第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析1结构结构性质性质鉴别鉴别杂质检查杂质检查含量测定含量测定体内药物分析体内药物分析2芳酸类非甾体药物芳酸类非甾体药物药理作用药理作用：抗炎、抗风湿、止痛、 退热、抗凝血应用应用：关节炎、发热、各种慢性疼痛3分类分类水杨酸邻氨基苯甲酸邻氨基苯乙酸芳基丙酸吲哚乙酸苯并噻嗪甲酸4第一节第一节 典型药物的结构与性质典型药物的结构与性质一、典型药物与结构特点一、典型药物与结构特点 苯环苯环各种取代基各种取代基 羧基羧基游离、盐、酯游离、盐、酯 氨基氨基酰胺酰胺5水杨酸类水杨酸类6典型药物：典型药物：7邻氨基苯甲酸类邻氨基苯甲酸类典型药物：典型药物：8邻氨基苯乙酸类邻氨基苯乙酸类典型药物：双氯芬酸钠典型药物：双氯芬酸钠9芳基丙酸类芳基丙酸类典型药物：布洛芬、酮洛芬、萘普生典型药物：布洛芬、酮洛芬、萘普生10吲哚乙酸类吲哚乙酸类典型药物：吲哚美辛典型药物：吲哚美辛11苯并噻嗪甲酸类苯并噻嗪甲酸类典型药物：吡罗昔康、美洛昔康典型药物：吡罗昔康、美洛昔康12其他非甾体抗炎药其他非甾体抗炎药13二、主要理化性质二、主要理化性质（一）酸性（一）酸性 游离羧基酸性较强游离羧基酸性较强 芳酸芳酸芳取代脂肪酸芳取代脂肪酸 可用酸碱滴定法测定含量可用酸碱滴定法测定含量14（二）水解性（二）水解性 酯键、酰胺键能水解酯键、酰胺键能水解 水解产物可用于鉴别水解产物可用于鉴别 水解反应可用于定量测定水解反应可用于定量测定15（三）光谱特征（三）光谱特征 红外：鉴别红外：鉴别 紫外：鉴别、含量测定、均匀度、溶出度紫外：鉴别、含量测定、均匀度、溶出度（四）基团或元素特性（四）基团或元素特性 酚羟基、二苯甲酮、芳伯胺基、硫元素酚羟基、二苯甲酮、芳伯胺基、硫元素16第二节第二节 鉴别试验鉴别试验一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应 1.水杨酸反应水杨酸反应 与三氯化铁反应生成紫堇色配合物与三氯化铁反应生成紫堇色配合物 17注意：注意： 1.反应条件：反应条件：pH46 ，强酸性环境产物分解，强酸性环境产物分解 2.反应灵敏，在稀溶液中进行反应灵敏，在稀溶液中进行 3.不同药物产物颜色略有差异不同药物产物颜色略有差异 4.阿司匹林阿司匹林紫堇色紫堇色182.酚羟基反应酚羟基反应 对乙酰氨基酚加三氯化铁显蓝紫色对乙酰氨基酚加三氯化铁显蓝紫色19二、缩合反应二、缩合反应 1.酮或醛结构与肼基缩合酮或醛结构与肼基缩合 20三、重氮化三、重氮化偶合反应偶合反应 芳香第一胺类鉴别反应芳香第一胺类鉴别反应具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物 21 直直接接：对对氨氨基基水水杨杨酸酸钠钠、盐盐酸酸普普鲁鲁卡卡因因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺 间间接接：对对乙乙酰酰氨氨基基酚酚（扑扑热热息息痛痛）、醋醋氨苯砜、贝诺酯氨苯砜、贝诺酯 22四、氧化反应四、氧化反应 甲芬那酸甲芬那酸+硫酸硫酸+重铬酸钾重铬酸钾深蓝色深蓝色 棕绿色棕绿色 吲哚美辛吲哚美辛+硫酸硫酸+重铬酸钾重铬酸钾紫色紫色 吲哚美辛吲哚美辛+盐酸盐酸+亚硝酸钠亚硝酸钠绿色绿色 黄色黄色23五、水解反应五、水解反应 24六、特征元素的反应六、特征元素的反应 1.氯元素的鉴别氯元素的鉴别 两种鉴别方法两种鉴别方法 2.硫元素的鉴别硫元素的鉴别25七、光谱法七、光谱法 （一）紫外（一）紫外-可见分光光度法可见分光光度法 1.最大吸收波长发最大吸收波长发 2.最大与最小吸收波长法最大与最小吸收波长法 3.吸光度法吸光度法 4.吸光度比值法吸光度比值法（二）红外分光光度法（二）红外分光光度法26八、色谱法八、色谱法 （一）（一）TLC 对照品与供试品斑点位置一致对照品与供试品斑点位置一致 （二）（二）HPLC 对照品与供试品保留时间一致对照品与供试品保留时间一致27第三节第三节 特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法一、阿司匹林和双水杨酸酯一、阿司匹林和双水杨酸酯 杂质来源：杂质来源： 原料残存（生产过程中乙酰化不完全）原料残存（生产过程中乙酰化不完全） 水解产生（贮存过程中水解产生）水解产生（贮存过程中水解产生） 28（一）合成路线：（一）合成路线：29（二）阿司匹林中游离水杨酸及有关物质（二）阿司匹林中游离水杨酸及有关物质 1.1.水杨酸水杨酸 来源：原料、水解产物来源：原料、水解产物 酚羟基酚羟基有色醌类杂质有色醌类杂质检查方法检查方法HPLCHPLC法法 固定相：固定相：ODSODS 流动相：乙腈流动相：乙腈- -四氢呋喃四氢呋喃- -冰醋酸冰醋酸- -水水 按照外标法以峰面积计算按照外标法以峰面积计算302.2.有关物质的检查有关物质的检查醋酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯31检查方法检查方法HPLCHPLC法法 固定相：固定相：ODSODS 流动相：流动相：A A 乙腈乙腈- -四氢呋喃四氢呋喃- -冰醋酸冰醋酸- -水水 B B 乙腈乙腈 对照液：对照液：0.5%0.5%供试品溶液供试品溶液 要求：供试品溶液杂质峰面积和不得大要求：供试品溶液杂质峰面积和不得大于对照液峰面积于对照液峰面积32（三）双水杨酸酯中游离水杨酸的检查（三）双水杨酸酯中游离水杨酸的检查 水杨酸水杨酸+Fe3+显色显色 测定测定530nm吸光度吸光度 要求：供试品溶液吸光度小于对照液要求：供试品溶液吸光度小于对照液 原料药：原料药：0.5% 制剂：制剂：1.5%33二、甲芬那酸中二、甲芬那酸中2,3-二甲基苯胺二甲基苯胺（一）合成工艺（一）合成工艺34（二）检查方法（二）检查方法 GC程序升温法检查程序升温法检查2,3-二甲基苯胺二甲基苯胺 限度：限度：0.01% 供试品溶液、对照品溶液供试品溶液、对照品溶液 35三、二氟尼柳中有关物质的检查三、二氟尼柳中有关物质的检查361.有关物质有关物质A高低浓度对比法高低浓度对比法 方法：方法：37供试品对照品38判断：判断： 控制杂质斑点个数，控制杂质种类控制杂质斑点个数，控制杂质种类 供试品溶液所显杂质斑点不得深于对供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）照溶液的主斑点（或荧光强度）39优点：优点：以供试品的稀溶液作为对照液，不以供试品的稀溶液作为对照液，不需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成几种限量的对照溶液；几种限量的对照溶液；缺点：缺点：不同物质，不同不同物质，不同R Rf f值比较，准确度值比较，准确度差、直观性差。差、直观性差。 402.有关物质有关物质B HPLC法法 固定相：固定相：C18 流动相：水流动相：水-甲醇甲醇-乙腈乙腈-冰醋酸冰醋酸 检测波长：检测波长：254nm 要求：杂质峰面积和小于对照液主要求：杂质峰面积和小于对照液主 峰面积峰面积41第四节第四节 含量测定含量测定一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法 1. 直接滴定法直接滴定法42阿司匹林阿司匹林 ChP（2010） 取取本本品品约约0.4g，精精密密称称定定，加加中中性性乙乙醇醇（对对酚酚酞酞指指示示液液显显中中性性）20ml，溶溶解解后后，加加酚酚酞酞指指示示液液3滴滴，用用氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液液（0.1mo1/L）滴滴定定。每每lml的的氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液液（0.1mo1/L）相相当当于于18.02mg的的C9H8O4。4344（1 1）测定方法及计算）测定方法及计算 反应摩尔比为反应摩尔比为1111 （2 2）讨论）讨论 中中性性乙乙醇醇 溶溶解解阿阿司司匹匹林林且且防防止止酯酯键键水水解解。“中性中性”是对中和法所用的指示剂而言是对中和法所用的指示剂而言45 优点：简便、快速优点：简便、快速 缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定） 酸性杂质干扰（如水杨酸）酸性杂质干扰（如水杨酸） 适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分 析，只能用于合格原料药的含量测定析，只能用于合格原料药的含量测定462. 水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法 酯的一般含量测定方法酯的一般含量测定方法阿司匹林阿司匹林:2NaOH（过量）（过量）H2SO4Na2SO42H2O水解：水解：剩余滴定：剩余滴定：47USPUSP方法方法：取本品约：取本品约1.5g1.5g，精密称定精密称定, ,加入氢氧化加入氢氧化钠滴定液（钠滴定液（0.5mo1/L0.5mo1/L）50.0m150.0m1，混合，缓缓煮沸混合，缓缓煮沸10min10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mo1/L0.25mo1/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每果用空白试验校正。每1ml1ml的氢氧化钠滴定液的氢氧化钠滴定液（0.5mol/l0.5mol/l）相当于相当于45.04mg45.04mg的的C C9 9H H8 8O O4 4。 48 反应摩尔比为反应摩尔比为1212 优点：消除了酯键水解的干扰优点：消除了酯键水解的干扰 缺点：酸性杂质干扰缺点：酸性杂质干扰49 取取本本品品10片片，精精密密称称定定，研研细细，精精密密称称取取适适量量（约约相相当当于于阿阿司司匹匹林林0.3g），置置锥锥形形瓶瓶中中，加加中中性性乙乙醇醇（对对酚酚酞酞指指示示液液显显中中性性）溶溶解解后后，振振摇摇使使阿阿司司匹匹林林溶溶解解，加加酚酚酞酞指指示示液液3滴滴，滴滴加加氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液液（0.1mol/L）至至溶溶液液显显粉粉红红色色，再再精精密密加加氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液液（0.1mol/L）40m1，置置水水浴浴上上加加热热15分分钟钟并并时时时时振振摇摇，迅迅速速放放冷冷至至室室温温，用用硫硫酸酸滴滴定定液液（0.05mol/L）滴滴定定，并并将将滴滴定定的的 结结 果果 用用 空空 白白 试试 验验 校校 正正 。 每每 lml的的 氢氢 氧氧 化化 钠钠 滴滴 定定 液液（0.1mo1/L）相当于相当于18.02mg的的C9H8O4。 3.两步滴定法两步滴定法 阿司匹林片、阿司匹林肠溶片阿司匹林片、阿司匹林肠溶片 氯贝丁酯氯贝丁酯 50第一步第一步 中和中和51第二步第二步 水解后剩余滴定水解后剩余滴定 水解：水解： 2NaOH（过量）过量）H2SO4Na2SO42H2O 药物与氢氧化钠反应摩尔比为药物与氢氧化钠反应摩尔比为1 1 本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰 52片剂含量测定结果的计算片剂含量测定结果的计算 53二、紫外可见分光光度法二、紫外可见分光光度法1. 直接紫外可见分光光度法直接紫外可见分光光度法2.柱分配色谱柱分配色谱紫外分光光度法紫外分光光度法三、三、HPLC54第五节第五节 体内药物分析体内药物分析一、血浆中阿司匹林与水杨酸的一、血浆中阿司匹林与水杨酸的HPLC测定法测定法二、人血浆中布洛芬的二、人血浆中布洛芬的HPLC测定与立体选择测定与立体选择性代谢研究性代谢研究55本章小结本章小结1.结构特点结构特点2.理化性质理化性质3.与三氯化铁反应鉴别与三氯化铁反应鉴别4.重氮化偶合反应重氮化偶合反应5.水解反应水解反应6.特征元素的反应特征元素的反应56本章小结本章小结7.紫外法鉴别紫外法鉴别8.阿司匹林中特殊杂质的检查阿司匹林中特殊杂质的检查9.对乙酰氨基酚中特殊杂质的检查对乙酰氨基酚中特殊杂质的检查10.酸碱滴定法测定含量酸碱滴定法测定含量11紫外紫外-可见分光光度法测定含量可见分光光度法测定含量57