定、空白滴定 n n吸取吸取80mL80mL蒸馏水于蒸馏水于250mL250mL的烧杯中，用的烧杯中，用NaOHNaOH标准溶液滴定至标准溶液滴定至pH8.2,pH8.2,然后加入然后加入10.00mL10.00mL中性甲醛溶液，再用中性甲醛溶液，再用NaOHNaOH标准溶液滴定至标准溶液滴定至pH9.2,pH9.2,记记下加入甲醛后消耗的下加入甲醛后消耗的NaOHNaOH溶液体积。溶液体积。 n n四、结果计算四、结果计算 n nV1 - V1 - 酱油稀释液在加入甲醛后滴定至酱油稀释液在加入甲醛后滴定至pH9.2pH9.2所用所用NaOHNaOH标准溶液的体标准溶液的体积积mLmL n nV2 - V2 - 空白滴定在加入甲醛后滴定至空白滴定在加入甲醛后滴定至pH9.2pH9.2所用所用NaOHNaOH标准溶液的体积标准溶液的体积mLmL n nC - C - NaOHNaOH标准溶液的浓度标准溶液的浓度mol/L mol/L n nM - M - 吸取的酱油的质量吸取的酱油的质量g g n n0.014 - 0.014 - 氮的毫摩尔质量氮的毫摩尔质量g/mg/m mol mol 实验七实验七 索氏提取法测定花生仁索氏提取法测定花生仁 中粗脂肪的含量中粗脂肪的含量 n n一、原理 n n样品用无水乙醚或石油醚等溶剂抽提后，蒸去样品用无水乙醚或石油醚等溶剂抽提后，蒸去溶剂所得的物质称为粗脂肪。因为除脂肪处还溶剂所得的物质称为粗脂肪。因为除脂肪处还含有色素及挥发油、蜡、树脂等物，这种抽提含有色素及挥发油、蜡、树脂等物，这种抽提法所得的脂肪为游离脂肪。法所得的脂肪为游离脂肪。 n n二、仪器和试剂 n n索氏抽提滤器索氏抽提滤器 虑纸虑纸 水浴锅水浴锅 n n无水乙醚或石油醚无水乙醚或石油醚 实验七实验七 索氏提取法测定花生仁索氏提取法测定花生仁 中粗脂肪的含量中粗脂肪的含量n n三、操作方法 n n1 1、准确称取已干燥恒量的索氏抽提器接收瓶、准确称取已干燥恒量的索氏抽提器接收瓶W1W1。 n n2 2、准确称取粉碎均匀的干燥花生仁、准确称取粉碎均匀的干燥花生仁2-6 g2-6 g，用滤，用滤纸筒严密包裹好后（筒口放置少量脱脂棉），纸筒严密包裹好后（筒口放置少量脱脂棉），放入抽提筒内。放入抽提筒内。 n n3 3、在已干燥恒量的索氏抽提器接收瓶中注入约、在已干燥恒量的索氏抽提器接收瓶中注入约三分之二的无水乙醚，并安装好索氏抽提装置，三分之二的无水乙醚，并安装好索氏抽提装置，在在45-5045-50左右的水浴中抽提左右的水浴中抽提4-54-5小时，抽提的速小时，抽提的速度以能顺利回流为宜。度以能顺利回流为宜。 实验七实验七 索氏提取法测定花生仁索氏提取法测定花生仁 中粗脂肪的含量中粗脂肪的含量n n4 4、抽提完成后，冷却。将接收瓶与蒸馏装置连、抽提完成后，冷却。将接收瓶与蒸馏装置连接，水浴蒸馏回收乙醚，无乙醚滴出后，取下接，水浴蒸馏回收乙醚，无乙醚滴出后，取下接收瓶置于是接收瓶置于是105105烘箱内干燥烘箱内干燥1-21-2小时，取出小时，取出冷却至室温后准确称重冷却至室温后准确称重W2W2。 n n四、计算四、计算 n nW2 W2 抽提瓶与脂肪的质量抽提瓶与脂肪的质量 g g n nW1 W1 空抽提瓶的质量空抽提瓶的质量 g g n nW W 花生仁的质量花生仁的质量 g g 实验八实验八 水的总硬度的测定水的总硬度的测定 n n一、目的要求一、目的要求 n n1 1了解了解EDTAEDTA测定水的总硬度的基本原理。测定水的总硬度的基本原理。 n n2 2掌握水的总硬度的测定方法。掌握水的总硬度的测定方法。 n n二、基本原理二、基本原理 n n在在pH=10pH=10时，时，EDTAEDTA能与钙、镁形成稳定的配合物，能与钙、镁形成稳定的配合物，其稳定性比铬黑其稳定性比铬黑T T与镁形成的配合物的稳定性强。与镁形成的配合物的稳定性强。以以EDTAEDTA标准溶液直接滴定，铬黑标准溶液直接滴定，铬黑T T为指示剂，在为指示剂，在接近终点时，接近终点时，EDTAEDTA夺取夺取Mg-EBTMg-EBT中的镁，使铬黑中的镁，使铬黑T T游离出来，溶液由红色突然转变为蓝色，即为滴游离出来，溶液由红色突然转变为蓝色，即为滴定终点。滴定时，加入三乙醇胺和定终点。滴定时，加入三乙醇胺和KCNKCN来消除水来消除水中少量的中少量的Fe3+Fe3+、Al3+Al3+、Cu2+Cu2+、Pb2+Pb2+等离子的干扰。等离子的干扰。 实验八实验八 水的总硬度的测定水的总硬度的测定n n三、试剂三、试剂 n n1 1铬黑铬黑T T指示剂：指示剂：0.5g0.5g铬黑铬黑T T与与50g50g氯化钠充分氯化钠充分混合。混合。 n n2 2氨氨- -氯化铵缓冲溶液（氯化铵缓冲溶液（pH=10pH=10）：称取）：称取5.4g5.4g氯氯化铵，加适量水溶解后，加入化铵，加适量水溶解后，加入35ml35ml氨水，再加氨水，再加水稀释至水稀释至100ml100ml。 n n3 31%KCN1%KCN溶液溶液 n n4 41 1：1 1三乙醇胺三乙醇胺 n n5 51 1：1HCl1HCl溶液溶液 n n6 6钙指示剂：钙指示剂：0.5g0.5g钙指示剂与钙指示剂与50g50g氯化钠充分混氯化钠充分混合合 实验八实验八 水的总硬度的测定水的总硬度的测定n n7 70.01mol/L0.01mol/L钙标准溶液：钙标准溶液： 精确称取干燥精确称取干燥(110(110) )至恒重的至恒重的0.5g0.5g基准碳酸钙于基准碳酸钙于250ml250ml烧杯中，烧杯中，用用1 1：1 1的的HClHCl溶液加热完全溶解，冷却后转入溶液加热完全溶解，冷却后转入500ml500ml的容量瓶中，用水稀释至刻，摇匀。的容量瓶中，用水稀释至刻，摇匀。n n8 80.01mol/LEDTA0.01mol/LEDTA标准溶液的配制与标定。配标准溶液的配制与标定。配制：称取制：称取3.7g EDTA3.7g EDTA二钠盐（分子量二钠盐（分子量372.2372.2）用）用去离子水稀释至去离子水稀释至1000ml1000ml，摇匀，贮存于聚乙烯，摇匀，贮存于聚乙烯瓶中待标定。瓶中待标定。实验八实验八 水的总硬度的测定水的总硬度的测定n标定：用移液管准确移取25.00钙标准溶液到250ml锥形瓶中，加入70ml水，然后加入10ml10%的NaOH溶液，加少量的钙指示剂，用EDTA溶液滴定至溶液由酒红色转变成纯蓝色为滴定终点。记录消耗EDTA的体积V（EDTA）。平行测定三次。计算公式： 实验八实验八 水的总硬度的测定水的总硬度的测定n n四、操作方法 n n准确吸取水样准确吸取水样100.00ml100.00ml于锥形瓶中，加入三乙于锥形瓶中，加入三乙醇胺醇胺6ml6ml、KCNKCN溶液溶液1ml1ml、氨、氨- -氯化铵缓冲溶液氯化铵缓冲溶液10ml10ml、铬黑、铬黑T T指示剂少许，用指示剂少许，用EDTAEDTA标准溶液滴标准溶液滴定至溶液由红色变为蓝色即为终点。记录消耗定至溶液由红色变为蓝色即为终点。记录消耗EDTAEDTA标准溶液的体积。平行测定三次。标准溶液的体积。平行测定三次。 n n计算 实验八实验八 水的总硬度的测定水的总硬度的测定n n说明： n n1 1用钙标准溶液标定用钙标准溶液标定EDTAEDTA，以钙指示剂为指，以钙指示剂为指示剂时，滴定的溶液应用示剂时，滴定的溶液应用NaOHNaOH调节调节pHpH到到12121414。 n n2 2滴定样品水样时，需先加入三乙醇胺和滴定样品水样时，需先加入三乙醇胺和KCNKCN，以消除，以消除Fe3+Fe3+、Al3+Al3+、Cu2+Cu2+等离子的干扰，等离子的干扰，然后加入缓冲溶液调节然后加入缓冲溶液调节pHpH值至值至1010，再加入铬黑，再加入铬黑T T。 n n3 3滴定时的水温过低，应将水温加热到滴定时的水温过低，应将水温加热到30304040再进行滴定再进行滴定实验九实验九 改良快速滴定法测定硬糖中改良快速滴定法测定硬糖中 还原糖的含量还原糖的含量 n n一、原理一、原理n n新制的酒石酸钾钠铜能被还原糖还原。当用还原糖溶新制的酒石酸钾钠铜能被还原糖还原。当用还原糖溶液滴定酒石酸钾钠铜溶液时，加入亚甲基蓝，达到终液滴定酒石酸钾钠铜溶液时，加入亚甲基蓝，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的亚甲基蓝还原为无点时，稍微过量的还原糖将蓝色的亚甲基蓝还原为无色，而显示出氧化亚铜的鲜红色。色，而显示出氧化亚铜的鲜红色。n n改良快速法在酒石酸钾钠铜溶液中加入了亚铁氰化钾，改良快速法在酒石酸钾钠铜溶液中加入了亚铁氰化钾，使红色的终点变为无色的终点而更易于判断。使红色的终点变为无色的终点而更易于判断。n n二、仪器与试剂二、仪器与试剂 n n台称台称 电炉电炉 酸式滴定管酸式滴定管 锥形瓶锥形瓶 移液管移液管 量筒量筒 洗瓶洗瓶 容量瓶容量瓶手套手套 n n裴林氏裴林氏A A液：溶解液：溶解CuSO45H2O 35g CuSO45H2O 35g 及亚甲基蓝及亚甲基蓝0.05g0.05g，加水溶解，定容至加水溶解，定容至1000mL1000mL，摇匀。，摇匀。实验九实验九 改良快速滴定法测定硬糖中改良快速滴定法测定硬糖中 还原糖的含量还原糖的含量n n裴林氏裴林氏B B液：称取液：称取117g117g酒石酸钾钠，酒石酸钾钠，126.4g 126.4g 氢氧化钠，氢氧化钠，9.4g9.4g亚铁氰化钾溶解后，定容至亚铁氰化钾溶解后，定容至1000mL,1000mL,摇匀。摇匀。 n n0 .1% 0 .1% 标准葡萄糖溶液：取分析纯葡萄糖，在标准葡萄糖溶液：取分析纯葡萄糖，在150150下烘下烘干至恒重，准确称取干至恒重，准确称取1.000g1.000g无水葡萄糖，加水溶解后定无水葡萄糖，加水溶解后定容至容至1000mL1000mL。n n三、操作方法三、操作方法 n n1 1、裴林氏液的标定（空白滴定）：、裴林氏液的标定（空白滴定）： n n11预备滴定预备滴定: :准确吸取裴林氏准确吸取裴林氏A A、B B液各液各5mL5mL于锥形瓶中于锥形瓶中, ,加水加水10mL,10mL,摇匀。在电炉上加热摇匀。在电炉上加热2 2分钟内至沸腾，沸腾后分钟内至沸腾，沸腾后立即由滴定管滴入标准葡萄糖溶液至终点（由蓝色变立即由滴定管滴入标准葡萄糖溶液至终点（由蓝色变为淡黄色），记下消耗的体积。为淡黄色），记下消耗的体积。实验九实验九 改良快速滴定法测定硬糖中改良快速滴定法测定硬糖中 还原糖的含量还原糖的含量n n22正式滴定正式滴定: :准确吸取裴林氏准确吸取裴林氏A A、B B液各液各5mL5mL于锥形瓶中于锥形瓶中, ,加水加水10mL,10mL,预加比预备滴定少预加比预备滴定少0.5-1mL0.5-1mL的标准葡萄糖溶液，的标准葡萄糖溶液，摇匀。在电炉上加热摇匀。在电炉上加热2 2分钟内至沸腾，沸腾后立即由滴分钟内至沸腾，沸腾后立即由滴定管以逐滴的速度滴入标准葡萄糖溶液至终点，记下定管以逐滴的速度滴入标准葡萄糖溶液至终点，记下消耗的体积。消耗的体积。n n2 2、样品的测定：、样品的测定： n n11样品制备样品制备: :将硬糖粉碎后将硬糖粉碎后, ,精确称取精确称取1.2-1.5g 1.2-1.5g 于于50mL50mL小小烧杯内烧杯内, ,溶解后溶解后, ,加水定容于加水定容于250mL250mL的容量瓶中的容量瓶中. . n n22预备滴定预备滴定: :准确吸取裴林氏准确吸取裴林氏A A、B B液各液各5mL5mL于锥形瓶中于锥形瓶中, ,加水加水10mL,10mL,加样品液加样品液10.00mL,10.00mL,摇匀。在电炉上加热摇匀。在电炉上加热2 2分钟分钟内至沸腾，沸腾后立即由滴定管滴入标准葡萄糖溶液内至沸腾，沸腾后立即由滴定管滴入标准葡萄糖溶液至终点，记下消耗的体积。至终点，记下消耗的体积。实验九实验九 改良快速滴定法测定硬糖中改良快速滴定法测定硬糖中 还原糖的含量还原糖的含量n n33正式滴定正式滴定: :准确吸取裴林氏准确吸取裴林氏A A、B B液各液各5mL5mL于锥形瓶中于锥形瓶中, ,加水加水10mL,10mL,加样品液加样品液10mL, 10mL, 预加比预备滴定少预加比预备滴定少0.5-1mL0.5-1mL的的标准葡萄糖溶液，摇匀。在电炉上加热标准葡萄糖溶液，摇匀。在电炉上加热2 2分钟内至沸腾，分钟内至沸腾，沸腾后立即由滴定管滴入标准葡萄糖溶液至终点，记沸腾后立即由滴定管滴入标准葡萄糖溶液至终点，记下消耗的体积。下消耗的体积。n n四、计算n nV0 V0 空白正式滴定消耗的标准葡萄糖溶液空白正式滴定消耗的标准葡萄糖溶液 mLmL n nV V 样品正式滴定消耗的标准葡萄糖溶液样品正式滴定消耗的标准葡萄糖溶液 mLmL n nW W 硬糖的质量硬糖的质量 g g n nV2 V2 测定时吸取的样液体积测定时吸取的样液体积 mLmL n nV1 V1 样品液总体积样品液总体积 mLmL 实验十实验十 大米中淀粉含量的测定大米中淀粉含量的测定 n n一、原理一、原理 n n本法是根据本法是根据GB/T5009.9-2003GB/T5009.9-2003酸水解法和改良快速直接滴定酸水解法和改良快速直接滴定法进行测定的。法进行测定的。 n n试样经除去脂肪及可溶性糖后，其中的淀粉用酸水解成具试样经除去脂肪及可溶性糖后，其中的淀粉用酸水解成具有还原性的单糖，然后按还原性单糖的方法测定，并折算有还原性的单糖，然后按还原性单糖的方法测定，并折算成淀粉。成淀粉。 n n二、仪器与试剂二、仪器与试剂 n n水浴锅水浴锅 粉碎机粉碎机 4040目筛目筛 附附250mL250mL锥形瓶的回流装置锥形瓶的回流装置 台称台称 电炉电炉 锥形瓶锥形瓶 烧杯烧杯 量筒量筒 容量瓶容量瓶 移液管移液管 棕色酸式滴定管棕色酸式滴定管 手套手套 n n乙醚乙醚 乙醇乙醇(85%) (85%) 盐酸盐酸(1+1) (1+1) NaOHNaOH溶液溶液(400g/L) (400g/L) NaOHNaOH溶液溶液(100g/L) (100g/L) 乙酸铅溶液（乙酸铅溶液（200g/L200g/L） 硫酸钠溶液硫酸钠溶液(100g/L) (100g/L) 甲基红溶液甲基红溶液(2g/L,(2g/L,用乙醇配用乙醇配) 0.01mol/L ) 0.01mol/L KMnO4KMnO4标准溶液标准溶液 实验十实验十 大米中淀粉含量的测定大米中淀粉含量的测定n n裴林氏裴林氏A A液：溶解液：溶解CuSO45H2O 35g CuSO45H2O 35g 及亚甲基蓝及亚甲基蓝0.05g0.05g，加水溶解，定容至，加水溶解，定容至1000mL1000mL，摇匀。，摇匀。 n n裴林氏裴林氏B B液：称取液：称取117g117g酒石酸钾钠，酒石酸钾钠，126.4g 126.4g 氢氧化氢氧化钠，钠，9.4g9.4g亚铁氰化钾溶解后，定容至亚铁氰化钾溶解后，定容至1000mL,1000mL,摇匀。摇匀。 n n0 .1% 0 .1% 标准葡萄糖溶液：取分析纯葡萄糖，在标准葡萄糖溶液：取分析纯葡萄糖，在150150下烘干至恒重，准确称取下烘干至恒重，准确称取1.000g1.000g无水葡萄糖，无水葡萄糖，加水溶解后定容至加水溶解后定容至1000mL1000mL。 n n三、测定步骤三、测定步骤 n n1 1、样品处理、样品处理 n n将大米磨碎并过将大米磨碎并过4040目筛，称取目筛，称取3.00g3.00g米粉置于放有米粉置于放有慢速滤纸的漏斗中，慢速滤纸的漏斗中， ，用，用30mL30mL乙醚分三次洗去试乙醚分三次洗去试实验十实验十 大米中淀粉含量的测定大米中淀粉含量的测定 样中脂肪，弃去乙醚。用样中脂肪，弃去乙醚。用150mL85%150mL85%乙醇分数次洗乙醇分数次洗涤残渣，除可溶性糖。滤干乙醇溶液，以涤残渣，除可溶性糖。滤干乙醇溶液，以100mL100mL水洗涤漏斗中残渣并转移至水洗涤漏斗中残渣并转移至250mL250mL锥形瓶中，加锥形瓶中，加入入30mL(1+1)30mL(1+1)盐酸，接好冷凝管，置沸水浴中回流盐酸，接好冷凝管，置沸水浴中回流2h2h。回流完毕后，立即置流水中冷却。待试样水。回流完毕后，立即置流水中冷却。待试样水解液冷却后，加解液冷却后，加2 2滴甲基红溶液，先以滴甲基红溶液，先以NaOHNaOH溶液溶液(400g/L)(400g/L)调至黄色，再以盐酸（调至黄色，再以盐酸（1+11+1）校正至水解）校正至水解液刚变为红色为宜。然后加液刚变为红色为宜。然后加20mL20mL乙酸铅溶液乙酸铅溶液（200g/L200g/L），摇匀，放置），摇匀，放置10min10min，再，再20mL20mL硫酸钠溶硫酸钠溶液液(100g/L)(100g/L)，以除去过多的铅。摇匀后将全部溶，以除去过多的铅。摇匀后将全部溶液和残渣转入液和残渣转入500mL500mL容量瓶中，加入水稀释至刻容量瓶中，加入水稀释至刻度。过滤，弃去初滤液度。过滤，弃去初滤液20mL20mL，滤液供测定用。，滤液供测定用。 实验十实验十 大米中淀粉含量的测定大米中淀粉含量的测定n n2 2、裴林氏液的标定（空白滴定）：、裴林氏液的标定（空白滴定）： n n11预备滴定预备滴定: :准确吸取裴林氏准确吸取裴林氏A A、B B液各液各5mL5mL于锥于锥形瓶中形瓶中, ,加水加水10mL,10mL,摇匀。在电炉上加热摇匀。在电炉上加热2 2分钟内至分钟内至沸腾，沸腾后立即由滴定管滴入标准葡萄糖溶液沸腾，沸腾后立即由滴定管滴入标准葡萄糖溶液至终点（由蓝色变为淡黄色），记下消耗的体积。至终点（由蓝色变为淡黄色），记下消耗的体积。 n n22正式滴定正式滴定: :准确吸取裴林氏准确吸取裴林氏A A、B B液各液各5mL5mL于锥于锥形瓶中形瓶中, ,加水加水10mL,10mL,预加比预备滴定少预加比预备滴定少0.5-1mL0.5-1mL的标的标准葡萄糖溶液，摇匀。在电炉上加热准葡萄糖溶液，摇匀。在电炉上加热2 2分钟内至沸分钟内至沸腾，沸腾后立即由滴定管以逐滴的速度滴入标准腾，沸腾后立即由滴定管以逐滴的速度滴入标准葡萄糖溶液至终点，记下消耗的体积。葡萄糖溶液至终点，记下消耗的体积。 实验十实验十 大米中淀粉含量的测定大米中淀粉含量的测定n n3 3、大米水解液中淀粉的测定、大米水解液中淀粉的测定 n n11预备滴定预备滴定: : 准确吸取裴林氏准确吸取裴林氏A A、B B液各液各5mL5mL于锥于锥形瓶中形瓶中, ,加水加水10mL,10mL,加大米水解液加大米水解液10.00mL10.00mL，摇匀。，摇匀。在电炉上加热在电炉上加热2 2分钟内至沸腾，沸腾后立即由滴定分钟内至沸腾，沸腾后立即由滴定管滴入标准葡萄糖溶液至终点，记下消耗的体积。管滴入标准葡萄糖溶液至终点，记下消耗的体积。 n n22正式滴定正式滴定: : 准确吸取裴林氏准确吸取裴林氏A A、B B液各液各5mL5mL于锥于锥形瓶中形瓶中, ,加水加水10mL, 10mL, 加大米水解液加大米水解液10.00mL10.00mL， 预加预加比预备滴定少比预备滴定少0.5-1mL0.5-1mL的标准葡萄糖溶液，摇匀。的标准葡萄糖溶液，摇匀。在电炉上加热在电炉上加热2 2分钟内至沸腾，沸腾后立即由滴定分钟内至沸腾，沸腾后立即由滴定管以逐滴的速度滴入标准葡萄糖溶液至终点，记管以逐滴的速度滴入标准葡萄糖溶液至终点，记下消耗的体积。下消耗的体积。 实验十实验十 大米中淀粉含量的测定大米中淀粉含量的测定n n四、计算四、计算 n nV0V0空白正式滴定消耗的标准葡萄糖溶液，空白正式滴定消耗的标准葡萄糖溶液，mLmL n nV1V1样品正式滴定消耗的标准葡萄糖溶液，样品正式滴定消耗的标准葡萄糖溶液，mLmL n nWW硬糖的质量，硬糖的质量，g g n nV2V2测定时吸取的样液体积，测定时吸取的样液体积，mLmL n n500500大米水解液总体积，大米水解液总体积，mLmL n n0.90.9还原糖还原糖( (以葡萄糖计以葡萄糖计) )折算成淀粉的换算系数折算成淀粉的换算系数 实验十一实验十一 维生素维生素C（抗坏血酸）的测定（抗坏血酸）的测定 2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法n n1 1、原理：、原理： n n维生素维生素C C是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的作用，是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原型及脱氢所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原型及脱氢型两种。还原型抗坏血酸还原染料型两种。还原型抗坏血酸还原染料2 2，6-6-二氯靛酚，二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失，本该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准一定量的样品提取液还原标准2 2，6-6-二氯靛酚的量二氯靛酚的量与样品中所含抗坏血酸的量成正比。与样品中所含抗坏血酸的量成正比。n n2 2、试剂、试剂n n 1%1%草酸溶液：草酸溶液： n n 2%2%草酸溶液：草酸溶液：实验十一实验十一 维生素维生素C（抗坏血酸）的测定（抗坏血酸）的测定 2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法n n 抗坏血酸标准液：准确称抗坏血酸标准液：准确称20mg20mg抗坏血酸溶于抗坏血酸溶于1%1%草酸中，草酸中，并稀释至并稀释至100ml100ml，吸，吸5ml5ml于于50ml50ml容量瓶中，加入容量瓶中，加入1%1%草酸至刻草酸至刻度，此溶液每毫升含有度，此溶液每毫升含有0.02mg0.02mg抗坏血酸；抗坏血酸； n n 0.02% 20.02% 2，6-6-二氯靛酚溶液：称取二氯靛酚溶液：称取2 2，6-6-二氯靛酚二氯靛酚50mg50mg，溶于溶于200ml200ml含有含有52mg52mg碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释至碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释至250ml250ml，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，应用过程中每，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，应用过程中每星期标定一次。星期标定一次。n n 0.001 mol/L KIO30.001 mol/L KIO3标液：吸标液：吸0.1 mol/L KIO30.1 mol/L KIO3溶液溶液5ml5ml于于500ml500ml容量瓶内容量瓶内加水至刻度，每毫升相当于抗坏血酸加水至刻度，每毫升相当于抗坏血酸0.008mg0.008mg； n n 0.5%0.5%淀粉溶液；淀粉溶液； 实验十一实验十一 维生素维生素C（抗坏血酸）的测定（抗坏血酸）的测定 2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法n n 6%KI6%KI溶液；溶液；n n3 3、溶液标定溶液标定 （1 1）抗坏血酸溶液的标定）抗坏血酸溶液的标定n n吸取抗坏血酸标准溶液吸取抗坏血酸标准溶液5ml5ml于三角瓶于三角瓶加加6%KI6%KI溶液溶液0.5ml0.5ml加加1%1%淀粉淀粉3 3滴滴用用0.001mol/L KIO30.001mol/L KIO3标液滴定到淡蓝色。标液滴定到淡蓝色。n n计算：计算： 抗坏血酸浓度抗坏血酸浓度c c（mg/mlmg/ml）= = （V1 0.088V1 0.088）/ V2/ V2n nV1 V1 滴定时消耗滴定时消耗0.001mol/L KIO30.001mol/L KIO3标准溶液的体积标准溶液的体积（mlml） n nV2 V2 滴定是时所取抗坏血酸的体积（滴定是时所取抗坏血酸的体积（mlml） n n0.088 1ml0.001 mol/L KIO30.088 1ml0.001 mol/L KIO3标液相当于抗坏血酸的量标液相当于抗坏血酸的量（mg/mlmg/ml） 实验十一实验十一 维生素维生素C（抗坏血酸）的测定（抗坏血酸）的测定 2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法n n（2 2）2 2，6-6-二氯靛酚溶液标定：吸二氯靛酚溶液标定：吸5ml5ml已知浓度抗坏血酸溶已知浓度抗坏血酸溶液标准溶液液标准溶液 加加5ml1%5ml1%草酸草酸 用染料用染料2 2，6-6-二氯靛酚滴定二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在至溶液呈粉红色，在1515秒不褪色为终点。秒不褪色为终点。n n计算：每毫升计算：每毫升2 2，6-6-二氯靛酚相当于抗坏血酸的毫克数等于二氯靛酚相当于抗坏血酸的毫克数等于滴定度（滴定度（T T） n nC C 抗坏血酸的浓度（抗坏血酸的浓度（mg/mlmg/ml） n nV1 V1 抗坏血酸标准溶液的体积（抗坏血酸标准溶液的体积（mlml） n nV2 V2 消耗消耗2 2，6-6-二氯靛酚的体积（二氯靛酚的体积（mlml） n n4 4操作方法操作方法n n 提取：称样提取：称样50g50g加加2%2%草酸草酸100ml100ml到入捣碎机中到入捣碎机中处处理理过滤过滤颜色若深可加白陶土。颜色若深可加白陶土。实验十一实验十一 维生素维生素C（抗坏血酸）的测定（抗坏血酸）的测定 2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法n n 滴定：吸滴定：吸5ml5ml样液样液于三角瓶于三角瓶用染料滴定至粉红色用染料滴定至粉红色1515秒内不褪色。秒内不褪色。n n计算：计算： n n抗坏血酸（抗坏血酸（mg/100gmg/100g）= =（V TV T）/ W 100 / W 100 n nV V 消耗染料体积（消耗染料体积（mlml） n nT 1mlT 1ml染料所能氧化抗坏血酸的毫克数染料所能氧化抗坏血酸的毫克数n nWW滴定时所有滤液中含有样品的克数滴定时所有滤液中含有样品的克数n n5 5注意事项注意事项n n 靛酚法测定的是还原型抗坏血酸，方法简便，较灵靛酚法测定的是还原型抗坏血酸，方法简便，较灵敏，但特异性差，样品中的其他还原性物质（如敏，但特异性差，样品中的其他还原性物质（如Fe2+Fe2+、Sn2+Sn2+、Cu2+Cu2+等）会干扰测定，使测定结果偏高。等）会干扰测定，使测定结果偏高。 实验十一实验十一 维生素维生素C（抗坏血酸）的测定（抗坏血酸）的测定 2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法n n所有试剂的配制最好都用重蒸馏水；所有试剂的配制最好都用重蒸馏水； n n 样品进入实验室后，应浸泡在已知量的样品进入实验室后，应浸泡在已知量的2%2%草酸液中，草酸液中，以防氧化，损失维生素以防氧化，损失维生素C C； 贮存过久的罐头食品，可能贮存过久的罐头食品，可能含有大量的低铁离子（含有大量的低铁离子（Fe2+Fe2+），要用），要用8%8%的醋酸代替的醋酸代替2%2%草酸。这时如用草酸，低铁离子可以还原草酸。这时如用草酸，低铁离子可以还原2 2，6-6-二氯靛二氯靛酚，使测定数字增高，使用醋酸可以避免这种情况的酚，使测定数字增高，使用醋酸可以避免这种情况的发生；发生；n n 整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧化；化； n n在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴辛醇消除；辛醇消除；n n 测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣除空测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣除空白体积。白体积。实验十二实验十二 酱油及盐渍品中食盐含量的测定酱油及盐渍品中食盐含量的测定 莫尔法莫尔法 n n一、原理一、原理 n n以以K2CrO4K2CrO4作指示剂，用作指示剂，用AgNO3AgNO3标准溶液直接滴定样品中标准溶液直接滴定样品中NaClNaCl。滴定过程中先出现。滴定过程中先出现AgClAgCl白色沉淀，当样品中白色沉淀，当样品中ClCl- -与与Ag+Ag+定量沉淀完全后，稍微过量的定量沉淀完全后，稍微过量的Ag+Ag+就与指示剂就与指示剂K2CrO4K2CrO4生成生成Ag2CrO4Ag2CrO4砖红色沉淀，即为滴定终点。反应分别为：砖红色沉淀，即为滴定终点。反应分别为： n nAg+ + Ag+ + ClCl- - AgClAgCl(白色白色) Ksp(AgC1) = 1.7710-10 ) Ksp(AgC1) = 1.7710-10 n n2Ag+ + CrO42- 2Ag+ + CrO42- Ag2CrO4(Ag2CrO4(砖红色砖红色) Ksp(AgC1) = 1.1210-) Ksp(AgC1) = 1.1210-1212n n二、试剂二、试剂 n n0.1molL-1 AgNO30.1molL-1 AgNO3标准溶液；标准溶液；5% K2CrO45% K2CrO4溶液。溶液。 n n三、操作方法三、操作方法 实验十二实验十二 酱油及盐渍品中食盐含量的测定酱油及盐渍品中食盐含量的测定 莫尔法莫尔法n n样品处理：准确移取酱油样品处理：准确移取酱油5.00mL5.00mL，置于，置于100mL100mL容量瓶中，容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。若为盐渍品则准确称取约加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。若为盐渍品则准确称取约10.0g10.0g，粉碎后，加温蒸馏水，粉碎后，加温蒸馏水25mL25mL，浸提半小时并不时搅，浸提半小时并不时搅拌，共三次，浸提液一并移入拌，共三次，浸提液一并移入lOOmLlOOmL容量瓶中，冷却，加容量瓶中，冷却，加水稀释至刻度，摇匀，过滤。水稀释至刻度，摇匀，过滤。 n n样品测定：吸取酱油稀释液或盐渍品滤液样品测定：吸取酱油稀释液或盐渍品滤液lO.00mLlO.00mL，置，置于锥形瓶中，加蒸馏水于锥形瓶中，加蒸馏水50mL50mL，摇匀。加入，摇匀。加入K2CrO4K2CrO4指示剂指示剂5 5滴，在充分振荡下用滴，在充分振荡下用0.1molL-1 AgNO30.1molL-1 AgNO3标准溶液滴定至砖标准溶液滴定至砖红色沉淀出现，即为终点，记下所消耗红色沉淀出现，即为终点，记下所消耗AgNO3AgNO3溶液的毫升溶液的毫升数。重复性条件下平行测定两次。数。重复性条件下平行测定两次。 n n移取蒸馏水移取蒸馏水60mL60mL，同时做试剂空白试验。，同时做试剂空白试验。 实验十二实验十二 酱油及盐渍品中食盐含量的测定酱油及盐渍品中食盐含量的测定 莫尔法莫尔法n n四、结果计算： n n按下式计算酱油中氯化钠质量分数：按下式计算酱油中氯化钠质量分数： n n= c(V1-V0)0.05845/(510/100) = c(V1-V0)0.05845/(510/100) n n式中式中 试样中氯化钠的质量分数试样中氯化钠的质量分数( (g/mLg/mL) ) n nc AgNO3c AgNO3标准溶液的物质的量浓度标准溶液的物质的量浓度(molL-1)(molL-1)； n nV1V1测定试样稀释液时消耗测定试样稀释液时消耗AgNO3AgNO3标准滴定溶标准滴定溶液的体积液的体积( (mLmL) )； n nV0V0试剂空白消耗试剂空白消耗AgNO3AgNO3标准滴定溶液的体积标准滴定溶液的体积( (mLmL) )； n n0.058450.05845NaClNaCl的毫摩尔质量。的毫摩尔质量。 实验十三实验十三 分光光度法测定火腿肠中分光光度法测定火腿肠中 亚硝酸盐的含量亚硝酸盐的含量 n n一、原理一、原理 n n样品经沉淀蛋白质，除脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与样品经沉淀蛋白质，除脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料，通过测定吸光度可与标准进行比较定量。料，通过测定吸光度可与标准进行比较定量。n n二、试剂二、试剂 n n亚铁氰化钾溶液：称取亚铁氰化钾溶液：称取10.6g K4Fe(CN)6 .3H2O10.6g K4Fe(CN)6 .3H2O溶于水定容溶于水定容100mL. 100mL. 乙酸锌溶液：称取乙酸锌溶液：称取11g Zn(CHCOO)2 .2H2O11g Zn(CHCOO)2 .2H2O加加1.5mL1.5mL冰乙酸，冰乙酸，溶于水定容溶于水定容50mL50mL。n n饱和硼砂溶液：称取饱和硼砂溶液：称取5g NaB4O7 . 10H2O5g NaB4O7 . 10H2O溶于溶于100mL100mL热水中，热水中，冷却备用。冷却备用。20%20%盐酸：取盐酸：取54mL54mL浓盐酸加水浓盐酸加水45mL45mL。n n0.4%0.4%对氨基苯磺酸：称取对氨基苯磺酸：称取0.4g0.4g对氨基苯磺酸溶于对氨基苯磺酸溶于100mL20%100mL20%盐酸中。盐酸中。实验十三实验十三 分光光度法测定火腿肠中分光光度法测定火腿肠中 亚硝酸盐的含量亚硝酸盐的含量n n200ug/mL200ug/mL亚硝酸钠标准液：精密称取亚硝酸钠标准液：精密称取0.1000g0.1000g经硅胶干燥经硅胶干燥2424小时的亚硝酸钠（小时的亚硝酸钠（GRGR），加水溶解后，定容），加水溶解后，定容500mL500mL。 5.0ug/mL5.0ug/mL亚硝酸钠标准使用液：吸取亚硝酸钠标准液亚硝酸钠标准使用液：吸取亚硝酸钠标准液5.0mL5.0mL于于500mL500mL容量瓶中用重蒸馏水定容。容量瓶中用重蒸馏水定容。n n三、仪器三、仪器 n n电炉电炉 电热恒温水浴锅电热恒温水浴锅 玻棒玻棒 漏斗漏斗 铁架台铁架台 n n烧杯（烧杯（200mL2200mL2个，个，500mL2500mL2个，个，50mL150mL1个）个） n n容量瓶（容量瓶（250ml1250ml1个）个） 吸管（吸管（2mL,5mL,10mL,50mL2mL,5mL,10mL,50mL各各1 1支）支） n n比色管（比色管（50mL1050mL10支）支） n n四、操作步骤四、操作步骤 n n1 1、样品处理、样品处理n n称取称取3g3g左右火腿肠于左右火腿肠于50mL50mL烧杯中，加入饱和硼砂溶液烧杯中，加入饱和硼砂溶液6.3mL6.3mL，以玻棒搅匀，用，以玻棒搅匀，用7070左右的重蒸馏水约左右的重蒸馏水约100mL100mL将其将其实验十三实验十三 分光光度法测定火腿肠中分光光度法测定火腿肠中 亚硝酸盐的含量亚硝酸盐的含量 洗入洗入250mL250mL的容量瓶中，置于沸水浴中加热的容量瓶中，置于沸水浴中加热1515分钟，取出，分钟，取出，一边转动一边加入一边转动一边加入5mL5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL5mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质。定容，混匀，静置半小时，乙酸锌溶液以沉淀蛋白质。定容，混匀，静置半小时，除去上层脂肪，过滤，弃去初滤液除去上层脂肪，过滤，弃去初滤液30mL30mL，收集滤液备用，收集滤液备用n n2 2、绘制标准曲线、绘制标准曲线 吸取吸取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20mL0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20mL亚硝酸钠标准使用液，亚硝酸钠标准使用液，分别置入分别置入7 7支支50mL50mL比色管中，各加入比色管中，各加入0.4%0.4%对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸2mL,2mL,混匀，静置混匀，静置3-53-5分钟后各加入分钟后各加入1.00mL 0.2%1.00mL 0.2%盐酸萘乙二盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置胺溶液，加水至刻度，混匀，静置1515分钟，用分钟，用2cm2cm比色皿，比色皿，以零管调零，于以零管调零，于538nm538nm处测量吸光度，以亚硝酸钠含量为处测量吸光度，以亚硝酸钠含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。实验十三实验十三 分光光度法测定火腿肠中分光光度法测定火腿肠中 亚硝酸盐的含量亚硝酸盐的含量n n3 3、样液测定、样液测定n n吸取吸取40mL40mL样品处理液于样品处理液于50mL50mL比色管中，按标准曲线绘制比色管中，按标准曲线绘制步骤进行，测定吸光度，通过吸光度从标准曲线上查出亚步骤进行，测定吸光度，通过吸光度从标准曲线上查出亚硝酸钠的含量（硝酸钠的含量（ugug）。）。n n五、计算五、计算 n nX 40mLX 40mL样品处理液中亚硝酸钠的含量（样品处理液中亚硝酸钠的含量（ugug） n nM M 火腿肠的质量（火腿肠的质量（g g） 实验十四实验十四 分光度法测定砂糖中分光度法测定砂糖中SO2的残留量的残留量 n n一、原理一、原理 n n亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合物，再亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色物质，与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色物质，其颜色的深浅与亚硫酸盐含量成正比，可通过比其颜色的深浅与亚硫酸盐含量成正比，可通过比色测定。色测定。 n n二、试剂二、试剂 n n0.1mol/L 0.1mol/L 四氯汞钠溶液四氯汞钠溶液 n n0.1%0.1%盐酸副玫瑰苯胺溶液盐酸副玫瑰苯胺溶液 n n1.2%1.2%氨基磺酸铵溶液氨基磺酸铵溶液 n n0.2%0.2%甲醛溶液甲醛溶液 实验十四实验十四 分光度法测定砂糖中分光度法测定砂糖中SO2的残留量的残留量n n二氧化硫标准使用液：二氧化硫标准使用液：2ug/mL 2ug/mL n n0.5mol/L0.5mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液 n n0.5mol/L0.5mol/L硫酸溶液硫酸溶液 n n三、测定操作三、测定操作 n n1 1、样品处理、样品处理 n n称取称取5-10g5-10g砂糖，以少量水溶解，移入砂糖，以少量水溶解，移入100mL100mL容量瓶中，加容量瓶中，加0.5mol/L0.5mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液4mL,54mL,5分钟后加入分钟后加入0.5mol/L0.5mol/L硫酸溶液硫酸溶液4mL4mL，然后再加入四氯汞钠吸收液，然后再加入四氯汞钠吸收液20mL,20mL,用水定容。用水定容。 n n2 2、标准曲线绘制、标准曲线绘制 n n吸取二氧化硫标准使用液吸取二氧化硫标准使用液0.00,0.20,0.40,0.60,0.80, 1.00, 1.50, 0.00,0.20,0.40,0.60,0.80, 1.00, 1.50, 2.00mL2.00mL，分别加入，分别加入25mL25mL带塞比色管中，加入四氯汞钠溶液带塞比色管中，加入四氯汞钠溶液体积达到体积达到10mL10mL，然后各加入，然后各加入1mL1.2%1mL1.2%氨基磺酸铵溶液，氨基磺酸铵溶液，1mL0.2%1mL0.2%甲醛溶液，甲醛溶液， 1mL0.1%1mL0.1%盐酸副玫瑰苯胺溶液，摇盐酸副玫瑰苯胺溶液，摇实验十四实验十四 分光度法测定砂糖中分光度法测定砂糖中SO2的残留量的残留量 匀，静置匀，静置2020分钟，用分钟，用1cm1cm比色皿，以零管为空白，在波长比色皿，以零管为空白，在波长550nm550nm处测吸光度，以处测吸光度，以SO2SO2含量为横坐标，吸光度为纵坐含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。标，绘制标准曲线。 n n3 3、样液的测定、样液的测定 n n吸取样品处理液吸取样品处理液0-5.00mL0-5.00mL置于置于25mL25mL带塞比色管中，按绘制带塞比色管中，按绘制标准曲线操作进行，并测出吸光度，从标准曲线上查得样标准曲线操作进行，并测出吸光度，从标准曲线上查得样品处理液的品处理液的SO2SO2含量。含量。 n n四、计算四、计算 n nCC测定时样品处理液测定时样品处理液SO2SO2含量含量ugug n nmm样品质量样品质量g g n nVV测定用样液体积测定用样液体积mLmL 实验十五实验十五 白酒中甲醇含量的测定白酒中甲醇含量的测定 亚硫酸品红比色法亚硫酸品红比色法n n一、原理一、原理 n n甲醇经氧化成甲醛后，与品红亚硫酸作用生成蓝紫色化合甲醇经氧化成甲醛后，与品红亚硫酸作用生成蓝紫色化合物，与标准系列比较定量。物，与标准系列比较定量。n n二、试剂二、试剂 n n高锰酸钾高锰酸钾磷酸溶液磷酸溶液 n n草酸草酸硫酸溶液硫酸溶液 n n亚硫酸品红溶液亚硫酸品红溶液 n n甲醇标准溶液：称取甲醇标准溶液：称取1.000g 1.000g 甲醇置于甲醇置于100mL100mL，容量瓶中，容量瓶中，加水稀释到刻度，此溶液每毫升相当于加水稀释到刻度，此溶液每毫升相当于10.0mg 10.0mg 甲醇，置于甲醇，置于低温保存。低温保存。n n甲醇标准使用液：吸取甲醇标准使用液：吸取10.0mL 10.0mL 甲醇标准溶液，置于甲醇标准溶液，置于100 100 mLmL 容量瓶中，加水到刻度。再取容量瓶中，加水到刻度。再取25.0 25.0 mLmL 稀释液置于稀释液置于50 50 mLmL 容量瓶中，加水至刻度，该溶液每毫升相当于容量瓶中，加水至刻度，该溶液每毫升相当于0.50mg 0.50mg 甲醇。甲醇。实验十五实验十五 白酒中甲醇含量的测定白酒中甲醇含量的测定 亚硫酸品红比色法亚硫酸品红比色法n n无甲醇的乙醇溶液无甲醇的乙醇溶液n n三、仪器三、仪器 n n分光光度计分光光度计 n n四、分析步骤四、分析步骤 n n根据样品中乙醇含量适当取样（乙醇含量根据样品中乙醇含量适当取样（乙醇含量30%30%取取1.0 ml1.0 ml，40%40%取取0.8 ml0.8 ml，50%50%取取0.6ml0.6ml，60%60%取取0.5ml0.5ml）置于）置于25 ml25 ml具塞比具塞比色管中。色管中。n n吸取吸取0.000.00，0.100.10，0.200.20，0.400.40，0.600.60，0.800.80，1.00ml1.00ml，甲醇标，甲醇标准使用液（相当于准使用液（相当于0.00.0，0.050.05，0.10.1，0.20.2，0.30.3，0.40.4，0.5mg0.5mg甲甲醇），分别置于醇），分别置于25 ml25 ml具塞比色管中，各加具塞比色管中，各加0.5ml0.5ml无甲醇乙无甲醇乙醇（体积分数为醇（体积分数为60%60%）。）。n n于试样管中及标准管中各加入水至于试样管中及标准管中各加入水至5 ml5 ml，再依次各加，再依次各加2 ml2 ml高锰酸钾高锰酸钾磷酸溶液，混匀，放置磷酸溶液，混匀，放置10min10min，各加，各加2 ml2 ml草酸草酸硫酸溶液，混匀使之褪色，再各加硫酸溶液，混匀使之褪色，再各加5ml5ml亚硫酸品红溶液，亚硫酸品红溶液，实验十五实验十五 白酒中甲醇含量的测定白酒中甲醇含量的测定 亚硫酸品红比色法亚硫酸品红比色法 混匀，于混匀，于20252025静置静置30 min30 min，用，用2cm2cm比色杯，于波长比色杯，于波长590nm590nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。处测吸光度，绘制标准曲线比较。n n五、计算n n式中：式中：样品中甲醇的含量，样品中甲醇的含量，g/100ml )(3g/100ml )(3OHCHx OHCHx n nmm测定样品中甲醇的含量，测定样品中甲醇的含量，m g m g n nVsVs样品体积，样品体积，ml ml n n计算结果保留两位有效数字。计算结果保留两位有效数字。 实验十六实验十六 白酒中杂醇油的测定白酒中杂醇油的测定n n一、一、 原理杂醇油成分复杂，其中有正乙醇，正、异戊醇，原理杂醇油成分复杂，其中有正乙醇，正、异戊醇，正、异丁醇，丙醇等。本法测定标准以异戊醇和异丁醇表正、异丁醇，丙醇等。本法测定标准以异戊醇和异丁醇表示，异戊醇和异丁醇在硫酸作用下生成戊烯和丁烯，再与示，异戊醇和异丁醇在硫酸作用下生成戊烯和丁烯，再与对二甲胺基苯甲醛作用显橙黄色，与标准系列比较定量。对二甲胺基苯甲醛作用显橙黄色，与标准系列比较定量。n n二、二、 试剂试剂n n1 1、对二甲胺基苯甲醛硫酸溶液（、对二甲胺基苯甲醛硫酸溶液（5 g/L5 g/L） n n2 2、无杂醇油的乙醇、无杂醇油的乙醇n n3 3、杂醇油标准溶液：准确称取、杂醇油标准溶液：准确称取0.080 g 0.080 g 异戊醇和异戊醇和0.020 g 0.020 g 异异丁醇于丁醇于100 100 mLmL 容量瓶中，加无杂醇油乙醇容量瓶中，加无杂醇油乙醇50 50 mLmL，再加水，再加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1mg 1mg 杂醇油，置低温保杂醇油，置低温保存。存。实验十六实验十六 白酒中杂醇油的测定白酒中杂醇油的测定n n4 4、杂醇油标准使用液：吸取杂醇油标准溶液、杂醇油标准使用液：吸取杂醇油标准溶液5.0 5.0 mLmL 于于50 50 mLmL容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于0.01 0.01 mg mg 杂醇油。杂醇油。n n三、三、 仪器分光光度计仪器分光光度计 n n四、四、 分析步骤分析步骤 n n吸取吸取1.0 1.0 mLmL试样于试样于10 10 mLmL容量瓶中，加水至刻度，混匀后，容量瓶中，加水至刻度，混匀后，吸取吸取0.30 0.30 mLmL， 置于置于10 10 mLmL比色管中。比色管中。n n吸取吸取0 0、0.100.10、0.200.20、0.300.30、0.400.40、0.50 0.50 mLmL杂醇油使用液（相杂醇油使用液（相当当0 0、0.100.10、0.200.20、0.300.30、0.400.40、0.50 mg 0.50 mg 杂醇油），置于杂醇油），置于10 10 mLmL比色管中。比色管中。n n于试样管及标准管中各准确加水至于试样管及标准管中各准确加水至1 1 mLmL，摇匀，放入冷水，摇匀，放入冷水中冷却，沿管壁加入中冷却，沿管壁加入2 2 mLmL对二甲胺基苯甲醛硫酸溶液对二甲胺基苯甲醛硫酸溶液（5 g/L5 g/L） 使其沉至管底，再将各管同时摇匀，放入沸水使其沉至管底，再将各管同时摇匀，放入沸水实验十六实验十六 白酒中杂醇油的测定白酒中杂醇油的测定 浴中加热浴中加热15 min15 min后取出，立即放入冰浴中冷却，并立即各后取出，立即放入冰浴中冷却，并立即各加入加入2 2 mLmL水，混匀，冷却。水，混匀，冷却。10 min10 min后用后用1 cm1 cm比色杯以零管比色杯以零管调节零点，于波长调节零点，于波长520nm520nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。处测吸光度，绘制标准曲线比较。n n五、五、 结果计算按下式计算杂醇油的质量：结果计算按下式计算杂醇油的质量： n n试样中：试样中： n nX X试样中杂醇油的含量，试样中杂醇油的含量，g/100 g/100 mLmL； n nm m测定试样稀释液中杂醇油的质量，测定试样稀释液中杂醇油的质量，mgmg； n nVV2 2试样体积，试样体积，mLmL； n nVV1 1测定用试样稀释体积，测定用试样稀释体积，mLmL。 实验十七实验十七 薄层层析法测定果酱中薄层层析法测定果酱中 苯甲酸、山梨酸的含量苯甲酸、山梨酸的含量 n n一、原理一、原理 n n先将样品酸化，然后用乙醚提取苯甲酸和山梨酸。先将样品酸化，然后用乙醚提取苯甲酸和山梨酸。再将提取液浓缩，点样于聚酰胺板上，经展开、再将提取液浓缩，点样于聚酰胺板上，经展开、显色后，并与标准点比较可进行概略定量。显色后，并与标准点比较可进行概略定量。 n n二、试剂二、试剂 n n6 mol/L 6 mol/L HClHCl (1:1) (1:1) 乙醚：除去过氧化物乙醚：除去过氧化物 n n4% 4% NaClNaCl 酸性溶液酸性溶液 无水乙醇无水乙醇 n n无水硫酸钠无水硫酸钠 聚酰胺粉：聚酰胺粉：200200目目 n n展开剂：展开剂： 正丁醇：氨水：无水乙醇（正丁醇：氨水：无水乙醇（7+1+27+1+2） n n异丙醇：氨水：无水乙醇（异丙醇：氨水：无水乙醇（7+1+27+1+2） n n显色剂：显色剂：0.04%0.04%溴甲酚紫（用溴甲酚紫（用50%50%的乙醇配制，并用的乙醇配制，并用0.1 0.1 mol/L mol/L NaOHNaOH调至调至PH=8PH=8） 实验十七实验十七 薄层层析法测定果酱中薄层层析法测定果酱中 苯甲酸、山梨酸的含量苯甲酸、山梨酸的含量n n苯甲酸标准液（苯甲酸标准液（2mg/mL2mg/mL）：精密称取）：精密称取0.2000g0.2000g苯甲酸，苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入用少量乙醇溶解后移入100mL100mL容量瓶中定容。容量瓶中定容。 n n山梨酸标准液（山梨酸标准液（2mg/mL2mg/mL）：精密称取）：精密称取0.2000g0.2000g山梨酸，山梨酸，用少量乙醇溶解后移入用少量乙醇溶解后移入100mL100mL容量瓶中定容。容量瓶中定容。 n n三、仪器三、仪器 n n玻璃板（玻璃板（1018cm1018cm） 微量注射器（微量注射器（10uL,20uL10uL,20uL） 层析缸层析缸 喷雾器喷雾器 吹风机吹风机 n n四、测定操作四、测定操作 n n1 1、样品处理、样品处理 n n称取称取25g25g混合均匀的样品，置于混合均匀的样品，置于100mL100mL分液漏斗中加分液漏斗中加0.5mL 0.5mL HClHCl酸化，用酸化，用1515、10mL10mL乙醚提取两次，每次振摇乙醚提取两次，每次振摇1 1分钟，静置分层后将醚层分出，合并乙醚提取液。分钟，静置分层后将醚层分出，合并乙醚提取液。实验十七实验十七 薄层层析法测定果酱中薄层层析法测定果酱中 苯甲酸、山梨酸的含量苯甲酸、山梨酸的含量 用用3mL 4% 3mL 4% NaClNaCl酸性溶液洗涤两次，弃去水层，静置酸性溶液洗涤两次，弃去水层，静置1515分钟，再分离出水层，将乙醚提取液通过无水硫酸钠分钟，再分离出水层，将乙醚提取液通过无水硫酸钠移入移入25mL25mL容量瓶中，加乙醚定容。吸取容量瓶中，加乙醚定容。吸取10.00mL10.00mL乙醚提乙醚提取液分两次置于取液分两次置于10ml10ml具塞离心管中，在约具塞离心管中，在约4040水浴上挥水浴上挥干，加入干，加入0.1mL0.1mL乙醇溶解残渣，备用。乙醇溶解残渣，备用。 n n2 2、聚酰胺薄层板的制备、聚酰胺薄层板的制备 n n称取称取1.6g1.6g聚酰胺粉，加聚酰胺粉，加0.4g0.4g可溶性淀粉，加约可溶性淀粉，加约15mL15mL水，水，研磨研磨3 3分钟，在分钟，在1020cm1020cm玻璃板上使其均匀即涂成玻璃板上使其均匀即涂成0.25-0.25-0.30mm0.30mm厚的薄层，室温下干燥厚的薄层，室温下干燥1 1小时，置于烘箱内小时，置于烘箱内8080干燥干燥1 1小时，取出后置干燥器中备用小时，取出后置干燥器中备用。 n n3 3、点样、点样 实验十七实验十七 薄层层析法测定果酱中薄层层析法测定果酱中 苯甲酸、山梨酸的含量苯甲酸、山梨酸的含量n n在距薄层板下端在距薄层板下端2cm2cm的基线上，用微量注射器点的基线上，用微量注射器点1uL1uL、2uL2uL样品液，同时分别点样品液，同时分别点1uL1uL、2uL2uL苯甲酸、山梨酸标准溶液，苯甲酸、山梨酸标准溶液，点间距点间距1.5cm1.5cm。 n n4 4、展开显色、展开显色n n将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂的展开槽中，展开将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂的展开槽中，展开槽内壁贴有滤纸，待溶剂前沿上展至槽内壁贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm,10cm,取出挥干，喷取出挥干，喷显色剂，斑点黄色，背景蓝色。显色剂，斑点黄色，背景蓝色。 n n5 5、定性与定量、定性与定量 n n把样品斑点与标准斑点比较，若与标准斑点同一位置线上把样品斑点与标准斑点比较，若与标准斑点同一位置线上出现样品斑点，说明样液中存在苯甲酸或山梨酸。然后根出现样品斑点，说明样液中存在苯甲酸或山梨酸。然后根据斑点的面积大小及颜色深浅确定样品点的苯甲酸、山梨据斑点的面积大小及颜色深浅确定样品点的苯甲酸、山梨酸的含量，再进行计算。酸的含量，再进行计算。 实验十七实验十七 薄层层析法测定果酱中薄层层析法测定果酱中 苯甲酸、山梨酸的含量苯甲酸、山梨酸的含量n n五、计算n nAA点样用样液中苯甲酸（山梨酸）的含量点样用样液中苯甲酸（山梨酸）的含量mg mg n nMM称取的样品质量称取的样品质量g g n nV1V1溶解残渣时加乙醇体积溶解残渣时加乙醇体积mLmL n nV2V2点样的体积点样的体积mLmL 实验十八实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定的测定 n n一、原理一、原理 n n样品中样品中AFT B1AFT B1经有机溶剂提取、净化、浓缩并经薄层色谱经有机溶剂提取、净化、浓缩并经薄层色谱分离后，在波长分离后，在波长365nm365nm紫外光下产生荧光，根据其在薄层紫外光下产生荧光，根据其在薄层板上显示荧光的强度与标准品板上显示荧光的强度与标准品AFT B1AFT B1最低检出量产生的荧最低检出量产生的荧光强度比较来测定样品中光强度比较来测定样品中AFT B1AFT B1的含量。的含量。 n n二、试剂二、试剂 n n三氯甲烷（三氯甲烷（ARAR） 正己烷（正己烷（AR AR 沸程沸程30-6030-60）或石油醚（沸）或石油醚（沸程程60-9060-90） 甲醇（甲醇（ARAR） 苯苯 （ARAR） 乙腈乙腈 （ARAR） 无水乙醚无水乙醚 （ARAR） 丙酮丙酮 （ARAR） n n（以上试剂应重蒸，并应经检验对薄层色谱测定无干扰）（以上试剂应重蒸，并应经检验对薄层色谱测定无干扰） n n苯苯- -乙腈乙腈(98:2)(98:2)混合溶液混合溶液 甲醇甲醇- -水（水（55:4555:45）混合溶液）混合溶液 三三氟乙酸（氟乙酸（ARAR） n n氯化钠氯化钠 （ARAR） 无水硫酸钠（无水硫酸钠（ARAR） 硅胶硅胶G G （薄层色谱用）（薄层色谱用） 实验十八实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定的测定n n5%5%次氯酸钠溶液：称取次氯酸钠溶液：称取100g100g漂白精，加入漂白精，加入500mL500mL水，搅匀。水，搅匀。另将另将80g80g工业用碳酸钠（工业用碳酸钠（Na2CO3.10H2ONa2CO3.10H2O）溶于）溶于500mL500mL温水温水中，倒入上述溶液中，搅匀，澄清过滤后贮存于带橡皮塞中，倒入上述溶液中，搅匀，澄清过滤后贮存于带橡皮塞的玻璃瓶中，用作消毒剂。的玻璃瓶中，用作消毒剂。 n n黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1B1标准贮备液：用百万分之一的微量分析天平标准贮备液：用百万分之一的微量分析天平精密称取精密称取1-1.2mgAFT B11-1.2mgAFT B1标准品，先加入标准品，先加入2mL2mL乙腈溶解后，乙腈溶解后，再用苯稀释至再用苯稀释至100mL100mL，避光置于，避光置于4 4冰箱中保存。使用前用冰箱中保存。使用前用紫外分光光度计测定其浓度，再用苯紫外分光光度计测定其浓度，再用苯- -乙腈混合溶液调整乙腈混合溶液调整其浓度为其浓度为10ug/mL10ug/mL。（在。（在350nm350nm测定测定AFT B1AFT B1的苯的苯- -乙腈溶液乙腈溶液的吸光度，其摩尔消光系数为的吸光度，其摩尔消光系数为1980019800，可根据朗伯，可根据朗伯- -比尔定比尔定律求出其浓度）。律求出其浓度）。 n n黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1B1标准应用液标准应用液I I（1ug/mL1ug/mL）：吸）：吸1.0mL10ug/mL1.0mL10ug/mL的黄曲霉毒素的黄曲霉毒素B1B1标准贮备液于标准贮备液于10mL10mL容量瓶中，加苯容量瓶中，加苯- -乙腈乙腈混合溶液定容。混合溶液定容。 实验十八实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定的测定n n黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1B1标准应用液标准应用液II II（0.2ug/mL0.2ug/mL）：吸取）：吸取1.0mL 1.0mL 1ug/mL1ug/mL的黄曲霉毒素的黄曲霉毒素B1B1标准应用液标准应用液I I于于5mL5mL容量瓶中，加容量瓶中，加苯苯- -乙腈混合溶液定容。乙腈混合溶液定容。 n n黄曲霉毒素黄曲霉毒素B1B1标准应用液标准应用液III(0.04ug/mL)III(0.04ug/mL)：吸取：吸取1.0mL 1.0mL 0.2ug/mL0.2ug/mL的黄曲霉毒素的黄曲霉毒素B1B1标准应用液标准应用液II II于于5mL5mL容量瓶中，容量瓶中，加苯加苯- -乙腈混合液定容。乙腈混合液定容。n n三、主要仪器三、主要仪器 n n玻璃板：玻璃板：520cm 520cm 涂布器涂布器 色谱展开槽（色谱展开槽（2564cm2564cm） n n紫外光灯：紫外光灯：100-125W100-125W，带有波长，带有波长365nm365nm滤光片滤光片 n n微量注射器：微量注射器：20uL,10uL20uL,10uL各一支各一支 实验十八实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定的测定n n四、操作步骤四、操作步骤 n n1 1、样品预处理、样品预处理 n n称取称取4g4g混匀的花生油样品于小烧杯中，用混匀的花生油样品于小烧杯中，用20mL20mL石油醚或正石油醚或正己烷，将其转移到己烷，将其转移到125mL125mL分液漏斗中，用分液漏斗中，用20mL20mL甲醇甲醇- -水溶水溶液分数次洗烧杯，洗液并入分液漏斗中，振摇液分数次洗烧杯，洗液并入分液漏斗中，振摇2 2分钟，静分钟，静止分层后，将下层甲醇止分层后，将下层甲醇- -水溶液移入第二分液漏斗，再用水溶液移入第二分液漏斗，再用5mL5mL甲醇甲醇- -水溶液重复提取一次，提取液并入第二分液漏水溶液重复提取一次，提取液并入第二分液漏斗中。在第二分液漏斗中加入斗中。在第二分液漏斗中加入20mL20mL三氯甲烷，振摇三氯甲烷，振摇2 2分钟，分钟，静止分层后，放出三氯甲烷层，经盛有约静止分层后，放出三氯甲烷层，经盛有约10g10g先用三氯甲先用三氯甲烷湿润的无水硫酸钠的慢速滤纸过滤于烷湿润的无水硫酸钠的慢速滤纸过滤于50mL50mL蒸发皿中，分蒸发皿中，分液漏斗中再加液漏斗中再加5mL5mL三氯甲烷提取一次，三氯甲烷层一并滤三氯甲烷提取一次，三氯甲烷层一并滤入蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗过滤器，洗液并入蒸入蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗过滤器，洗液并入蒸发皿中。在通风柜中，将蒸发皿于发皿中。在通风柜中，将蒸发皿于6565水浴上挥干，然后水浴上挥干，然后放入冰盒上泠却放入冰盒上泠却2-32-3分钟，准确加入分钟，准确加入1mL1mL苯苯- -乙腈混合乙腈混合液，液，实验十八实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定的测定 用带橡皮头滴管的管尖将残渣充分混合，若有结晶析出，用带橡皮头滴管的管尖将残渣充分混合，若有结晶析出，将蒸发皿取下，继续溶解、混匀，晶体消失后用将蒸发皿取下，继续溶解、混匀，晶体消失后用33 33 滴管吸滴管吸取上清液转移于取上清液转移于2mL2mL具塞试管中。具塞试管中。 n n2 2、样品测定、样品测定 n n11薄层板的制备薄层板的制备 n n称取约称取约3g3g硅胶硅胶GG，加相当于硅胶量的，加相当于硅胶量的2-32-3倍左右的水，用力倍左右的水，用力研磨研磨1-21-2分钟，至成糊状后立即倒入涂布器内，推铺成分钟，至成糊状后立即倒入涂布器内，推铺成520cm520cm、厚度为、厚度为0.25 mm0.25 mm的薄层板三块。于空气中干燥约的薄层板三块。于空气中干燥约1515分钟后，在分钟后，在100100下活化下活化2 2小时，取出放入干燥器中保存。小时，取出放入干燥器中保存。 n n22点样点样 n n将薄层板边缘附着的吸附剂刮净，在距薄层板底端将薄层板边缘附着的吸附剂刮净，在距薄层板底端3cm3cm的的基线上用微量注射器滴加样液和标准液：基线上用微量注射器滴加样液和标准液： 实验十八实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定的测定n n第一点：第一点：10uL 0.04ug/mL AFT B1 10uL 0.04ug/mL AFT B1 标液标液 n n第二点：第二点：20uL20uL样液样液 n n第三点：第三点：20uL 20uL 样液样液 + 10uL 0.04ug/mL AFT B1 + 10uL 0.04ug/mL AFT B1 标液标液 n n第四点：第四点：20uL 20uL 样液样液 + 10uL 0.2ug/mL AFT B1 + 10uL 0.2ug/mL AFT B1 标液标液 n n要求点距边缘和点间距约为要求点距边缘和点间距约为1cm,1cm,样点直径约样点直径约3cm,3cm,大小相同，大小相同，点样时可用电吹风冷风边吹边点。点样时可用电吹风冷风边吹边点。 n n33展开展开 n n在展开槽内加在展开槽内加10mL10mL无水乙醚，将点好样的薄层板预展无水乙醚，将点好样的薄层板预展12cm12cm，取出挥干。再于另一展开槽内加，取出挥干。再于另一展开槽内加10mL 10mL 丙酮丙酮+ +三氯三氯甲烷（甲烷（8+928+92）混合溶剂，展开）混合溶剂，展开10-12cm10-12cm，取出挥干。，取出挥干。 实验十八实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定的测定n n44结果观察结果观察 n n将展开好的薄板放在将展开好的薄板放在365nm365nm的紫外灯光下观察：的紫外灯光下观察：a. a.若第一若第一点无荧光或都无荧光。说明薄板或展开剂未制备好，需重点无荧光或都无荧光。说明薄板或展开剂未制备好，需重新制备。新制备。b. b.第一点有荧光，而其余三点无荧光。说明样液第一点有荧光，而其余三点无荧光。说明样液中有荧光猝灭剂，样液需重新制备。中有荧光猝灭剂，样液需重新制备。c. c.第一点有荧光，第第一点有荧光，第二点无荧光，三、四点有荧光。说明样液不含二点无荧光，三、四点有荧光。说明样液不含AFT B1AFT B1或含或含量小于最低检出量。量小于最低检出量。d. d.四个点都有荧光。需做确证实验后四个点都有荧光。需做确证实验后再进行定量。再进行定量。n n55确证实验确证实验 n n于另一薄板上左边依次点二个样：于另一薄板上左边依次点二个样： n n第一点：第一点：10uL0.04ug/mL AFT B110uL0.04ug/mL AFT B1标液标液n n第二点：第二点：20uL20uL样液样液实验十八实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定的测定n n乙酸（乙酸（TFATFA），在以上两点各加一小滴三氟待反应），在以上两点各加一小滴三氟待反应5 5分分钟后，用电吹风热风钟后，用电吹风热风2 2分钟，使温度不高于分钟，使温度不高于4040。 n n再于薄层板的右边点以下二个点：再于薄层板的右边点以下二个点： n n第三点：第三点：10uL 0.04ug/L AFT B1 10uL 0.04ug/L AFT B1 标液标液 n n第四点：第四点：20uL20uL样液样液 n n同第同第33步展开后，于紫外光下观察样液是否产生与步展开后，于紫外光下观察样液是否产生与AFT AFT B1B1标准点相同的衍生物标准点相同的衍生物AFT B2a ,AFT B2a ,未加未加TFATFA的第三、四点作的第三、四点作空白对照。空白对照。n n 66稀释定量稀释定量n n若第二点的荧光强度比第一点强，则根据其强度估计减少若第二点的荧光强度比第一点强，则根据其强度估计减少点样体积，于另一薄板上点四个点：点样体积，于另一薄板上点四个点：实验十八实验十八 薄层层析法黄曲霉毒素薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定的测定n n第一点：第一点：10uL 0.04ug/mL AFT B110uL 0.04ug/mL AFT B1标液标液n n第二点：第二点：10uL 10uL 样液样液 n n第三点：第三点：15uL 15uL 样液样液 n n第四点：第四点：20uL 20uL 样液样液 n n展开后取荧光强度与第一点相同的样点进行计算。展开后取荧光强度与第一点相同的样点进行计算。n n五、计算五、计算 n nX X 样品中样品中AFT B1 AFT B1 的含量的含量ug/kg(ppbug/kg(ppb) ) n nV1V1稀释前样液的总体积稀释前样液的总体积mLmL n nV2V2出现同等荧光强度的稀释后样液点样量出现同等荧光强度的稀释后样液点样量uLuL n nD D 样液的稀释倍数样液的稀释倍数 实验十九实验十九 气相色谱法测定米酒中气相色谱法测定米酒中 乙酸乙酯的含量乙酸乙酯的含量 n n一、原理一、原理 n n将酒样气化后通过气相色谱仪分离，各种挥发性成分以不将酒样气化后通过气相色谱仪分离，各种挥发性成分以不同时间从出口流出，用氢火焰离子化检测器进行检测，并同时间从出口流出，用氢火焰离子化检测器进行检测，并与标准系列比较定量。与标准系列比较定量。n n二、试剂二、试剂 n nGDX-102(60-80GDX-102(60-80目目) ) n n精制乙醇：取无水乙醇精制乙醇：取无水乙醇300mL,300mL,加高锰酸钾少许，蒸馏，收加高锰酸钾少许，蒸馏，收集中间馏液约集中间馏液约200mL,200mL,用酒精比重计测出其浓度，然后加水用酒精比重计测出其浓度，然后加水配成与样品酒相同浓度的溶液。配成与样品酒相同浓度的溶液。n n乙酸乙酯标准溶液：准确称取气相色谱纯乙酸乙酯乙酸乙酯标准溶液：准确称取气相色谱纯乙酸乙酯800mg,800mg,以少量精制乙醇洗入以少量精制乙醇洗入100mL100mL容量瓶中，并用其稀释至刻度，容量瓶中，并用其稀释至刻度，冰箱中保存。使用时吸取冰箱中保存。使用时吸取1.00mL1.00mL置于置于10mL10mL容量瓶，用精制容量瓶，用精制乙醇定容，此使用液的浓度为乙醇定容，此使用液的浓度为0.80mg/mL0.80mg/mL。实验十九实验十九 气相色谱法测定米酒中气相色谱法测定米酒中 乙酸乙酯的含量乙酸乙酯的含量n n三、仪器条件三、仪器条件 n n日本岛津日本岛津GC-14B GC-14B n n色谱柱：色谱柱：2 m 4 mm 2 m 4 mm n n固定相：固定相：GDX-102(60-80GDX-102(60-80目目) ) n n气化室温度：气化室温度：190190 n n柱温：柱温：200200 n n检测器温度：检测器温度：230230 n n载气及流速：载气及流速：NN；40mL/min 40mL/min n n氢气流速：氢气流速：40mL/min 40mL/min n n空气流速：空气流速：500mL/min 500mL/min 实验十九实验十九 气相色谱法测定米酒中气相色谱法测定米酒中 乙酸乙酯的含量乙酸乙酯的含量n n四、测定操作n n1 1、安装色谱柱、安装色谱柱n n将色谱柱一端插入将色谱柱一端插入60-8060-80目的目的GDX-102GDX-102担体，另一端塞担体，另一端塞入一小团棉花后连接抽气机，开动抽气机抽气，使担入一小团棉花后连接抽气机，开动抽气机抽气，使担体均匀充实到色谱柱中。然后将其安装到色谱仪。体均匀充实到色谱柱中。然后将其安装到色谱仪。n n2 2、调节色谱条件、调节色谱条件n n开启氮气瓶调节阀，使压力达到开启氮气瓶调节阀，使压力达到0.5KPa0.5KPa，然后通过流量，然后通过流量计调节好流量。计调节好流量。n n开启氢气自动发生器，当压力达到开启氢气自动发生器，当压力达到0.3KPa0.3KPa，再通过流量，再通过流量计调节好流量。计调节好流量。n n开启空气压缩机，稳压后再通过流量计调节好流量。开启空气压缩机，稳压后再通过流量计调节好流量。 n n打开打开GC-14BGC-14B气相色谱仪电源，将所有控制气相色谱仪电源，将所有控制FIDFID的开关置的开关置于于FIDFID位置，启动加热开关。通过控制面板调节好气化位置，启动加热开关。通过控制面板调节好气化室温度、柱室温度、检测器温度。最后启动室温度、柱室温度、检测器温度。最后启动STARTSTART。实验十九实验十九 气相色谱法测定米酒中气相色谱法测定米酒中 乙酸乙酯的含量乙酸乙酯的含量n n启动计算机色谱工作站，待基线平稳后，可进样分析。启动计算机色谱工作站，待基线平稳后，可进样分析。 n n3 3、测定、测定n n进进0.50uL0.50uL标准使用液，记录色谱图记录表中乙酸乙酯的标准使用液，记录色谱图记录表中乙酸乙酯的峰高；进峰高；进0.50uL0.50uL酒样，记录色谱图记录表中乙酸乙酯的酒样，记录色谱图记录表中乙酸乙酯的峰高。峰高。n n4 4、计算、计算n nC1 C1 进样标准液中乙酸乙酯含量进样标准液中乙酸乙酯含量mg mg n nH1 H1 标准液色谱图乙酸乙酯的峰高标准液色谱图乙酸乙酯的峰高mvmv n nH2 H2 酒样色谱图乙酸乙酯的峰高酒样色谱图乙酸乙酯的峰高mvmv 实验二十实验二十 紫外分光光度法测定鱼肝油中紫外分光光度法测定鱼肝油中 维生素维生素A的含量的含量n n一、原理一、原理 n n维生素维生素A A的异丙醇溶液在的异丙醇溶液在325nm325nm波长处有最大吸收峰，其波长处有最大吸收峰，其吸光度与维生素吸光度与维生素A A的含量成正比。的含量成正比。n n二、试剂二、试剂 n n维生素维生素A A标准溶液：视黄醇标准溶液：视黄醇85%85%（或视黄醇乙酸脂（或视黄醇乙酸脂90%90%）经）经皂化处理后使用。称取一定量的标准品，用脱醛乙醇溶解皂化处理后使用。称取一定量的标准品，用脱醛乙醇溶解使其浓度大约为使其浓度大约为1mg/mL1mg/mL。临用前需进行标定。取标定后。临用前需进行标定。取标定后的维生素的维生素A A标准溶液配制成标准溶液配制成10 I.U/10 I.U/mLmL的标准使用液。的标准使用液。n n标定：取维生素标定：取维生素A A溶液若干微升，用脱醛乙醇稀释溶液若干微升，用脱醛乙醇稀释3.00Ml3.00Ml，在，在325nm325nm处测定吸光度，用此吸光度计算出维生素处测定吸光度，用此吸光度计算出维生素A A的的浓度。浓度。实验二十实验二十 紫外分光光度法测定鱼肝油中紫外分光光度法测定鱼肝油中 维生素维生素A的含量的含量n nCC维生素维生素A A的浓度的浓度g/mLg/mL n nAA维生素维生素A A的平均吸光度值的平均吸光度值 n nSS加入的维生素加入的维生素A A溶液量溶液量LL n nE1%E1%维生素维生素A A的比吸光系数：的比吸光系数： n n无水脱醛乙醇：取无水脱醛乙醇：取2g2g硝酸银溶入少量水中。取硝酸银溶入少量水中。取4g4g氢氧化钠氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入盛有溶于温乙醇中。将两者倾入盛有1L1L乙醇的试剂瓶中，振摇乙醇的试剂瓶中，振摇后，暗处放置两天（不时摇动促进反应）。取上层清液蒸后，暗处放置两天（不时摇动促进反应）。取上层清液蒸馏，弃去初馏液馏，弃去初馏液50mL50mL。n n酚酞：用酚酞：用95%95%乙醇配制成乙醇配制成1%1%的溶液。的溶液。n n1:11:1氢氧化钾；氢氧化钾；0.5mol/L 0.5mol/L 氢氧化钾；无水乙醚（不含过氧化氢氧化钾；无水乙醚（不含过氧化物物) )；异丙醇；异丙醇实验二十实验二十 紫外分光光度法测定鱼肝油中紫外分光光度法测定鱼肝油中 维生素维生素A的含量的含量n n三、操作步骤三、操作步骤 n n1 1、样品处理、样品处理n n皂化：称取皂化：称取0.5-5g0.5-5g充分混匀的鱼肝油于三角瓶中，加入充分混匀的鱼肝油于三角瓶中，加入10mL1:110mL1:1氢氧化钾及氢氧化钾及20-40mL20-40mL乙醇，在电热板上回流乙醇，在电热板上回流3030分钟。分钟。加入加入10mL10mL水，稍稍振摇，若有混浊现象，表示皂化完全。水，稍稍振摇，若有混浊现象，表示皂化完全。 n n提取：将皂化液移入分液漏斗，先用提取：将皂化液移入分液漏斗，先用30mL30mL水分两次洗涤皂水分两次洗涤皂化瓶（若有渣，可用经过脱脂棉过滤），再用化瓶（若有渣，可用经过脱脂棉过滤），再用50mL50mL乙醚分乙醚分两次洗涤皂化瓶，所有洗液并入分液漏斗中，振摇两分钟两次洗涤皂化瓶，所有洗液并入分液漏斗中，振摇两分钟（注意放气），静止分层后，水层放入第二分液漏斗。皂（注意放气），静止分层后，水层放入第二分液漏斗。皂化瓶再用化瓶再用30mL30mL乙醚分两次洗涤，洗液倒入第二分液漏斗，乙醚分两次洗涤，洗液倒入第二分液漏斗，振摇后静止分层，将水层放入第三分液漏斗，醚层并入第振摇后静止分层，将水层放入第三分液漏斗，醚层并入第一分液漏斗。重复操作一分液漏斗。重复操作3 3次。次。实验二十实验二十 紫外分光光度法测定鱼肝油中紫外分光光度法测定鱼肝油中 维生素维生素A的含量的含量n n洗涤：向第一分液漏斗的醚液中加入洗涤：向第一分液漏斗的醚液中加入30mL30mL水，轻轻振摇，水，轻轻振摇，静止分层后放出水层。再加静止分层后放出水层。再加15-20mL 0.5mol/L15-20mL 0.5mol/L的氢氧化钾的氢氧化钾溶液，轻轻振摇，静止分层后放出碱液。再用水同样操作溶液，轻轻振摇，静止分层后放出碱液。再用水同样操作至洗液不使酚酞变红为止。醚液静止至洗液不使酚酞变红为止。醚液静止10-2010-20分钟后，小心放分钟后，小心放掉析出的水。掉析出的水。n n浓缩：将醚液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用约浓缩：将醚液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用约25mL25mL乙醚洗涤分液漏斗和硫酸钠两次，洗液并入三角瓶中乙醚洗涤分液漏斗和硫酸钠两次，洗液并入三角瓶中。用水浴蒸馏回收乙醚，待瓶中剩余约。用水浴蒸馏回收乙醚，待瓶中剩余约5mL5mL乙醚时取下减乙醚时取下减压抽干，立即用异丙醇溶解并移入压抽干，立即用异丙醇溶解并移入50mL50mL容量瓶中用异丙醇容量瓶中用异丙醇定容。定容。n n2 2、绘制标准曲线、绘制标准曲线n n分别取维生素分别取维生素A A标准使用液标准使用液0.00,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00mL0.00,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00mL于于10mL10mL容量瓶中用异丙醇定容。以零管调零，于紫外分光光容量瓶中用异丙醇定容。以零管调零，于紫外分光光度计上在度计上在325nm325nm处分别测定吸光度，绘制标准曲线。处分别测定吸光度，绘制标准曲线。实验二十实验二十 紫外分光光度法测定鱼肝油中紫外分光光度法测定鱼肝油中 维生素维生素A的含量的含量n n3、样品测定n n取浓缩后的定容液于紫外分光光度计上在取浓缩后的定容液于紫外分光光度计上在325nm325nm处测定处测定吸光度，通过此吸光度从标准曲线上查出维生素吸光度，通过此吸光度从标准曲线上查出维生素A A的含的含量。量。n n四、计算 n n n nCC测出的样品浓缩后的定容液的维生素测出的样品浓缩后的定容液的维生素A A的含量的含量I.U/I.U/mLmL n nVV浓缩后的定容液的体积浓缩后的定容液的体积mLmL n nmm样品的质量样品的质量g g 实验二十一实验二十一 饼干中抗氧化剂饼干中抗氧化剂BHT的测定的测定n n一、原理一、原理n n试样通过水蒸气蒸馏，使试样通过水蒸气蒸馏，使BHTBHT分离，用甲醛吸收，遇分离，用甲醛吸收，遇邻联二茴香胺与亚硝酸钠溶液生成橙红色物质，用三邻联二茴香胺与亚硝酸钠溶液生成橙红色物质，用三氯甲烷提取，可进行比色定量。氯甲烷提取，可进行比色定量。n n二、试剂二、试剂 n n1 1、无水氯化钙、无水氯化钙n n2 2、甲醇、甲醇n n3 3、三氯甲烷、三氯甲烷n n4 4、甲醇（、甲醇（50%50%） n n5 5、亚硝酸钠溶液：、亚硝酸钠溶液：3g/L3g/L，避光保存。，避光保存。n n6 6、邻联二茴香胺溶液：称取、邻联二茴香胺溶液：称取125mg125mg邻联二茴香胺于邻联二茴香胺于50ml50ml棕色容量瓶中加棕色容量瓶中加25ml25ml甲醇，振摇使其溶解，加甲醇，振摇使其溶解，加50mg50mg活性炭，振摇活性炭，振摇5min5min过滤，取过滤，取20.0ml20.0ml滤液置于另一滤液置于另一50ml50ml棕色容量瓶中，加盐酸（棕色容量瓶中，加盐酸（1+111+11）至刻度。临用时）至刻度。临用时实验二十一实验二十一 饼干中抗氧化剂饼干中抗氧化剂BHT的测定的测定 现配并避光保存。现配并避光保存。 n n7 7、BHTBHT标准溶液：准确称取标准溶液：准确称取0.050g BHT0.050g BHT，用少量甲醇，用少量甲醇溶解，移入溶解，移入100ml100ml棕色容量瓶中，并稀释至刻度，避光棕色容量瓶中，并稀释至刻度，避光保存。此溶液每毫升相当于保存。此溶液每毫升相当于0.050g BHT0.050g BHT。n n8 8、BHTBHT标准使用液：临用时吸取标准使用液：临用时吸取1.0mlBHT1.0mlBHT标准溶液，标准溶液，置于置于50ml50ml棕色容量瓶中加甲醇至刻度，混匀，避光保存。棕色容量瓶中加甲醇至刻度，混匀，避光保存。此溶液每毫升相当于此溶液每毫升相当于10.0g BHT10.0g BHT。m mn n三、仪器三、仪器n n1 1、水蒸气蒸馏装置。、水蒸气蒸馏装置。n n2 2、甘油浴。、甘油浴。n n3 3、分光光度剂、分光光度剂实验二十一实验二十一 饼干中抗氧化剂饼干中抗氧化剂BHT的测定的测定n n四、测定步骤四、测定步骤 n n1 1、试样处理、试样处理n n称取称取25g25g粉碎试样（约含粉碎试样（约含0.40mgBHT0.40mgBHT）于）于100ml100ml蒸馏瓶中，蒸馏瓶中，加加16.0g16.0g无水绿化钙粉末及无水绿化钙粉末及10.0ml10.0ml水，当甘油浴温度达到水，当甘油浴温度达到165165恒温时，将蒸馏瓶浸入甘油浴中，连接好水蒸气发恒温时，将蒸馏瓶浸入甘油浴中，连接好水蒸气发生装置，冷凝管下端浸入有生装置，冷凝管下端浸入有50ml50ml甲醇的甲醇的200ml200ml容量瓶中，容量瓶中，进行蒸馏，蒸馏速度进行蒸馏，蒸馏速度1.52ml/min1.52ml/min，在，在5060min5060min内收集约内收集约100ml100ml馏出液（连同原有的甲醇共约馏出液（连同原有的甲醇共约150ml150ml，蒸汽压不可太，蒸汽压不可太高，以免油滴带出），以温热的甲醇分次洗涤冷凝管，洗高，以免油滴带出），以温热的甲醇分次洗涤冷凝管，洗液合并于容量瓶中并稀释至刻度。液合并于容量瓶中并稀释至刻度。实验二十一实验二十一 饼干中抗氧化剂饼干中抗氧化剂BHT的测定的测定n n2 2、测定准确吸取、测定准确吸取25.0ml25.0ml上述处理后的试样溶液，移入用黑上述处理后的试样溶液，移入用黑纸（布）包扎的纸（布）包扎的100ml100ml分液漏斗中，另准确吸取分液漏斗中，另准确吸取0.000.00，1.001.00，2.002.00，3.003.00，4.004.00，5.00ml BHT5.00ml BHT标准使用液，分别置于用标准使用液，分别置于用黑纸（布）包扎的黑纸（布）包扎的60ml60ml分液漏斗中，加入甲醇（分液漏斗中，加入甲醇（50%50%）至）至25ml25ml。分别加入。分别加入5ml5ml邻联二茴香胺溶液，混匀，再各加邻联二茴香胺溶液，混匀，再各加2ml2ml亚硝酸钠溶液，振摇亚硝酸钠溶液，振摇1min,1min,放置放置10min10min，再加入，再加入10ml10ml三氯甲三氯甲烷，剧烈振摇烷，剧烈振摇1min,1min,静置静置3min3min后，将三氯甲烷层移入用黑纸后，将三氯甲烷层移入用黑纸（布）包扎的（布）包扎的10ml10ml比色管中，管中预先放入比色管中，管中预先放入2ml2ml甲醇，混甲醇，混匀。用匀。用1cm1cm比色皿以三氯甲烷为参比，于波长比色皿以三氯甲烷为参比，于波长520nm520nm处测处测定吸光度，制作标准曲线，比较定量。定吸光度，制作标准曲线，比较定量。实验二十一实验二十一 饼干中抗氧化剂饼干中抗氧化剂BHT的测定的测定n n五、五、 结果计算结果计算n n式中：式中：n nX-X-试样中试样中BHTBHT的含量，的含量，g/kg g/kg n nm2-m2-测定用样液中测定用样液中BHTBHT的质量，的质量，m mg g n nm1-m1-试样质量，试样质量，g g n nV1-V1-蒸馏后样液总体积，蒸馏后样液总体积，ml ml n nV2-V2-测定用吸取样液的体积，测定用吸取样液的体积，ml ml 实验二十二实验二十二 罐头食品中锡含量的测定罐头食品中锡含量的测定 苯芴酮比色法苯芴酮比色法 n n一、原理一、原理 n n样品经消化后，在弱酸介质中四价锡离子与苯芴酮生成微样品经消化后，在弱酸介质中四价锡离子与苯芴酮生成微溶性橙红色络合物，在保护性胶体存在下进行比色测定。溶性橙红色络合物，在保护性胶体存在下进行比色测定。n n二、试剂二、试剂 n n10%10%酒石酸溶液酒石酸溶液n n0.5%0.5%动物胶溶液（临时配制）动物胶溶液（临时配制） n n1%1%抗坏血酸溶液（临时配制）抗坏血酸溶液（临时配制） n n0.01%0.01%苯芴酮溶液：称取苯芴酮溶液：称取0.010g0.010g苯芴酮，加少量甲醇及苯芴酮，加少量甲醇及1:91:9硫硫酸数滴溶解，以甲醇稀释至酸数滴溶解，以甲醇稀释至100mL100mL。n n锡标准溶液：精密称取锡标准溶液：精密称取0.1000g0.1000g金属锡（金属锡（99.99%99.99%），置于小），置于小烧杯中，加烧杯中，加10mL10mL硫酸，盖以表面皿，加热至锡完全溶解，硫酸，盖以表面皿，加热至锡完全溶解，移去表面皿，继续加热至发生浓白烟，冷却，慢慢加移去表面皿，继续加热至发生浓白烟，冷却，慢慢加5mL5mL水，移入水，移入100mL100mL容量瓶中，用容量瓶中，用1:91:9硫酸多次洗涤烧杯，洗液硫酸多次洗涤烧杯，洗液并入容量瓶中，并稀释至刻度，混匀。此溶液浓度为并入容量瓶中，并稀释至刻度，混匀。此溶液浓度为实验二十二实验二十二 罐头食品中锡含量的测定罐头食品中锡含量的测定 苯芴酮比色法苯芴酮比色法 1mg/mL1mg/mL。使用时再以。使用时再以1:91:9硫酸溶液稀释至硫酸溶液稀释至10ug/mL10ug/mL锡标准锡标准使用液。使用液。n n三、测定步骤三、测定步骤 n n1 1、试样消化、试样消化n n称取称取5.005.0010.00g10.00g捣碎试样，置于捣碎试样，置于250250500mL500mL凯氏烧瓶中，凯氏烧瓶中，加数粒玻璃珠，加数粒玻璃珠，101015mL15mL硝酸，放置片刻后，小火缓缓加硝酸，放置片刻后，小火缓缓加热，待作用缓和，放冷。沿管壁加入热，待作用缓和，放冷。沿管壁加入5 510mL10mL硫酸，再加硫酸，再加热，至瓶中液体开始变成棕色时，不断加入硝酸至有机物热，至瓶中液体开始变成棕色时，不断加入硝酸至有机物分解完全。加大火力，至产生白烟，待瓶口白烟冒净后，分解完全。加大火力，至产生白烟，待瓶口白烟冒净后，瓶内液体再产生白烟为消化完全，该溶液应澄清透明或微瓶内液体再产生白烟为消化完全，该溶液应澄清透明或微带黄色，放冷。加带黄色，放冷。加20mL20mL水煮沸，除去残余的硝酸至产生白水煮沸，除去残余的硝酸至产生白烟为止，如此处理两次，放冷。将冷后的溶液移入烟为止，如此处理两次，放冷。将冷后的溶液移入100mL100mL容量瓶中，用水洗涤烧瓶，洗液并入容量瓶中，放冷，定容量瓶中，用水洗涤烧瓶，洗液并入容量瓶中，放冷，定容，混匀。按同法做一试剂空白。容，混匀。按同法做一试剂空白。实验二十二实验二十二 罐头食品中锡含量的测定罐头食品中锡含量的测定 苯芴酮比色法苯芴酮比色法n n2 2、测定、测定n n吸取吸取1.0-5.0mL1.0-5.0mL消化液和同量的空白液分别置于消化液和同量的空白液分别置于25mL25mL比色管比色管中；吸取中；吸取0.000.00，0.200.20，0.400.40，0.600.60，0.800.80，1.00mL1.00mL锡标准溶液锡标准溶液分别置于分别置于25mL25mL比色管中。于上述各管中各加入比色管中。于上述各管中各加入0.5mL10%0.5mL10%酒石酸溶液及酒石酸溶液及1 1滴酚酞指示剂，混匀，各加滴酚酞指示剂，混匀，各加1:11:1氨水中和至氨水中和至淡红色，加淡红色，加3mL1:93mL1:9硫酸，硫酸，1mL0.5%1mL0.5%动物胶溶液及动物胶溶液及2.5mL1%2.5mL1%抗坏血酸溶液，再加水至抗坏血酸溶液，再加水至25mL25mL，混匀，再各加，混匀，再各加2mL0.01%2mL0.01%苯芴酮溶液，混匀，苯芴酮溶液，混匀，1 1小时后，用小时后，用2cm2cm比色皿，以零管调零，比色皿，以零管调零，于波长于波长490nm490nm处测量吸光度。先以锡标准液的含量处测量吸光度。先以锡标准液的含量( (ugug) )为为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，然后从标准曲横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，然后从标准曲线上查出消化液和空白液的锡含量。线上查出消化液和空白液的锡含量。实验二十二实验二十二 罐头食品中锡含量的测定罐头食品中锡含量的测定 苯芴酮比色法苯芴酮比色法n n四、计算四、计算 n nxx样品中锡含量样品中锡含量mg/mg/kg(mgkg(mg/L) /L) n nA1A1测定用消化液中锡含量测定用消化液中锡含量ugug n nA2A2空白液中锡含量空白液中锡含量ugug n nmm样品质量样品质量g g（体积（体积mLmL） n nV1V1消化液的总体积消化液的总体积mLmL n nV2V2测定用消化液的体积测定用消化液的体积mLmL n n实验主要参考文献实验主要参考文献 n n中华人民共和国国家标准，中华人民共和国国家标准，食品卫生检验方法理化部分食品卫生检验方法理化部分（一）（一），北京：中国国家标准出版，北京：中国国家标准出版，2004 2004 实验二十三实验二十三 茶叶中茶多酚含量的测定茶叶中茶多酚含量的测定 高锰酸钾直接滴定法高锰酸钾直接滴定法 n n一、原理一、原理 n n茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。根据消耗根据消耗1ml0.318g/ml1ml0.318g/ml的高锰酸钾相当于的高锰酸钾相当于5.82mg5.82mg茶多酚的茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。换算系数，可计算茶多酚的含量。n n二、试剂二、试剂 n n1 1、0.1%0.1%靛红溶液：靛红溶液： n n称取靛红称取靛红1g1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.841.84的浓硫酸的浓硫酸50ml50ml，冷却后用蒸馏水定容至，冷却后用蒸馏水定容至1000ml1000ml，如果，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g1g，加浓硫酸，加浓硫酸50ml50ml，在，在8080烘箱或水浴中加热磺化烘箱或水浴中加热磺化46h46h，用蒸馏水定容，用蒸馏水定容至至1000ml1000ml，过滤后贮于棕色瓶中。，过滤后贮于棕色瓶中。实验二十三实验二十三 茶叶中茶多酚含量的测定茶叶中茶多酚含量的测定 高锰酸钾直接滴定法高锰酸钾直接滴定法n n2 2、0.630%0.630%草酸溶液：草酸溶液： n n准确称取草酸准确称取草酸6.3034g6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至，用蒸馏水溶解后定容至1000ml1000ml。n n3 3、高锰酸钾标准溶液：、高锰酸钾标准溶液： n n称取称取ARAR的高锰酸钾的高锰酸钾1.27g1.27g，用蒸馏水溶解后定容至，用蒸馏水溶解后定容至1000ml1000ml。准确吸取准确吸取0.630%0.630%草酸溶液草酸溶液10ml10ml，放入，放入250ml250ml锥形瓶中（平行锥形瓶中（平行2 2份），加入蒸馏水份），加入蒸馏水50ml50ml，再加入相对密度为，再加入相对密度为1.841.84的浓硫酸的浓硫酸10ml10ml，摇匀，在，摇匀，在70807080水浴中保温水浴中保温5 5分钟，取出后用高锰分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以酸钾进行滴定。开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边颠边摇，待溶液出现淡红色保持后可逐渐加快，边颠边摇，待溶液出现淡红色保持1 1分钟分钟不变即为终点。按下式计算高锰酸钾溶液的浓度：不变即为终点。按下式计算高锰酸钾溶液的浓度： n n 实验二十三实验二十三 茶叶中茶多酚含量的测定茶叶中茶多酚含量的测定 高锰酸钾直接滴定法高锰酸钾直接滴定法n n三、仪器三、仪器 n n分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500ml500ml白瓷皿。白瓷皿。 n n四、测定步骤四、测定步骤 n n1 1、供测试液的准备：、供测试液的准备： n n准备称取茶叶磨碎样品准备称取茶叶磨碎样品1g1g，放在，放在200ml200ml三角烧瓶中，加入三角烧瓶中，加入沸蒸馏水沸蒸馏水80ml80ml，在沸水浴中浸提，在沸水浴中浸提3030分钟，然后抽滤、洗涤，分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入滤液倒入100ml100ml容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至至100ml100ml，摇匀。，摇匀。n n 2 2、测定：、测定： n n取取200ml200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%0.1%靛红溶液靛红溶液5ml5ml，再，再加入供测试液加入供测试液5ml5ml，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1 1滴滴/s/s为宜，接近终点为宜，接近终点时应慢滴。直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消时应慢滴。直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。同时做空白测定。耗的高锰酸钾毫升数。同时做空白测定。 实验二十三实验二十三 茶叶中茶多酚含量的测定茶叶中茶多酚含量的测定 高锰酸钾直接滴定法高锰酸钾直接滴定法n n五、结果计算五、结果计算n n式中：式中： n nXX茶多酚的含量，茶多酚的含量，% % n nBB空白消耗的高锰酸钾毫升数，空白消耗的高锰酸钾毫升数，ml ml n nAA样品消耗的高锰酸钾毫升数，样品消耗的高锰酸钾毫升数，ml ml n n-高锰酸钾的浓度，高锰酸钾的浓度，% % n nmm样品的质量样品的质量g g n nV1V1测定用供测试液的体积，测定用供测试液的体积，ml ml n nV2-V2-供测试液的体积，供测试液的体积，ml ml 实验二十四实验二十四 胆碱酯酶抑制法测定胆碱酯酶抑制法测定 有机磷农药残留量有机磷农药残留量 n n一、原理一、原理 n n有机磷类有机磷类(OPS)(OPS)和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶( (AchEAchE) )的的活性具有很强的抑制作用。向样品中添加一定量的乙酰活性具有很强的抑制作用。向样品中添加一定量的乙酰( (或丁酰或丁酰) )胆碱酯酶，如果样品中含有上述两大类农药，即胆碱酯酶，如果样品中含有上述两大类农药，即会对酶的活性产生抑制作用。当向含有农药的样品中添加会对酶的活性产生抑制作用。当向含有农药的样品中添加底物底物( (碘化硫代乙酰胆碱碘化硫代乙酰胆碱) )和显色剂和显色剂( (二硫代二硝基苯甲酸二硫代二硝基苯甲酸) )时，酶由于丧失活性而不能催化底物分解并完成显色反应；时，酶由于丧失活性而不能催化底物分解并完成显色反应；相反，如果样品中不含农药，胆碱酯酶则能催化底物分解相反，如果样品中不含农药，胆碱酯酶则能催化底物分解并完成显色反应。通过分光光度计于并完成显色反应。通过分光光度计于412nm412nm波长下比色，波长下比色，能测出颜色变化造成的吸光度之差，再通过吸光度的变化能测出颜色变化造成的吸光度之差，再通过吸光度的变化计算出酶的抑制率。酶的抑制率越大，说明样品中残留农计算出酶的抑制率。酶的抑制率越大，说明样品中残留农药的含量越高。药的含量越高。 实验二十四实验二十四 胆碱酯酶抑制法测定胆碱酯酶抑制法测定 有机磷农药残留量有机磷农药残留量n n二、试剂二、试剂 n n1 1、磷酸盐缓冲溶液：、磷酸盐缓冲溶液：3.2g KH2PO43.2g KH2PO4和和11.9gK2HPO411.9gK2HPO4配成配成1000mL1000mL，PH8.0PH8.0。 n n2 2、显色剂：、显色剂：160mg160mg二硫代二硝基苯甲酸二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)(DTNB)和和15.6mg15.6mg碳碳酸钠，用酸钠，用20mL20mL缓冲溶液溶解，缓冲溶液溶解，4 4冰箱中保存。冰箱中保存。 n n3 3、底物：取、底物：取25.0mg25.0mg碘化硫代乙酰胆碱，加碘化硫代乙酰胆碱，加3.0mL3.0mL蒸馏水溶蒸馏水溶解，摇匀后解，摇匀后4 4冰箱中保存备用，保存期不超过冰箱中保存备用，保存期不超过2 2周。周。 n n4 4、胆碱酯酶溶液：称取、胆碱酯酶溶液：称取0.040g0.040g丁酰胆碱酯酶丁酰胆碱酯酶( (粉剂粉剂) )或乙酰或乙酰胆碱酯酶，加入胆碱酯酶，加入2mL2mL磷酸盐缓冲溶液，溶解后低温保存，磷酸盐缓冲溶液，溶解后低温保存，1 1周内可用。周内可用。 n n三、仪器三、仪器 n n1 1、农药残留快速测定仪或分光光度计。、农药残留快速测定仪或分光光度计。 n n2 2、分析天平。、分析天平。 n n3 3、恒温烘箱。、恒温烘箱。 实验二十四实验二十四 胆碱酯酶抑制法测定胆碱酯酶抑制法测定 有机磷农药残留量有机磷农药残留量n n四、测定步骤四、测定步骤 n n1 1、取蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成、取蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm1cm见方的碎片，见方的碎片，取样取样1g1g，放入烧杯或提取瓶中，加入，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL5mL缓冲液振荡缓冲液振荡1 12min2min，倒出提取液，静置，倒出提取液，静置3 35min5min备用。备用。 n n2 2、对照溶液测试：先于试管中加入、对照溶液测试：先于试管中加入2.5mL2.5mL缓冲液，再加入缓冲液，再加入0.1mL0.1mL胆碱酯酶溶液、胆碱酯酶溶液、0.1mL0.1mL显色剂，摇匀后于显色剂，摇匀后于3737放置放置15min15min以上以上( (每批样品测试时放置时间应一致每批样品测试时放置时间应一致) )。加入。加入0.1mL0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色，应立即用底物摇匀，此时检液开始显色，应立即用1cm1cm比色皿放入比色皿放入农药残留快速测定仪农药残留快速测定仪( (或分光光度计或分光光度计) )，记录反应，记录反应3min3min的吸的吸光度变化值光度变化值A0A0。 n n3 3、样品溶液测定：先于试管中加入、样品溶液测定：先于试管中加入2.5mL2.5mL样品提取液，其样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录反应它操作与对照溶液测试相同，记录反应3min3min的吸光度变化的吸光度变化值值AtAt。 实验二十四实验二十四 胆碱酯酶抑制法测定胆碱酯酶抑制法测定 有机磷农药残留量有机磷农药残留量n n五、结果计算与判定五、结果计算与判定 n n抑制率抑制率(%)=(%)=(A0-A0-At)/ At)/ A0100 A0100 n n式中：式中： n nA0-A0-对照溶液反应对照溶液反应3min3min吸光度变化值；吸光度变化值； n nAt -At -样品溶液反应样品溶液反应3min3min吸光度变化值。吸光度变化值。 n n当蔬菜样品提取液对酶的抑制率当蔬菜样品提取液对酶的抑制率 50%50%时，表示蔬菜中有时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检验阳性结果的样品需要重复检验2 2次以上。次以上。 n n本检验方法阳性结果符合率在本检验方法阳性结果符合率在80%80%以上。以上。 实验二十五实验二十五 聚乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯塑聚乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯塑料成型品的检测料成型品的检测 高锰酸钾消耗量的检测高锰酸钾消耗量的检测 n n一、原理一、原理 n n试样经用浸泡液浸泡后，测定其高锰酸钾消耗量，表试样经用浸泡液浸泡后，测定其高锰酸钾消耗量，表示可溶出有机物质的含量。示可溶出有机物质的含量。 n n二、试剂二、试剂 n n1 1、硫酸：、硫酸：1+2 1+2 n n2 2、高锰酸钾标准溶液：、高锰酸钾标准溶液：c(1/5kMnO4)=0.01mol/L c(1/5kMnO4)=0.01mol/L n n3 3、草酸标准溶液：、草酸标准溶液：c(1/2H2C2O42H2O)=0.01mol/L c(1/2H2C2O42H2O)=0.01mol/L n n4 4、乙酸：、乙酸：4% 4% n n5 5、乙醇：、乙醇：65% 65% n n6 6、正乙烷。、正乙烷。 实验二十五实验二十五 聚乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯塑聚乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯塑料成型品的检测料成型品的检测 高锰酸钾消耗量的检测高锰酸钾消耗量的检测n n三、测定步骤三、测定步骤 n n1 1、制备浸泡液：、制备浸泡液： n n水浸泡液：水浸泡液：6060，浸泡，浸泡2 2小时；乙酸浸泡液：小时；乙酸浸泡液：6060，浸泡，浸泡2 2小时；乙醇浸泡液：室温，浸泡小时；乙醇浸泡液：室温，浸泡2 2小时；正乙烷浸泡液：小时；正乙烷浸泡液：室温，浸泡室温，浸泡2 2小时；以上浸泡液按接触面每平方厘米加小时；以上浸泡液按接触面每平方厘米加2ml2ml，在容器中则加入浸泡液至，在容器中则加入浸泡液至2/34/52/34/5容积为准。容积为准。 n n2 2、锥型瓶处理：、锥型瓶处理： n n取取100ml100ml水，放入水，放入250ml250ml锥型瓶中，加锥型瓶中，加5ml5ml硫酸（硫酸（1+21+2）、）、5ml5ml高锰酸钾标准溶液，煮沸高锰酸钾标准溶液，煮沸5min5min，倒去，用水冲洗备用。，倒去，用水冲洗备用。 n n3 3、滴定：、滴定： n n准确吸取准确吸取100ml100ml水浸泡液（有残渣则需过滤）于上述处理水浸泡液（有残渣则需过滤）于上述处理过的锥型瓶中，加过的锥型瓶中，加5ml5ml硫酸（硫酸（1+21+2）和）和10ml10ml高锰酸钾标准溶高锰酸钾标准溶液，再加玻璃珠液，再加玻璃珠2 2粒，准确煮沸粒，准确煮沸5 5分钟后，趁热加入分钟后，趁热加入10.0ml10.0ml实验二十五实验二十五 聚乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯塑聚乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯塑料成型品的检测料成型品的检测 高锰酸钾消耗量的检测高锰酸钾消耗量的检测 草酸标准溶液，再以高锰酸钾标准溶液滴定至微红色，记草酸标准溶液，再以高锰酸钾标准溶液滴定至微红色，记吓次消耗的高锰酸钾体积。另取吓次消耗的高锰酸钾体积。另取100ml100ml水，按同样的方法水，按同样的方法做空白测定。做空白测定。 n n四、结果计算四、结果计算 n n式中：式中： n nXX试样高锰酸钾消耗量，试样高锰酸钾消耗量，mg/L mg/L n nV1100mlV1100ml浸泡液消耗的高锰酸钾的体积，浸泡液消耗的高锰酸钾的体积，ml ml n nA100mlA100ml试剂空白消耗的高锰酸钾的体积数，试剂空白消耗的高锰酸钾的体积数，ml ml n nCC高锰酸钾标准溶液的浓度，高锰酸钾标准溶液的浓度，mol/l mol/l n n31.631.6与与1.0ml1.0ml的高锰酸钾标准溶液相当的高锰酸钾质量，的高锰酸钾标准溶液相当的高锰酸钾质量，mg mg 实验二十六实验二十六 保健食品中超氧化物歧化保健食品中超氧化物歧化 酶（酶（SOD）活性的测定）活性的测定n n一、原理一、原理 n n将将2525时抑制邻苯三酚自氧化速率时抑制邻苯三酚自氧化速率50%50%所需的所需的SODSOD定义为定义为一个活力单位。在碱性条件下，邻苯三酚会发生自氧化，一个活力单位。在碱性条件下，邻苯三酚会发生自氧化，可根据可根据SODSOD抑制邻苯三酚自氧化能力测定抑制邻苯三酚自氧化能力测定SODSOD活力。活力。n n二、试剂二、试剂 n n1 1、A A液：液：PH8.20 0.1mol/lPH8.20 0.1mol/l三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷- -盐酸缓冲液盐酸缓冲液（内含（内含1mmol/LEDTA2Na1mmol/LEDTA2Na）。称取）。称取1.2114g1.2114g三羟甲基氨基三羟甲基氨基甲烷和甲烷和37.2mgEDTA2Na37.2mgEDTA2Na溶于溶于62.4ml0.1mol/l62.4ml0.1mol/l盐酸溶液中，盐酸溶液中，用蒸馏水定溶至用蒸馏水定溶至100ml100ml。n n2 2、B B液：液：4.5mmol/l4.5mmol/l邻苯三酚盐酸溶液。称取邻苯三酚邻苯三酚盐酸溶液。称取邻苯三酚56.7mg56.7mg溶于少量溶于少量10mmol/l10mmol/l盐酸溶液，并定容至盐酸溶液，并定容至100ml100ml。n n3 3、盐酸溶液：、盐酸溶液：10mmol/l 10mmol/l n n4 4、蒸馏水：二重石英蒸馏水。、蒸馏水：二重石英蒸馏水。实验二十六实验二十六 保健食品中超氧化物歧化保健食品中超氧化物歧化 酶（酶（SOD）活性的测定）活性的测定n n三、仪器三、仪器 n n1 1、紫外、紫外- -可见分光光度计；可见分光光度计； n n2 2、精密酸度计，、精密酸度计，0.01PH0.01PH； n n3 3、离心机；、离心机； n n4 4、10ml10ml比色管；比色管； n n5 5、10ml10ml离心管；离心管； n n6 6、玻璃乳钵。、玻璃乳钵。n n四、测定步骤四、测定步骤 n n1 1、取茶叶样品、取茶叶样品1.00g1.00g置于研钵中，加入置于研钵中，加入9.0ml9.0ml蒸馏水研磨蒸馏水研磨5 5分分钟，移入钟，移入10ml10ml离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵，洗液并入离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵，洗液并入离心管中，加蒸馏水至刻度，经离心管中，加蒸馏水至刻度，经4000r/min4000r/min离心离心1515分钟，取分钟，取上清液测定。上清液测定。实验二十六实验二十六 保健食品中超氧化物歧化保健食品中超氧化物歧化 酶（酶（SOD）活性的测定）活性的测定n n三、仪器三、仪器 n n1 1、紫外、紫外- -可见分光光度计；可见分光光度计； n n2 2、精密酸度计，、精密酸度计，0.01PH0.01PH； n n3 3、离心机；、离心机； n n4 4、10ml10ml比色管；比色管； n n5 5、10ml10ml离心管；离心管； n n6 6、玻璃乳钵。、玻璃乳钵。n n四、测定步骤四、测定步骤 n n1 1、取茶叶样品、取茶叶样品1.00g1.00g置于研钵中，加入置于研钵中，加入9.0ml9.0ml蒸馏水研磨蒸馏水研磨5 5分分钟，移入钟，移入10ml10ml离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵，洗液并入离心管。用少量蒸馏水冲洗研钵，洗液并入离心管中，加蒸馏水至刻度，经离心管中，加蒸馏水至刻度，经4000r/min4000r/min离心离心1515分钟，取分钟，取上清液测定。上清液测定。实验二十六实验二十六 保健食品中超氧化物歧化保健食品中超氧化物歧化 酶（酶（SOD）活性的测定）活性的测定n n2 2、在、在2525左右，于左右，于10ml10ml比色管中依次加入比色管中依次加入A A液液2.35ml2.35ml，蒸，蒸馏水馏水2.00ml2.00ml，B B液液0.15ml0.15ml。加入。加入B B液立即混合并倾入比色皿，液立即混合并倾入比色皿，分别测定在分别测定在325nm325nm波长条件下初始时和波长条件下初始时和1Min1Min后吸光度值，后吸光度值，二者之差为邻苯三酚自氧化速率二者之差为邻苯三酚自氧化速率A325A325（min-1min-1）为）为0.0600.060。n n3 3、在、在2525左右，于左右，于10ml10ml比色管中依次加入比色管中依次加入20.0ul20.0ul样液或酶样液或酶液，液，A A液液2.35ml2.35ml，蒸馏水，蒸馏水2.00ml2.00ml，B B液液0.15ml0.15ml。加入。加入B B液立即液立即混合并倾入比色皿，分别测定在混合并倾入比色皿，分别测定在325nm325nm波长条件下初始时波长条件下初始时和和1 1分钟后吸光度值，二者之差为样液或酶液抑制邻苯三分钟后吸光度值，二者之差为样液或酶液抑制邻苯三酚自氧化速率酚自氧化速率A325A325（min-1min-1）。加入样液或酶液的量使）。加入样液或酶液的量使抑制邻苯三酚自氧化速率为抑制邻苯三酚自氧化速率为1/21/2A325A325（min-1min-1），即），即0.0300.030。实验二十六实验二十六 保健食品中超氧化物歧化保健食品中超氧化物歧化 酶（酶（SOD）活性的测定）活性的测定n n五、计算结果五、计算结果 n n式中：式中：n nVV加入样液或酶液的体积，加入样液或酶液的体积，ml ml n nA325A325邻苯三酚自氧化速率邻苯三酚自氧化速率n nA325A325样液或酶液抑制邻苯三酚自氧化速率样液或酶液抑制邻苯三酚自氧化速率n nDD样液或酶液的稀释倍数样液或酶液的稀释倍数 n nV1V1样液总体积，样液总体积，ml ml n n4.54.5反应液总体积，反应液总体积，ml ml n nmm样液的质量，样液的质量，ml ml n n三聚氰胺三聚氰胺HPLC-UVHPLC-UV检测方法检测方法 n n三聚氰胺是强极性化合物，在传统的反相三聚氰胺是强极性化合物，在传统的反相C18C18柱上保留很差，需要用离子对试柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局（FDAFDA）的三聚氰胺检测方法和中国农业部公布的三聚氰胺检测方法，采用）的三聚氰胺检测方法和中国农业部公布的三聚氰胺检测方法，采用艾杰尔艾杰尔( (AgelaAgela) ASB) ASB系列亲水色谱柱，可以得到良好的分离效果，分析色谱图系列亲水色谱柱，可以得到良好的分离效果，分析色谱图如下：如下： n n图图2 2 VenusilVenusil ASB ASB 色谱柱分离三聚氰胺的谱图色谱柱分离三聚氰胺的谱图 n n(a) (a) 色谱柱：色谱柱：VenusilVenusil ASB C8 4.6250mm ASB C8 4.6250mm；标准：；标准：FDAFDA方法；流动相：缓冲液：方法；流动相：缓冲液：乙腈乙腈=85=85：1515；缓冲液：；缓冲液：10mM10mM柠檬酸，柠檬酸，10mM10mM辛烷磺酸钠，调辛烷磺酸钠，调pHpH为为3.03.0；流速：；流速：1.0mL/min1.0mL/min；柱温：；柱温：40 40 oCoC；波长：；波长：240nm240nm(b) (b) 色谱柱：色谱柱：VenusilVenusil ASB-C18 4.6250mm ASB-C18 4.6250mm；标准：中国农业部颁标准方法；缓；标准：中国农业部颁标准方法；缓冲液：冲液：10mM10mM柠檬酸柠檬酸, 10mM, 10mM庚烷磺酸钠；庚烷磺酸钠； 流动相：缓冲溶液流动相：缓冲溶液: :乙腈乙腈=85:15=85:15；流；流速：速：1.0mL/min;1.0mL/min;柱温：柱温：4040；波长：；波长：240nm240nm空白加水平（空白加水平（mg/Lmg/L） 回收率回收率0.01 116%0.01 116%0.1 108%0.1 108%0.5 92%0.5 92%2 96% 2 96% n n由上表由上表1 1可以看出：用可以看出：用PCXPCX柱净化样品，可以得到满意的回收率，此方法处理柱净化样品，可以得到满意的回收率，此方法处理样品，比样品，比FDAFDA公布的前处理方法更加准确、可靠。公布的前处理方法更加准确、可靠。