第第2020章章 药品的微生物学控制药品的微生物学控制第一节第一节 药物中微生物的来源药物中微生物的来源 1 1 来自空气中的微生物来自空气中的微生物 2 2 来自水中的微生物来自水中的微生物 3 3 其他来源其他来源药品微生物污染的途径药品微生物污染的途径原辅料原辅料生产环境：空气生产环境：空气水：药品配置、容器洗涤水：药品配置、容器洗涤操作人员：最大污染源操作人员：最大污染源设备容器及包装材料设备容器及包装材料第二节第二节 微生物引起的药物变质微生物引起的药物变质l药品成分药品成分营养丰富：葡萄糖注射液、糖浆、人参、血浆等。营养丰富：葡萄糖注射液、糖浆、人参、血浆等。微生物代谢产物为原料，极易污染：氨基酸、酶类微生物代谢产物为原料，极易污染：氨基酸、酶类制剂。制剂。金属离子促进微生物生长：金属离子促进微生物生长：K+K+、Na+Na+、Ca2+Ca2+、Mg2+Mg2+。lpHpH值和渗透压：适合微生物生长。含水量值和渗透压：适合微生物生长。含水量; ; 抑抑菌、杀菌作用菌、杀菌作用 一、药物变质的判断一、药物变质的判断 1.1.有病原微生物存在有病原微生物存在 2.2.微生物毒性代谢产物存在微生物毒性代谢产物存在 3.3.产品有可见的物理或化学变化产品有可见的物理或化学变化 4.4.微生物总数超标微生物总数超标 5.5.无菌制剂中有微生物的存在无菌制剂中有微生物的存在二、药物变质的外在表现二、药物变质的外在表现气味气味色素色素, ,沉淀沉淀粘稠丝粘稠丝团块团块PHPH膨胀膨胀第第3 3节节 药物制剂的微生物学检查药物制剂的微生物学检查 20102010版版 中国药典中国药典第一节第一节 无菌制剂无菌制剂的的无菌检查无菌检查 一、无菌检查的基本原则一、无菌检查的基本原则 无菌检查是检查要求无菌的药品无菌检查是检查要求无菌的药品. .医疗器具医疗器具. .原料原料. .辅辅料料. .以及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方以及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。法。符合无菌检查法的规定仅表明了供试品在该检验条件符合无菌检查法的规定仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。下未发现细菌和真菌污染。二、无菌检查的基本方法二、无菌检查的基本方法（一）一般药品的无菌检查（一）一般药品的无菌检查 直接接种法直接接种法 以金黄色葡萄球菌、生孢梭状芽孢杆菌、白以金黄色葡萄球菌、生孢梭状芽孢杆菌、白色念珠菌为需氧菌、厌氧菌、真菌的阳性对照。色念珠菌为需氧菌、厌氧菌、真菌的阳性对照。 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(S. aureus)CMCC(B) 26003(S. aureus)CMCC(B) 26003 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌(2005)/(2005)/大肠杆菌（大肠杆菌（20102010） 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌（2010） 生孢梭菌生孢梭菌(C. sporogenes) CMCC(B) 64941(C. sporogenes) CMCC(B) 64941 白色念珠菌白色念珠菌(C. albicans) CMCC(F) 98001(C. albicans) CMCC(F) 98001 黑曲霉黑曲霉(A. niger) CMCC(F) 98003(A. niger) CMCC(F) 98003菌种保藏管理中心及机构：菌种保藏管理中心及机构：中国医学微生物菌种保藏管理中心（中国医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）美国标准菌种收藏所（美国标准菌种收藏所（ATCC）(B)代表细菌（代表细菌（Bacteria）(F)代表真菌（代表真菌（Fungi）（二）特殊药品的无菌检查（二）特殊药品的无菌检查1 1 油类药物的无菌检查油类药物的无菌检查 Tween-80Tween-802 2 抗菌药物或含防腐剂药物的无菌检查抗菌药物或含防腐剂药物的无菌检查（1 1）加入灭活剂）加入灭活剂（2 2）微孔滤膜法（）微孔滤膜法（不超过不超过1000ml1000ml) )（3 3）稀释法）稀释法（4 4）离心沉淀法）离心沉淀法第二节第二节 口服药及外用药物的微生物学检查口服药及外用药物的微生物学检查 限制性控制微生物数量和种类限制性控制微生物数量和种类药品微生物药品微生物限度标准限度标准（一）制定标准的原则（一）制定标准的原则使用要求：各种药品的使用方法、部位和使用对象均不使用要求：各种药品的使用方法、部位和使用对象均不相同，有注射和口服的药物，有成人用和小孩用等等区相同，有注射和口服的药物，有成人用和小孩用等等区别，对染菌限制也相应不同。别，对染菌限制也相应不同。原料性质：化学原料、植物原料和动物原料等，原料性质：化学原料、植物原料和动物原料等，加营养成分和含杀菌剂的化妆品，染菌差别大。加营养成分和含杀菌剂的化妆品，染菌差别大。生产条件：设备条件、工人素质、技术水平，生产条件：设备条件、工人素质、技术水平，产品质量不一。产品质量不一。剂型类别：液体剂型，中成药制剂和化学制剂，剂型类别：液体剂型，中成药制剂和化学制剂，染菌机会和程度均有不同。染菌机会和程度均有不同。制制 剂剂活菌数及控制菌标准活菌数及控制菌标准注射用制剂，眼科用制剂，用注射用制剂，眼科用制剂，用于正常无菌体腔、严重烧伤和于正常无菌体腔、严重烧伤和溃疡面的制剂溃疡面的制剂1g(ml)制剂中制剂中不得含有活菌不得含有活菌用于局部和受伤皮肤的制剂，用于局部和受伤皮肤的制剂，供耳、鼻、喉等用的制剂供耳、鼻、喉等用的制剂1g(ml)制剂中制剂中活菌数活菌数不超过不超过100，不不得含有得含有肠杆菌科细菌、绿脓杆菌、金肠杆菌科细菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌黄色葡萄球菌其他制剂其他制剂1g(ml)制剂中制剂中活菌数活菌数不超过不超过1000，不不得含有得含有肠杆菌科细菌、绿脓杆菌、金肠杆菌科细菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌，黄色葡萄球菌， 1g(ml)制剂中活的制剂中活的真菌真菌（霉菌、酵母）数不超过（霉菌、酵母）数不超过100WHOWHO对药品的染菌限度标准对药品的染菌限度标准检验原则检验原则维持样品的维持样品的污染原状污染原状去除残留防腐剂去除残留防腐剂或抑菌剂或抑菌剂样品应有样品应有代表性代表性符合规定符合规定检验条件检验条件维持样品的污染原状维持样品的污染原状v为真实反映产品在出厂时本身所受的污染程为真实反映产品在出厂时本身所受的污染程度，在检验之前必须去除影响染菌量发生变度，在检验之前必须去除影响染菌量发生变化的各种因素。化的各种因素。v样品必须样品必须保持原有的封闭状态保持原有的封闭状态，不得任意，不得任意启开，如发现有包装破裂、霉变、变色、异启开，如发现有包装破裂、霉变、变色、异味等不再进行检验。样品应保存在阴凉干燥味等不再进行检验。样品应保存在阴凉干燥处。处。去除残留防腐剂或抑菌剂去除残留防腐剂或抑菌剂v某些药品中加入防腐剂或抑菌成份，各种待某些药品中加入防腐剂或抑菌成份，各种待检菌处于受抑制状态而不易检出，必须创造检菌处于受抑制状态而不易检出，必须创造条件使其复苏，利于检出条件使其复苏，利于检出。v药品检验中多采用稀释法、沉降法、离心沉药品检验中多采用稀释法、沉降法、离心沉淀法、活性剂法、离子交换树脂法等淀法、活性剂法、离子交换树脂法等。v每批样品应从每批样品应从两个两个以上大包装单位中中随机以上大包装单位中中随机抽取抽取4 4瓶瓶（盒）包装单位，检验时应从（盒）包装单位，检验时应从两瓶两瓶（盒）以上的样品中共取（盒）以上的样品中共取10g(ml)10g(ml)。样品应有代表性样品应有代表性v药品可以受多种微生物污染，可以同时有细药品可以受多种微生物污染，可以同时有细菌、霉菌、酵母菌等，检验条件有差异菌、霉菌、酵母菌等，检验条件有差异。符合规定检验条件符合规定检验条件一、一、细菌总数细菌总数的测定的测定 了解被检药品在单位重量或体积内所了解被检药品在单位重量或体积内所含有的活菌数，含有的活菌数， 以判断供试药物被细菌污染的程度。以判断供试药物被细菌污染的程度。二、二、霉菌和酵母菌总数霉菌和酵母菌总数的测定的测定三、控制菌的检验三、控制菌的检验控制菌的检验原则：控制菌的形态和培养特控制菌的检验原则：控制菌的形态和培养特征的观察是鉴别的基本要求。征的观察是鉴别的基本要求。一般检测程序一般检测程序：药物的准备或预处理：药物的准备或预处理增菌培养增菌培养 分离培养分离培养 纯培养纯培养 染色镜检染色镜检 生化试验、血清学试验、动物试验生化试验、血清学试验、动物试验 结果判断结果判断1.1.大肠埃希菌：大肠埃希菌：口服药的常规必检口服药的常规必检项目之一。项目之一。u（1 1）形态与染色）形态与染色u（2 2）分离培养）分离培养 大肠埃希菌（大肠埃希菌（TTCTTC染色）染色）u（3 3）生化反应）生化反应 在环境卫生和食品在环境卫生和食品 卫生学中，常用作被卫生学中，常用作被 粪便污染粪便污染的检测指标。的检测指标。 作为革兰阴性菌的作为革兰阴性菌的 代表代表2.2.沙门菌：沙门菌：口服药的必检口服药的必检项目。项目。3.3.铜绿色假单胞菌：铜绿色假单胞菌：眼科制剂和外用眼科制剂和外用药药4.4.金黄色葡萄球菌：金黄色葡萄球菌：眼科制剂和外用药眼科制剂和外用药5.5.破伤风梭菌：用于破伤风梭菌：用于深部组织深部组织、创伤、和溃疡面、创伤、和溃疡面 的外用制剂的外用制剂四、活螨的检验：四、活螨的检验： 口服药和外用药口服药和外用药体螨体螨尘螨尘螨恙螨恙螨包括注射剂、输液剂及用于无菌体腔、烧包括注射剂、输液剂及用于无菌体腔、烧伤、眼科外伤用药等制剂。伤、眼科外伤用药等制剂。1.1.规定灭菌药物规定灭菌药物应应达到无菌要求达到无菌要求。生产过程除菌不彻底、包装不严、瓶塞松生产过程除菌不彻底、包装不严、瓶塞松动、安瓿漏气造成微生物污染。动、安瓿漏气造成微生物污染。总结总结在输液或注射液中出现浑浊、沉淀、云雾在输液或注射液中出现浑浊、沉淀、云雾状改变或产气现象，要坚决放弃使用。状改变或产气现象，要坚决放弃使用。污染菌以污染菌以G G- - - -多见，如大肠杆菌、产气杆菌。多见，如大肠杆菌、产气杆菌。包括各种口服药剂、外用制剂和消毒剂与抗生包括各种口服药剂、外用制剂和消毒剂与抗生素制剂，对这类药物没有无菌要求，但对污染素制剂，对这类药物没有无菌要求，但对污染菌的数量和种类有相应卫生标准。菌的数量和种类有相应卫生标准。 2.2.非规定灭菌药物非规定灭菌药物口服药剂：有固形剂和液形剂。固形剂包括粉、口服药剂：有固形剂和液形剂。固形剂包括粉、片、颗粒、丸、胶囊等制剂，由于含水量较低，片、颗粒、丸、胶囊等制剂，由于含水量较低，较少受到微生物污染，尤其是合成药物在制造过较少受到微生物污染，尤其是合成药物在制造过程中经加热、酸、碱处理，含有的活菌数极低，程中经加热、酸、碱处理，含有的活菌数极低，每克在每克在1010个以下个以下，多的也，多的也不超过不超过10001000个个。液形剂包括各种乳剂、糖浆、饮剂等，较易液形剂包括各种乳剂、糖浆、饮剂等，较易受到微生物的污染，尤其是真菌的污染，常受到微生物的污染，尤其是真菌的污染，常可以检出酵母菌、青霉菌、黑曲霉菌等。可以检出酵母菌、青霉菌、黑曲霉菌等。外用药剂：包括外用的粉剂、液剂、软膏剂等，外用药剂：包括外用的粉剂、液剂、软膏剂等，多用于皮肤与黏膜，如一般滴眼剂、眼膏、耳鼻多用于皮肤与黏膜，如一般滴眼剂、眼膏、耳鼻喉科用药、新生儿脐部、妇产科用药。经常应用喉科用药、新生儿脐部、妇产科用药。经常应用于人体高危险区，对微生物的污染应特别注意。于人体高危险区，对微生物的污染应特别注意。滴眼剂滴眼剂的的pHpH及其渗透压近似于泪液，微生物及其渗透压近似于泪液，微生物在其中容易发育，因而在保持和使用过程常在其中容易发育，因而在保持和使用过程常存在被污染的危险。主要是绿脓杆菌污染。存在被污染的危险。主要是绿脓杆菌污染。消毒剂、抗生素制剂：有较强的抑菌、杀菌作消毒剂、抗生素制剂：有较强的抑菌、杀菌作用。但也有因所用的洗涤剂被污染而引起感染；用。但也有因所用的洗涤剂被污染而引起感染；六氯酚、洗必泰、酚等一般消毒剂也有被六氯酚、洗必泰、酚等一般消毒剂也有被G-G-杆杆菌污染的报道。可能与使用方法有关系。菌污染的报道。可能与使用方法有关系。评价药品的一般污染时采用评价药品的一般污染时采用活菌数活菌数（细菌总数）（细菌总数）（每克或每毫升药品、化妆品中活菌数量而不（每克或每毫升药品、化妆品中活菌数量而不考虑其种类）表示。考虑其种类）表示。另一方面可以推测致病微生物存在的可能性。另一方面可以推测致病微生物存在的可能性。基本上呈现基本上呈现正相关正相关。药品微生物污染的指示菌药品微生物污染的指示菌评价药品微生物污染的指标菌是评价药品微生物污染的指标菌是E.coli，来源于人和，来源于人和温血动物的温血动物的粪便粪便，检出该菌说明产品已被粪便污染，检出该菌说明产品已被粪便污染，有可能存在其他肠道致病菌或寄生虫等病原体的危有可能存在其他肠道致病菌或寄生虫等病原体的危险。险。评价药品微生物污染的控制菌是评价药品微生物污染的控制菌是不得检出的特不得检出的特定微生物定微生物。各国选定的控制菌不完全一致。各国选定的控制菌不完全一致。药品微生物污染的控制菌药品微生物污染的控制菌我国药品控制菌：粪大肠菌群、绿脓杆菌、金我国药品控制菌：粪大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、破伤风杆菌、活螨。黄色葡萄球菌、沙门氏菌、破伤风杆菌、活螨。