ELISA及及相关免疫分析技术相关免疫分析技术江苏省临床检验中心江苏省临床检验中心许斌许斌8/25/2024JSCCL XUBIN概述概述ELISA是一种敏感性高是一种敏感性高、特异性强特异性强、重复重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存易保存、操作简便操作简便、结果判断较客观等因结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做半定量分析等优点，已广泛应用也可以做半定量分析等优点，已广泛应用于微生物学于微生物学、寄生虫学寄生虫学、肿瘤学和细胞因肿瘤学和细胞因子等领域。子等领域。ELISA的影响因素较多，加强的影响因素较多，加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。质量管理才能充分发挥其方法学的优点。8/25/2024JSCCL XUBINELISA1971年年Engvall等等人人把把免免疫疫组组化化的的EIA技技术术应应用用于于临临 床床 检检 验验 发发 展展 为为 ELISA （Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay）技术，酶联免疫吸附剂试验技术，酶联免疫吸附剂试验。特特点点：在在聚聚苯苯乙乙烯烯固固相相载载体体表表面面组组装装免免疫疫活活性性物质形成物质形成“免疫吸附剂免疫吸附剂” ” 酶酶标标记记免免疫疫活活性性物物质质，化化学学显显色色剂剂进进行行信信号号放放大大； 有二步温育反应二次洗涤过程；有二步温育反应二次洗涤过程； 灵敏度、特异性相对较高。灵敏度、特异性相对较高。8/25/2024JSCCL XUBINELISA原理双双抗抗体体（原原）夹夹心心法法检检测测抗抗原原（体体）的的常常见见方方法法，应应用用针针对对抗抗原原两两个个不不同同决决定定族族的的两两种种单单抗抗分分别别作作为为固固相相载载体体和和酶酶标标抗抗体体检检测测溶溶液液中中的的抗抗原原（适适用用于于二二价价以以上上抗抗原原, ,不能测小分子半抗原不能测小分子半抗原）。）。8/25/2024JSCCL XUBIN间接法间接法检测抗体的方法，利用酶标记的检测抗体的方法，利用酶标记的抗抗体（一般为抗人抗抗体（一般为抗人IgGIgG）检测已与固相检测已与固相抗原结合的抗体，因有干扰须稀释标本。抗原结合的抗体，因有干扰须稀释标本。 固相包被抗原待测抗体酶标记第二抗体底物8/25/2024JSCCL XUBIN竞争法竞争法检测抗原或小分子半抗原、抗体，以测抗检测抗原或小分子半抗原、抗体，以测抗原为例，使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体原为例，使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结结合，结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的酶标抗原就越少，显色越浅，二者呈负相关。合的酶标抗原就越少，显色越浅，二者呈负相关。固相包被抗原待测抗体酶标记特异抗体底物8/25/2024JSCCL XUBINELISA原理&竞竞争争中中和和法法以以测测抗抗体体为为例例，包包被被抗抗体体、待待测测抗抗体体竞竞争争结结合合加加入入的的恒恒定定量量的的中中和和抗抗原原，酶酶标标记记抗抗抗抗体体（抗抗人人IgG），待待测测抗抗体体量量越越多多包包被被抗抗体体结结合合越少，显色越浅。越少，显色越浅。&捕捕获获法法一一般般用用于于检检测测IgM抗抗体体，包包被被抗抗人人链链，捕捕获获血血清清中中的的所所有有IgM抗抗体体，加加入入定定量量特特异异抗抗原原与与捕捕获获的的特特异异抗抗体体结结合合，酶酶标标记记特特异异抗抗体体（或或抗抗抗抗体体）显色。显色。8/25/2024JSCCL XUBINELISA捕获法原理图捕获法原理图固相包被抗链抗体捕获的IgM抗体酶标记抗原底物8/25/2024JSCCL XUBIN试剂盒选择卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品，试剂应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价。&灵灵敏敏度度：有有二二层层含含义义，1 1）为为试试剂剂检检出出被被检检物物质质的的最最低低量量的的能能力力；2 2）为为试试剂剂对对人人群群或或大大量量样样品品中中阳阳性性检检出出的的能能力力（假阴性越少越好），取决于包被物的全面性。（假阴性越少越好），取决于包被物的全面性。&特特异异性性：指指试试剂剂正正确确检检定定不不存存在在的的被被检检物物质质的的能能力力（无无假假阳阳性性），取取决决于于包包被被抗抗原原（体体）及及标标记记抗抗原原（体）的纯度及特异性。（体）的纯度及特异性。&精精密密度度：ELISAELISA试试剂剂一一般般指指其其批批内内CVCV，其其值值应应小小于于15%15%；定量试剂应同时考察线性范围；定量试剂应同时考察线性范围8/25/2024JSCCL XUBINCLSII/LA23-AAssessingthequalityofimmunoassaysystems:radiooimmunoassaysandenzyme,fluorescence,andluminescenceimmunoassays;approvedguideline11.2:Thelowerimmunochemicaldetectionlimitforanassayrepresentsthelowestlevelofanananlytethatcanbereproduciblydetected.thelaboratoryortestsensitivityisidenticaltothedetectionlimit;usecutoffvalueClinical(diagnostic)sensitivity:theproportionofpatientswithawell-definedclinicaldisorderwhosetestvaluesarepositiveorexceedadefineddecisionlimit(i.e.,apositiveresultandidentificationofthepatientswhohaveadisease);usepositivepredictivevalue,false-negativeresults,et.al.8/25/2024JSCCL XUBIN8/25/2024JSCCL XUBIN 8/25/2024JSCCL XUBIN8/25/2024JSCCL XUBIN8/25/2024JSCCL XUBIN8/25/2024JSCCL XUBINHBV基因型和血清学亚型基因型和血清学亚型以以HBsAg的抗原决定族分血清学亚型的抗原决定族分血清学亚型共同决定族共同决定族a，相互排斥的二对决定族相互排斥的二对决定族d/y，w/r；w又分又分1-4；r又分又分q+和和q-。共有共有9种亚型：种亚型：ayw1，ayw2，ayw3，ayw4，ayr，adw2，adw4，adrq+，adrq-只表明包膜蛋白氨基酸差异，只表明包膜蛋白氨基酸差异，有流行病学意义有流行病学意义8/25/2024JSCCL XUBIN基因型血清型基因长度 表达（前s1-55aa，s-226aa） 突变频率流行地域前s2聚合酶核心前C区（G1896A）核心启动子（1762/1764）Aadw2,ayw132211198451856.5%45%欧美非Badw2,ayw1321511984318350%16%亚洲Cayr,adrq+,adrq-,adw2321511984318350%58%亚洲,澳洲,美国Dayw2,ayw3,ayw4318210883218343%12%地中海,俄美,印度Eayw4321211884218327%7%西非Fayw4,adw2,321511984318316%中南美洲Gadw23248108842195100%中北美洲Hadw43215119843183美洲8/25/2024JSCCL XUBIN8/25/2024JSCCL XUBIN保存参考品的国际机构或组织保存参考品的国际机构或组织英国国立生物学标准及控制品研究院（英国国立生物学标准及控制品研究院（NIBSC）：）：免疫血清学免疫血清学IU/ML德国鲍尔德国鲍尔-艾立希研究院（艾立希研究院（PEI）：）：病毒学、免疫血清学等，传染病标志物最全。病毒学、免疫血清学等，传染病标志物最全。PEI/ML法国国家中心实验室（法国国家中心实验室（LNS）、）、法国输血协会法国输血协会（SFTS）：）：病毒性肝炎、艾滋等血清盘。病毒性肝炎、艾滋等血清盘。NG/ML荷兰输血中心实验室（荷兰输血中心实验室（CLB）：）：血型、病毒学、自身抗体等。血型、病毒学、自身抗体等。丹麦国家血清研究院（丹麦国家血清研究院（SSI）：）：病毒学、寄生虫、免疫蛋白等。病毒学、寄生虫、免疫蛋白等。美国美国BBI：HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、HTLV-1等等Panel。8/25/2024JSCCL XUBIN&稳稳定定性性：试试剂剂在在规规定定条条件件下下能能储储存存的的时时间间，一一般般采采用用破破坏坏性性试试验验即即将将试试剂剂存存放放于于3737保保存存，定定期期测测定定其其灵灵敏敏度度，特特异异性性和和精精密密度度等等指指标标，直直到到其其质质量量指指标标开开始始下下降降为为止止，通通常常认认为为3737每每稳稳定定一天相当于一天相当于410410保存一个半月。保存一个半月。&简简便便性性：指指在在不不影影响响试试剂剂的的前前三三项项指指标标的的前前题题下下，实实验验和和测测定定步步骤骤越越少少越越好好，在在定定性性试试验验中中结结果判断简单明了，）定量试验结果计算也应简单。果判断简单明了，）定量试验结果计算也应简单。&安安全全性性：指指试试剂剂对对操操作作者者和和环环境境安安全全无无害害无无传传染性。染性。&经经济济性性：试试剂剂在在同同等等质质量量条条件件下下通通过过大大规规模模生生产或技术进步降低成本而市场价格比较合理。产或技术进步降低成本而市场价格比较合理。8/25/2024JSCCL XUBIN试剂盒选择&试试剂剂评评价价需需要要有有权权威威的的血血清清考考核核盘盘（Panel）进进行行检检测测，一一般般实实验验室室不不易易从从生生检检所所或或临临检检中中心心取取得得，每每进进一一次次试试剂剂评评价价一一次次也也很很麻麻烦烦。可可以以通通过过间间接的信息对试剂进行选择。接的信息对试剂进行选择。根据该试剂生检所批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；通过询问试剂包被物的组成，如原料来源（基因工程或合成多肽），片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣；参考室间质评评价报告中对试剂的评价结果，这比较客观公正，因为统计数字均来自各参评医院，反映了试剂在某一地区的使用情况；根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。8/25/2024JSCCL XUBIN标本的采集和保存可用作ELISA的标本十分广泛，体液（如血清，血浆，各种积液），分泌物（如唾液）和排泻物（如粪便，尿液）均可作为标本以测定其中的抗原或抗体成分，一般使用血清。标本采集时应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰立可读方法的结果，可造成假阳性；长菌的标本同样的道理易产生假阳性。抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝剂。标本在冰箱中保存时间过长易导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深，一般血清置4冰箱5天内完成测试。如需保存一周以上则要-20冰冻保存，融解时应上下颠倒充分混匀，同时避免气泡。ELISA的灵敏度1ng/ml水平上,标本间的污染要尽量避免，尤其不应与生化试验用同一管标本.最起码应先做免疫后做生化.8/25/2024JSCCL XUBIN标本标本使用真空采血管使用真空采血管&分离胶分离胶&不抗凝不抗凝8/25/2024JSCCL XUBIN内外干扰物质的影响分析内外干扰物质的影响分析溶血 脂浊 RF 自身抗体 AFP 补体 肝素 EDTAA0.1650.2000.2500.2640.1860.1460.1830.126S0.0230.0160.0070.0290.0100.0070.0190.013A对照对照0.1510.1950.1950.1950.1160.1160.1160.116S0.0380.0080.0080.0080.0180.0180.0180.018P0.050.050.010.010.010.010.010.018/25/2024JSCCL XUBIN操作中注意事项&ELISA实实验验的的结结果果受受操操作作影影响响很很大大，每每个个步步骤骤包包括括加加样样，温温育育，洗洗涤涤，显显色色，酶酶标标仪仪读读数数均均应应认认真真负负责责才才能能充充分分发发挥挥ELISA的高灵敏，强特异的优点。的高灵敏，强特异的优点。&因此因此,应建立实验项目的标准操作程序应建立实验项目的标准操作程序(SOP)。8/25/2024JSCCL XUBIN仪器质控为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。洗板机和酶标仪。移液器：移液器：ELISAELISA加样量小（加样量小（5-1005-100l l），），其准确性直其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在一般应在10%10%以内；以内；水水浴浴箱箱经经常常检检查查水水浴浴箱箱温温度度计计所所示示的的温温度度和和水水中中（或或温温箱箱内）实测温度是否一致，允许有内）实测温度是否一致，允许有11的误差；的误差；洗洗板板机机每每个个厂厂家家设设置置洗洗板板后后的的残残留留液液有有各各自自的的规规定定一一般般不不超超过过2ul 2ul ，人人工工扣扣板板时时，垫垫纸纸不不湿湿，定定期期检检查查管管孔孔是是否否堵堵塞；塞；酶酶标标仪仪经经常常维维护护其其光光学学部部分分，防防止止滤滤光光片片霉霉变变，定定期期检检测校正滤光片波长和线性范围，使其保持良好的工作性能。测校正滤光片波长和线性范围，使其保持良好的工作性能。8/25/2024JSCCL XUBIN加样器合格标准水合格标准8/25/2024JSCCL XUBIN酶标仪校正程序酶标仪校正程序&滤滤光光片片波波长长精精度度检检查查：将将不不同同波波长长的的滤滤光光片片从从酶酶标标仪仪上上卸卸下下，用用UV-2201型型紫紫外外-可可见见分分光光光光度度计计（波波长长精精度度0.3nm）于于可可见见光光区区对对每每个个滤滤光光片片进进行行扫扫描描，其其检检测测值值与与标定值之差为滤光片波长精度。标定值之差为滤光片波长精度。&通通道道差差与与孔孔间间差差检检测测：通通道道差差检检测测是是取取一一只只酶酶标标板板小小孔孔杯（杯底须光滑，透明，无污染以酶标板架作载体，杯（杯底须光滑，透明，无污染以酶标板架作载体，将将其其（内内含含200ul甲甲基基橙橙溶溶液液吸吸光光度度调调至至0.500A左左右右）置置于于8个个通通道道的的相相应应位位置置，蒸蒸溜溜水水调调零零，1于于490nm处处连连续续测测三三次次,观观察察其其不不同同通通道道的的检检测测器器测测量量结结果果的的一一致致性性，可可用用极极差差值值来来表表示示。孔孔间间差差的的测测量量是是选选择择同同一一厂厂家家，同同一一批批号号酶酶标标2板板条条（8条条共共96孔孔）分分别别加加入入200ul甲甲基基橙橙溶溶液液（吸吸光光度度调调至至0.100A左左右右）先先后后置置于于同同一一通通道道，蒸蒸溜溜水水调调零零,于于490nm处处检检测测，其其误差大小用误差大小用1.96s衡量。衡量。&零零点点飘飘移移（稳稳定定性性观观察察）：取取8只只小小孔孔杯杯分分别别置置于于8个个通通道道的的相相应应位位置置，均均加加入入200ul蒸蒸溜溜水水并并调调零零，于于490nm处处每每隔隔30分钟测一次，观察各个通道分钟测一次，观察各个通道4小时内吸光度的变化。小时内吸光度的变化。8/25/2024JSCCL XUBIN酶标仪校正程序酶标仪校正程序&精精密密度度评评价价：每每个个通通道道3只只小小杯杯分分别别加加入入200ul高高中中低低3种种不不同同浓浓度度的的甲甲基基橙橙溶溶解解，蒸蒸溜溜水水调调零零，于于490nm作作双双份份平平行行测测定定，每每日日测测二二次次（上上下下午午各各一一次次），连连续续测测定定20天天。分分别别计计算算其其批批内内精精密密度度，日日内内批批精精密密度度,日日间间精精密密度度和和总总精精密密度及相应的度及相应的CV值。值。&线线性性测测定定：用用电电子子天天平平精精确确称称取取甲甲基基橙橙配配制制5个个系系列列的的溶溶液液，于于490nm平平行行测测8次次，取取其其均均值值。计计算算其其回回归归方方程程，相相关关系系数数及及标标准准估估计计误误差差s，并并用用1.96s表表示示样样品品测测量量的的误误差差范范围围.双双波波长长测测定定评评价价：取取一一分分甲甲基基橙橙溶溶液液，分分别别加加入入3种种不不同同浓浓度度的的溶溶血血液液（测测定定波波长长为为490nm，校校正正波波长长为为585nm），先先后后于于8个个通通道道检检测测，每每个个通通道道测测3次次，51比比较较各各组组之之间间是是否否具有统计学差异，以考察双波长消除干扰组分的效果。具有统计学差异，以考察双波长消除干扰组分的效果。&一一般般酶酶标标仪仪无无585nm滤滤光光片片，可可选选用用550nm或或630nm滤滤光光片片。450nm滤光片的检定选用普鲁兰溶液（校正波长为滤光片的检定选用普鲁兰溶液（校正波长为630nm）8/25/2024JSCCL XUBIN全自动酶标仪全自动酶标仪定期校准（年检，维修后）定期校准（年检，维修后）主要参数：加样精度（针间误差），主要参数：加样精度（针间误差），携带污染率（加样和管道），携带污染率（加样和管道），洗板效果，洗板效果，光学系统。光学系统。8/25/2024JSCCL XUBIN8/25/2024JSCCL XUBIN8/25/2024JSCCL XUBIN加样加样应用微量移液器（加样枪加样应用微量移液器（加样枪)按规定的量加入微孔板按规定的量加入微孔板的的1/3处避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产处避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。生气泡。每次加样应更换吸嘴，做到一人一吸头，以免发生交每次加样应更换吸嘴，做到一人一吸头，以免发生交叉污染叉污染;干吸头预先在血清中抽吸三次。干吸头预先在血清中抽吸三次。样本稀释，目的是为了减少非特异性反应，所以一定样本稀释，目的是为了减少非特异性反应，所以一定要先加稀释液后加样本，特别注意加样后要在微量振要先加稀释液后加样本，特别注意加样后要在微量振荡器上振荡荡器上振荡30秒钟，同时注意防止液体溢出。如后面秒钟，同时注意防止液体溢出。如后面操作步骤中加二种以上试剂时均需振荡混匀。操作步骤中加二种以上试剂时均需振荡混匀。如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去第一滴有气如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去第一滴有气泡的试剂后加样。泡的试剂后加样。8/25/2024JSCCL XUBIN温育抗抗原原抗抗体体反反应应需需要要在在一一定定温温度度下下（37C），经经过过一一定的时间才能达到反应的平衡点定的时间才能达到反应的平衡点&ELISA边边缘缘效效应应是是由由温温育育形形成成的的。所所以以温温育育一一般般采采用用能能使使反反应应液液温温度度迅迅速速达达到到平平衡衡的的水水浴浴法法。一一种种放放在在水水浴浴箱箱的的隔隔板板上上，另另一一种种是是放放在在温温箱箱的的湿湿盒盒里里。水水要要浸浸至板条的至板条的1/3处，不可将板条叠加放置。处，不可将板条叠加放置。&边缘效应（2ng/mlHBsAg一步法三种不同温育法的结果） 水浴法 孵箱法 微波法A中央（S） 0.307（0.023） 0.282（0.028） 0.151（0.059） A周围（S） 0.290（0.038） 0.357（0.047） 0.097（0.038） P 0.05 0.01 2.1换算而来，常用于夹心法。换算而来，常用于夹心法。B）C.O=0.5N，从抑止率公式换算而来，从抑止率公式换算而来，常用于竟争，中和法常用于竟争，中和法C）C.O=N+C（C为常数），用于间接法。为常数），用于间接法。D)C.O=CP+N（C为为常常数数），用用于于间间接接法法。此此公公式式最最客客观观，但对生产厂家要求很高，阴阳性对照测定值要基本恒定。但对生产厂家要求很高，阴阳性对照测定值要基本恒定。8/25/2024JSCCL XUBIN报告方式定定量量分分析析用用已已知知量量的的标标准准品品作作一一系系列列稀稀释释，ELISA测测定，绘制标准曲线，结果以绝对量或单位表示。定，绘制标准曲线，结果以绝对量或单位表示。ELISA的的标标准准曲曲线线每每次次都都要要和和待待测测标标本本做做在在同同一一块块板板上。上。现现有有的的ELISA定定量量试试剂剂盒盒标标准准曲曲线线只只有有在在较较窄窄的的浓浓度范围内成直线，要得到精确的结果实属不易。度范围内成直线，要得到精确的结果实属不易。 因此严禁用定性试剂盒做定量分析。8/25/2024JSCCL XUBIN灰区概念灰区概念把把定定量量分分析析的的正正常常值值范范围围引引入入定定性性分分析析建建立立灰灰区区概概念念，即即将将CO值值上上下下的的一一段段区区域域定定为为阳阳性性可可疑疑，需需重重复复实实验验或或换换试试剂剂重重测测以以确确定定其其阴阴阳阳性性，如如仍仍落在灰区范围内则报告落在灰区范围内则报告+（阳性）。（阳性）。灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要。灰区的设置有二种：灰区的设置有二种：1）C.O（1CV），），CV为该试剂的批内为该试剂的批内CV(一般在一般在15-20%间）；间）；2）C.O2s，s为实验室做室内质控为实验室做室内质控ROC的的s。8/25/2024JSCCL XUBIN8/25/2024JSCCL XUBIN确认试验确认试验抗原检测抗原检测中和试验中和试验抗体检测抗体检测RIBA（RecombinantImmunoblotAssay）：）：将病毒的各种抗原单独包被在纤维将病毒的各种抗原单独包被在纤维素膜、尼龙膜等载体上，检测不同抗原的反应素膜、尼龙膜等载体上，检测不同抗原的反应性。性。或或WesternBlot：用十二烷基硫酸钠用十二烷基硫酸钠SDS处理的处理的待检血清经待检血清经SDS-聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶PAGE电泳，电泳，使抗原与抗体分离，将抗原转移到硝酸纤维膜使抗原与抗体分离，将抗原转移到硝酸纤维膜上，加入抗体，再用与酶或同位素标记的二抗上，加入抗体，再用与酶或同位素标记的二抗反应，显色或放射自显影判定结果。反应，显色或放射自显影判定结果。8/25/2024JSCCL XUBIN质量审核型式检查（编号唯一性、项目完整型式检查（编号唯一性、项目完整性、书写完整性）性、书写完整性）仪器检查（状态、校准）仪器检查（状态、校准）试剂检查（效期）试剂检查（效期）质控检查（室内、室间）质控检查（室内、室间）异常值检查（及时与临床联系）异常值检查（及时与临床联系）8/25/2024JSCCL XUBIN8/25/2024JSCCL XUBIN8/25/2024JSCCL XUBINHBsAgHBeAgHBcAb-IgGHBcAg-IgMHBeAbHBsAb临床意义临床意义+急性急性HBV感染早期感染早期HBV复制活跃复制活跃+急慢性急慢性HBV感染，感染，HBV复制活跃复制活跃+急慢性急慢性HBV感染，感染，HBV复制中跃复制中跃+ 急慢性急慢性HBV感染，感染，HBV复制低跃复制低跃异型慢性乙型肝炎异型慢性乙型肝炎+HBV复制停止或极低复制停止或极低+平静的平静的HBV携带状态，携带状态，HbsAg极低测不出，极低测不出，HBsAg/抗抗HBs空白期空白期+HBV既往感染，未产生抗既往感染，未产生抗-HBs+ 抗抗HBs出现前期，出现前期，HBV复制低复制低+HBV感染恢复期感染恢复期+HBV感染恢复期感染恢复期+不同亚型再感染不同亚型再感染+整合整合病后或接种疫苗后获得免疫病后或接种疫苗后获得免疫8/25/2024JSCCL XUBINHBsAgA.急、慢性肝炎的诊断。B.献血员和各种血制品的筛选。C.急性肝炎最早期的预后指标。D.流行病学调查。注意事项注意事项：一、HBsAg假阳性血清分离不佳或肝素抗凝血；二、HBsAg假阴性感染早期易形成抗原抗体复合物，这种情况需要检测抗HBc-IgM及HBVDNA；多数商用试剂盒检测系统采用的为多克隆抗体检测HBsAg的adr、ayw型，S区的点突变即可导致临界测定值或阴性结果； 由于慢性病毒携带者（低水平HBsAg携带者）或HBV感染潜伏期，HBsAg浓度低于检测水平的下限。8/25/2024JSCCL XUBIN抗抗-HBs：A.预预后后：抗HBs经常在肝炎症状出现后4-6个月出现，一般表示病毒清除，感染开始恢复。近年来的研究发现在抗HBs阳性患者体内有5%HBVDNA阳性，慢性肝炎中的一些抗HBs阳性者，肝细胞中可检出HBsAg、HBeAg、HBVDNA，因此尽管自然感染者抗HBs阳转后，大多数预后良好，但也不能过于乐观，应定期复查。B.流行病学调查。流行病学调查。C.疫疫苗苗接接种种对对象象的的筛筛选选和和效效果果观观察察。接种疫苗后，抗HBs浓度超过10IU/L，表明其具有保护性。加强免疫后4-8周，大于100IU/L，即便以后有所降低，其免疫力能维持10年以上。注意事项：注意事项：A 怀疑假阳性结果时要进行中和试验。B抗HBs经常在HBsAg消失几周至几月后方呈阳性（窗期），极少数在HBsAg消失后即为阳性，同时可检出抗同时可检出抗HBs及及HBsAg见于以下几种情形见于以下几种情形：前后或同时感染两种亚型HBV，抗HBs及HBsAg同时检出通常要持续很久，且浓度均很高；抗HBs假阳性；编码HBsAg的基因变异使得HBsAg抗原性改变，原型抗HBs不能将其清除。8/25/2024JSCCL XUBINHBeAg：A.评价血清传染性：慢性HBsAg携带者中，HBeAg及HBV-DNA检测可以用来评估其传染危险性，90%HBeAg阳性HBsAg携带者可以传染给她们的新生儿，而HBeAg阴性或抗HBe阳性的孕妇中只有10%会传染给婴儿。B.预后：急性期HBeAg的消失通常伴随ALT的降低，预示着疾病的好转；HBeAg持续阳性超过12周，提示HBV感染趋向慢性；HBeAg阳性的无症状者较少。注意事项：注意事项：（1）假阴性：前C区基因变异导致不能生成和分泌HBeAg，血清中HBeAg阴性，但这种突变并不影响乙肝病毒的复制，仍可形成完整的病毒颗粒，该种情况下尽管检测不到HBeAg，慢性HBV感染炎症反应也相当强。HOOK 效应 （2）假阳性： 包被抗体不纯（含有抗C）8/25/2024JSCCL XUBIN电化学发光HBeAg检测的高线性8/25/2024JSCCL XUBIN抗抗-HBe：A、反映血清感染性：通常情况下HBsAg（+）、抗HBe（+）病例的传染性较低；B、监视急性和慢性HBV感染：血清HBeAg消失、抗HBe出现对监视急慢性HBV感染很有诊断价值，特别是抗HBe出现更有预见价值，在干扰素治疗中出现表明疾病状况的改善；C、预后：抗HBe阳转出现在HBeAg阴转后早期（2周内），可能预示急性肝炎恢复顺利；如出现在晚期（HBeAg阴转后6周以上）或不出现抗HBe，可能发展为慢性肝炎。注意事项：注意事项：抗HBe不宜作流行病学调查，因为其阳性率远远低于抗HBc，且实际上抗HBe阳性者抗HBc往往也呈阳性。HBeAg和抗HBe测定一般适用于HBsAg阳性者，几乎所有急性感染者均出现HBeAg或抗HBe阳性，偶尔两者同时阳性，只有少数HBsAg携带者（通常其浓度较低），HBeAg和抗HBe均阴性。 8/25/2024JSCCL XUBIN乙肝抗原/抗体检测的血清转型(Seroconversion)8/25/2024JSCCL XUBIN抗抗-HBc：A、诊断急慢性HBV感染：急性HBV感染时抗HBc的滴度平均为1:500-1:1000，健康携带者的滴度一般为1:10，慢性HBV感染者一般为1:100，HBsAg(-)若抗HBc滴度很高提示为慢性HBV感染（隐匿性感染）。B、调查特定人群HBV感染的流行率或危险性；该指标在感染后可持续存在几年至几十年，因此很适合调查感染的流行率性。C、验证抗HBs及HBsAg阳性结果。注意事项：注意事项：A、 临界阳性一般是假阳性，是由于临界阳性一般是假阳性，是由于IgM型引起的交叉反应。型引起的交叉反应。B、抗抗HBc阴阴性性而而HBsAg阳阳性性一一般般发发生生在在免免疫疫缺缺陷陷病病例例，这这时时存存在在HBV复复制制的的其他标志如其他标志如HBeAg及高滴度的及高滴度的HBVDNA。C、对抗对抗HBc单独阳性，排除假阳性后，美国单独阳性，排除假阳性后，美国CDC有以下解释：有以下解释：急急性性感感染染后后的的恢恢复复早早期期（窗窗期期）在在HBV急急性性感感染染消消退退时时，HBsAg减减少少甚甚至至消消失失，抗抗HBs尚尚未未出出现现，抗抗HBc是是唯唯一一能能检检出出的的特特异异性性指指标标，此此时时抗抗HBcIgM也也为阳性。为阳性。被被动动转转移移：HBsAg携携带带者者母母亲亲所所生生的的婴婴儿儿可可因因母母体体抗抗体体被被动动转转移移（抗抗HBc可通过胎盘）而呈现抗可通过胎盘）而呈现抗HBc单独阳性。单独阳性。 远远期期感感染染伴伴抗抗HBs消消失失，这这种种情情况况通通常常在在感感染染后后多多年年才才会会发发生生，且且相相当当少少见（见（0.5%）。）。远期感染伴有低水平远期感染伴有低水平HBsAg。HDV重复感染继发重复感染继发HBsAg产生下降产生下降8/25/2024JSCCL XUBIN8/25/2024JSCCL XUBIN