会计学1X实验动物质量实验动物质量(zhling)监测监测第一页，共69页。2024/8/212024/8/212 2实验动物质量监测实验动物质量监测(jin(jinc)c)的意义的意义生物学实验研究的四个基本(jbn)条件Animal，Equipment，Information，Reagent，简称AEIR四要素这4个要素在整个实验研究中具有同等重要的地位，不能忽略或偏废。事实上，实验动物质量往往成为制约性要素，影响整个实验的质量和水平实验动物质量监测是实验动物科学的重要内容，是确保实验动物质量的必要手段。第1页/共68页第二页，共69页。2024/8/212024/8/213 31 1、实验工作人员的健康、实验工作人员的健康(jinkng)(jinkng)和和生命的保证生命的保证n n常见常见(chn jin)(chn jin)的的人畜共患病：流行性人畜共患病：流行性出血热、狂犬病、猴出血热、狂犬病、猴B B病毒、淋巴细胞脉络病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、利什丛脑膜炎病毒、利什曼原虫等曼原虫等第2页/共68页第三页，共69页。2024/8/212024/8/214 42 2、动物、动物(dngw)(dngw)生产和繁殖的保证生产和繁殖的保证n n动物一旦染上传染动物一旦染上传染病，则种群难以净病，则种群难以净化化(jnghu)(jnghu)，一，一些烈性传染病如鼠些烈性传染病如鼠痘、兔病毒性出血痘、兔病毒性出血症等可致动物全军症等可致动物全军覆没，造成巨大经覆没，造成巨大经济损失。济损失。第3页/共68页第四页，共69页。2024/8/212024/8/215 53 3、实验结果、实验结果(ji gu)(ji gu)准确性、规律准确性、规律性、重复性的保证性、重复性的保证第4页/共68页第五页，共69页。2024/8/212024/8/216 6实验动物质量监测主要包括(boku)以下几个方面：遗传质量微生物与寄生虫质量饲料质量环境质量监测。第5页/共68页第六页，共69页。2024/8/212024/8/217 7第一节第一节 遗传质量遗传质量(zhling)(zhling)监监测测n n实验动物的遗传背景与反应特性，是影响实验结果的重要因素。n n不同遗传背景与反应特性的实验动物，对同一刺激有时可引起不同质和量的反应。n n为了保存实验动物品种品系特性。使实验动物使用者在动物实验中能得到正确的、可重复的科学数据，实验动物生产者在严格遵守品系繁育技术路线的同时，还必须(bx)努力做好实验动物遗传质量的严格监测，以防止实验动物遗传上的污染和变异。第6页/共68页第七页，共69页。2024/8/212024/8/218 8如：BALB/c对放射线比其他品系更为敏感。C57BL/6肿瘤发生率低，A系高。BALB/c和C3H小鼠对鼠伤寒沙门氏菌的敏感性存在显著(xinzh)差异SHR为自发性高血压大鼠，心血管疾病发生率高第7页/共68页第八页，共69页。2024/8/212024/8/219 9一、群体管一、群体管理理n n管理上人为的粗心最易引起遗传管理上人为的粗心最易引起遗传(ychun)(ychun)上的混上的混杂，所以对育种群进行恰当的管理是保证遗传杂，所以对育种群进行恰当的管理是保证遗传(ychun)(ychun)质量的最有效方法。质量的最有效方法。n n每一个实验动物育种机构都应当认真执行良好的每一个实验动物育种机构都应当认真执行良好的育种制度，完善地保持育种记录，基础群应有系育种制度，完善地保持育种记录，基础群应有系谱记录。要做到以上要求，最重要的因素就是要谱记录。要做到以上要求，最重要的因素就是要有训练有素、经验丰富的技术人员。有训练有素、经验丰富的技术人员。第8页/共68页第九页，共69页。2024/8/212024/8/211010二、免疫学标记二、免疫学标记(bioj)(bioj)监测监测（一）皮肤移植法 这是目前最常用和最灵敏的检测亚系内或亚系间组织相容性基因差异的方法。在小鼠和大鼠中普遍采用的是尾部或背部皮肤移植法。皮肤移植法灵敏度高。易掌握，经济。不需昂贵设备，易对植皮成活情况进行观察和判断。能有效地测出新发生的、造成亚系变异的遗传混杂(hnz)和突变。第9页/共68页第十页，共69页。2024/8/212024/8/211111（二）混合淋巴细胞反应 混合淋巴细胞反应的原理为：异源动物或遗传上有差异个体的淋巴细胞混合培养一定时间后，这些细胞会增殖，甚至进一步裂解。此反应结果可在79天获得，定期地从群体中抽 取 足 够 量 的 动 物 进 行(jnxng)监测能够维护实验动物的品质。第10页/共68页第十一页，共69页。2024/8/212024/8/211212（三）淋巴组织移植 用供体的均质淋巴器官，如骨髓、脾、淋巴结、胸腺或胚胎肝脏制备出单细胞悬液。然后将适量活细胞通过静脉或腹腔注射(zhsh)到受体动物体内，组织相容性由受体中存活者及脾增大者来确定，也可以用放射学方法。根据移植细胞的存活数测定。第11页/共68页第十二页，共69页。2024/8/212024/8/211313三、生化三、生化(shn(shnhu)hu)标记监测标记监测 通过多种形式的电泳和电聚集。可检定生化标记即同工酶或蛋白质，常用的电泳介质有乙酸纤维素膜、淀粉凝胶、聚丙烯酰胺凝胶。每一种标记系统(xtng)做特异性染色，最后将得到的带型与公布的生化遗传图式进行比较。如中华人民共和国国家标准GB；T14923-2001公布9种常用近交系大鼠生化位点标记基因(表5-2)。第12页/共68页第十三页，共69页。2024/8/212024/8/211414表表表表5-2 5-2 5-2 5-2 常用近交系大鼠生化常用近交系大鼠生化常用近交系大鼠生化常用近交系大鼠生化(shn hu)(shn hu)(shn hu)(shn hu)位位位位点标记基因点标记基因点标记基因点标记基因StrainStrainAkp1Akp1 Cs2Cs2Es1Es1Es3Es3 Es4Es4 Es6Es6 Es8Es8 Es9Es9F344/NF344/Na aa aa aa ab ba ab ba aLOU/CLOU/Ca aa aa aa ab bb bb ba aSHRSHRa ab ba ab ba aa ab ba aWKYWKYb bb ba ad db ba aa ac cLEW/MLEW/Ma aa aa ad db ba ab bc cACIACIb ba ab ba ab bb bb ba a第13页/共68页第十四页，共69页。2024/8/212024/8/211515四、骨骼形态四、骨骼形态(xngti)(xngti)特征监测特征监测n n常常采采用用“下下颌颌骨骨分分析析法法”来来鉴鉴别别和和检检测测(jin (jin c)c)大小鼠的亚系变异。大小鼠的亚系变异。n n将将年年龄龄、性性别别、体体重重相相当当的的大大鼠鼠或或小小鼠鼠处处死死后后，分分辨辨右右下下颌颌骨骨，加加以以标标记记，在在直直角角坐坐标标系系上上测测量出多个形态特征参考点距离。量出多个形态特征参考点距离。n n将将所所有有测测量量的的平平均均数数作作统统计计分分析析，利利用用判判别别函函数数确确定定下下颌颌骨骨形形状状。如如果果测测量量值值集集中中，则则表表明明被测亚系间无显著的遗传变异。被测亚系间无显著的遗传变异。第14页/共68页第十五页，共69页。2024/8/212024/8/211616五、染色体带型五、染色体带型监测监测(jinc)(jinc) 可可以以利利用用染染色色体体分分带带技技术术，鉴鉴别别C C带带和和Q Q带带作作为为染染色色体体标标记记，用用来来区区分分大大、小小鼠鼠的的近近交交系系，在在多多数数大大、小小鼠鼠的的近近交交系系中中，所所有有中中期期染染色色体体都都存存在在C C带带材材料料，同同源源染染色色体体的的C C带带区区域域大大小小(dxio)(dxio)相相同同；不不同同的的近近交交系系，C C带带材材料料大大小小(dxio)(dxio)不不同同，是是品品系系特特异异的的，是是一一种种很很有有价价值值的的检检测测亚亚系系变变异异和和混混杂杂来来源源的方法。的方法。第15页/共68页第十六页，共69页。2024/8/212024/8/211717六、现代六、现代(xindi)(xindi)分分子生物学技术子生物学技术 传统的遗传监测方法来源于过去研究者对哺乳动物进行遗传分析时采用的研究手段。随着分子生物学技术的发展，分子生物学技术有可能取代传统的遗传监测方法，其优点是多态性高，位点丰富，实验技术成熟，直接涉及生物的遗传基础，DNA样品(yngpn)容易保存和运输等等。第16页/共68页第十七页，共69页。2024/8/212024/8/211818 1 1 限限 制制 性性 片片 断断 长长 度度 多多 态态(RFLP)(RFLP)技术技术 当当动动物物基基因因组组DNADNA被被限限制制性性内内切切酶酶消消化化时时，酶酶能能够够识识别别双双链链DNADNA链链上上的的特特定定核核苷苷酸酸序序列列，并并在在每每条条DNADNA链链上上切切割割(qig)(qig)产产生生一一个个切切口口，使使DNADNA裂裂解解为为片片断断。这这些些片片断断的的长长度度在在动动物物群群体体中中存存在在变变异异，造造成成多多态态现现象象。通通过过DNADNA电电泳泳和和DNADNA探探针针分分子子杂杂交交技技术术，即即可可观观察察到到不不同同带型。带型。第17页/共68页第十八页，共69页。2024/8/212024/8/211919 例如：位于小鼠第2号染色体补体 -5（ complement-5） 位 点(He)的pC5探针，当用Hind消化小鼠DNA时，C3H品系将产生一条的带型，而AKP品系将产生和两条带型。从而可以在He位点上区别这两个品系。目前(mqin)所报道的RFLP位点已多达1098个，给遗传学研究带来许多便利条件。第18页/共68页第十九页，共69页。2024/8/212024/8/212020 2 2简简单单序序列列长长度度多多态态(SSLP)(SSLP)技技术术 简简单单序序列列长长度度多多态态位位点点是是动动物物基基因因内内广广泛泛存存在在的的由由l l4 4个个核核苷苷酸酸组组成成(z (z chn)chn)的的成成串串的的重重 复复 序序 列列 ， 又又 称称 为为 微微 卫卫 星星(micro (micro satellite)satellite)。估估计计这这样样的的DNADNA结结构构在在哺哺乳乳动动物物基基因因组组内内的的数数目目多多达达5 5万万1010万万个个。在在每每个个特特定定的的位位点点上上，重重复复序序列列的的长长度度在在不不同同品品系系中中存存在在着着差差异异。采采用用夹夹在在这这些些序序列列两两端端的的引引物物，通通过过聚聚合合酶酶链链式式反反应应(PCR)(PCR)和和电电泳泳，就就能能观观察察到到这这些些位位点点的的差差异，从而区分不同的品系。异，从而区分不同的品系。第19页/共68页第二十页，共69页。2024/8/212024/8/212121 例如：小鼠第16条染色体的D16Mit4位点，其PCR产物的大小（bp）在常用近交系中分别如 下 ： C57BL/6-132， DBA/2-123， A/J-147， C3H-123，BALB/c-149， AKR-126， CBA-132。SSLP测试技术比RFLP技术简便，多态性高，需要的DNA样品较少，引物容易(rngy)获得，推广应用前景可观。第20页/共68页第二十一页，共69页。2024/8/212024/8/212222 3 3DNADNA指指纹纹(finger (finger printing)printing)技术技术 上上述述两两种种DNADNA技技术术是是针针对对单单个个DNADNA位位点点进进行行的的测测试试。DNADNA指指纹纹技技术术一一次次可可同同时时测测试试多多个个位位点点，所所以以有有一一定定的的优优势势。DNADNA指指纹纹技技术术经经过过电电泳泳后后可可获获得得十十几几到到几几十十条条带带，而而这这些些带带型型在在个个体体(gt)(gt)之之间间或或品品系系之之间间有有差差异异，如如同同人人类类的的指指纹纹在在每每个个人人都都不不同同一一样样，因因此此而而得得名名。通通常常有有两两种种方方法法获获得得DNADNA指指纹纹图图。一一是是用用限限制制性性内内切切酶酶和和小小卫卫星星探探针针技技术术获获得得的的DNADNA指指纹纹。二二是是用用较较短短的的随随机机扩扩增增引引物物或或小小卫卫星星引引物，通过物，通过PCRPCR而获得的而获得的DNADNA指纹。指纹。第21页/共68页第二十二页，共69页。2024/8/212024/8/212323 DNA指纹图谱有时在亚系或亚群之间有区别，所以对亚系的监测十分有用。但是DNA指纹的结果因为电泳带太多而不好辨认和比较。因此，也影响其在遗传监测和其他研究中的应用(yngyng)。目前所做的DNA指纹比上述两种DNA技术少，但随着研究的深入和方法的改进，将来一定会有所突破。第22页/共68页第二十三页，共69页。2024/8/212024/8/212424 4随机扩增多态（RAPD）技术 RAPD技 术 是 20世 纪 90年 代(nindi)发展起来的一种简便、快捷的检测基因组DNA多态性的遗传标记技术。该项技术首先将动物目的基因组DNA提纯、酶切，用含10个碱基的随机引物，对DNA进行PCR扩增，经电泳，便可在多个位点上得到扩增产物。各种DNA多态分析方法，第23页/共68页第二十四页，共69页。2024/8/212024/8/212525 如：DNA指纹、限制性片段长度多态(RFLP)等，虽然可直接检测基因组的遗传变异，但都不同程度地存在操作复杂、需要特异性操作、需要事先知道动物基因组DNA序列等不足。而RAPD技术，由于引物可任意改变，有可能找到任何一个个体特异的RAPD标记，从而(cng r)为实验动物的遗传检测和分析提供一个十分有效的工具。第24页/共68页第二十五页，共69页。2024/8/212024/8/212626七、遗传性状监测结果七、遗传性状监测结果(ji gu)(ji gu)的分析的分析 当被检查的遗传性状与每个品系的遗传概貌图一致时，同时(tngsh)遗传管理资料清晰、可信，可以认为有关品系的繁育生产正在正确地进行，该品系的动物遗传质量合格；若与遗传概貌图不一致时，可以考虑以下原因：第25页/共68页第二十六页，共69页。2024/8/212024/8/212727 1 1 1 1遗传污染遗传污染遗传污染遗传污染(genetic contamination)(genetic contamination)(genetic contamination)(genetic contamination) 这这这这是是是是最最最最常常常常见见见见的的的的遗遗遗遗传传传传变变变变异异异异，往往往往往往往往是是是是由由由由于于于于遗遗遗遗传传传传学学学学管管管管理理理理不不不不善善善善所所所所致致致致。这这这这种种种种情情情情况况况况如如如如发发发发现现现现(fxin)(fxin)(fxin)(fxin)得得得得早早早早，在在在在被被被被检检检检查查查查的的的的性性性性状状状状中中中中至至至至少少少少可可可可以以以以观观观观察察察察到到到到一一一一个个个个以以以以上上上上基基基基因因因因标标标标记记记记发发发发生生生生改改改改变变变变，出出出出现现现现杂杂杂杂合合合合型型型型，或或或或与与与与遗遗遗遗传传传传概概概概貌貌貌貌不不不不符符符符的的的的其其其其他他他他表表表表型型型型；如如如如果果果果发发发发现现现现(fxin)(fxin)(fxin)(fxin)得得得得较较较较迟迟迟迟，一一一一些些些些杂杂杂杂合合合合基基基基因因因因可可可可随随随随机机机机地地地地固固固固定定定定为为为为单单单单一一一一的的的的纯纯纯纯合合合合型型型型，但但但但与与与与原原原原品品品品系系系系的的的的遗遗遗遗传传传传概概概概貌貌貌貌不不不不一一一一致致致致。出出出出现现现现上上上上述述述述情情情情况况况况均均均均应应应应淘淘淘淘汰汰汰汰原原原原品品品品系系系系，更更更更换换换换来来来来源源源源清清清清楚楚楚楚、质质质质量量量量合合合合格格格格的的的的动动动动物物物物作作作作为为为为新新新新种种种种，重重重重新新新新进进进进行行行行品品品品系系系系的的的的繁繁繁繁育。育。育。育。第26页/共68页第二十七页，共69页。2024/8/212024/8/212828 2. 2. 遗传漂变遗传漂变(genetic drift)(genetic drift) 遗遗传传漂漂变变是是指指一一个个品品种种或或品品系系动动物物基基因因型型在在饲饲养养的的过过程程中中可可能能发发生生随随机机的的改改变变。这这种种改改变变多多由由于于近近交交系系动动物物部部分分(b (b fen)fen)杂杂合合基基因因尚尚未未纯纯合合时时即即进进行行了了分分系系，造造成成了了亚亚系系和和支支系系的的形形成成。监监测测时时可可以以看看到到一一个个品品系系所所有有的的动动物物在在1 12 2个个基基因因标标记记上上与与原原品品系系的的遗遗传传概概貌貌不不符符，但但表表型型一一致致又又均均为为纯纯合合型型。这这种种情情况况在在经经同同系系异异体体移移植植试试验验排排除除了了遗遗传传污污染染后后需需按按照亚系和支系重新命名。照亚系和支系重新命名。第27页/共68页第二十八页，共69页。2024/8/212024/8/212929 3遗传突变(mutation) 遗传突变在哺乳类动物中的频率为10-5。在分析监测结果时，如果仅看到一只动物单个基因标记出现杂合型，应考虑有否发生遗传突变。为了证实此点，往往需要(xyo)根据动物编号查询该只动物同窝兄妹或双亲的基因标记表型。如遗传突变发生在亲代，则同窝兄妹均应为杂合型或分离产生不同的表型。第28页/共68页第二十九页，共69页。2024/8/212024/8/213030 如果(rgu)在同窝兄妹或双亲中该基因标记的表型与遗传概貌图一致，应考虑被测个体发生了遗传突变。在检查时如同时发现其他基因标记的表型与遗传概貌图不符，无论是杂合型还是纯合型均应考虑发生了遗传污染，应立即淘汰换种。遗传突变如无特殊保留价值，在剔除突变的个体后，整个品系可以继续保存；如有保存价值，可将突变个体单独培育成同源突变近交系。第29页/共68页第三十页，共69页。2024/8/212024/8/213131第二节第二节 微生物学微生物学(wi (wi shn w xu)shn w xu)与寄生虫与寄生虫学监测学监测如何控制微生物和寄生虫，是实验动物标准化的主要(zhyo)内容之一。一般而言，科研中使用的实验动物，其微生物和寄生虫的控制级别越高，其结果就越精确、越可靠。第30页/共68页第三十一页，共69页。2024/8/212024/8/213232一、监测一、监测(jin (jin c)c)意义意义1对实验动物进行微生物、病毒与寄生虫的监控(jin kn)，对保证实验研究的顺利进行和工作人员的身体健康具有十分重要的意义。实验动物被集中饲养，极易导致疾病的爆发与流行。实验动物疾病的爆发，除造成动物死亡外，还会干扰实验的顺利进行，引起生物制品的污染，对人类健康产生危害。第31页/共68页第三十二页，共69页。2024/8/212024/8/2133332对实验动物饲养设施的监测(jin c)，为确保这些设施能否控制微生物污染提供依据。3对引进的实验动物进行检疫，避免病原体入侵原有的动物群。4如动物群发生疾病，为了确证病原，对患病动物进行病原学诊断，积累对疾病的认识，收集菌株和毒株，进一步研究病原，为诊断试剂和疫苗的制备提供菌株和毒株。第32页/共68页第三十三页，共69页。2024/8/212024/8/213434二、监测二、监测(jin c)(jin c)方法方法（一）实验动物病毒学检测(jin c)方法1血清学检测(jin c) 适用于各级各类实验动物的经常性检测(jin c)和疫情普查。常用方法有：酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光试验(IFA)、免疫酶染色试验(IEA)、血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)、病毒中和试验、补体结合试验、琼脂扩散试验。第33页/共68页第三十四页，共69页。2024/8/212024/8/2135352病原学检测适用于动物群中有疾病流行，需要检出病毒或确认病毒存在的情况。检测方法有：病毒分离与鉴定，病毒颗粒、抗原或核酸的检出，潜在病毒的激活，抗体产生试验等。例如：采用HA或HI方法检查患病动物排泄物或组织悬液中的血凝素抗原；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检查病毒基因组；采用核酸分子杂交(zjio)技 术 或 聚 合 酶 链 反 应(PCR)检出组织或排泄物中的病毒核酸。第34页/共68页第三十五页，共69页。2024/8/212024/8/213636（二）实验动物细菌学检测方法最常用的方法是病原菌的分离与培养或进行动物接种。部分病原菌，如：鼠伤寒(shnghn)沙门菌、鼠棒状杆菌、布氏杆菌、沙门菌、气管败血波氏杆菌等，可采取血清学方法，但仍需结合分离培养结果最后做出诊断。对于泰泽菌，由于不能在人工培养基上生长，因此宜采用组织压片、镜检的方法进行检查，并结合病理检查结果最后做出诊断。第35页/共68页第三十六页，共69页。2024/8/212024/8/213737（三）实验动物真菌学检测方法目前主要采用沙氏培养基分离培养。皮肤真菌一般在25培养，深部真菌在37培养。不同的真菌具有(jyu)一定的菌落特点，镜下染色检查可进行种属鉴定，有时，还需借助于生物化学反应结果和免疫学方法进行最后诊断。第36页/共68页第三十七页，共69页。2024/8/212024/8/213838（四）实验动物寄生虫学检测方法 1体外寄生虫 肉眼(ruyn)观察法、透明胶纸粘取法、拔毛取样法、皮屑刮取法、黑背景检查法、解剖镜下通体检查法等，主要检查蚤、虱、螨等节肢动物。 第37页/共68页第三十八页，共69页。2024/8/212024/8/213939 2 2体内寄生虫体内寄生虫 主主要要检检查查蠕蠕虫虫和和原原虫虫，可可用用直直接接涂涂片片法法( (粪粪便便、血血液液、脏脏器器、肠肠内内容容物物) )、饱饱和和盐盐水水漂漂浮浮法法或或沉沉淀淀法法、透透明明胶胶纸纸肛肛门门周周围围粘粘取取法法、组组织织(zzh)(zzh)或或器器官官剖剖面面压压印印法法、病病变变组组织织(zzh)(zzh)切切片片或或压压片片法法、尿尿液液的离心法的离心法( (如查鼠膀胱线虫如查鼠膀胱线虫) )等。等。实实验验动动物物的的微微生生物物、寄寄生生虫虫检检测测具具体体操操作作方方法法详详见见国国家家标标准准实实验验动动物物微微生生物物学学和和寄寄生生虫虫学学的的检检测测 方方 法法 （ 啮啮 齿齿 类类 和和 兔兔 类类 ） （ GB/T14926.1-GB/T14926.1-14926.41-200 114926.41-200 1）。）。第38页/共68页第三十九页，共69页。2024/8/212024/8/214040三、监测三、监测(jin c)(jin c)要要求求1选定监测项目 任何一种实验动物都有许多致病性微生物、寄生虫，结合具体情况选择合适的检测项目，既达到保证动物质量的目的，又可节省人力物力。我国经过十多年来对各地实验动物感染病原微生物、寄生虫情况的调查，结合其他国家的规定和经验，制定了我国啮齿类和兔类微生物学、寄生虫学等级标准(biozhn)，猫、犬、猴等中型实验动物，卫生部医学实验动物管理委员会亦有初步规定。第39页/共68页第四十页，共69页。2024/8/212024/8/2141412采样数量和频度检测结果的准确性，要采取合适的动物数量。采样动物数可根据动物群体的污染程度而有所不同。按照国家标准规定，动物数量超过100只的生产繁殖单元取样如下(rxi)：普通级动物不能少于10只；清洁级动物检测510只；饲养于小隔离罩内的无菌动物和无特定病原体动物随机抽检2只；饲养于生产繁殖单元的抽检510只。第40页/共68页第四十一页，共69页。2024/8/212024/8/214242除了采样的数量，还必须考虑到检测的间隔时间。一般来说，一旦病原体侵入动物群体引起感染，初期分离病原体较容易，抗体的检出率上升。23个月后可因某些个体(gt)抗体水平的降低以及新出生的非感染个体(gt)的增加等原因，抗体检出率下降，据此，检测间隔时间以3个月一次为宜。至少每年检查2次，选在春、秋季疾病多发季节为宜。第41页/共68页第四十二页，共69页。2024/8/212024/8/214343采样时，宜在动物群中不同方位随机采取育成动物，选择至少4个不同的位置采集样品或采用前哨动物放人群内，不时调换位置，饲养一定时间后解剖检查抗体或病原(bngyun)。运输途中保证动物的安全和避免污染。引种的动物则需有检疫隔离期，小鼠、大鼠和豚鼠l7天，兔21天，犬、猫2128天，猴l9周。第42页/共68页第四十三页，共69页。2024/8/212024/8/214444第三节第三节 饲料质量饲料质量(zhling)(zhling)监控监控实验动物作为生物体离不开营养，饲料是实验动物摄人营养素的主要来源。只有良好的营养才能(cinng)使实验动物保持良好的健康状态，而健康的实验动物才能(cinng)确保实验结果的可靠。因此，加强饲料质量标准化管理，是实现实验动物标准化的重要环节。第43页/共68页第四十四页，共69页。2024/8/212024/8/214545一、实验动物一、实验动物一、实验动物一、实验动物(dngw)(dngw)(dngw)(dngw)饲料饲料饲料饲料 生产加工、储存与管理生产加工、储存与管理生产加工、储存与管理生产加工、储存与管理 实验动物饲料是以实验动物饲养标准为依据，经过严密设计、科学配方、精心加工、生产制造而形成的标准化产品。因此，进行实验动物饲料生产必须(bx)了解有关实验动物饲养管理法规条例，全面掌握饲料的生产过程。第44页/共68页第四十五页，共69页。2024/8/212024/8/2146461实验动物配合饲料的生产加工应根据各种实验动物的特性和不同的实验目的，采用不同的饲料加工方法。常用实验动物如大鼠、小鼠、豚鼠及兔等实验动物的饲料应制成具有一定硬度的颗粒饲料较为适合其摄食习性；狗、猫则以膨化饲料为好；而有的实验动物根据实验目的不同，常要求制作糊状、粉状或液体饲料以满足(mnz)研究需要。但是无论其形状如何，在实验动物饲料加工生产过程中都应注意生产规格及其产品标准。第45页/共68页第四十六页，共69页。2024/8/212024/8/2147472实验动物饲料的储存 包括原料储存和成品储存两部分内容(nirng)。 原料储存：应按原料种类、生产厂家、进货日期等分开保管。保管中要注意温度、湿度变化，防止鸟类、鼠类和昆虫的污染。尽量做到先进先出。 成品储存：要定期清扫存储罐，产品变更时彻底清扫存储罐，成品库内严格执行先进先出原则。注意存储罐的温、湿度，防止成品饲料霉变，防止野鼠、昆虫及有毒物质自引污染。分类堆放，标志清楚，严防与原料混贮，保证标准货物出库登记。第46页/共68页第四十七页，共69页。2024/8/212024/8/2148483实验动物的饲料管理 实验动物饲料管理是指从饲料原料选择、生产加工到成品以及(yj)生产过程中的虫害、安全及卫生管理的全过程。第47页/共68页第四十八页，共69页。2024/8/212024/8/214949 二、实验二、实验(shyn)(shyn)动物饲料的动物饲料的消毒消毒 实 验 动 物 的 饲 料 在 收 获(shuhu)、加工、储存及运输过程中都有污染病菌的可能，为确保实验动物质量和动物实验的准确性，我们要通过适当的消毒方法使其达到灭菌的目的。常用饲料消毒方法有干热、湿热、辐照及药物熏蒸等多种，应按饲养动物的不同要求和饲料种类以及所具备的条件来选择。第48页/共68页第四十九页，共69页。2024/8/212024/8/2150501干热灭菌法 将饲料在80100的条件下烘烤。此法设备比较简单，但温度不好掌握(zhngw)，灭菌不够彻底，而且营养损失较大。第49页/共68页第五十页，共69页。2024/8/212024/8/2151512高温高压灭菌法 高温高压灭菌法是指将饲料在121，的高温高压蒸锅内加热(ji r)15min以上，将细菌全部杀死。一 般 11530min、 12l20min、12515min。绝大多数维生素。尤其是维生素C、维生素B1、维生素B6和维生素A等，过热会受到破坏，而纯化学性饲料比天然饲料更不稳定。第50页/共68页第五十一页，共69页。2024/8/212024/8/2152523药物熏蒸灭菌法 熏蒸是利用化学药品的气雾剂对饲料进行消毒。如用环氧乙烷进行灭菌，熏蒸后必须在不低于20的自然空气中将残余气体挥发。实验证明，即使这样处理，在饲料中仍然(rngrn)残存一些对动物代谢有损害的化合物。第51页/共68页第五十二页，共69页。2024/8/212024/8/2153534. 放射线照射灭菌法 通常在对谷物类饲料消毒时，采用5Mrad剂量的60Co照射对营养成分损失甚小。射线对维生素B1和维生素B6仅有微小破坏，通常采用的剂量为35Mrad。此法在灭菌效果和对营养素的破坏程度方面(fngmin)都优于其他方法。但受条件所限，不便推广。第52页/共68页第五十三页，共69页。2024/8/212024/8/215454三、实验动物三、实验动物(dngw)(dngw)饲料的检测饲料的检测 饲料检测是实验动物饲料质量管理必不可少(b b k sho)的重要手段。饲料质量变化不仅直接影响着实验动物质量，而且也间接影响实验结果的可靠性。我国实验动物饲料质量应符合国家标准GBl4924-2001规定的根据实验动物的不同种类、性别、年龄、体重和生理阶段制定的饲养标准。第53页/共68页第五十四页，共69页。2024/8/212024/8/2155551感观性状的检验 用手、眼、鼻等器官直接通过色泽、气味、手感、杂质情况等项指标对饲料的新鲜程度、均匀度、含水量等进行(jnxng)直观判断。2营养成分的测定 按照国家实验动物饲料营养标准所规定的养分含量及分析方法，对产品的营养成分和混合均匀度等进行(jnxng)检测。52第54页/共68页第五十五页，共69页。2024/8/212024/8/215656第四节第四节 环境质量环境质量(hun (hun jn zh lin)jn zh lin)监测监测 严格监控实验动物生产环境和动物实验环境，可保证实验动物健康和质量标准化，可保障实验研究获得正确的结果。合乎标准的环境，不仅(bjn)为实验动物及动物实验工作者提供适宜的条件，维持实验动物等级标准，而且是保障工作人员身体健康，使他们不受危害因素伤害的需要。第55页/共68页第五十六页，共69页。2024/8/212024/8/215757一、噪声一、噪声(zoshng)(zoshng)测测定定1仪器 普通噪声计、积分型噪声计。2测定方法 分静态和动态：静态为在动物饲养前，所有系统正常运转时检测；动态为饲养动物后，在正常饲养条件下检测。 通常(tngchng)在洁净室无人、无动物，空调净化系统正常运行的情况下测定洁净室的噪声，测定点选择在被测环境的中央，如房间大于15m2，可选择两个或两个以上的测定点，距地面1m。第56页/共68页第五十七页，共69页。2024/8/212024/8/215858二、照度二、照度(zho (zho d)d)测定测定1仪器 便携式照度计。2测定方法 测定者需穿着黑色衣服，避免反射光影响测定结果。测定前开启(kiq)所有的照明设备，测定时以距墙壁1m以上、离地面85cm处的平面照明度为准。每隔选择一个测量点，每点测3次，取平均值，单位为lx。第57页/共68页第五十八页，共69页。2024/8/212024/8/215959三、空气落下三、空气落下(lu xi)(lu xi)细菌测定细菌测定 空气落下菌数测定应在实验动物设施经消毒灭菌，空调净化系统正常运行48h后进行。1试剂 直径9cm的血液琼脂(qingzh)培养基。2测定方法 在无动物的状态下，每510m2放置一个直径9cm的血液琼脂(qingzh)培养基，敞开皿盖暴露30min，盖上皿盖，置于37培养4872h后，计算培养皿内菌落数。第58页/共68页第五十九页，共69页。2024/8/212024/8/216060四、空气四、空气(kngq)(kngq)洁净洁净度测定度测定在动物饲养前，空调净化系统运行48h后进行。1、检测仪器 尘埃(chn i)粒子计数器。2、方法 乱流洁净室面积不大于50m2的布置5个测点，每增加2050m2应增加35个测点。每个测定点连续测定3次。测定时100级净化室的采样量每分钟不少于1L，1000级以上的净化室的采样量每分钟不小于。层流洁净室取各测定点最大值；乱流洁净室取洁净室各测点的平均值作为实测结果。第59页/共68页第六十页，共69页。2024/8/212024/8/216161五、相邻洁净五、相邻洁净(jijng)(jijng)区静压区静压差测定差测定1仪器 微压计，最小刻度为。2测定方法 测定顺序一般由低压到高压，测定前将需要测定压差的两个区域封闭，关闭(gunb)所有的门。测定时将测定用的胶管穿过墙上或门上预留的孔洞进入室内(穿胶管的孔洞必须密封，设置在离墙面不远处垂直气流的方向，且周围无阻挡物、气流干扰小的区域)。s1第60页/共68页第六十一页，共69页。2024/8/212024/8/216262六、气流方向和速度六、气流方向和速度(sd)(sd)测定测定1仪器 发烟管、热球式电风速仪或数字显示式风速仪。2测定方法 测定气流方向一般用烟雾法，也可用纸条测定法。测定气流速度，将风速仪放置在有代表性的饲养实验动物笼具的位置进行(jnxng)测定。测量点设置可参照温度测试点设置。测量时风速计传感器与风向垂直，指针做周期性运动，要取其平均值。第61页/共68页第六十二页，共69页。2024/8/212024/8/216363七、换气七、换气(hun q)(hun q)次数测定次数测定1仪器 热球式电风速仪或数字显示式风速仪。2测定方法 测量换气次数，首先必须计算出换气量。换气量由送风管道风速求得。在一个以上进气口的房间(fngjin)，要将各进气口合并计算。第62页/共68页第六十三页，共69页。2024/8/212024/8/216464八、温度八、温度(wnd)(wnd)、湿度、湿度测定测定温、湿度是日常管理中最基本也是最重要的环境检测指标之一，温、湿 度 的 检 测 除 了 可 观 察 连 接(linji)到空调设备上的自动温、湿度控制仪，还应在每个房间设置温度、湿度计。常用的温度计有棒状温度计、最高最低温度计、热敏电阻温度计、数字型温度计等。常用湿度计有干湿球温度计、通风干湿机温度计、氯化锂露点计及自动记录温、湿度计等。第63页/共68页第六十四页，共69页。2024/8/212024/8/2165651仪器 棒状温度计、热敏温度计、简易干湿球温度计和自动记录温度计等。2测定方法 实验动物设施建成使用之前，应对动物室内环境进行检测。在测定温度、湿度时，空调通风系统应连续运转，并做多点检测，如在外界空气最冷和最热时检测最佳。测量点应具有代表性，在距地面(dmin)10，50，150，200cm高度水平设定间隔，1m的很多格状测点，依次测量，并将结果制成不同等高的温度度数分布图。第64页/共68页第六十五页，共69页。2024/8/212024/8/216666 一般动物室常采用“田”字形、9点模式，即在入口、中央、内侧相当于动物饲养高度的上、中、下三层设置三个格测定(50，100，150cm)。以洁净室面积小于50m2为例，测定前空调系统连续运转24h以上(yshng)，测定时空调系统处于运转状态。第65页/共68页第六十六页，共69页。2024/8/212024/8/216767九、氨气的测定九、氨气的测定(cdng)(cdng) 在设施正常运行，状态，动物(dngw)饲养密度符合设计标准，垫料更换时符合时限要求下进行。1便携式氨气检测仪 第66页/共68页第六十七页，共69页。2024/8/212024/8/2168682 2 2 2、纳氏试剂、纳氏试剂、纳氏试剂、纳氏试剂(shj)(shj)(shj)(shj)比色法测定氨浓度：比色法测定氨浓度：比色法测定氨浓度：比色法测定氨浓度：n n原理n n 碘化汞和碘化钾的碱性(jin xn)溶液与氨反应生成淡红棕色胶态化合物，其色度与氨氮含量成正比，通常可在波长410425nm范围内测其吸光度，计算其含量。第67页/共68页第六十八页，共69页。内容(nirng)总结会计学。这种改变(gibin)多由于近交系动物部分杂合基因尚未纯合时即进行了分系，造成了亚系和支系的形成。如有保存价值，可将突变个体单独培育成同源突变近交系。2对实验动物饲养设施的监测，为确保这些设施能否控制微生物污染提供依据。包括原料储存和成品储存两部分内容。乱流洁净室取洁净室各测点的平均值作为实测结果。发烟管、热球式电风速仪或数字显示式风速仪。测量点设置可参照温度测试点设置。热球式电风速仪或数字显示式风速仪。原理第六十九页，共69页。