专题专题专题专题2 2 2 2 细胞工程细胞工程细胞工程细胞工程2.2.2 2.2.2 动物细胞融合与动物细胞融合与单克隆抗体单克隆抗体学习学习目标目标了解动物细胞融合的原理、过程和意义。理解单克隆抗体制备的过程和应用( (一一) )概念概念 动物细胞融合动物细胞融合也称细胞杂交也称细胞杂交, ,是指两个或多是指两个或多 个动物细胞结合形成个动物细胞结合形成一个一个细胞的过程。细胞的过程。杂交细胞杂交细胞: :融合后形成的具有原来两个或融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的多个细胞遗传信息的单核单核细胞。细胞。一、动物细胞融合一、动物细胞融合仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线丧失感染性丧失感染性（不感染细胞）（不感染细胞）保留融合活性保留融合活性（诱导细胞融合）（诱导细胞融合） 动动物物细细胞胞融融合合过过程程示示意意图图不同DNA的两个细胞 灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞项目项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理细胞融合的方法用 去除细胞壁后诱导原生质体融合用 使细胞分散后诱导细胞融合诱导手段用 使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外，还有用_ 结果应用培育植物新品种主要_ 意义相同点原生质体融合原理相同；原生质体融合的方法相似细胞膜的流动性植物细胞的全能性细胞膜的流动性细胞增殖纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶物理法、化学法灭活的病毒获得杂种植株获得杂交细胞用于制备单克隆抗体克服远缘杂交 不亲和的障碍1、抗体是由何种细胞产生的？、抗体是由何种细胞产生的？浆细胞（效应浆细胞（效应B细胞）细胞）2、抗体是如何产生的？、抗体是如何产生的？B B淋巴细胞淋巴细胞抗原抗原增殖分化成浆细胞增殖分化成浆细胞3、一种、一种B淋巴细胞能产生淋巴细胞能产生几种抗体？几种抗体？一种一种二二、单克隆抗体制备的原理单克隆抗体制备的原理（一）（一）获得得抗体的抗体的传统方法方法1 1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后、把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。从动物血清中分离出所需的抗体。2 2、缺点：、缺点： 产量低，纯度低，产量低，纯度低，特异性差特异性差。一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂杂交交细胞细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术（二）实验（二）实验原理：原理：动物细胞融合动物细胞融合单克隆单克隆抗体抗体既能迅速既能迅速大量繁殖，大量繁殖，又能又能产生专一抗体，产生专一抗体，（三）（三）如何如何大量生产单克隆抗体？大量生产单克隆抗体？利用利用B B淋巴细胞淋巴细胞产生抗体的功能。产生抗体的功能。利用利用肿瘤细胞肿瘤细胞无限增殖的特性。无限增殖的特性。利用利用细胞融合的技术细胞融合的技术将两种细胞融将两种细胞融合获得具有合获得具有B B淋巴细胞和肿瘤细胞淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。特性的杂交瘤细胞。利用利用动物细胞培养动物细胞培养技术大量培养杂技术大量培养杂交瘤细胞。交瘤细胞。三、三、过程过程：免疫动免疫动物物注射抗原的目的是什么？获得能产生相应抗体的B淋巴细胞（浆细胞）诱导细胞融合常用方法是什么？灭活的仙灭活的仙台病毒台病毒如何进行筛选？具有筛选作用的培养基（选择培养基）？种？种BB 、B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 、杂交细胞杂交细胞如何获得大量的单克隆抗体？免疫免疫B细胞和骨髓瘤细胞的制细胞和骨髓瘤细胞的制备备细胞融细胞融合合杂交瘤细胞的选择培养杂交瘤细胞的选择培养杂交瘤细胞的筛选杂交瘤细胞的筛选分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备整个制备过程为何要经过整个制备过程为何要经过两次筛选两次筛选? ?第一次筛选：用特定的选择培养基筛选出多种第一次筛选：用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞杂交瘤细胞第二次筛选第二次筛选（克隆化培养和抗体检测）：（克隆化培养和抗体检测）：筛选筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。四、四、单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用、可用于作为诊断试剂：有准确，高效，简易、快、可用于作为诊断试剂：有准确，高效，简易、快速的优点速的优点、可用于疾病治疗、可用于疾病治疗、可用于运载药物（作为、可用于运载药物（作为运载运载对应疾病的药物的对应疾病的药物的 “生物导弹生物导弹“。）。）“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药物单克隆抗体药物课堂反馈答案：15ABBDC610DBCDC