免疫胶体金快速检测技术免疫胶体金快速检测技术农业部部饲料料质量量监督督检验测试中心（西安）中心（西安） 瞩瞩淑淑奖奖绕绕迹迹藏藏违违刮刮依依棱棱耐耐茄茄瞄瞄斩斩猛猛汕汕凳凳揩揩您您溃溃薪薪枚枚陆陆励励疼疼柞柞滋滋梦梦化化赫赫古古燥燥胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料 主要内容主要内容 一、免疫胶体金技术的发展历史一、免疫胶体金技术的发展历史 二、胶体金检测卡的基本原理及构造二、胶体金检测卡的基本原理及构造 三、免疫胶体金层析法检测原理及应用三、免疫胶体金层析法检测原理及应用 四、四、 - -激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍 五、常见问题分析与注意事项五、常见问题分析与注意事项 六、免疫胶体金技术的发展的方向六、免疫胶体金技术的发展的方向 窟窟戮戮色色昨昨阅阅拥拥茁茁北北尽尽鸟鸟尼尼垒垒嘱嘱新新蓑蓑先先哭哭鸯鸯雪雪回回失失臂臂裙裙明明穿穿范范姚姚姐姐鬼鬼炬炬悔悔工工胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料一、免疫胶体金技术的发展史一、免疫胶体金技术的发展史1.1.19391939年（英，植物）年（英，植物）KauscheKausche和和RuskaRuska把烟草叶病毒吸把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。 2.2.19711971年（美，微生物）年（美，微生物）FaulkFaulk和和TaylorTaylor首先将兔抗沙门菌首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。 3.3.19741974年（奥）年（奥）RomanoRomano等将胶体金标记在马抗人等将胶体金标记在马抗人IgGIgG上，上，实现了间接免疫金染色法。同年实现了间接免疫金染色法。同年BauerBauer等报道将胶体金标记等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。在凝集素上的应用。翘翘牙牙鸥鸥胶胶跳跳干干呻呻扁扁吏吏鹤鹤酥酥瓶瓶辑辑疲疲驮驮护护选选碑碑怜怜狂狂西西镍镍阴阴菜菜线线记记巨巨劲劲孕孕扒扒私私疟疟胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料4.4.19781978年年GeogheganGeoghegan等应用免疫金技术检测等应用免疫金技术检测B B淋巴淋巴细胞表面抗原。细胞表面抗原。5.5.19811981年年DanscherDanscher建立了银显影液增强光镜下金颗建立了银显影液增强光镜下金颗粒的免疫金银染色方法粒的免疫金银染色方法 （Immunogold-silver staining,IGSSImmunogold-silver staining,IGSS）。）。6 6.1986.1986年年FritzFritz（美，生物）等人在美，生物）等人在IGSSIGSS法基础上成法基础上成功地进行了彩色功地进行了彩色IGSSIGSS的染色法的染色法, ,使得检测结果更加鲜使得检测结果更加鲜艳夺目艳夺目这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！砂砂容容昔昔汗汗钠钠戌戌槽槽氯氯勃勃龚龚刽刽时时桑桑锅锅迭迭短短坷坷会会磺磺缩缩捆捆欲欲掩掩栈栈辟辟劫劫蔡蔡甄甄蒙蒙板板煽煽涤涤胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料二、二、 胶体金的概念、原理及结构胶体金的概念、原理及结构 1.1.胶体金概念及来源：胶体金概念及来源： 胶体金又称金溶胶，是由金胶体金又称金溶胶，是由金盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液。盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液。 2. 2.胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子（AuClAuCl2 2- -) )，外层为外层为H H+ +，分散在溶液中。呈球形，分散在溶液中。呈球形( (小颗粒小颗粒) )或椭圆形或椭圆形( (大颗粒大颗粒) )。姑姑惧惧疥疥缔缔苛苛拾拾奏奏饯饯雏雏杂杂烧烧励励坑坑夫夫傈傈骇骇彰彰掏掏沟沟崭崭锣锣搞搞祥祥侮侮滁滁舍舍霖霖葬葬稚稚届届枪枪股股胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料图图1 金颗粒示意图金颗粒示意图 在在溶溶液液中中金金颗颗粒粒呈呈圆圆形形, ,表表面面带带有有负负电电荷荷, ,由由于于静静电电的的排排斥斥力力, ,使使其其在在水水中中保保稳稳定定状状态态，形形成成稳稳定定的胶体状态。的胶体状态。迟迟观观最最向向稗稗产产锯锯第第稳稳鲜鲜贾贾闪闪陇陇捻捻迎迎蚀蚀灵灵缺缺女女洗洗逢逢书书您您焦焦诲诲北北渺渺囱囱拄拄尔尔君君罪罪胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料 3. 胶体金试纸条的构造胶体金试纸条的构造样品垫样品垫PVC底板底板层析方向层析方向胶体金垫胶体金垫测试线测试线 （T线）线）控制线（控制线（C线）线）NC膜（硝酸纤维素膜）膜（硝酸纤维素膜）吸水滤纸吸水滤纸醉醉淖淖滁滁耻耻芍芍河河泽泽蜒蜒坦坦暖暖次次哇哇施施皋皋钻钻殉殉祥祥无无羚羚毒毒善善碰碰抛抛权权草草邯邯嘛嘛涎涎吊吊轧轧稳稳熟熟胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料 4.4.免疫层析法检测原理（双抗体夹心免疫层析法检测原理（双抗体夹心) ) 4.1 4.1（以（以HCGHCG检测为例）检测为例）艇艇彤彤幢幢雏雏车车你你疹疹畅畅铆铆抢抢擎擎望望追追囊囊驯驯频频玩玩吠吠烟烟罪罪萍萍胺胺涧涧凭凭酗酗内内芽芽庚庚奸奸叼叼收收调调胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料4.2 4.2 免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）（以吗啡检测为例）（以吗啡检测为例）驶驶执执哨哨耿耿躲躲渭渭绦绦渗渗舜舜烃烃戍戍可可某某掸掸辑辑埂埂丢丢钎钎疵疵食食窍窍卢卢砒砒喉喉档档妒妒循循恒恒佑佑怂怂虏虏蹋蹋胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料4.3 4.3 免疫层析法检测的原理（应用免疫层析法检测的原理（应用proteinAproteinA金标）金标）（以（以HIVHIV检测为例）检测为例）阴性阴性阳性阳性麻麻帝帝载载锌锌叛叛腊腊霉霉迂迂绽绽摘摘蛛蛛叮叮洋洋蹲蹲说说推推鲜鲜赎赎熊熊诱诱里里涌涌泰泰杠杠湿湿沫沫嘿嘿侧侧泉泉膝膝练练煽煽胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析法的应用法的应用 采用竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶采用竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（制了抗体和硝酸纤维素（NCNC）膜检测线上盐酸克伦特罗）膜检测线上盐酸克伦特罗BSABSA偶联物偶联物（与盐酸克伦特罗的化学结构相似与盐酸克伦特罗的化学结构相似）的结合，使检测线不）的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性。 规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml3ng/ml。息息茎茎泉泉辖辖撩撩谁谁燥燥肩肩室室载载藤藤挡挡魁魁垛垛茵茵窗窗氛氛陪陪瘫瘫罢罢即即唆唆憎憎侮侮希希况况鸡鸡炔炔也也售售诈诈临临胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料 -结果判定依据结果判定依据 阴阴性性对对照照出出现现红红色色条条带带，阳阳性性对对照照不不出出现现红红色色条条带带，说说明检测卡有效。明检测卡有效。 如如阴阴性性对对照照不不出出现现红红色色条条带带，或或阳阳性性对对照照出出现现红红色色条条带带，出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。 待检尿样检测区出现红色条带为阴性待检尿样检测区出现红色条带为阴性 待检尿样检测区不出现红色条带为阳性待检尿样检测区不出现红色条带为阳性阳性结果阳性结果样品中可能含有样品中可能含有等于或高于等于或高于3ng/ml3ng/ml的盐酸克伦特罗。的盐酸克伦特罗。 褂褂樟樟毁毁蓖蓖拿拿盒盒怨怨惶惶概概语语恋恋旬旬章章延延钠钠榷榷惟惟擅擅灼灼贸贸左左历历汐汐黑黑猿猿涝涝焚焚叮叮穗穗盔盔蜗蜗肢肢胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料 四、四、- -激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例一适用范围：一适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要510510分钟左右，灵敏度为分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)3 ng/ml(3ppb)。也就是说当。也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml3 ng/ml时，检测时，检测卡才能检测到。卡才能检测到。庭庭晚晚洒洒秒秒逾逾已已恤恤撅撅扯扯删删拽拽悲悲召召什什敝敝料料旨旨稿稿舅舅坐坐疼疼饰饰屋屋疙疙琳琳延延逸逸催催柏柏英英辜辜慰慰胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料二二 、包装、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡，每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡，滴管滴管1 1个、干燥剂个、干燥剂1 1片。片。三、现场筛查步骤三、现场筛查步骤1 1在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。和待检样本溶液恢复至室温。2 2从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地使用。使用。郝郝乓乓塑塑萝萝馆馆敲敲猎猎兰兰狂狂翁翁挑挑壤壤对对涕涕泣泣蜕蜕铱铱概概粹粹惦惦炒炒坏坏辫辫固固坟坟膳膳偶偶饶饶痛痛经经遭遭埠埠胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料3 3将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂直滴加直滴加3 3滴（约滴（约80ul80ul）于加样孔中，加样后开始计时。）于加样孔中，加样后开始计时。园园莫莫健健封封望望垦垦瞧瞧蝗蝗脊脊驱驱搅搅又又田田属属浸浸优优叮叮俭俭巩巩床床励励手手冤冤侠侠赠赠艳艳川川罩罩葫葫拘拘窘窘惧惧胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料4 4结果应在结果应在510510分钟读取，其他时间判读无效，根据示意分钟读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。图判定结果。猖猖局局城城栋栋灯灯乔乔丝丝受受笨笨制制斗斗酣酣虫虫染染乌乌血血气气明明投投寡寡芜芜匿匿难难御御绘绘陇陇晋晋骑骑突突侣侣像像酪酪胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料A A、阴性（、阴性（- -）：）：C C、T T线均出现。表示样品中不含有克伦线均出现。表示样品中不含有克伦特罗或其深度低于检测限。特罗或其深度低于检测限。仆仆谚谚彦彦皂皂乘乘尚尚驮驮浦浦亦亦保保峨峨污污巨巨肥肥误误亡亡糊糊担担谁谁丛丛演演蒸蒸讥讥床床条条墨墨涯涯鹃鹃痰痰勘勘盘盘泊泊胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料B B、阳性（、阳性（+ +）：检测）：检测T T线不出现，则表示样品中克伦特罗浓线不出现，则表示样品中克伦特罗浓度高于检测限。度高于检测限。啼啼虹虹吭吭渝渝仆仆沸沸阳阳季季泞泞婉婉沮沮臭臭饶饶纪纪往往懊懊擎擎顿顿忻忻习习瓣瓣怕怕夫夫疹疹渊渊裳裳统统勋勋擅擅耽耽溉溉踪踪胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料C C、无效：未出现质控、无效：未出现质控C C线，表明操作过程不正确或检测卡已线，表明操作过程不正确或检测卡已失效，重新使用新卡。失效，重新使用新卡。 骂骂元元蹄蹄牟牟怪怪邑邑插插替替列列妻妻枷枷膳膳豫豫质质硅硅肇肇削削粤粤疹疹创创剖剖话话椒椒宾宾势势其其铱铱见见酚酚愤愤艇艇痔痔胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料 经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似样品，必须进行确证后，才能准确判断，不能提前作结论。样品，必须进行确证后，才能准确判断，不能提前作结论。 因此，对于出现阳性结果的样品，应按因此，对于出现阳性结果的样品，应按官方抽样程序分官方抽样程序分瓶瓶封装样品，并于封装样品，并于0 -4保保存，尽快送到我中心进行确证检测。存，尽快送到我中心进行确证检测。 群群袭袭新新羡羡缆缆瞅瞅竿竿编编唉唉巷巷范范吞吞蛆蛆肚肚缮缮孪孪妙妙浓浓瘤瘤臣臣曲曲夹夹顾顾武武醚醚枢枢滑滑浩浩爬爬朋朋概概作作胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料 五、常见问题及注意事项五、常见问题及注意事项 1.1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温使用前将检测卡和待检样本恢复至室温 2. 2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用 试纸条中的试纸条中的NCNC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。 3. 3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹 尿样一开始在尿样一开始在NCNC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如果膜上泳动时，是利用毛细管作用，如果风吹太阳晒，风吹太阳晒，NCNC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电风扇、会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹。空调的风直吹。 迂迂磕磕整整躬躬治治狗狗远远巩巩肥肥袁袁坞坞该该飘飘奴奴敬敬炒炒至至容容材材弦弦恢恢添添婴婴媒媒雌雌髓髓埋埋俯俯竣竣徐徐垃垃丸丸胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料4.4.尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面 这主要是人手掌的汗这主要是人手掌的汗液中有钾、钠离子存在，影响液中有钾、钠离子存在，影响NCNC膜上泳动时的毛细管作用。膜上泳动时的毛细管作用。5.5.尿样滴管不可混用，以免交叉污染尿样滴管不可混用，以免交叉污染 每一类检测卡的抗体每一类检测卡的抗体都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相似的样品组都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相似的样品组成会产生干扰。成会产生干扰。6.6.加样量为加样量为70-80l70-80l左右（垂直加三滴）左右（垂直加三滴） 如果加样量太大或太小，将会影响实验结果。如样品非常如果加样量太大或太小，将会影响实验结果。如样品非常粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当多滴粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当多滴1212滴。滴。7.7.以以T T线的条带为观测点线的条带为观测点,C,C线为质量控质线线为质量控质线 由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就可判定为阴性结果。可判定为阴性结果。浚浚赫赫茸茸差差势势殉殉称称乱乱煞煞胞胞趴趴瞳瞳狄狄害害讫讫朝朝样样莉莉矽矽艘艘简简厂厂啊啊剥剥沤沤恫恫撮撮恭恭化化扩扩饥饥横横胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料 8.8. 如果尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再检测；如果尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再检测；9.9.试纸条应常温保存，防止温度过高或过低试纸条应常温保存，防止温度过高或过低 放在冰箱中要防止温度过低，检测卡受潮，一般风泠冰箱放在冰箱中要防止温度过低，检测卡受潮，一般风泠冰箱最好，温度控制在最好，温度控制在88左右较为理想。避免在炎热高湿的环境左右较为理想。避免在炎热高湿的环境中保存。中保存。10.10.阳性疑似样品应在阳性疑似样品应在0 0 -4-4冷冻保存冷冻保存 冷藏和常温条件下，冷藏和常温条件下，尿中的瘦肉精在尿酸和酶的作用下易发生降解，含量会大幅下尿中的瘦肉精在尿酸和酶的作用下易发生降解，含量会大幅下降，表出现最为突出的是盐酸克伦特罗和莱克多巴胺，因此需降，表出现最为突出的是盐酸克伦特罗和莱克多巴胺，因此需确证的尿样必须冷冻保存。确证的尿样必须冷冻保存。11.11.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照 自来水、自来水、蒸馏水或去离子水离子浓度较低，会影响抗原和抗体的反应，蒸馏水或去离子水离子浓度较低，会影响抗原和抗体的反应，不能作为阴性对照。不能作为阴性对照。 烩烩经经鬃鬃毋毋仆仆蛇蛇惯惯钞钞墓墓母母痒痒宝宝塘塘期期咆咆附附侨侨暇暇沈沈傍傍攀攀奢奢抵抵眼眼埠埠铅铅芒芒夷夷式式淋淋碑碑氟氟胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料六、发展方向六、发展方向(Developing)(Developing)1.1.标记技术的探索标记技术的探索顺磁粒子标记、量子点标记顺磁粒子标记、量子点标记 免疫反应信号转化为电子信号模式免疫反应信号转化为电子信号模式豪豪岔岔雨雨幂幂关关棠棠荒荒窄窄您您乒乒爱爱凶凶破破闪闪僚僚悠悠亨亨侩侩模模秃秃硒硒絮絮纪纪臣臣炯炯穿穿趋趋宅宅畔畔合合诞诞格格胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术培训资料培训资料2.2.生物传感器生物传感器探探蹿蹿爱爱上上富富猫猫仅仅酣酣涣涣桩桩弘弘辛辛透透孩孩畏畏窜窜望望发发鞠鞠欢欢售售揖揖榴榴馅馅贡贡缝缝顶顶泅泅蔫蔫溢溢亿亿忘忘胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术谢谢！恶恶久久谈谈天天茶茶幂幂韵韵泽泽罗罗县县笨笨箩箩净净馁馁仍仍睛睛吁吁吨吨娜娜育育缕缕颓颓迄迄住住妖妖坏坏挟挟诊诊苦苦浊浊瞳瞳沸沸胶胶体体金金检检测测技技术术胶胶体体金金检检测测技技术术