层析填料选择 Media Selection 19601960 19701970 19801980 19901990 20002000 SephadexSephadex SepharoseSepharose Sepharose CLSepharose CL Sepharose FF Sepharose FF SuperoseSuperose Sepharose HPSepharose HP SuperdexSuperdex Sepharose Big beadsSepharose Big beads StreamlineStreamline Sepharose XLSepharose XL Mono beadsMono beads SOURCESOURCE SephacrylSephacryl 新一代填料是新一代填料是什么呢？什么呢？ Capto sepharoseCapto sepharose 填料的基本特点 五大类层析技术 凝胶过滤 (GF) 离子交换 (IEX) 亲和层析 (AC) 疏水层析 (HIC) 反相层析 (RPC) 基架 - 颗粒越细、大小越均匀，分辨率越高，但反压亦较高 (SOURCE基架例外) 物理稳定性 - 新一代介质较坚固，能承受高流速，同时保持柱床体积和结构稳定，省却每次重新装柱，提高重复性 化学稳定性 - 新一代介质能承受极端pH，高盐度，促溶剂和有机溶剂，利于开发分离条件和在位清洗(CIP)，大大延长介质寿命并提高重复性 3 / GE / 如何选择层析填料 按照层析技术原理分类选择填料 层析工艺不同阶段选择填料的一般规律 根据目的物的性质选择填料 根据规模选择合适的层析预装柱 层析空柱选择 4 / GE / 如何选择层析填料 按照层析技术原理分类选择填料 层析工艺不同阶段选择填料的一般规律 根据目的物的性质选择填料 根据规模选择合适的层析预装柱 层析空柱选择 5 / GE / 按照层析技术原理分类选择填料 凝胶过滤填料选择 离子交换填料选择 亲和填料选择 疏水填料选择 反相填料选择 凝胶过滤填料选择 离子交换填料选择 亲和填料选择 疏水填料选择 反相填料选择 6 / GE / 凝胶过滤（GF）填料选择 原理：是根据分子量大小分 离物质的一种层析方法。 精度：分子量差别一倍以上 重点：选择分离范围选择分离范围 类型：类型：Sephadex、Superdex、Sephacryl、 Sepharose、Superose Gel structure 7 / GE / Sephadex 系列填料 快速group separation首选 Sephadex 是由葡聚糖葡聚糖 交联环氧氯丙烷环氧氯丙烷形成 的多孔结构 Sephadex: 羟基基团，羟基基团， 呈弱酸性呈弱酸性 Sephadex : Sephadex : SeSeparation paration PhaPharmacia rmacia DexDextran tran 5050周年周年19591959- -20092009 8 / GE / Sephadex 系列填料 快速group separation首选 第一代凝胶过滤填料： G-10 分离范围： 700 G-25 分离范围：10005000 G-50 分离范围：100030000 Sephadex LH-20分离范围:5000 9 / GE / Superdex 系列填料 最受欢迎的凝胶过滤填料 特点：特点：结合了Sephadex的高选择性和琼脂糖的高物理稳定性，机械稳定性好,高分辨率高化学稳定性 monomer dimer mAU 0 500 1000 1500 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 ml 型号 分离范围 Superdex peptide 1007000 Superdex 30 prep grad 10000 Superdex 75 300070000 Superdex 200 10K-600K 10 / GE / 1. Superdex Peptide 2. Superdex 75 3. Superdex 200 4. Sephacryl S-100 HR 5. Sephacryl S-200 HR 6. Sephacryl S-300 HR 7. Sephacryl S-400 HR Kav 1.0- 0.8- 0.6- 0.4- 0.2- 1000 10,000 100,000 1,000,000 10,000,000 1 2 3 4 5 6 7 Sephacryl S系列填料 经济的高分辨率填料 Sephacryl S系列有6种不同分离范围（1000-108），提供广阔的选择性，甚至可分DNA质粒和病毒，经济、高效，易于自行装柱，是Superdex外作下游纯化的理想介质 11 / GE / Sepharose 系列填料 快速大分子凝胶过滤首选 Sepharose的结构： -D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖交替结合所形成的线性多聚糖。 在形成过程中由单独的多糖链先形成双螺旋，然后聚集成胶束，胶束之间形成微孔，其大小取决于胶束的多少，即琼脂糖的浓度。 pH为4-9之间稳定。 琼脂糖凝胶对样品的吸附 作用很小，并且机械强度 和孔穴稳定性都很好。 Sepharose: Sepharose: SeSeparation paration PhaPharmacia rmacia agagroserose 12 / GE / Sepharose 系列填料 快速大分子凝胶过滤首选 Sepharose 2B/4B/6B：分离范围10K-40000K Sepharose CL 2B/4B/6B： Sepharose 6FF：分离范围10KD-4MD Sepharose 4FF：分离范围60KD-20MD 适合分离分子量大小差异大，对分辨率要求不高的样本。如核酸、蛋白多糖等。 Sepharose与2,3-二溴丙醇共价交联得Sepharose CL，适合有机溶剂纯化。主要用于核酸、蛋白多糖分离等。 适用于巨大分子如多糖疫苗、病毒、乙肝表面抗原、DNA质粒纯化。 13 / GE / Superose系列填料 分离范围最宽广的高分辨率凝胶过滤填料 Superose 6分离范围：5k-5000K Superose 12分离范围：1K-300K 14 / GE / 吸附层析填料设计 基架基架 SOOO配基配基 色谱模式色谱模式 选择性选择性 载样量载样量 化学稳定性化学稳定性 机械稳定性机械稳定性 化学稳定性化学稳定性 柱效柱效/ /分辨率分辨率 表面特性表面特性 压力压力/ /流速特性流速特性 15 / GE / 按照层析技术原理分类选择填料 凝胶过滤填料选择 离子交换填料选择 亲和填料选择 疏水填料选择 反相填料选择 16 / GE / 离子交换（IEX）最受欢迎的层析方法 原理原理：根据生物分子的表面电荷性质进行分离纯化， 可以应用在层析的各个阶段。 重点：在于选择合适的分辨率。在于选择合适的分辨率。 17 / GE / 离子交换填料的分类 基本形式： 基架类型： Sepharose 基架 Source 基架 Capto 基袈 Sephadex基架 纤维素基架 R（带电配基）（带电配基） 18 / GE / Sepharose基架离子交换填料 市场主流 Q、SP Sepharose High Performence Q、SP、DEAE、CM、ANX Sepharose Fast Flow Q、SP Sepharose Big Beads 分分 辨辨 率率 小小 大大 高高 低低 Sreamline SP and DEAE DEAE、CM Sepharose CL-6B 颗颗 粒粒 34um 90um 100-300um 19 / GE / 新一代层析介质挑战载量极限！新一代层析介质挑战载量极限！ XL介质拥有琼脂糖骨架配合葡 萄糖长链，大大增加高流速下 的动力载量大大减少柱床体积， 降低放大工艺时的成本。 Q、SP Sepharose XL 超高载量填料超高载量填料 XL A = Macroprep High Q B = Fractogel EMD, TMAE 650C = SuperQ 650 D = Q HyperDE = STREAMLINE Q XLF = Q Sepharose XL 050100150200250ABCDEFmg BSA/ml载量可比一般介质高达10倍！1ml Q Sepharose XL 可载 250mg BSA！ 20 / GE / MacroCap SP 专为较大的生物分子设计的阳离子交换填料 特别适合PEG修饰后的蛋白的纯化 基架基架：交联的烯丙基葡聚糖与氮氮亚甲基丙烯酰胺 颗粒大小：平均50um 动态载量：4mg/ml填料 21 / GE / Source基架离子交换填料 高流速、低反压、高分辨率 化学材质：聚苯乙烯/二乙烯苯 颗粒均匀，硬度大，排阻极限可达107 3um具有极高分辨率，常用于分析具有极高分辨率，常用于分析 10um具有很高分辨率，用于微量制备具有很高分辨率，用于微量制备 30um具有较高分辨率，流速快具有较高分辨率，流速快 使用流速使用流速3001000cm/hr 15um具有较高分辨率，用于精细纯化具有较高分辨率，用于精细纯化 使用流速使用流速30600cm/hr Mono P：专为层析聚焦设计的弱阴离子交换填料 22 / GE / Capto基架系列离子交换填料 新一代快流速高载量填料 改良交联琼脂糖-刚性更强、传质速度更快 线状葡聚糖表面延伸剂-载量提高 颗粒大小：平均90um,75um,40um 配基：Q、S、DEAE、Adhere、MMC、ImPres + SO3O- 基架 表面延伸剂 配基:磺酸乙烷基 + 23 / GE / Capto基架刚性更强 Capto Q and Sepharose 6 Fast Flow in BPG 300, 20 cm bed height 高流速、低反压 高载量 24 / GE / Capto基架刚性更强 更宽的工作范围 MeasuredMeasured flow velocity for Capto Q at 3 bar with 20 cm20 cm bed height in FineLINE 100: 850 cm/h850 cm/h MediumMedium Bed height (cm)Bed height (cm) Flow velocity in a 1 m diameter Flow velocity in a 1 m diameter column (cm/h)column (cm/h) CaptoCapto 2020 700700 Sepharose 6 Fast FlowSepharose 6 Fast Flow 2020 240240 MeasuredMeasured flow velocity for Capto Q at 3 bar with 45 cm45 cm bed height in FineLINE 100: 600 cm/h600 cm/h MediumMedium Bed height (cm)Bed height (cm) Flow velocity in a 1 m diameter Flow velocity in a 1 m diameter column (cm/h)column (cm/h) CaptoCapto 4545 350350 Sepharose 6 Fast FlowSepharose 6 Fast Flow 4545 2525 25 / GE / Capto Impres 中度以及精细纯化的快流速高分辨率填料 Capto Q / SP ImpRes: 颗粒直径40m，高分辨率 良好的压力流速性质 工艺设计方便 较宽的操作窗口易于线性放大 高生产通量 提高生产效率 HiScreen Capto Q ImpRes HiScreen Q HP HiScreen Capto Q HiScreen Q FF 26 / GE / Capto基架系列离子交换填料 -多模式的离子交换填料 HIC/RPCHIC/RPC (Hydrophobicity)(Hydrophobicity) Ion exchangeIon exchange (Charge)(Charge) AffinityAffinity (Biorecognition)(Biorecognition) Q Sepharose Fast FlowQ Sepharose Fast Flow SP Sepharose Fast FlowSP Sepharose Fast Flow EtcEtc Phenyl Sepharose HPPhenyl Sepharose HP SOURCE 15RPCSOURCE 15RPC EtcEtc MabSelectMabSelect Blue SepharoseBlue Sepharose EtcEtc 27 / GE / CaptoTM adhere 多模式新型强阴离子交换填料 + OON+OHOHOHOON+OHOHOHN N- -BenzylBenzyl- -N N- -methylethanolaminemethylethanolamine CaptoCaptoTM High flow agaroseHigh flow agarose Removal of Leached Protein A Dimers and aggregtes Host cell proteins Viruses Nucleic acids . preferably in flowthrough mode. preferably in flowthrough mode. High load in flow-through mode (100 - 300 mg MAb/ml) Contaminant removal to formulation level in two chromatographic two chromatographic stepssteps 28 / GE / Capto MMC 耐高盐浓度的弱阳离子交换凝胶 高盐吸附 新的选择性 29 / GE / Layered beads-Two Examples Shell Shell B Beadseads Ligand only in outer layer (shell) of the bead Active surface, inactive core Core BeadsCore Beads Ligand only in the core of the bead Inactive surface, active core 30 / GE / CaptoCore 700 5 m inactive shell 85 m particle size N+Octylamine - Multimodal ligand Very strong protein binding Viral Particle Host Cell Proteins DNA fragments Endotoxins Detergents Benzonase Etc CaptoCapto Core 700Core 700 31 / GE / Window of Operation Load & Flow Rate Buffer Composition 0.02.04.06.08.010.012.014.0pH 6.5pH 7.0pH 7.5pH 7.5pH 8.0MDCK HCP Capacity mg protein/ml medium 20 mM Phosphate + 150 mMNaCl20 mM Phosphate + 1000 mMNaCl20 mM Tris + 150 mM NaCl20 mM Tris + 1000 mM NaCl 100 500 0.3 10 Load ml/ml medium cm/h (Note: Not to scale) Max. Flow Capto Core 700 Gel Filtration 33 / GE / Sephadex基架离子交换填料 批量吸附模式的选择 属于第一代离子交换填料，由于物理化学稳定性不好，逐渐被淘汰。但是在相对附加值较低的领域或者是特殊的应用中如抗生素领域仍有使用。 基于Sephadex G-25或G-50 对于小分子（如分子量小于30000）选择A-25或C-25,对于稍大的分子选择A-50或C-50，分子量大于10万的选A-25或A-50。 34 / GE / 离子交换纤维素 老一代经济的离子交换填料，应用在实验室条件比较差的重力流层析柱内，或对流速要求不高的粗纯化 DEAE Sephacel：推荐使用流速10cm/hr,耐压0.03Mp 35 / GE / 离子交换填料选择总结 等电点 知道选阴离子还是阳离子的pH范围 蛋白质的pH稳定性 弱离子交换剂的pH范围 选择性选择性 处理量及放大的要求 分辨率 层析形式 36 / GE / 按照层析技术原理分类选择填料 凝胶过滤填料选择 离子交换填料选择 亲和填料选择 疏水填料选择 反相填料选择 37 / GE / 亲和填料选择 原理：根据生物分子之间的特异相互作用分离纯化蛋白质，只要有合适的配基，即可采用亲和层析 重点：选择合适的配基。选择合适的配基。 应用： 抗体以及Fc融合蛋白 重组的标签蛋白 族特异性生物分子 预活化的亲和填料 38 / GE / 亲和填料选择 抗体以及Fc融合蛋白 重组的标签蛋白 His标签融合蛋白纯化的填料选择 GST标签融合蛋白纯化的填料选择 Strep(II)标签融合蛋白纯化的填料选择 MBP标签融合蛋白纯化的填料选择 族特异性生物分子 预活化的亲和填料 39 / GE / 抗体及Fc融合蛋白纯化 IgG的Fc区域与金黄色葡萄球菌表面蛋白A以及链霉菌表面蛋白G有特异性的结合。 Protein A Protein G 转一性好，纯转一性好，纯度高度高 范围广，结范围广，结合牢合牢 40 / GE / ProteinA抗体亲和填料 天然的蛋白A nProtein A Sepharose 4 FF Protein A HP Protein A Sepharose CL-4B Protein A Sepharose 6MB 重组的蛋白A rProtein A Sepharose FF rmp Protein A Sepharose FF MabSelect系列 41 / GE / Number of CIP cycles020406080100120140160180200220DBC at 10% breakthrough (polyclonal hIgG) % 02040608010015 min contact time with 0.1 M NaOH / cycle60 min contact time with 0.1 M NaOH / cycle15 min contact time with 0.5 M NaOH / cycle15 min contact time with 0.1 M NaOH / cycle(conventional Protein A resin)15 min contact time with 0.1 M NaOH / cycle (16 X 100 mm)MabSelect系列填料 为大规模纯化设计 MabSelect 快流速 MabSelect SuRe耐碱 MabSelect Xtra高载量 MabSelect SuRe LX-耐碱，高载量 42 / GE / 蛋白G抗体亲和填料 Protein G Sepharose 4FF -Bioprocess填料，耐压0.1MP Gammabind G Sepharose -重组II型，耐压0.008MP Gammabind Plus sepharose -重组III型，耐压0.015MP Protein G Sepharose High Performance（只有预装柱形式） 43 / GE / 嗜硫亲和填料 配基配基：2巯基嘧啶 原理原理：蛋白与配基之间通过电子的供给与接受相互作用，这种作用可以通过高浓度的盐来提高 HiTrap IgM Purification HP, 1 ml HiTrap lgY Purification HP, 5 ml PlasmidSelect Xtra 44 / GE / CaptoTM L binding affinity In humans: 60 % of light chains - kappa 40% of light chains - lambda Protein L binds kappa subunits I, II, and IV of variable region in humans Four binding domains The Protein L binding affinity for the variable region of the kappa light chain enables Capto L to capture a broad range of antibody fragments 45 / GE / Selection Guide Antibody fragment resins Antibody fragment Chain subtype Recommended product Alternative product Kappa light chain Lambda light chain Fab CaptoTM L Lambda FabSelect KappaSelect scFv Dab Kappa light chain Capto L Kappa light chain Capto L VH3 heavy chain MabSelectTM If small lambda fragments: Use IEX or multimodal solutions 46 / GE / His-标签蛋白质纯化 Ni Sepharose Ni2+ Ni2+ Ni2+ Ni2+ cleavage site TEV protease rProteinrProtein His His His His His His 47 / GE / Ni Sepharose 6 FF 凝胶 Ni Sepharose HP 凝胶 Designed for purification of histidine-tagged proteins Precharged with Ni2+ High protein binding capacity Minimal Ni2+ leakage BioProcess media Available in HisTrap and HisPrep prepacked column formats Ni Sepharose 6 FFNi Sepharose HP凝胶颗粒大小90 m 34 m 动态载量40 mg His 标记蛋白质 / ml 凝胶40 mg His 标记蛋白质 / ml 凝胶线性流速50 - 400 cm/h 柱高 10 cm5 mg 重组 GST / ml 凝胶线性流速线性流速30 - 300 cm/h ( 1 - 10 ml/min) 柱高 10 cm15 - 150 cm/h ( 0.5 - 5 ml/min) 柱高 10 cm操作压力操作压力0.15 Mpa (1.5 bar)0.15 Mpa (1.5 bar)pH 稳定性稳定性 3 - 12 4 - 13保存保存4-30 摄氏度 20% 乙醇4-30 摄氏度 20% 乙醇Glutathione Sepharose High Performance凝胶颗粒凝胶颗粒34 祄 动态载量动态载量10 mg 重组 GST / ml 凝胶线性流速线性流速30 - 300 cm/h ( 1 - 10 ml/min) 柱高 10 cm操作压力操作压力0.3 Mpa (3.0 bar)pH 稳定性稳定性 3 - 12保存保存4-30 摄氏度 20% 乙醇61 / GE / StrepTactin Sepharose High Performance High binding capacity, 6 mg/ml medium Highly pure Strep(II)-tagged recombinant proteins eluted in concentrated form and small volumes Physiological conditions and mild elution with 2.5 mM desthiobiotin preserve target protein activity Fast and easy regeneration with 0.5 M NaOH in 10 min Strep II标签蛋白纯化填料 62 / GE / Dextrin Sepharose High Performance High binding capacity, approx. 10 mg/ml medium Highly pure MBP-tagged recombinant proteins eluted in concentrated form and small volumes Physiological conditions and mild elution with 10 mM maltose preserve target protein activity Fast and easy regeneration with 0.5 M NaOH MBPTrap HP is with Dextrin Sepharose High Performance MBP标签蛋白纯化填料蛋白纯化填料 63 / GE / 其他亲和填料选择 填料 特异性 Benzamidine Sepharose 4FF HS 苯甲脒 专一结合丝氨酸蛋白酶，胰蛋白酶和类胰蛋白酶 Capto Blue （HS） Blue sepharose FF 白蛋白、凝血因子、需要核糖核酸辅助的酶、干扰素等 Calmodulin Sepharose 4B 钙调节因子 ATP 酶、蛋白激酶、磷酸二酯酶、神经传递素、干扰素、促肾上腺皮质激素等 Capto Heparin Sepharose 6FF/CL 6B 肝素 抗凝血酶III、凝血因子、脂蛋白、脂酶、蛋白合成因子、激素、类固醇受体、核酸结合酶、限制性内切酶、干扰素 VIIISelect、VIISelect 特异纯化凝血因子VIII和VII/VIIa Streptavidin Sepharose HP 生物素 利用生物素和抗生素的结合作用做亲和层析；如使用生物素标记的抗体纯化相应抗原 64 / GE / Capto Blue 流速比Blue Sepharose 6FF快 可以耐受氢氧化钠清洗和高压灭菌 更低的基团脱落 与白蛋白结合更紧 用来替代Blue Sepharose 6FF 65 / GE / VIISelect Some characteristicsSome characteristics Base matrix High flow agarose Average particle size 75 m Ligand FVII ligand Ligand density Approx. 5.7 mg/mL medium Binding capacity Approx. 8 mg/mL medium Storage conditions 20% ethanol at 2C - 8C pH stability 3-10 (long term) pH stability 2-12 (short term) - - For internal use only For internal use only - - 66 / GE / VIIISelect 67 / GE / 族特异性亲和填料选择 填料 特异性 IgG Sepharose FF 一步纯化原核试验生物表达系统产生的蛋白A 融合产物 Gelatin Sepharose 4B/4FF 明胶 一步纯化或去除纤维结合素 Lentil Lectin Sepharose 4B ConA Sepharose 4B 能纯化糖蛋白、膜蛋白、(特别是未含端甘露呲喃葡萄糖 a - D glucosepyranosyl、甘露呲喃糖a - D - mannopyranosyl 或相类似残基分子) Lysine Sepharose 4B 纯化核蛋白体核糖核酸、血纤维蛋白溶酶原和血纤维蛋白溶酶原激活剂 2, 5 ADP Sepharose 4B 纯化NADP+ 依赖脱氢酶和其它对NADP+有亲和作用的酶如葡糖-6- 磷酸脱氢酶 Poly (U) Sepharose 4B 纯化mRNA，逆转录酶，干扰素，植物的核酸 68 / GE / 预活化的亲和填料选择 Chemical group Length of Structure of Product on ligand spacer arm spacer arm Proteins, peptides, amino acidsProteins, peptides, amino acids aminoamino 10-atom HiTrap NHSNHS- -activatedactivated HP NHSNHS- -activatedactivated Sepharose 4 Fast Flow None CNBrCNBr- -activatedactivated Sepharose 4B CNBrCNBr- -activatedactivated Sepharose 4 Fast Flow 10-atom ECH Sepharose 4B carboxylcarboxyl 11-atom EAH Sepharose 4B thiolthiol 4-atom Thiopropyl Sepharose 6B 10-atom Activated Thiol Sepharose 4B 12-atom Epoxy-activated Sepharose 6B O N O H O O N O O O N O H O H O O N O H N H 2 O S O H S N N N S O S N N O H O O O H O O O O O H O 69 / GE / 按照层析技术原理分类选择填料 凝胶过滤填料选择 离子交换填料选择 亲和填料选择 疏水填料选择 反相填料选择 70 / GE / 疏水层析填料选择 Bead sizeBead size NameName 15 SOURCE* 15 Phenyl 15 SOURCE 15 Isopropyl 15 SOURCE 15 Ether 34 Butyl Sepharose* HP 34 Phenyl Sepharose HPm Shells of standard li and 75 Capto* Phenyl (high sub) 75 Capto Butyl 75 Capto Octyl 90 Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (high sub) 90 Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (low sub) 90 Butyl-S-Sepharose 6 Fast Flow 90 Butyl Sepharose 4 Fast Flow 90 Octyl Sepharose 4 Fast Flow 71 / GE / 疏水层析填料选择 原理：根据蛋白质上的疏水性质分离 重点：选择填料的疏选择填料的疏水性强弱水性强弱 苯基高取代苯基低取代辛基丁基异丙基醚基 Butyl sepharose 4B Octyl Sepharose CL-4B Phenyl Sepharose CL-4B Phenyl Sepharose Big Beads 72 / GE / 疏水性强弱的排序 Typical mab applications because of low solubility 我们的填料具有最宽的疏水性跨度范围 Increasing ligand hydrophobicity 73 / GE / 按照层析技术原理分类选择填料 凝胶过滤填料选择 离子交换填料选择 亲和填料选择 疏水填料选择 反相填料选择 74 / GE / 反相层析填料的选择 根据分辨率的高低依次为： uRPC C2/C18:只有预装柱形式，HPLC分析柱 SOURCE 5RPC:只有预装柱形式，用于分析 SOURCE 15RPC：用于精细纯化 SOURCE 30RPC：良好的可放大性 75 / GE / 按照层析技术原理分类选择填料 按照层析技术原理分类选择填料 层析工艺不同阶段选择填料的一般规律 根据目的物的性质选择填料 根据规模选择合适的层析预装柱 层析空柱选择 76 / GE / purity step capture intermediate purification polishing isolate product, concentrate, stabilize remove bulk impurities achieve final purity, remove trace impurities, structural variants, aggregates etc. 层析工艺不同阶段选择填料的一般规律 77 / GE / The efficiency depends on the particle size! Capto Mini SOURCE 5 Mono 78 / GE / 按照层析技术原理分类选择填料 按照层析技术原理分类选择填料 层析工艺不同阶段选择填料的一般规律 根据目的物的性质选择填料 根据规模选择合适的层析预装柱 层析空柱选择 79 / GE / 根据目的物的性质选择填料 抗体抗体 Protein A、Protein G抗体亲和填料，Superdex200去除聚合体，或者Capto adhere去除抗体以外的杂质，Phenyl HP在抗体纯化中应用也很广泛。 糖类或糖蛋白糖类或糖蛋白Con A和Gelatin亲和填料 标签蛋白标签蛋白根据标签选相应的填料 具有合适配基的生物分子具有合适配基的生物分子专一的或族特异的亲和填料，或者使用预活化的填料自行制作亲和填料。 80 / GE / 根据目的物的性质选择填料 多肽Superdex peptide以及SOURCE RPC 天然产物Sephadex LH20， SOURCE RPC， 生物碱用阳离子交换， 生物酸、黄酮、蒽醌、皂甙用阴离子交换 疫苗Sapharose FF 病毒Q-XL，Source 15Q 寡核苷酸Mono Q、Souce Q 抗生素聚合体分析 Sephadex G-10 81 / GE / 根据目的物的性质选择填料 去除小分子物质或脱盐Sephadex G-25 去除内毒素阴离子交换、疏水和活化的偶联介质 去除残余核酸Capto Q、QFF 82 / GE / 按照层析技术原理分类选择填料 按照层析技术原理分类选择填料 层析工艺不同阶段选择填料的一般规律 根据目的物的性质选择填料 根据规模选择合适的层析预装柱 层析空柱选择 83 / GE / HITRAP COLUMNS Affinity Ion Exchange Hydrophobic Interaction Desalting 90 + 34 m 颗粒大小的 Sepharose, Sephadex 每盒五根包装，带注射器转接头和层析系统转接头 经济方便的填料筛选与条件优化方式 1ml 0.7 x 2.5 cm 5ml 1.6 x 2.5 cm 适合于确定条件 84 / GE / HISCREEN COLUMNS 10 cm 高，提供足够的保留时间，确定真实的纯化条件条件设计 Affinity chromatographyAffinity chromatography HiScreen IMAC FF HiScreen Ni FF HiScreen Blue FF HiScreen Capto* Blue HiScreen MabSelect SuRe* HiScreen MabSelect SuRe LX HiScreen MabSelect* HiScreen MabSelect Xtra* Ion exchange chromatography (IEX)Ion exchange chromatography (IEX) HiScreen Capto Q ImpRes HiScreen Capto Sp ImpRes HiScreen Capto Q HiScreen Capto S HiScreen Capto DEAE HiScreen Capto MMC HiScreen Capto adhere HiScreen Q FF HiScreen SP FF HiScreen DEAE FF HiScreen Q HP HiScreen SP FF Hydrophobic interaction chromatography (HIC)Hydrophobic interaction chromatography (HIC) HiScreen Butyl FF HiScreen Butyl-S FF HiScreen Octyl FF HiScreen Capto Phenyl (high sub) HiScreen Phenyl FF (high sub) HiScreen Phenyl FF (low sub) HiScreen Phenyl HP HiScreen Capto Butyl HiScreen Butyl HP 85 / GE / 比较: HiScreen AIEX & HiTrap AIEX 86 / GE / HIPREP COLUMNS 经济型制备级预装柱 Affinity chromatographyAffinity chromatography GSTPrep FF 16/10 Column HiPrep Heparin FF 16/10 Column HiPrep IMAC FF 16/10 Column HisPrep FF 16/10 Column DesaltingDesalting HiPrep 26/10 Desalting column Gel filtration chromatographyGel filtration chromatography HiPrep 16/60 Sephacryl S-100 HR HiPrep 26/60 Sephacryl S-100 HR HiPrep 16/60 Sephacryl S-200 HR HiPrep 26/60 Sephacryl S-200 HR HiPrep 16/60 Sephacryl S-300 HR HiPrep 26/60 Sephacryl S-300 HR Hydrophobic interaction chromatographyHydrophobic interaction chromatography HiPrep 16/10 Butyl FF HiPrep 16/10 Octyl FF HiPrep 16/10 Phenyl FF (high sub) HiPrep 16/10 Phenyl FF (low sub) Ion exchange chromatographyIon exchange chromatography HiPrep 16/10 ANX HiPrep 16/10 CM FF HiPrep 16/10 DEAE FF HiPrep 16/10 Q FF HiPrep 16/10 SP FF HiPrep 16/10 Q XL HiPrep 16/10 SP XL 87 / GE / HiLoad 16/600 Superdex 30 prep grade HiLoad 26/600 Superdex 30 prep grade HiLoad 16/600 Superdex 75 prep grade HiLoad 26/600 Superdex 75 prep grade HiLoad 16/600 Superdex 200 prep grade HiLoad 26/600 Superdex 200 prep grade HiLoad Superdex columns Empty XK columns XK and HiLoad columns 可重装预装柱及空柱 88 / GE / Gel filtration Superdex 200 10/300 GL Superdex 75 10/300 GL Superdex peptide 10/300 GL Superose 6 10/300 GL Superose 12 10/300 GL 10/300 = 24 ml bed volume Tricorn colums Available pre-packed and empty Analytical scale (10 + 13 m beads) 1/16“ fittings (KTA format) No tubings to reduce dead volumes TRICORN GLASS COLUMNS 高分辨率填料预装柱及空柱 Ion Exchange Mono Q 5/50 GL Mono Q 10/100 GL Mono S 5/50 GL Mono S 10/100 GL 5/50 = 1 ml bed volume 10/100 = 8 ml bed volume 89 / GE / SMART COLUMNS 微量纯化预装柱，采用仪器自动化操作 Precision column holder 90 / GE / Gravity Flow columns 纯化达到几十毫克级量，采用重力操作 填料和体积： His（1ml） GST(2ml/10ml) G-25(2ml/8ml) G-10(2ml/8ml) 91 / GE / 96-well filter platesPreDictor/ MultiTrap 高通量纯化 特点：节省样品体积,速度快得到大量信息 适合：工艺开发条件摸索 多样品时的高通量筛选 样品量少时的微量纯化 MultiTrap His、GST、G-25、Streptavidin、Protein A、Protein G 每孔50ul填料，可上样600ul ProdictorProdictor Amount of chromatography Amount of chromatography medium per wellmedium per well PreDictor Capto S 2 ml or 20 ml or 50 ml PreDictor Capto Q 2 ml or 20 ml or 50 ml PreDictor Capto DEAE 2 ml or 20 ml or 50 ml PreDictor Capto MMC 6 ml or 20 ml or 50 ml PreDictor Capto adhere 6 ml or 20 ml or 50 ml PreDictor MabSelect 6 ml or 20 ml or 50 ml PreDictor MabSelect SuRe 6 ml or 20 ml or 50 ml 92 / GE / SpinTrap Column 微量纯化预装柱,采用台式离心机操作 种类：His、GST、Ab、 NHS、Streptavidin、 Protein A、Protein G、G-25、Phos SpinTrap Fe. 体积：内装100ul填料，一次最大可以上样600ul. 93 / GE / 磁珠Mag SepharoseTM 简单快速的蛋白富集 EquilibrationEquilibration IncubationIncubation WashingWashing ElutionElution Quick attraction to the magnet - speeding up sample processing Dense and visual beads - easy to spot and collect Hydrophilic and non-adherent - reduces smearing effects and aggregate formation 94 / GE / 各种实验室纯化柱子和工具总览 手动方式 自动化 105 / GE / 按照层析技术原理分类选择填料 按照层析技术原理分类选择填料 层析工艺不同阶段选择填料的一般规律 根据目的物的性质选择填料 根据规模选择合适的层析预装柱 层析空柱选择 106 / GE / 实验室层析空柱的选择 C柱系列 简易层析柱，无夹套及flow adaptor XK柱系列 实验室到中试层析柱 Tricorn(HR)柱系列 高压层析柱（最大10Mpa） SR柱系列 耐有机溶剂层析柱 107 / GE / C column Max pressure 0.1MPa C column reservoir 108 / GE / XK column Max pressure 0.5MPa XK Reservoir 109 / GE / Tricorn Tricorn 5 10MPa Tricorn 10 5 MPa Tricorn reservoir 111 / GE / HiScale columns空柱 XK柱之后新一代实验室规模层析柱 专门兼容高流速填料 Capto and MabSelect. 压力达到20 bar ，轴向装柱，快捷密封锁定。 InsideInside diameter (mm)diameter (mm) LengthLength 20 cm 40 cm 16 HiScale 16/20 HiScale 16/40 26 HiScale 26/20 HiScale 26/40 50 HiScale 50/20 HiScale 50/40 Several filter sizes available; 10 m, 20 m and 80* m, nylon. 20 m is the default filter size. * For HiScale 50 (and XK 50) only. Valco fittings, 1/16” on HiScale 16 and 26. 1/8” on HiScale 50. 112 / GE / 用空柱子须留意 使用调节器( flow adaptor ) - 保护柱床的同时更可提高 分辨率，节省凝胶 柱子物料须生物兼容，并有尤良的化学抗性 加上装柱器( packing reservoir )，可一步把凝胶装满柱 子，大大提高柱效，尤其是凝胶过滤柱 柱子的过滤网孔径应该是凝胶颗粒的1/3, 一般10um孔 径就够用，如用SOURCE15介质装HR柱和XK柱，须换上5um的网 XK柱完全配合KTA及各种自装的凝胶，是最佳的选择 800免费技术热线 固话请拨 800-810-9118 手机请拨 400-810-9118 您强大的技术支持后盾 倾听您的声音，解决您的问题 一直都在您的身边 关于我们公司及产品的任何疑问，都可以拿起电话拨打800或者400热线。 113 Thank you Please visit: www.gehealthcare.com/protein-purification