郑州轻工业学院生物基础实验中心生物基础实验中心一、实验室简介生生物物基基础础实实验验中中心心生物化学实验室生物化学实验室微生物学实验室微生物学实验室生物技术实验室生物技术实验室河南省生物工程技术研究中心实验室河南省生物工程技术研究中心实验室生物学实验室生物学实验室承担的主要实验课程生物化学微生物学普通生物学普通遗传学细胞生物学分子生物学微生物遗传育种学病毒学生化技术大实验生物技术大实验免疫学细胞工程基因工程原理与技术生物技术工艺学酶工程微生物工程二、实验室安全一、电一、电二、水二、水三、气三、气四、火四、火 五、试剂五、试剂六、废液处置六、废液处置七、仪器使用七、仪器使用 连线：仪器连线必须使用带有接地的三根线的连线：仪器连线必须使用带有接地的三根线的护套线护套线，不可，不可使用普通的使用普通的塑料绞线塑料绞线。电话线可用普通的塑料绞线。电话线可用普通的塑料绞线。严禁私拉乱扯。严禁私拉乱扯。 接地：仪器应有良好的接地：仪器应有良好的接地接地，提高仪器的稳定性及安全系数。，提高仪器的稳定性及安全系数。 维修：维修仪器时必须维修：维修仪器时必须切断电源切断电源，方可拆机修理。，方可拆机修理。 墙电：需要对墙电进行维修、改造时，必须由持有北京市供墙电：需要对墙电进行维修、改造时，必须由持有北京市供电局和劳动局核发的电局和劳动局核发的电工证电工证的人员进行操作。的人员进行操作。 检查：如遇线路检查：如遇线路老化老化或或损坏损坏应及时地应及时地更换更换。 触电：触电：断电断电或或绝缘脱离绝缘脱离 急救急救一、电一、电 节约用电！节约用电！二、二、水水 上上 水：水龙头或水管漏水时，应及时地水：水龙头或水管漏水时，应及时地修理修理。 下下 水：下水道排水不畅时，应及时地水：下水道排水不畅时，应及时地疏通疏通。 冷却水：输水管必须使用冷却水：输水管必须使用橡胶管橡胶管，不得使用，不得使用乳胶管乳胶管；上水管与水龙头的连接处及上水管、下水管上水管与水龙头的连接处及上水管、下水管与仪器或冷凝管的连接处必须用与仪器或冷凝管的连接处必须用管箍夹紧管箍夹紧；下水管必须插入水池的下水管必须插入水池的下水管下水管中。中。 纯净水：应按照纯净水：应按照“操作规程操作规程”进行操作；取水时应注进行操作；取水时应注意及时地关闭取水开关，防止意及时地关闭取水开关，防止溢流溢流。 节约用水！节约用水！三、三、气体气体直立放置时要直立放置时要稳妥稳妥；气瓶要远离热源；避免曝晒和强烈振动；气瓶要远离热源；避免曝晒和强烈振动； 一般实验室内存放气瓶量不得超过一般实验室内存放气瓶量不得超过两瓶两瓶。氢气氢气瓶和瓶和氧气氧气瓶不能同存一处。瓶不能同存一处。 搬运：搬运或转动钢瓶时，不得用手执着搬运：搬运或转动钢瓶时，不得用手执着开关阀开关阀移动。移动。 使用：按气瓶的使用：按气瓶的类别类别选用减压器，安装时螺扣应选用减压器，安装时螺扣应拧紧拧紧，并，并检漏检漏。 开启钢瓶：逆时针方向为开；先开总阀，后开减压阀。开启钢瓶：逆时针方向为开；先开总阀，后开减压阀。 关闭钢瓶：顺时针方向为关；先关总阀，后关减压阀。关闭钢瓶：顺时针方向为关；先关总阀，后关减压阀。 气嘴保护：用死扳手夹紧气嘴后再开总阀。气嘴保护：用死扳手夹紧气嘴后再开总阀。 安全：气瓶内的气体安全：气瓶内的气体不可用尽不可用尽 惰性气体惰性气体：应剩余：应剩余0.050.05MPaMPa以上压力的气体。以上压力的气体。 可燃气体可燃气体：应剩余：应剩余0.20.2MpaMpa以上压力的气体。以上压力的气体。 氢氢 气气：应剩余：应剩余2.02.0MPaMPa以上压力的气体。以上压力的气体。 存放：分类分处保管；存放：分类分处保管； 乙炔乙炔 性质：极易性质：极易燃烧燃烧、容易、容易爆炸爆炸。 使用：使用时应装上回闪阻止器，还要注意防止气使用：使用时应装上回闪阻止器，还要注意防止气 体回缩。用后及时地体回缩。用后及时地关闭总阀关闭总阀。 存放：乙炔气瓶的地方，要求存放：乙炔气瓶的地方，要求通风通风良好。良好。 故障：发现乙炔气瓶有故障：发现乙炔气瓶有发热发热现象，说明乙炔已发生现象，说明乙炔已发生 分解分解，应立即关闭气阀，并用水，应立即关闭气阀，并用水冷却冷却瓶体，瓶体， 同时将气瓶移至安全区域加以妥善处理。同时将气瓶移至安全区域加以妥善处理。 灭火：发生乙炔燃烧时，应用干粉灭火器灭火。灭火：发生乙炔燃烧时，应用干粉灭火器灭火。 几种特殊气体的性质和使用安全几种特殊气体的性质和使用安全性性质质：氢氢气气密密度度小小，易易泄泄漏漏，扩扩散散速速度度很很快快，易易和和其其它它气体混合。气体混合。 氢氢气气与与空空气气混混合合气气的的爆爆炸炸极极限限：氢氢气气含含量量爆爆炸炸下下限限4.14.1，爆爆炸炸上上限限74.174.1( (体体积积比比) )，此此时时极极易易引引起自燃自爆，燃烧速度约为起自燃自爆，燃烧速度约为2.7m/s2.7m/s。使使用用：提提倡倡使使用用氢氢气气发发生生器器。在在使使用用氢氢气气的的地地方方，严严禁禁烟火烟火；严防；严防泄漏泄漏；用后及时地；用后及时地关闭总阀关闭总阀。存放：存放：氢气应氢气应单独单独存放，最好放置在室外专用的小屋内，存放，最好放置在室外专用的小屋内，确保安全。确保安全。 氢气氢气性质：强烈性质：强烈助燃助燃烧。烧。 高高温温下下，纯纯氧氧十十分分活活泼泼；温温度度不不变变而而压压力力增增加加时时，可可以以和和油油类类发发生生急急剧剧的的化化学学反反应应，并并引引起起发发热热自自燃燃，进而产生强烈爆炸。进而产生强烈爆炸。 使使用用：不不可可将将氧氧气气瓶瓶与与油油类类物物质质混混放放，并并绝绝对对避避免免让让其其它它可燃性气体混入氧气瓶。可燃性气体混入氧气瓶。存放：存放：氧气瓶禁止放于阳光氧气瓶禁止放于阳光曝晒曝晒的地方。的地方。 氧气氧气四、四、火火 加热加热 进行蒸馏实验和消化样品时进行蒸馏实验和消化样品时应使用应使用加热套加热套和和封封闭式电炉闭式电炉，不应使用明火加热。，不应使用明火加热。 安全使用安全使用酒精灯酒精灯。 明火明火 实验室内实验室内严禁吸烟严禁吸烟。 在使用易燃气体和易燃试剂的实验室内不得使在使用易燃气体和易燃试剂的实验室内不得使 用明火。用明火。 火情处理火情处理 报警：报警：119119（说明火源、火情、单位名称、地理位置，或明显标志）（说明火源、火情、单位名称、地理位置，或明显标志） 措施：早发现、早处理、早报告措施：早发现、早处理、早报告 灭火：灭火： 学会使用灭火器（一拔、二握、三瞄、四扫）学会使用灭火器（一拔、二握、三瞄、四扫） 沉着、冷静沉着、冷静 易燃固体易燃固体、易燃气体易燃气体、易燃液体易燃液体和和带电物体带电物体着火时，可用着火时，可用 干粉灭火器干粉灭火器灭火灭火 ； 导线导线或或电器电器着火时，应先着火时，应先断电断电，再用，再用干粉干粉灭火器灭火。灭火器灭火。 切不可用泡沫灭火器，此灭火器导电。切不可用泡沫灭火器，此灭火器导电。 衣服衣服着火时，应尽快地着火时，应尽快地脱掉脱掉衣服，并用衣服，并用水水灭火。或就地灭火。或就地滚动滚动， 切忌外跑。切忌外跑。 防火：防火：火灾不能预期、不能杜绝、只能预防火灾不能预期、不能杜绝、只能预防 消除消除火灾火灾隐患（电、火、气、试剂）隐患（电、火、气、试剂） 备逃生四件宝（灭火器、绳、手电筒、防毒面具）备逃生四件宝（灭火器、绳、手电筒、防毒面具） 五、五、试剂试剂 有机试剂：使用有机试剂：使用三氯甲烷、四氯甲碳、乙醚、苯、丙酮、三氯甲烷、四氯甲碳、乙醚、苯、丙酮、 己烷等低沸点有机溶剂己烷等低沸点有机溶剂时，一定要远离火源时，一定要远离火源 和热源。装有上述试剂的试剂瓶应和热源。装有上述试剂的试剂瓶应封严封严，并，并 放在放在阴凉阴凉处保存。处保存。 使用使用有毒有毒有机溶剂时应在有机溶剂时应在通风橱通风橱内操作，防内操作，防 止止意外意外事故发生。事故发生。 无机试剂：无机试剂：浓酸、浓碱浓酸、浓碱具有强烈的具有强烈的腐蚀性腐蚀性。使用。使用浓硝酸浓硝酸、 浓盐酸浓盐酸、浓硫酸浓硫酸、高氯酸高氯酸及及氨水氨水时，应在时，应在通通 风橱风橱中操作。如上述试剂溅到中操作。如上述试剂溅到皮肤皮肤上或上或眼眼内，内， 应立即用应立即用水水冲洗，然后用冲洗，然后用5%NaHCO5%NaHCO3 3或或5%H5%H3 3BOBO3 3 冲洗。冲洗。 标标 识识：自配试剂应贴标签，并注明化合物：自配试剂应贴标签，并注明化合物名称名称、浓浓 度度、配制、配制日期日期，以及配制人，以及配制人姓名姓名。 废弃的溶液应按废弃的溶液应按有机有机及及无机无机进行进行分类分类，严禁将，严禁将 不同类别的液体不同类别的液体混放混放在同一个瓶中。在同一个瓶中。 装有废液的容器必须具有装有废液的容器必须具有明显的标识明显的标识，标识上，标识上 应注明该废液的应注明该废液的名称名称、组成组成、浓度浓度、日期日期及该及该 溶液废弃人的溶液废弃人的姓名姓名。 将装有废液的容器放在将装有废液的容器放在指定地点指定地点，统一处理。，统一处理。 严禁将严禁将有毒有毒、有害有害、强腐蚀性强腐蚀性试剂及液体试剂及液体倒入倒入 水池水池中。中。 废弃的废弃的洗液洗液不得倒入不得倒入下水道下水道，应装入试剂瓶，应装入试剂瓶统统 一处理一处理。 六、废液处置六、废液处置 切记：切记：H H2 2SOSO4 4 H H2 2O O 洗涤液的配制洗涤液的配制 盐酸盐酸- -乙醇溶液乙醇溶液 取一定体积的取一定体积的盐酸盐酸（36%36%），将其倒入），将其倒入等体积等体积的的乙醇乙醇 (95%(95%）中，混匀备用。）中，混匀备用。 用于洗涤被用于洗涤被带色有机物带色有机物污染的比色皿及玻璃仪器。污染的比色皿及玻璃仪器。 重铬酸钾重铬酸钾- -硫酸洗液硫酸洗液 称取称取10g10g重铬酸钾重铬酸钾（工业纯）于（工业纯）于400ml400ml烧杯中，加入烧杯中，加入 少量水溶解后，少量水溶解后，慢慢地慢慢地加入加入200ml200ml硫酸硫酸（工业纯），边（工业纯），边 加边搅，混匀备用。加边搅，混匀备用。 用于洗涤被用于洗涤被有机物有机物污染的玻璃仪器。污染的玻璃仪器。 1.1.仪器使用者必须认真地阅读仪器使用者必须认真地阅读操作规程，操作规程，经过经过培训培训方可上机操作。方可上机操作。 2.2.必须严格地按照必须严格地按照“仪器仪器操作规程操作规程”进行操作。进行操作。 3.3.在使用仪器之前应进行在使用仪器之前应进行预登记预登记。 4.4.完成样品测定后，应在该仪器的完成样品测定后，应在该仪器的“使用维修登记本使用维修登记本”上进行上进行机时机时登记。登记。 5.5.在样品的测定过程中，应保持仪器、实验台面及实验室的在样品的测定过程中，应保持仪器、实验台面及实验室的整洁整洁。 6.6.需需要要在在晚晚上上及及假假日日、节节日日使使用用仪仪器器时时，应应事事先先求求得得仪仪器器管管理理人人员员的的同同意，并办理实验室房门意，并办理实验室房门钥匙借用钥匙借用登记。钥匙用后应及时地登记。钥匙用后应及时地归还归还。 7.7.遇到仪器发生故障，立即向管理人员报告，遇到仪器发生故障，立即向管理人员报告，不得擅自处理不得擅自处理。 8.8.未未按按“仪仪器器操操作作规规程程”进进行行操操作作而而造造成成仪仪器器故故障障或或损损坏坏，应应由由该该操操作作人员及所在课题组负责人员及所在课题组负责修理修理，所发生的修理费用由该课题组，所发生的修理费用由该课题组支付支付。 9.9.按按操操作作规规程程使使用用水水、电电。发发现现安安全全隐隐患患应应立立即即报报告告，及及时时处处理理。离离开开实实验验室室时时应应检检查查仪仪器器、水水、电电、门门、窗窗是是否否关关好好，夏夏季季应应检检查查空空调调是是否关闭。否关闭。10.10.不不得得擅擅自自挪挪用用与与公公用用仪仪器器相相关关的的辅辅助助设设备备和和零零、配配件件，以以及及实实验验室室内内的一切公用设施。的一切公用设施。七、仪器使用七、仪器使用防患于未然刻苦的学习精神严谨的科学态度求是的工作作风良好的操作习惯实验室规则1、实验前需预习实验指导和有关理论，明确实验目的、原理、预期的结果、操作关键步骤及注意事项。2、实验要严肃认真地按照操作规程进行，注意观察实验中出现的现象和结果，并把实验数据和结果及时如实记录在实验记录本上，课后根据实验结果进行科学分析。3、实验室和实验台应保持整洁。公用试剂用毕，立即盖严并还原。实验完毕，仪器洗净放好。4、注意节约药品、试剂和各种物品，爱护仪器，按规程操作仪器，以免损坏。5、实验室严禁吸烟！乙醇、丙酮等易燃物品不能直接加热，并远离火源。实验结束离开实验室之前，关好窗户，切断电源，水源，确保安全。6、若发生酸碱灼烧事故，应用大量自来水冲洗，酸灼伤者用饱和NaHCO3溶液中和，碱灼伤者用饱和H3BO3溶液中和，氧化剂伤害者用Na2S2O4处理。7、所有固体废弃物如：废纸、固体废弃物、沉淀物等必须弃于垃圾桶中。强酸、强碱必须倒入玻璃器皿中，用水稀释后倒入水槽。实验考试和考核方法实验分数占总分的15，其中理论考试占5分，见理论考试试卷。每次实验为2.5分，其中： 1、实验报告占1分（实验的报告占0.5分，分析讨论0.5分。）。 2、实验结果占0.4分（结果的正确度），操作考核占0.4分：包括分光光度法测试，离心机使用，层析法，电泳法等基本操作。实验态度占0.7分。实验报告要求 1、实验题目，时间，实验者姓名2、目的3、原理（简单明了）4、操作不写5、结果，定性要分析，定量要列表6、结论：总结分析试剂使用规则1、使用试剂前应该仔细辨认标签，看清名称及浓度，是否为本实验所需。2、取出试剂后，立即将瓶塞盖好，放回原位；未用完的试剂决不可倒回原瓶。3、取标准溶液时，应该将标准溶液倒入干试管中，再用干净吸管吸取标准液，以免污染瓶中的标准液体。4、使用滴管时，滴管尖端朝下，避免试剂流入橡皮帽内。5、使用有毒试剂及强酸强碱时，尽可能用量筒取，若用吸管只能用吸耳球取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。使用过的玻璃仪器的清洗1、一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗12次，倒置晾干。2、容量分析仪器，如滴定管、容量瓶等先用自来水冲洗，沥干后，浸于铬酸洗液浸泡数小时。然后用自来水反复冲洗干净，干燥备用。3、用完比色杯后，立即用自来水反复冲洗。切忌用刷子、粗糙的布或纸擦拭。洗净后，倒置晾干备用。吸量管的种类和使用1、分类 1）奥氏吸量管 供准确量取0.50、1.0、2.0、3.0ml液体所用。这种吸量管只有一个刻度，当放出所量取的液体时，管尖余留的液体必须吹入容器内。 2）移液管 常用量取50.0、25.0、10.0、5.0、2.0、1.0ml的液体，这种吸量管只有一个刻度，放液时，量取的液体自然流出后，管尖需在容器内滞留15秒。注意管尖残留的液体不要吹出。 3）刻度吸量管 供量取10 ml以下任意体积的溶液。一般刻度包括尖端部分。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶液。此类吸量管为“吹出式”，吸量管上端标有“吹”字。未标“吹”字的吸量管，则不必吹出管尖的残留液体。2、使用原则 量取整数量液体，并且取量要求准确时，应该选用奥氏吸量管。量取大体积时要用移液管。同一定量实验中，如欲加同种试剂于不同的管中，并且取量不多时，应选择一支与最大取液量接近的刻度吸量管。吸量管的使用1、正确拿法 中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端2、取液 用橡皮球吸液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上端。3、调刻度 吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。4、放液 吸量管移入准备接受溶液的容器中，仍使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。奥氏吸量管和刻度到底的吸量管应吹出尖端残留的液体。移液管应最后靠壁15秒。一、分光光度法 原理光的本质是一种电磁波，具有不同的波长，可见光的波长范围在400760nm。波长范围200400nm的光线称为紫外光。有色物质可以选择性地吸收一部分可见光的光能量而呈现不同颜色，某些物质却能特征性地选择吸收紫外光的能量。 物质吸收由光源发出的某些波长的光可形成特定的吸收光谱。由于物质的吸收光谱与物质的分子结构有关，而且在一定的条件下其吸收程度与该物质的浓度成正比，所以可利用物质的特定吸收光谱对其进行定性和定量的分析。分光光度法就是利用各种物质所具有的这种吸收特征所建立起来的分析方法。 吸收光谱和物质的定性分析 用各种不同波长的光线作为入射光测定物质的吸光度（Absorbance），然后以波长（）为横轴，相应的吸光度（A）为纵轴，按结果作图，可得到该物质的吸收光谱曲线。吸收光谱曲线是物质的特征曲线。在一定的温度、pH值等条件下吸收光谱的曲线形状是一定的。在吸收光谱中，往往可找到一个或几个吸收最大值，该处的波长称为最大吸收波长（max）。物质不同，它们的最大吸收波长也往往不同。物质用分光分析定性主要根据是吸收光谱存在的特征吸收。 常用定性方法： 1、比较吸收光谱曲线。2、比较最大吸收波长。3、比较吸光度比值。 BeerLambert定律和物质的定量分析 原理一束平行光照射至溶液时、一部分光被吸收、一部分光可透过该溶液、不同物质光的吸收程度是不同的。物质对单色光吸收的强弱以及溶液浓度与也曾厚度的关系，服从物质对光吸收的定量定律，即BeerLambert定律，其表达式为： AKCL 或Lg I0/IKCL BeerLambert定律的含义为一束单色光通过溶液解质后，光能被吸收的程度与溶液的浓度和厚度成正比。如果实验中的厚度不变，则AKC A为吸光度，T为透光度，即I/I0，A和T是负对数的关系。 吸收系数K实际上式物质在单位浓度和单位厚度下对入射光的吸光度，在一定波长下，K越大，表示物质对光的吸收越强。常用的以BeerLambert定律为依据的定量分析方法BeerLambert定律原理是讨论有色溶液对单色光的吸收程度与溶液的浓度及液层厚度间的定量关系。1、标准曲线法。配制一系列已知不同浓度的测定物溶液，按一定方法显色后，分别用分光光度计测得吸光度。以吸光度为纵座标、浓度为横座标，绘制AC曲线，即标准曲线。在相同条件下，测定被测溶液得吸光度，从标准曲线上可找出相应的浓度。标准曲线制作与测定管的测定应在同一仪器上进行。2、标准管法。将标准品（已知浓度Cs）与样品在相同条件下显色并测得吸光度。因为在此下，两者的K值相等，所以可根据 Cx(Cs/As) Ax 求得样品溶液得浓度Cx。式中As和Ax分别为标准管测定 管的吸光度。3、克分子吸光系数法。当浓度为IM，溶液厚度为1cm，吸光系数用表示，亦称为克分子吸光系数。在已知得情况下，可根据下式求出测定液的物质浓度 CA/分光光度计 原理：分光光度计形式较多，但基本结构和原理相似，可用下图表示：仪器中光源经过单色器中的单色原件（如棱镜），所得到的单色光（入射光）进入样品室，透出的光被受光器（光电池或光电色）产生光电流，放大后在测量仪上显示出吸光度（A）或透光度（T）仪器的光电管或光电池对不同波长的光敏感度不一样，在制作吸收曲线时应注意每换一次波长，都应将空白溶液的吸光度调整到0。 光源单色器受光器测量器样品室分光光度计的类型1、单波长单光束分光光度计2、单波长双光束分光光度计3、双波长分光光度计最简单常见的光度计是单波长单光束分光光度计，如751、721等。使用方法 （以721为例） 该机的光谱范围在360nm-800nm。 1、接通电源，打开机器开关，使仪器通电，打开箱盖，预热10分钟。2、将空白液或对照液及测定液分别装入比色杯3/4体积并用软纸擦清外壁，放入样品室。3、调节电流计上零点调节器，使读书盘上指针的吸光度为或透光率为0。调节测定所用波长。4、盖上箱盖，光径开关自动打开。转动光量调节器使空白或对照管的吸光度为0，或透光率为100，待读数指针稳定后，逐步拉出样品盒滑干，通过读数指针，读取测定管上的吸光度。有时需调节灵敏度开关，才能正确读得吸光度。此时应重新转动零点调节器至吸光度为。 5、读数完毕，打开仪器盖板，关闭开关，将比色杯冲洗干净。 6、溶液定量测定时，应注意吸光度在0.11.0范围，浓度太大时应适当稀释。 *注意事项：1）用手拿比色杯的磨砂面。 2）液体的体积装满比色杯的3/4。 3）不要将比色杯放在分光光度计上。可见光紫外光光度计 该种机采用两个光源，可在可见和紫外区对物质进行分析，钨丝灯发出光的适宜范围在3601000nm，氢灯发出光的适宜范围在150400nm。 通过两种光源的切换，可以在两种波长范围内使用。