LOGO植物生理学实验植物生理学实验实验五实验五 丙二醛含量测定丙二醛含量测定实验原理实验原理u植物在衰老或逆境下遭受植物在衰老或逆境下遭受伤害害，在，在活性氧活性氧积累累诱发下发下发生生膜脂膜脂过氧化作用，氧化作用，产生生丙二丙二醛、二、二烯轭合物、脂合物、脂类过氧化物、乙氧化物、乙烷等。其中丙二等。其中丙二醛（MDA）是膜脂）是膜脂过氧化氧化最重要的最重要的产物之一，物之一，通常利用它作为通常利用它作为膜脂膜脂过氧化氧化指标，指标，因此可通因此可通过测定定MDA了解膜脂了解膜脂过氧化的程度，以氧化的程度，以间接接测定膜系定膜系统受受损程度以及植物的程度以及植物的对逆境条件反应的强弱对逆境条件反应的强弱。实验原理实验原理u丙二丙二醛在高温及酸性在高温及酸性环境下可与境下可与2-硫代巴比妥酸硫代巴比妥酸（TBA）反）反应产生生红棕色的三甲棕色的三甲基复合物（基复合物（3,5,5-三甲基三甲基恶唑2,4-二二酮），该物物质的吸光系数为的吸光系数为155mmol/(Lcm)，在在532 nm处有有最大最大吸收峰，吸收峰，并且在并且在600nm处有有最最小光吸收小光吸收。硫代巴比妥酸丙二醛3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川）实验原理实验原理u可溶性糖可溶性糖对此反此反应有干有干扰，为消除这种干扰可使用以下为消除这种干扰可使用以下公式公式算出算出MDA浓度（浓度（mol/L），并进一步算出单位），并进一步算出单位质量组织中质量组织中MDA含量（含量（mol/g）。）。 C（mol/L）=6.45（A532-A600）-0.56A450 uA450、A532和和A600分别表示在三种波长处的吸光度值分别表示在三种波长处的吸光度值实验目的；实验材料、仪器设备与试剂实验目的；实验材料、仪器设备与试剂u目的：目的：学学习和掌握丙二和掌握丙二醛法法测定植物叶片中定植物叶片中过氧化脂氧化脂质含量的原理和方法。含量的原理和方法。u仪器器 分光光度分光光度计、离心机、电炉、离心机、电炉； 研钵、研钵、天平天平、试管架管架、离心管、移液管、滤纸等。、离心管、移液管、滤纸等。u试剂 5%三氯乙酸（三氯乙酸（TCA）；0.67%硫代巴比妥酸（用硫代巴比妥酸（用10%TCA配制）；石英砂。配制）；石英砂。u材料材料：白兰叶片：白兰叶片实验步骤实验步骤1. 取取0.5g叶片材料，加叶片材料，加2mL5%TCA研磨后将匀浆转入离研磨后将匀浆转入离心管，再用心管，再用3mL5%TCA洗涤研钵后转入离心管。将匀洗涤研钵后转入离心管。将匀浆在浆在3000r/min下离心下离心10min。2. 取上清液取上清液2mL，加，加0.67%TBA2mL，混合后在，混合后在100水水浴上煮沸浴上煮沸30min，冷却后再离心一次。，冷却后再离心一次。3. 分别测定上清液在分别测定上清液在450nm，532nm和和600nm处的吸光处的吸光度值（度值（以以0.67 %硫代巴比妥酸溶液硫代巴比妥酸溶液为空白空白），按公式），按公式计算计算MDA浓度浓度注意事项注意事项u反应之后浓度改变反应之后浓度改变u离心时要注意配平问题离心时要注意配平问题u如待如待测液液浑浊，可适当增加离心力及，可适当增加离心力及时间作业与思考题作业与思考题u得出得出实验结果后，果后，代入公式计代入公式计算出算出MDA在单位在单位重量材料中的含重量材料中的含量，写于量，写于实验报告上告上。【之前。【之前问题】问题】u思考题：第二次离心起什么作用？思考题：第二次离心起什么作用？