边妹歇胆惺氨速漱而嫂缺恭肇沥绿推宫夏漆吨垄鼠豺恫捞熊痴扼廊链湿嚷白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩论文答辩论文答辩欢迎各位老师指导厂惋夷分泡希晌散违刷宴辐孤茹湖派郧垢拓懂柞汰避苔弹埠妖侠禹茄挝加白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩边妹歇胆惺氨速漱而嫂缺恭肇沥绿推宫夏漆吨垄鼠豺恫捞熊痴扼廊链湿嚷白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩抗癌活性肽对大肠癌抗癌活性肽对大肠癌LOVOLOVO细胞及细胞及相关凋亡基因的影响相关凋亡基因的影响 学学 科科 专专 业：外科学业：外科学导导 师师 姓姓 名：王茂春名：王茂春 教授教授指指 导导 教教 师师: : 苏秀兰苏秀兰 教授教授研研研研 究究究究 生生生生 姓姓姓姓 名名名名：白斯古楞白斯古楞貉葫粮失妮票欺嗣犁疹钨儿揽龋醉鸦擂朝序孔趣酒喀晾瞻由皋妻骄弄奢侈白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩前言前言n大肠癌为人类常见的恶性肿瘤之一，病死率极高。在我国的发病率有大幅度提高，病死率也不断上升，已经位居恶性肿瘤死亡率的第45位3,4 。目前大肠癌的治疗还是以手术治疗为主，但即使结直肠癌病人接受了根治性手术，复发率仍较高，而再次手术的机会又很小5。大肠癌的高发病率与相对低存活率表明对其需要一种更有效的治疗策略，需要积极探索大肠癌生物治疗的新方法，以提高患者的生存质量，延长生命，为全身治疗创造条件。玩馆挣塌懊闷捍叉昨葛镭陈冕起辗翰弄俊抡玲鲜厉郑踪肌畦庶寨鼠逗斤瓣白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n抗癌活性肽（Anticancer bioactive peptide，ACBP)是一种天然活性物质,相对分子质量小于800kd，属于小分子多肽13,14,15 。具有抑制肿瘤细胞增殖和激活免疫系统的双重作用，大量体外细胞实验和动物体内试验证明，ACBP能够抑制胃癌，卵巢癌，鼻咽癌，胆囊癌等多种肿瘤细胞的DNA合成，诱导肿瘤细胞凋亡和分化，降低肿瘤患者血液粘稠度，改善微循环，调节患癌机体无氧糖酵解，提高机体免疫力。速照泻撂唯韶妹哀练绳诗监嘱汁胡用烤匪再凯袄摇兆骏烂仙萝特换酋季胳白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nP53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高，研究最广泛、深入的基因之一。p53分为野生型(wild-type p53,wtp53)和突变型(mutant-type p53,mtp53）7 。野生型p53 对细胞的分裂和增殖起负调控作用，是抑癌基因。而p53蛋白由于不稳定，易发生突变，一旦p53发生突变，就会丧失野生型p53 基因所具有的细胞周期停滞、诱导凋亡发生、介导细胞衰老、维持基因稳定和错配基因修饰等抑癌功能，同时获得许多癌基因的特殊功能。 绰炊耗徊釉棒拨淤芍篇蘸区婶亏综垦砂贬畔乡因考瞩活轧硬缘秋尾让懊返白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nBcl-2基因家族分为两大类：一类是抗凋亡蛋白，另一类是促凋亡蛋白8。bcl-2、Bcl-xl属于Bcl-2基因家族成员中抗凋亡蛋白一类。bcl-2基因能抑制细胞凋亡而延长细胞的寿命，但不能促进细胞增殖，即细胞凋亡抑制基因。敌呼按伯雾龚咏皱日剥洗惹瞥粤由拖时低善香真廓紫痔贵嗡敬六责碱诲沽白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nBcl-xl基因是近几年发现的Bcl-2家族成员的代表，为抑制凋亡的蛋白，在人体各组织中均有表达11。 Bcl-xl功能与bcl-2相似，能与Bak蛋白一起形成异二聚体，来中和Bak蛋白的促凋亡作用，从而抑制细胞的凋亡。 庄繁晰十惰触契祸伸颊五届脸魂柬懊绪张膏嚣擦颅豌纺峭可惶凉衙驼黍新白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩研究目的研究目的探讨抗癌活性肽（ACBP）对大肠癌细胞株的凋亡和p53、bcl-2、Bcl-xl基因表达的影响，进一步完善抗癌活性肽对大肠癌细胞的抑制作用机制，证实其对大肠癌细胞有生长抑制的作用。 饭繁氛碉蚁捉咕湍坯挑短予蓉遁巴砚揣羞砍疡根泣赡君诺九瓤射可期啃雅白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩实验路线图实验路线图体外培养大肠癌体外培养大肠癌lovo细胞细胞分为分为NS、5-FU、ILP三组三组倒置显微镜下观察细胞凋亡倒置显微镜下观察细胞凋亡RT-PCR方法检测方法检测p53p53p53p53、Bcl-2 、Bcl-xl基因的表达基因的表达得出结论统计学处理取取3-4代的细胞代的细胞作用作用24h匣西庞朴韭镐硅屏雍愁着抽成邢胶正咒泉家信攘拆榴磷尾该殴逝庚血胎俯白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩实验方法实验方法n体外培养人体大肠癌lovo细胞株 n实验分组：将大肠癌lovo细胞株常规复苏,放入在37、5% CO2,饱和湿度的培养箱中培养。24小时更换DMEM培养基一次,待细胞融合时用0.25%胰蛋白酶消化传代,取3-4代的细胞，分别加入生理盐水( 0.5mL，对照组)、5-FU ( 0.5mL，阴性对照组) 、抗癌活性肽( 0.5mL，用药组) 陪梳薛幂钩蔑章诡偿泡漏僧霹子淬仍佯私酝椭蹈绵杏谨毕从酣咎惭掉馋庞白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n用药24h后倒置显微镜下观察各组lovo细胞形态学改变。n收集细胞加入1ml的Trizol n提取总RNAn细胞总RNA鉴定：1的琼脂糖电泳来鉴定细胞总RNA，观察出现的各个条带及条带亮度。 蛆砖戍盂见么躯肌圈炮迁昏枚骨金姆铁丑欧憨切菇钳要樊弧亏中史仁讼惶白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n总RNA提取步骤：收集细胞，加入收集细胞，加入1ml的的Trizol 室温静置室温静置5min加入氯仿加入氯仿0.2ml/管管 室温静置室温静置5min上清液转至新离心管上清液转至新离心管漩涡振荡漩涡振荡30s后离心后离心 弃上清，加入弃上清，加入1ml75%乙醇洗涤乙醇洗涤室温静置室温静置10min弃上清，保留沉淀弃上清，保留沉淀溶解于适量的溶解于适量的DEPC水中水中冰上放置冰上放置5min 12000g，4，离，离心心5min剧烈震荡混匀剧烈震荡混匀一般一般500ml洗两洗两次次12000g，4，离心离心5min12000g，4，离心离心5min12000g，4，离心离心5min12000g，4，离，离心心3min室温晾干室温晾干加入等体积异加入等体积异丙醇，上下颠丙醇，上下颠倒倒廓题秘薪亮匡锯木摇皑舆佯纪敬环镜食照抒压诛带破言愉蜜玉午候竣官安白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nDU800紫外分光光度计测定：分别测定细胞的总RNA光密度值(OD)在260nm和280nm处的,并计算RNA的含量和纯度。要求RNAOD260/OD280值在1.5-2.0之间，浓度在500ug/ml以上的符合实验条件。nRT-PCR半定量方法检测抗癌活性肽（ACBP）对大肠癌lovo细胞p53、bcl-2、Bcl-xl基因表达的影响。鹿幂铀履惺癌引防井覆葡译自附软揩歌芽实哥缩给则枢不痴猾欲库始拱锡白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nRT反应液配置 试剂 使用量 5PrimeScriptBuffer 4 l PrimeScriptRT Enzyme Mix I 1 l Oligo dT Primer（50 M） 1 l Total RNA 根据浓度计算体积RNase Free dH2O up to 20 l 注：Total RNA用量为1ug 。n反转录反应条件如下: 37 15 min *3（反转录反应） 85 5 sec（反转录酶的失活反应）滨萤雕十酝泥圾蝇杂豪宛血殷喳气男档英子挪萨身鹊侍幸锯匀勾碴腹浙渠白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nPCR反应液配制（15ul） 试剂 使用量 5PrimeSTARBuffer（Mg2+ plus） 3.00 l dNTP Mixture（各2.5 mM） 1.20 l Primer 1（10 M） 0.20 l Primer 2（10 M） 0.20 l cDNA产物（10 pg/l） 3.00 l PrimeSTARHS DNA Polymerase 0.15 l 灭菌蒸馏水 up to 15.00 l 筑浓彬德唉挽涪幂杆丹祁清轴沾胶乎据屹素龙竣笋耸抓蛔参朴镰漓绰征板白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nPCR引物详细序列 Sequence(5to3) Product(bp) Tm p53 F ATGAAGCTCCCAGAATGCCA 264 52 p53 R AATCAACCCACAGCTGCACA 264 52 Bcl-xl F CCTGCCTGCCTTTGCCTAA 244 53 Bcl-xl R TAAACTGACTCCAGCTGTATC 244 53 bcl-2 F GGTGCCACCTGTGGTCCACCT 261 55 bcl-2 R CTTCACTTGTGGCCCAGATAGG 261 55 GAPDH F CCTCAACGACCACTTTGTCA 103 50-60 GAPDH R TTACTCCTTGGAGGCCATGT 103 50-60蓄林遏折背捎垫毖唆蚤归筋镐肤猫巴胞柴叭悠缮旅吁斑呜圣胺模蜜臼甩碟白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nPCR反应条件如下 ：94 5min 1 Cycle94 30sec 52 、53或55 * 15sec 25 Cycle72 30sec 72 7min 1 Cycle4 保存注：p53退火温度为52摄氏度，bcl-2退火温度为55摄氏度, Bcl-xl退火温度为53摄氏度。 繁虐瞬暮紫惦键战逃刁傈妈拢灸菜讨恍蜂撅自撑餐淬绦甩童怨懦髓踢协赣白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n实验采用GAPDH片段作为内参照。P53、bcl-2、Bcl-xl、GAPDH引物采用Oligo 软件进行设计，由invitrogen公司合成。n琼脂糖凝胶电泳 ：取PCR产物5ul，加5xLoading Buffer 2ul，2%琼脂糖凝胶电泳 110V，100mA，25min，凝胶成像仪成像并保存结果。n凝胶图像分析软件半定量分析测定灰度值。兄念系阵普校轧淑简恕淘桑筑百稻矽费视阁掏瘩让滦衡代靳脸泻酝译妨头白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩统计学分析统计学分析n实验数据采用 表示，组间比较采用t 检验，两组以上比较采用方差分析，SPSS13.0 统计软件进行统计学分析。P 0.05 为差异有统计学意义。向亚浆攀档玉栈翘炭帽诸凝伺儒摈婚疵曝黍君丽系见架优丑阎狐抉铁庙蓝白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩实验仪器及设备实验仪器及设备 分光光度仪 培养箱 显微镜 超净台 低温超速离心机 叉楞段炒渭菠闲隶禾储式堤痛旗滁莱猫狈锤绘险栓灯灯篮祁榷碎鳃助曰搓白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩实验结果实验结果n加入生理盐水24h后见lovo细胞生长旺盛,形态良好呈梭形或多角形，胞质均匀透明，随时间延长变化不大。用药前和用药用药前和用药24h24h后（倒置显微镜后（倒置显微镜下，下，100100，x400x400） 生理盐水组生理盐水组宅妥听旭盅围盎随猖演亚栽促轨登秘米徊告增堑岳铣支伏有珠恳赋毛牺淘白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n加入5-FU5-FU 24h后见lovo细胞数量减少，部分细胞变小、变圆、折光率减弱、核浓缩等细胞凋亡形态。用药前和用药用药前和用药24h24h后（倒置后（倒置显微镜下，显微镜下，100100，x400x400）5-FU组组 北鞘拔睦缠槽米析莎劝劈蠕锋注红敦拿价刃测略隶嚏臂林仑坑唉岂购男埠白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n加入ILP 24h后见lovo细胞数量减少，部分细胞变小、变圆、折光率减弱、核浓缩等细胞凋亡形态。用药前和用药用药前和用药24h24h后（倒置后（倒置显微镜下，显微镜下，100100，x400x400）抗癌活性肽组抗癌活性肽组 瓮船含划厨听抛笆搪氢秸耕靖宠弘氟冒焊慎骄嚎盟眩狞异飘漳沾函微庇咏白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n细胞总RNA1琼脂糖电泳细胞总细胞总RNA1RNA1琼脂糖电泳可见清晰的两条条带，分别为琼脂糖电泳可见清晰的两条条带，分别为18S18S和和28S28S。 丸哪肩须肮愧茶道酮运工蔼功滋独哄脸抬沫湿伴掂嘱敌吧机缮层颓蹈慰舌白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n紫外分光光度计测定： 分别测定细胞总RNA在260nm和280nm处的光密度值(OD),并计算RNA的含量和纯度。数据显示RNA纯度均在OD260/OD280比值1.5-2.0之间，浓度在400-2500ug/ml之间，符合RT-PCR实验条件。 邹乞钵汹另绿勇悼晕洛部储怠姜着洁堤斯交蛮冗捻字信喉交姻蛇钦庭弯龋白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nRT-PCR检测p53基因RNA水平表达：ACBP组与5-FU组p53基因RNA表达水平明显低于NS组p53基因RNA表达。p53 RT-PCRp53 RT-PCR电泳图电泳图 瞄绞鼠踪币磁谢庇幅驯拨讯癣碎徘孵蔽酱好唐秀箍戏医懦异邮秩摘容返耻白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nRT-PCR检测bcl-2基因RNA水平表达： ACBP组与5-FU组bcl-2基因RNA表达水平明显低于NS组p53基因RNA表达。bcl-2 RT-PCRbcl-2 RT-PCR电泳图电泳图 因配么铡赌釜去祭脖理蕾枪抗券涣蜒瘤负疑猿街史白吨绍渔咏竞换嫉顷晚白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nRT-PCR检测Bcl-xl基因RNA水平表达： ACBP组与5-FU组Bcl-xl基因RNA表达水平明显低于NS组p53基因RNA表达。Bcl-xl RT-PCRBcl-xl RT-PCR电泳图电泳图 降嚼疹猴干韭行临赌沽婆百镊罕围汾哨子友俱闸撬迟壬省妙租躇告校譬帛白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n在ACBP组、5-FU组和NS组中GAPDH的表达GAPDH RT-PCRGAPDH RT-PCR电泳图电泳图 在ACBP组、5-FU组和NS组中GAPDH均有表达圭痛鸟剔耙烙姓镍硷苗敲甚钮警汤恶杖噶移皂碱兴接缔隔啼强乞达释脑蔗白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n大肠癌lovo细胞p53、Bcl-2、Bcl-xl基因总RNA表达（n=3， ） 组 别 p53基因 bcl-2基因 Bcl-xl基因 N S 组 19.280.40 12.870.29 25.810.45 ACBP 组 13.230.21* 07.280.35* 17.770.47* 5-Fu 组 13.820.20* 07.880.35* 18.290.33* 注：注：*P0.01*P0.01，*P0.01 VS NS*P0.01 VS NS组组驹桥奖馋葬凌撇掐遭疹墒痕伊梗褪肩荧抽宙讥须絮屿圾亨旗痊缠畸拧栅吠白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩讨论讨论n抗癌活性肽(anticancer bioactive peptide，ACBP)来源于经过诱导动物脏器，以现代生物技术分离、提取的一种新型抗癌生物制剂19。在将近十年多的研究中，目前已经完成了对小白鼠及大白鼠进行的急毒和长毒试验，表明ACBP对正常的生理过程及酶的代谢基本上没有干扰，未发现明显的毒副作用。 酷铀措辈矿帮擅庭奔桅有佃伯摸方措瓤牟震形擅犁吹击肝洲滑囚偏葵讥专白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n本课题组前期研究证实：通过MTT细胞毒理实验证实：ACBP抗癌作用的有效浓度为25ug/ml，最有效作用时间为24小时。ACBP：大量体外细胞实验和动物体内实验证明，ACBP能够抑制胃癌、大肠癌、白血病、卵巢癌、胆囊癌等多种肿瘤细胞的DNA合成，诱导肿瘤细胞的凋亡并使细胞向正常细胞分化，降低肿瘤病人机体血液黏稠度，提高免疫力。 蔚咕艺党煤烈衬绅阎箱剿南蛙软榴坟靠瞩坐草捐丁甩喜略村汉涂替贫站挖白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n本实验选用25ug/mlACBP对大肠癌lovo细胞株作用24小时，观察结果可见ACBP其抑癌作用机制可能与抑制细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡有关，以进一步探讨证实ACBP的抗癌作用机理，并通过RT-PCR方法检测p53、bcl-2、Bcl-xl基因观察其在肿瘤细胞中的表达情况，为其在临床应用提供更为完善的理论依据。 辰冶啸菏醚昌动刻索砒恃恼斗截蜡晋垒修俄泻瞳函扎淄免迫吉醋暇爸肃笨白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n肿瘤是因人体细胞中调控因子的平衡调控发生紊乱，导致细胞异常增殖而诱发的。在体内外各种致癌因素的作用下，p53基因发生缺失或突变，使其编码的蛋白质丧失了抑制细胞增值的作用，导致细胞的无限增值而引发肿瘤。变异的p53蛋白不仅丧失了阻止正常细胞发生癌变的作用，还由于突变所产生的异常功能(Gain of function)启动一些原癌基因的过度表达，促进细胞的恶性转化，加速肿瘤的发生和发展22.23。丢埔芥俭春氛姑纱吼淬趋删欧绎懈僻产组刻剁库激栽饺隧拣评透鹿转彝柴白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nbcl-2基因是原癌基因到目前发现的与凋亡关系最密切的基因之一。正常组织中bcl-2在自身稳定性方面起着重要作用, 一般在记忆B淋巴细胞和寿命长的干细胞群及胸腺髓质细胞里较多，如:结肠、子宫内膜、前列腺和皮肤中，但在上皮细胞分化末期较少出现。bcl-2蛋白在正常细胞中可表达于激活和发育过程，也可表达于成熟组织中，在人体多种形态的肿瘤细胞中亦可表达，走向凋亡的细胞中却低表达或不表达28。 爽眉款须肆剪融傀邮二珍面告粳娄遇商诫播瘪紫抖榜绅隐干绩拯如齿骡桔白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nBcl-xl的表达与恶性肿瘤的发生、发展过程相关。该基因有2种类型:一种为Bcl-xl，与bcl-2蛋白有协同作用；另一种为Bcl-xs，与bcl-2蛋白有抑制作用30。Bcl-xl的功能与bcl-2比较相似，可与Bak蛋白形成异二聚体，来中和Bak基因的促凋亡作用，使抑制细胞凋亡31。研究表明, Bcl-xl/bax比例是决定细胞对凋亡刺激信号敏感的重要因素33。当Bcl-xl表达过量时，细胞可免遭凋亡，反之，在诱导剂的作用下细胞容易发生凋亡。 虑寒嘿震澜扒坪塘承和宜钦怕督制考酚钨认枪猜雹惭缆辨泣榴微锈撒淋印白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩nBcl-2家族与p53的基因调控也是有着相互联系的。一些学者认为bcl-2能抑制p53来介导细胞凋亡, 近年来又发现突变型p53是由于其在mRNA及蛋白水平下调bcl-2表达来抑制细胞凋亡，从而成为了bcl-2的调控因子。有研究发现，p53基因失活时, 使bcl-2家族的基因调控失衡，引起凋亡抑制基因Bcl-xl在mRNA水平升高，致使靶细胞不容易诱发细胞凋亡。 浙福默拓浴老磷谩枕旱亚依捂霄余焉茫陈计仰做采粱欠岗众具兑洋洪斤谈白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩n本试验中，通过lovo细胞培养，镜下观察和RT-PCR检测p53、bcl-2、Bcl-xl基因发现，从形态学和RNA表达两个方面的研究提示：ACBP对大肠癌lovo细胞具有抑制生长、诱导凋亡作用，可能是其治疗大肠癌的重要机制之一，同时也进一步明确了ACBP的抗肿瘤疗效。为抗癌活性肽对大肠癌的临床治疗提供了实验依据，提示其具有潜在的临床应用前景。 洱扒矛淘致贵旧游对撕潭岔抑纳胆钳轨禾罕通匀散粱肚祖入凳霹源砒群栗白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩结论结论n抗癌活性肽可能通过降低细胞中p53基因的表达，下调肿瘤细胞生长与增殖能力，发挥其抗肿瘤作用。n抗癌活性肽的抗肿瘤作用可能与下调大肠癌lovo细胞中bcl-2、Bcl-xl基因表达，诱导细胞凋亡有关。仇佃梨因沫咀恍朽咽锦退吉寝父里胎罢责预襄烁脯园辈挣肯嘴逸磨风刨锣白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩【参考文献】【参考文献】1. 1. 1. 1. 姚国栋姚国栋姚国栋姚国栋, , , , 苏秀兰苏秀兰苏秀兰苏秀兰, , , , 乌新林等乌新林等乌新林等乌新林等. . . . 抗癌活性肽对荷人胃癌裸鼠细胞凋亡抗癌活性肽对荷人胃癌裸鼠细胞凋亡抗癌活性肽对荷人胃癌裸鼠细胞凋亡抗癌活性肽对荷人胃癌裸鼠细胞凋亡及及及及BcL-2BcL-2BcL-2BcL-2、BaxBaxBaxBax表达的影响表达的影响表达的影响表达的影响J .J .J .J .内蒙古医学院学报，内蒙古医学院学报，内蒙古医学院学报，内蒙古医学院学报，2010.42010.42010.42010.4，32323232（2 2 2 2）1031031031031081081081082. 2. 2. 2. 温再和，苏秀兰，欧阳晓晖等温再和，苏秀兰，欧阳晓晖等温再和，苏秀兰，欧阳晓晖等温再和，苏秀兰，欧阳晓晖等. . . . 抗癌活性肽抑制肿瘤生长和转移的抗癌活性肽抑制肿瘤生长和转移的抗癌活性肽抑制肿瘤生长和转移的抗癌活性肽抑制肿瘤生长和转移的研究进展研究进展研究进展研究进展J .J .J .J .内蒙古医学杂志内蒙古医学杂志内蒙古医学杂志内蒙古医学杂志Inner Mongolia Med,2005Inner Mongolia Med,2005Inner Mongolia Med,2005Inner Mongolia Med,2005，37373737（1 1 1 1）,34,34,34,3436 36 36 36 3. 3. 3. 3. 徐桂华徐桂华徐桂华徐桂华, , , ,苏秀兰苏秀兰苏秀兰苏秀兰, , , ,中杰等中杰等中杰等中杰等. . . .抗癌活性肽对人胃癌抗癌活性肽对人胃癌抗癌活性肽对人胃癌抗癌活性肽对人胃癌BGC-823BGC-823BGC-823BGC-823细胞周期的调细胞周期的调细胞周期的调细胞周期的调控控控控J.J.J.J.中华肿瘤防治杂志，中华肿瘤防治杂志，中华肿瘤防治杂志，中华肿瘤防治杂志，2007200720072007，14141414（18181818）：）：）：）：1361-1364.1361-1364.1361-1364.1361-1364.4. 4. 4. 4. 庞利群，范钰，蒋鹏程等庞利群，范钰，蒋鹏程等庞利群，范钰，蒋鹏程等庞利群，范钰，蒋鹏程等. RNA. RNA. RNA. RNA干扰干扰干扰干扰BclBclBclBclxLxLxLxL基因表达对大肠癌细胞基因表达对大肠癌细胞基因表达对大肠癌细胞基因表达对大肠癌细胞侵袭的影响侵袭的影响侵袭的影响侵袭的影响J .J .J .J .复旦学报，复旦学报，复旦学报，复旦学报，2009200920092009，36(1)36(1)36(1)36(1)，7474747478 78 78 78 5. 5. 5. 5. 孙念峰，张建良，王国斌，抗凋亡基因孙念峰，张建良，王国斌，抗凋亡基因孙念峰，张建良，王国斌，抗凋亡基因孙念峰，张建良，王国斌，抗凋亡基因Bag-1 Bag-1 Bag-1 Bag-1 和和和和Bcl-2 Bcl-2 Bcl-2 Bcl-2 在结肠癌组在结肠癌组在结肠癌组在结肠癌组织的表达及相互关系的研究织的表达及相互关系的研究织的表达及相互关系的研究织的表达及相互关系的研究JJJJ中国现代普通外科进展，中国现代普通外科进展，中国现代普通外科进展，中国现代普通外科进展，2008,112008,112008,112008,11（5 5 5 5）395395395395398 398 398 398 6. 6. 6. 6. 赵媛媛，彭诗东，苏秀兰等赵媛媛，彭诗东，苏秀兰等赵媛媛，彭诗东，苏秀兰等赵媛媛，彭诗东，苏秀兰等. . . .抗癌活性肽对鼻咽癌细胞周期的影响抗癌活性肽对鼻咽癌细胞周期的影响抗癌活性肽对鼻咽癌细胞周期的影响抗癌活性肽对鼻咽癌细胞周期的影响J.J.J.J.中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2006200620062006，41414141（8 8 8 8）：）：）：）：607-611.607-611.607-611.607-611.驶钒茅拙柴识增捶贡搓词畴俩机煞落窗济凡檬工兼势刑伎康喀欢菲颓肖孙白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩7. Qi Xie1; Biling Liang2In vivo comparison of transduction 7. Qi Xie1; Biling Liang2In vivo comparison of transduction 7. Qi Xie1; Biling Liang2In vivo comparison of transduction 7. Qi Xie1; Biling Liang2In vivo comparison of transduction efficiency with recombinant adenovirus-mediated p53 in a efficiency with recombinant adenovirus-mediated p53 in a efficiency with recombinant adenovirus-mediated p53 in a efficiency with recombinant adenovirus-mediated p53 in a human colon cancer mouse model by different delivery human colon cancer mouse model by different delivery human colon cancer mouse model by different delivery human colon cancer mouse model by different delivery routesJ routesJ routesJ routesJ Chinese-German Journal of Clinical OncologyChinese-German Journal of Clinical OncologyChinese-German Journal of Clinical OncologyChinese-German Journal of Clinical Oncology，2008,12 2008,12 2008,12 2008,12 8. Xiao-Dong Zhou; Jie-Ping Yu; Hong-Gang YuExpression of 8. Xiao-Dong Zhou; Jie-Ping Yu; Hong-Gang YuExpression of 8. Xiao-Dong Zhou; Jie-Ping Yu; Hong-Gang YuExpression of 8. Xiao-Dong Zhou; Jie-Ping Yu; Hong-Gang YuExpression of cellular FLICE-inhibitory protein and its association with cellular FLICE-inhibitory protein and its association with cellular FLICE-inhibitory protein and its association with cellular FLICE-inhibitory protein and its association with p53 mutation in colon cancerJp53 mutation in colon cancerJp53 mutation in colon cancerJp53 mutation in colon cancerJWorld Journal of World Journal of World Journal of World Journal of GastroenterologyGastroenterologyGastroenterologyGastroenterology，2005-16-019 2005-16-019 2005-16-019 2005-16-019 9. Luis Orlando P9. Luis Orlando P9. Luis Orlando P9. Luis Orlando P rez; Martin Carlos Abba;Evaluation of p53 rez; Martin Carlos Abba;Evaluation of p53 rez; Martin Carlos Abba;Evaluation of p53 rez; Martin Carlos Abba;Evaluation of p53 codon 72 polymorphism in adenocarcinomas of the colon and codon 72 polymorphism in adenocarcinomas of the colon and codon 72 polymorphism in adenocarcinomas of the colon and codon 72 polymorphism in adenocarcinomas of the colon and rectum in La Plata, ArgentinaJrectum in La Plata, ArgentinaJrectum in La Plata, ArgentinaJrectum in La Plata, ArgentinaJWorld Journal of World Journal of World Journal of World Journal of GastroenterologyGastroenterologyGastroenterologyGastroenterology，2006-09-018 2006-09-018 2006-09-018 2006-09-018 10. Cao Jiang; Teng Lisong; Zheng Shu; Construction of p53 10. Cao Jiang; Teng Lisong; Zheng Shu; Construction of p53 10. Cao Jiang; Teng Lisong; Zheng Shu; Construction of p53 10. Cao Jiang; Teng Lisong; Zheng Shu; Construction of p53 antisense RNA expression vector and its effect on colon antisense RNA expression vector and its effect on colon antisense RNA expression vector and its effect on colon antisense RNA expression vector and its effect on colon cancer cellsJcancer cellsJcancer cellsJcancer cellsJChinese Medical JournalChinese Medical JournalChinese Medical JournalChinese Medical Journal，1998-04-025 1998-04-025 1998-04-025 1998-04-025 11. Zhenyu He a; d; Chuanbing Shi b11. Zhenyu He a; d; Chuanbing Shi b11. Zhenyu He a; d; Chuanbing Shi b11. Zhenyu He a; d; Chuanbing Shi b；The potential of The potential of The potential of The potential of carcinoembryonic antigen,p53,Ki-67 and glutathion carcinoembryonic antigen,p53,Ki-67 and glutathion carcinoembryonic antigen,p53,Ki-67 and glutathion carcinoembryonic antigen,p53,Ki-67 and glutathion Stransferase- as clinico histopathological markers for Stransferase- as clinico histopathological markers for Stransferase- as clinico histopathological markers for Stransferase- as clinico histopathological markers for colorectal cancerJ colorectal cancerJ colorectal cancerJ colorectal cancerJ Journal of Biomedical ResearchJournal of Biomedical ResearchJournal of Biomedical ResearchJournal of Biomedical Research，2010-2010-2010-2010-01-00901-00901-00901-00912.You-Li Zhang, Li-Qun Pang, Significance of Bcl-xL in human 12.You-Li Zhang, Li-Qun Pang, Significance of Bcl-xL in human 12.You-Li Zhang, Li-Qun Pang, Significance of Bcl-xL in human 12.You-Li Zhang, Li-Qun Pang, Significance of Bcl-xL in human colon carcinomaJcolon carcinomaJcolon carcinomaJcolon carcinomaJ。World J GastroenterolWorld J GastroenterolWorld J GastroenterolWorld J Gastroenterol，2008,14(19),30692008,14(19),30692008,14(19),30692008,14(19),30693073307330733073岿存如菠诉脓德担活删腋鸡萤烽篓沙酵戒户艺毫逆拇筹恒谍磕桩骚已腔勤白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩13.13.13.13.Sandig BV ,Brand K, Herwig S , et al. p16 and p53 genest Sandig BV ,Brand K, Herwig S , et al. p16 and p53 genest ransferred with the help of adenovirus to induce ransferred with the help of adenovirus to induce apoptictumor cell death J . Ugeskr Laeger , 1997 , 159 apoptictumor cell death J . Ugeskr Laeger , 1997 , 159 (46) :6825(46) :68256830.6830.14.Manne U, Weiss HL, Grizzle WE. Bcl-2 expression isassociated 14.Manne U, Weiss HL, Grizzle WE. Bcl-2 expression isassociated with improved prognosis in patients with distalcolorectal with improved prognosis in patients with distalcolorectal adenocarcinomas. Int J Cancer, 2000, 89:423adenocarcinomas. Int J Cancer, 2000, 89:423430.430.傲瓦扒痛吱残妥培卓溺者宣貌车噶坐熙贪蒙旭主熬酵昆某亩巷事砰额家摆白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩致谢致谢n难忘的研究生学习即将结束，首先衷心感谢我的导师王茂春教授对我的培养和指导。导师不仅传授我专业知识，更教我做人的道理，使我有信心成为一名既有医术又有医德的好医生。您渊博的学识、精湛的医术、高尚的医德、朴实无华的作风是我一生学习的榜样。在此，向辛勤栽培我的恩师致以最诚挚的谢意！n特别感谢附院临床医学研究中心苏秀兰教授对本课题的精心指导，衷心感谢苏依拉老师、张嘉玲老师、贾淑琴老师在实验过程中给予的悉心指导和热忱帮助。n衷心感谢普通外科C区所有老师在我学习生涯中给予的指导、教诲和帮助。感谢你们让我在收获知识的同时，收获了友情和快乐。n最后，再次衷心感谢我的师长、同学和朋友，感谢我的家人，一直默默陪伴着我！谢谢你们！辆其鳃坞授废钩非娶佳链舶斯津遥藩嫌速染驱促衙拭揽议狄基沟蛊绷甚蛰白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩边妹歇胆惺氨速漱而嫂缺恭肇沥绿推宫夏漆吨垄鼠豺恫捞熊痴扼廊链湿嚷白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩www.themegallery.com谢谢 谢谢 ！谢谢 谢谢 ！蓝涡端擦裸杠椒级岸彤沧菱贝泳蒜收迭恋橱澜刁语饱颤寿诚姬憋夕满奇砷白斯古楞论文答辩白斯古楞论文答辩