牛津杯法和打孔法抑菌试验 u扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法。扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法。 u由于扩散法操作简单，成本低，已经被大多数由于扩散法操作简单，成本低，已经被大多数实验室和基层单位所采用实验室和基层单位所采用稀稀释法包括法包括试管稀管稀释法和微量稀法和微量稀释法，通法，通过测试细菌在含菌在含不同不同浓度度药物培养基内的生物培养基内的生长情况，判断其最低抑菌情况，判断其最低抑菌浓度度（MIC）。）。扩散法散法 一、实验原理u将培养基平板置培养箱中培养，一方面将培养基平板置培养箱中培养，一方面试验菌（指菌（指示菌）开始生示菌）开始生长繁殖；另一方面抗生素呈球面繁殖；另一方面抗生素呈球面扩散，散，形成形成递减的梯度减的梯度浓度，离杯越近，抗生素度，离杯越近，抗生素浓度越大，度越大，离杯越离杯越远抗生素抗生素浓度越小。度越小。u在牛津杯周在牛津杯周围抑菌抑菌浓度范度范围内的内的细菌的生菌的生长被抑制，被抑制，形成透明的抑菌圈。形成透明的抑菌圈。u抑菌圈的大小反映抑菌圈的大小反映测试菌菌对测定定药物的敏感程度物的敏感程度（药敏敏实验）或）或药物物对指示指示细菌的抑菌程度（抑菌菌的抑菌程度（抑菌试验）。）。一、实验原理u抗生素抗生素浓度越高，抑菌圈越大。度越高，抑菌圈越大。u在抑菌圈的在抑菌圈的边缘处，琼脂培养基中所含抑菌物脂培养基中所含抑菌物质的的浓度即度即为该菌菌悬液中液中对该种指示菌的最低抑菌种指示菌的最低抑菌浓度（度（MIC） 。u抑菌圈直径与抑菌圈直径与药物物对测试菌的最低抑菌菌的最低抑菌浓度度 呈呈负相关，即抑相关，即抑菌圈愈大，菌圈愈大，MIC愈小。愈小。二、实验材料培养基：培养基： 牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨固体培养基固体培养基菌种：菌种： 大大肠杆菌（杆菌（E.coli) 金黄色葡萄球菌（金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) 枯草芽枯草芽孢杆菌（杆菌（Bacillus subtilis)药品：阿莫西林、黄芪多糖、品：阿莫西林、黄芪多糖、 其他：牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、移其他：牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、移液液枪、 1mL、200uL 枪头、 恒温培养箱、恒温培养箱、 超超净工作台、工作台、接种接种环“牛津杯”是放被测抗生素的不锈钢小管，小管内径为6mm，外径为8mm，高10mm的圆筒形管子，管子的重量尽可能相等。牛津杯牛津杯三、实验操作1. 倒平板倒平板：将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化，倒在培养皿内，每皿约20ml，凝固。2. 标记：菌种、牛津杯摆放位置、药物及其浓度3. 制制备菌菌悬液液：用生理盐水洗下试管内的菌苔并稀释。4. 菌液涂布菌液涂布：吸取1mL 菌液入平板表面，用涂布器涂布将菌液涂布均匀5. 摆放牛津杯放牛津杯：在培养基表面垂直摆放牛津杯，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙。6.加入待加入待检药液液：在杯中加入不同稀释度的药液或待检样品。7. 孵育孵育：加满后在37 培养1618 h。8. 结果果报告：告：用毫米尺量取抑菌圈直径，参考表的用毫米尺量取抑菌圈直径，参考表的标准判准判读结果，按敏感（果，按敏感（S）、中介（）、中介（I）、耐）、耐药（R）报注意事项在超净工作台中或酒精灯旁操作平板倒好，一定要平牛津杯立直，才能保证杯内抑菌物质均匀的向四周扩散牛津杯均匀摆放于培养基上，位置安排适中，防止出现抑制圈重叠，可在平皿中央摆一个，外周等距离摆56个。思考题青霉素、头孢菌素类药物的抗菌机制如何？药敏试验抗菌药物敏感性试验，简称药敏试验，是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验，测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制作用，以指导选择治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁，有助于经验性治疗选药