医学微生物学实验医学微生物学实验微生物学教研室 2011年12月实验内容一、细菌染色标本检查法一、细菌染色标本检查法 抗酸染色法（操作）抗酸染色法（操作）二、标本片观察：二、标本片观察：（钩体（钩体 、白色念珠菌，曲霉、枯草芽胞杆菌、）、白色念珠菌，曲霉、枯草芽胞杆菌、） 目的要求l掌握抗酸染色技术l掌握钩体，白色念珠菌、曲霉、枯草杆菌基本形态l分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色抗酸染色。l齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色兰色。一、抗酸染色原理一、抗酸染色原理 抗酸染色抗酸染色l材料： 标本：卡介苗 染液：石炭酸复红，3%盐酸酒精，美蓝 器具：同革兰氏染色 实验方法：实验方法：1、细菌涂片标本的制备、细菌涂片标本的制备 涂片涂片 干燥干燥 固定固定3、油镜观察油镜观察1）初染：）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗待标本冷却后用水冲洗。2）脱色：）脱色： 3%盐酸酒精脱色301；用水冲洗。3）复染复染：用碱性美兰溶液复染1，用水冲洗后用吸水纸吸干。2、染色染色 抗酸染色步骤抗酸染色步骤 1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。、涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片涂片 干燥干燥 固定固定抗酸染色步骤抗酸染色步骤l2、染色包括初染、脱色、复染三步。、染色包括初染、脱色、复染三步。 石炭酸复红维持石炭酸复红维持 3-5 5 3%盐酸酒精盐酸酒精30 1 美蓝复染美蓝复染1 冲洗冲洗 干燥干燥 油镜观察油镜观察冲洗冲洗冲洗冲洗初染初染脱色脱色复染复染三、抗酸染色结果三、抗酸染色结果抗酸菌呈红色抗酸菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。注意事项：1、无菌操作、无菌操作2、菌种管摇匀后取菌、菌种管摇匀后取菌3、涂片均匀、涂片均匀4、初染加热维持、初染加热维持35分钟，勿沸腾烧干分钟，勿沸腾烧干5、冷却后冲洗、冷却后冲洗6、油镜下从视野中找红色抗酸菌、油镜下从视野中找红色抗酸菌二、标本片观察二、标本片观察l白色念珠菌l钩体l枯草杆菌l曲霉白色念珠菌钩端螺旋体类炭疽（枯草杆菌）类炭疽（枯草杆菌） 炭疽杆菌炭疽杆菌曲霉实验报告实验报告l绘制抗酸染色结果镜下图l绘制四张标本片镜下图