第十四章第十四章 食品中有害物质的检测食品中有害物质的检测第一节第一节 食品中农药残留及其检测食品中农药残留及其检测农药是农业消费中运用的各种药剂统称，包括：杀虫剂、杀菌剂、农药是农业消费中运用的各种药剂统称，包括：杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调理剂。我国农药消费现状及开展趋势：除草剂、植物生长调理剂。我国农药消费现状及开展趋势：目前全世界实践消费和运用的农药的种类为目前全世界实践消费和运用的农药的种类为500多种，其中大量运多种，其中大量运用的有用的有100种，主要是化学合成消费的。种，主要是化学合成消费的。我国现有主要农药合成企业近我国现有主要农药合成企业近400家，已建成家，已建成700千吨以上原药消费千吨以上原药消费安装，可年年消费安装，可年年消费250多种原药、农药中产量居世界第二位美国多种原药、农药中产量居世界第二位美国第一，农药产量呈逐年增长的趋势。第一，农药产量呈逐年增长的趋势。新种类与新工艺不断出现。新种类与新工艺不断出现。 常用的有：有机氯农药和有机磷农药两类。常用的有：有机氯农药和有机磷农药两类。 杀虫剂有胺丙畏、苯胺硫磷等。杀虫剂有胺丙畏、苯胺硫磷等。 杀菌剂有腐霉利、乙霉威等。杀菌剂有腐霉利、乙霉威等。 除草剂有丙草胺、麦草畏等。除草剂有丙草胺、麦草畏等。 生长调理剂有烯效唑、多效唑、油菜素内酯等。生长调理剂有烯效唑、多效唑、油菜素内酯等。农药加工剂型：主要有乳油、粉剂、粉粒剂、悬浮剂、水剂、片剂、农药加工剂型：主要有乳油、粉剂、粉粒剂、悬浮剂、水剂、片剂、烟剂等。烟剂等。农药在防治农作物病虫害、控制人类传染病、提高农畜产品的产量农药在防治农作物病虫害、控制人类传染病、提高农畜产品的产量和质量以及确保人体安康等方面，都起着重要的作用。但是，大量和质量以及确保人体安康等方面，都起着重要的作用。但是，大量广泛用农药也会呵斥对食物的污染。广泛用农药也会呵斥对食物的污染。农药残留是指农药施用后，残存在生物体、农副产品和环境中的微农药残留是指农药施用后，残存在生物体、农副产品和环境中的微量农药原体、有毒代谢产物、降解物和杂质的总称。残留的数量叫量农药原体、有毒代谢产物、降解物和杂质的总称。残留的数量叫残留量。残留量。 食品中普遍存在农药残留食品中普遍存在农药残留, 残留量随食品种类及农药的种类不同而残留量随食品种类及农药的种类不同而有很大差别，由于农药的毒性都很大，有的还可在人体内蓄积，对有很大差别，由于农药的毒性都很大，有的还可在人体内蓄积，对人体呵斥危害。食品中残留农药过高会导致癌症和帕金森症。人体呵斥危害。食品中残留农药过高会导致癌症和帕金森症。1994 年，我国农药中毒人数已超越年，我国农药中毒人数已超越10万，大部分是由于农药残留。万，大部分是由于农药残留。农药进入人体的方式农药进入人体的方式土壤、水土壤、水 、空气、空气家禽、畜家禽、畜植物、饲料植物、饲料水生动、植物水生动、植物肉、蛋、乳肉、蛋、乳人人容易吸收农药的蔬菜：番茄、茄子、圆辣椒、容易吸收农药的蔬菜：番茄、茄子、圆辣椒、卷心菜、白菜及大多数根菜类、薯类。卷心菜、白菜及大多数根菜类、薯类。对农药吸收率较低的：对农药吸收率较低的： 叶菜类、果类等。叶菜类、果类等。许多国家都对食品中农药允许残留量作了规定。许多国家都对食品中农药允许残留量作了规定。表表13l和和132分别为我国和分别为我国和WHO制定的有机氯农药六六六、滴滴制定的有机氯农药六六六、滴滴涕在食品中的允许残留量规范；涕在食品中的允许残留量规范；表表133我国制定的有机磷农药在食品中允许残留量规范我国制定的有机磷农药在食品中允许残留量规范表表13 4FAO/WHO引荐的部分食品中有机磷农药允许残留量规范引荐的部分食品中有机磷农药允许残留量规范食品中农药残留量的分析，食品中农药残留量的分析， 1) 比色法比色法 少特异性，灵敏度很低，少特异性，灵敏度很低， 分光光度法分光光度法 已很少运用已很少运用 电化学分析电化学分析2纸色谱纸色谱 TLC 3GC 电子捕获检测器电子捕获检测器 适用有机氯农药。适用有机氯农药。4HPLC 非挥发性、热不稳定性农药，如非挥发性、热不稳定性农药，如 部分有机磷农药。部分有机磷农药。5GC/ 红外光谱红外光谱 联用、联用、 GC/MS 联用。联用。1、DDT类类氯化苯及其衍生物，包括氯化苯及其衍生物，包括DDT、 六六六。六六六。 一、有机氯农药残留量的检测一、有机氯农药残留量的检测 一有机氯农药的性质及常见种类一有机氯农药的性质及常见种类有机氯农药是农药中一类有机含氯化合物，普通分为五大类：有机氯农药是农药中一类有机含氯化合物，普通分为五大类：3、七、七O五四五四 纯品为白色晶体，微溶于水，易溶于某些有机溶纯品为白色晶体，微溶于水，易溶于某些有机溶剂。剂。 主要用于杀灭蚊蝇。蓄积在动植物脂肪中，主要用于杀灭蚊蝇。蓄积在动植物脂肪中， 经过食物链进入经过食物链进入人体。中毒病症为乏力、失人体。中毒病症为乏力、失 眠、眩晕、恶心等，长期接触可影响中眠、眩晕、恶心等，长期接触可影响中枢枢 神经系统及肝脏。神经系统及肝脏。2、氯化甲撑萘类、氯化甲撑萘类七氯、七氯、 艾氏剂、狄氏剂。艾氏剂、狄氏剂。4、氯丹、氯丹 纯品为无色或淡黄色液体，微溶于水，易溶于某些有纯品为无色或淡黄色液体，微溶于水，易溶于某些有机溶剂。中毒情况同机溶剂。中毒情况同70545、林丹又名高丙体六六六、林丹又名高丙体六六六 本品为无色晶体，不溶于水，本品为无色晶体，不溶于水，溶于大多数有机溶剂。中毒情况同溶于大多数有机溶剂。中毒情况同7054 。主要用于粮食、蔬菜、果。主要用于粮食、蔬菜、果树、烟草、森林、粮仓。树、烟草、森林、粮仓。1六六六六六六 六六六分子式为六六六分子式为C6H6Cl6，化学名为六氯环己烷、六氯化苯，英文，化学名为六氯环己烷、六氯化苯，英文名为名为Benzene hexachl oride (简称简称 BHC)。BHC有多种异构体：有多种异构体：BHC为白色或淡黄色固体，纯品为无色无臭晶体，工业品有霉臭气为白色或淡黄色固体，纯品为无色无臭晶体，工业品有霉臭气味，在土壤中半衰期为味，在土壤中半衰期为2年，不溶于水，易溶于脂肪及丙酮、乙醚、年，不溶于水，易溶于脂肪及丙酮、乙醚、石油醚及环己烷等有机溶剂。石油醚及环己烷等有机溶剂。BHC对光、热、空气、强酸均很稳定，但对碱不稳定对光、热、空气、强酸均很稳定，但对碱不稳定( BHC除外除外)，遇碱能分解，遇碱能分解(脱去脱去HCl)。C6H6Cl6十十3KOH C6H3Cl3十十3KCl 十十3H2O (2)滴滴涕 滴滴涕分子式为C14H9Cl15， 化学名为2，2双(对氯苯基)1，1，1一三氯乙烷、二氯二苯三氯乙烷，简称二二三，英文名为Dichlorodiphenyl trichloroethane，简称DDT。根据苯环上Cl的取代位置不同构成如下几种异构体: DDT产品为白色或淡黄色固体，纯品DDT为白色结晶，熔点108.5109，在土壤中半衰期310年，在土壤中消逝95%需1633年。不溶于水，易溶于脂肪及丙酮、不溶于水，易溶于脂肪及丙酮、CCl4、苯、氯苯、乙醚、苯、氯苯、乙醚等有机溶剂。等有机溶剂。DDT对光、酸均很稳定，对热亦较稳定，但温度高于本身的熔点时，对光、酸均很稳定，对热亦较稳定，但温度高于本身的熔点时，DDT会脱去会脱去HCl而生成毒性小的而生成毒性小的DDE，对碱不稳定，遇碱亦会脱去，对碱不稳定，遇碱亦会脱去HCl。DDT在生物体内富集作用很强。在生物体内富集作用很强。例如例如:水鸟体内水鸟体内DDT残留为残留为25 mg/kg，DDT污染的水要高出污染的水要高出8001000万倍。万倍。DDT的污染是全球性的，在人迹罕至的南极的企鹅、海的污染是全球性的，在人迹罕至的南极的企鹅、海豹、北极的北极熊、甚至未出世的胎儿体内均可检出豹、北极的北极熊、甚至未出世的胎儿体内均可检出DDT的存在。的存在。 样品的预处置样品的预处置1.提取提取 用丙酮、己烷、乙醚、石油醚等。用丙酮、己烷、乙醚、石油醚等。水果蔬菜水果蔬菜丙酮丙酮初提初提Na2SO4溶液溶液稀释稀释石油醚石油醚提取提取添加丙酮极性，降低有机添加丙酮极性，降低有机氯农药在丙酮中的溶解度。氯农药在丙酮中的溶解度。乳制品乳制品乙醇乙醇草酸钾草酸钾破坏脂肪球破坏脂肪球乙醚乙醚醚层醚层鱼、禽、肉鱼、禽、肉高氯酸冰醋酸高氯酸冰醋酸1:1消化消化石油醚石油醚提取提取脱水脱水去杂去杂无水无水Na2SO4醚层醚层脱水脱水去杂去杂无水无水Na2SO42.净化净化提取液中常含有脂肪、腊质及色素等干扰测定的提取液中常含有脂肪、腊质及色素等干扰测定的杂质。杂质。硫酸净化法：硫酸净化法：脂肪、脂肪、蜡质、蜡质、色素色素浓浓H2SO4磺化反响磺化反响弱极性弱极性强极性强极性分别分别柱层析法：柱层析法： 氧化铝、活性碳氧化铝、活性碳液液分配法：利用两种互不相溶的溶剂对，使有机氯农液液分配法：利用两种互不相溶的溶剂对，使有机氯农药与干扰物质得以分别。药与干扰物质得以分别。3.浓缩浓缩检验规范检验规范 GB/T 5009.19二二GC-ECD法测定有机氯农药残留法测定有机氯农药残留三三TLC法测定有机氯农药残留法测定有机氯农药残留教材教材P336二、有机磷农药残留及其检测二、有机磷农药残留及其检测 (一)有机磷农药的特性及种类1常见的有机磷农药及其构造常见的有机磷农药及其构造 有机磷农药是农药中一类含磷的有机化合物目前大量消费与运用有机磷农药是农药中一类含磷的有机化合物目前大量消费与运用至少有至少有60多种。多种。按其毒性可分成高毒、中等毒及低毒三类；按其毒性可分成高毒、中等毒及低毒三类；按其构造那么可划分为磷酸酯及硫代磷酸酯两大类，其构造通式：按其构造那么可划分为磷酸酯及硫代磷酸酯两大类，其构造通式：根据根据R，Rl及及X等基团不一样，等基团不一样，可构成不同的有机磷农药。可构成不同的有机磷农药。2有机磷农药的理化性质有机磷农药的理化性质 有机磷农药中，除敌百虫、乐果为白色晶体外，其他有有机磷农药中，除敌百虫、乐果为白色晶体外，其他有机磷农药的工业品均为棕色油状。有机磷农药有特殊的蒜机磷农药的工业品均为棕色油状。有机磷农药有特殊的蒜臭味，挥发性大，对光、热不稳定，并具有如下性质：臭味，挥发性大，对光、热不稳定，并具有如下性质： 溶解性：多数有机磷农药难溶于水，可溶于脂肪及各种有机溶剂，如疏水性有机溶剂：丙酮、石油醚、正己烷、氯仿、二氯甲烷及苯等，亲水性有机溶剂；乙脂、二甲基亚砜等。水解性：因有机磷农药属酯类水解性：因有机磷农药属酯类(磷酸酯或硫代磷酸酯磷酸酯或硫代磷酸酯)，故在一定，故在一定条件下能水解，特别是在碱性介质、高温、水分含量高等环境中，条件下能水解，特别是在碱性介质、高温、水分含量高等环境中，更易水解。如敌百虫在碱性溶液中易水解为毒性较大的敌敌畏。更易水解。如敌百虫在碱性溶液中易水解为毒性较大的敌敌畏。 氧化性：有机磷农药中，硫代磷酸酯农药在溴作用下或在紫外线氧化性：有机磷农药中，硫代磷酸酯农药在溴作用下或在紫外线照射下，分子中照射下，分子中S易被易被O取代，生成毒性较大的磷酸酯。取代，生成毒性较大的磷酸酯。 样品预处置样品预处置 1.提取提取 普通根据有机磷农药与样品的种类，选择适当的普通根据有机磷农药与样品的种类，选择适当的提取溶剂与提取方法。用乙睛、丙酮、氯仿或二氯提取溶剂与提取方法。用乙睛、丙酮、氯仿或二氯甲烷等提取。甲烷等提取。 2净化净化 将样品提取液经乙晴或二甲基亚砜分配提取后，再用柱将样品提取液经乙晴或二甲基亚砜分配提取后，再用柱色谱净化，柱中吸附剂可由活性炭、氧化铝、弗罗里矽土、色谱净化，柱中吸附剂可由活性炭、氧化铝、弗罗里矽土、无水无水Na 2SO4或硅藻土等按一定比例组成。或硅藻土等按一定比例组成。3.浓缩浓缩二有机磷农药的检测二有机磷农药的检测GC法测定法测定 氮磷检测器。氮磷检测器。几种有机磷农药的检验规范：几种有机磷农药的检验规范：马拉硫磷马拉硫磷 GB/T 5009.36倍硫磷倍硫磷 GB/T 5009.20甲胺磷甲胺磷 GB14876 三、氨基甲酸酯类农药残留及其检测 R2 RlOOC-N CH3(一一)氨基甲酸酯类农药的性质及常用种类氨基甲酸酯类农药的性质及常用种类 氨基甲酸酯类农药可视为氨基甲酸的衍生物，氨基甲酸酯类农药可视为氨基甲酸的衍生物，氨基甲酸是极不稳定的，会自动分解为氨基甲酸是极不稳定的，会自动分解为 C02和和 H20，但氨基甲酸的盐和酯均相当稳定，该类农药通常，但氨基甲酸的盐和酯均相当稳定，该类农药通常具有以下通式：具有以下通式： 常见的氨基甲酸酯农药有：常见的氨基甲酸酯农药有：甲萘威、戊氰威、呋喃丹、仲丁威、异丙威、速甲萘威、戊氰威、呋喃丹、仲丁威、异丙威、速灭威、残杀威、涕灭威、抗蚜威、灭虫威、灭多威、灭威、残杀威、涕灭威、抗蚜威、灭虫威、灭多威、恶虫威、硫双灭多威、双甲眯等。恶虫威、硫双灭多威、双甲眯等。 主要用作杀虫剂、杀螨剂、除草剂、杀软体动物剂和杀线虫主要用作杀虫剂、杀螨剂、除草剂、杀软体动物剂和杀线虫剂等。剂等。(二二)氨基甲酸酯类农药残留的测定氨基甲酸酯类农药残留的测定GCECD法测定氨基甲酸酯类农药残留与本节有机磷农残的法测定氨基甲酸酯类农药残留与本节有机磷农残的气相色谱测定方法一样，详见气相色谱测定方法一样，详见GBT 173312019。四、拟除虫菊酯类农药残留及其检测四、拟除虫菊酯类农药残留及其检测( (一一) )拟除虫菊酯的特性及常用种类拟除虫菊酯的特性及常用种类 拟除虫菊酯拟除虫菊酯(Pyrethroids)(Pyrethroids)是近年来开展较快的一是近年来开展较快的一类重要的合成杀虫剂。在全世界的杀虫剂销售额中类重要的合成杀虫剂。在全世界的杀虫剂销售额中占占2020左右。常见的拟除虫菊酯有：左右。常见的拟除虫菊酯有：烯丙菊酯、胺菊酯、醚菊酯、苯醚菊酯、甲醚菊酯、烯丙菊酯、胺菊酯、醚菊酯、苯醚菊酯、甲醚菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰菊酯、杀螟菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰菊酯、杀螟菊酯、氰戊菊酯、氟氰菊酯、氟胺氰菊酯、氟氰戊菊酯、氰戊菊酯、氟氰菊酯、氟胺氰菊酯、氟氰戊菊酯、溴氟菊酯等。溴氟菊酯等。拟除虫菊酯主要运用在农业上，如防治棉花、蔬菜和果树的拟除虫菊酯主要运用在农业上，如防治棉花、蔬菜和果树的食叶和食果害虫，特别是在有机磷、氨基甲酸酯出现抗药性的情况食叶和食果害虫，特别是在有机磷、氨基甲酸酯出现抗药性的情况下，其优点更为明显。除此之外，拟除虫菊酯还作为家庭用杀虫剂下，其优点更为明显。除此之外，拟除虫菊酯还作为家庭用杀虫剂被广泛运用，它可防治蚊蝇、蟑螂及家畜寄生虫等。被广泛运用，它可防治蚊蝇、蟑螂及家畜寄生虫等。(二二)拟除虫菊酯残留的检测拟除虫菊酯残留的检测 参考本节中有机氯农药残留的检测，详见参考本节中有机氯农药残留的检测，详见GBT 173322019。 第四节第四节 食品中兽药残留及其检测食品中兽药残留及其检测一、兽药残留的种类与危害一、兽药残留的种类与危害典型的兽药是指用于预防和治疗畜禽典型的兽药是指用于预防和治疗畜禽疾病的药物。但是，随着集约化养殖消费疾病的药物。但是，随着集约化养殖消费的开展，一些化学的、生物的药用成分被的开展，一些化学的、生物的药用成分被开发成具有某些效果的动物保健品或饲料开发成具有某些效果的动物保健品或饲料添加剂，也属于兽药的范畴。兽药的主要添加剂，也属于兽药的范畴。兽药的主要用途有防病治病、促进生长、提高消费性用途有防病治病、促进生长、提高消费性能、改善动物性食品的质量等。兽药残留能、改善动物性食品的质量等。兽药残留是指动物性产品的任何可食部分含有兽药是指动物性产品的任何可食部分含有兽药母化合物或其代谢物。母化合物或其代谢物。兽药最高残留限量兽药最高残留限量(MRLVD)(MRLVD)是指某种兽是指某种兽药在食物中或食物外表产生的最高允许兽药在食物中或食物外表产生的最高允许兽药残留量药残留量( (单位单位ggkgkg，以鲜重计，以鲜重计) )。 第五节第五节 黄曲酶毒素的检测黄曲酶毒素的检测简述:黄曲酶与寄生曲霉中的一些菌株所产生的黄曲酶毒素(aflatoxins简称AFT),是化合物中毒性和致癌性最强的物质之一.食品中以花生、玉米、牛乳及乳制品以及腌制肉等最易污染黄曲酶毒素。目前，已鉴定出十多种黄曲酶毒素，它们构造非常类似，其中毒性和致癌性最大的是AFTB1，此外AFTB2、G1、G2和M1也具有剧烈的毒性。黄曲酶毒素B1、G1、M1的化学构造如下：一、与分析有关的黄曲酶毒素的物理化学性质一、与分析有关的黄曲酶毒素的物理化学性质黄曲酶毒素是一种在紫外区域能发出剧烈特殊荧光的物质。黄曲酶毒素是一种在紫外区域能发出剧烈特殊荧光的物质。AFTB1在紫外光在紫外光365纳米下产生蓝紫光荧光。但并非一切具纳米下产生蓝紫光荧光。但并非一切具有荧光的物质都是黄曲酶毒素，分析时需留意区别。有荧光的物质都是黄曲酶毒素，分析时需留意区别。黄曲酶毒素比较稳定，难溶与水、己烷、石油醚、可溶于甲醇、黄曲酶毒素比较稳定，难溶与水、己烷、石油醚、可溶于甲醇、乙醇、氯仿、丙酮等。乙醇、氯仿、丙酮等。AFTB1在中性、酸性溶液中显中性，在在中性、酸性溶液中显中性，在pH13的强酸性中稍有分解，的强酸性中稍有分解，在在pH910的强碱性介质中能迅速分解，荧光消逝，但这种反响是的强碱性介质中能迅速分解，荧光消逝，但这种反响是可逆的，在酸性情况下又能产生带有蓝紫色荧光的可逆的，在酸性情况下又能产生带有蓝紫色荧光的B1。黄曲酶毒素。黄曲酶毒素B1的稀溶液那么对光很敏感。的稀溶液那么对光很敏感。 起初，以纸上层析法和氧化铝薄层层析进展分别技术，以目测法起初，以纸上层析法和氧化铝薄层层析进展分别技术，以目测法定量，灵敏度为定量，灵敏度为0.1ppm.主要用于检测主要用于检测AFTB1 1965年，改用硅藻土年，改用硅藻土G或硅胶作为吸附剂，进展薄层层析。或硅胶作为吸附剂，进展薄层层析。以目测法定量，灵敏度为以目测法定量，灵敏度为5ppb.主要用于检测主要用于检测AFTB1和和G1。 2019年以来，开场用荧光光密度计法进展定量，灵敏度为年以来，开场用荧光光密度计法进展定量，灵敏度为0.1ppb1ppb,甚至高达甚至高达0.01ppb. 近年来，又开展了微柱层析法。取内径为近年来，又开展了微柱层析法。取内径为0.4厘米的玻璃管，厘米的玻璃管，制成氧化铝制成氧化铝-弗罗里矽土为主的微柱。他样品中的杂质被氧化铝弗罗里矽土为主的微柱。他样品中的杂质被氧化铝吸附，而黄曲酶毒素那么被弗罗里矽土吸附。吸附，而黄曲酶毒素那么被弗罗里矽土吸附。二、黄曲酶毒素的测定方法二、黄曲酶毒素的测定方法黄曲酶毒素的检测技术开展很快。三、食品中黄曲酶毒素三、食品中黄曲酶毒素B1的薄层层析测定法的薄层层析测定法 黄曲酶毒素黄曲酶毒素B1、B2、G1、G2通常共同存在，其含量通常共同存在，其含量之间存在着一定的比例关系。在天然被污染的食品中，普之间存在着一定的比例关系。在天然被污染的食品中，普通以通以AFTB最多，而最多，而AFTB2 、G1、G2只含有一小部分，只含有一小部分，所以，食品中所以，食品中AFTB的测定结果，仍具有一定的代表意义。的测定结果，仍具有一定的代表意义。四四.操作条件的选择操作条件的选择(一一)采样采样食品中的黄曲霉素的分布不均匀食品中的黄曲霉素的分布不均匀,普通集中于霉坏粒普通集中于霉坏粒,其他如皱皮其他如皱皮枯萎枯萎,破损粒亦易污染破损粒亦易污染.污染了黄曲霉素的花生仁往往是脱色的污染了黄曲霉素的花生仁往往是脱色的,可可是是,也有例外也有例外,皱皮脱色的颗粒皱皮脱色的颗粒,有时未检出有毒素有时未检出有毒素,而外观正常的却而外观正常的却又含有毒素又含有毒素,所以所以,采样时要留意样品的代表性采样时要留意样品的代表性.(二)试样的制备粮谷类以小钢磨粉碎成粮谷类以小钢磨粉碎成20目目,花生的油脂含量较高花生的油脂含量较高,难以碾碎难以碾碎,通常采用碾药槽或手摇切片机通常采用碾药槽或手摇切片机,碾成约碾成约10目目.霉变潮湿的霉变潮湿的 样品样品,需求先在低温需求先在低温(60oC70oC)枯燥枯燥2小时后小时后,再行粉碎再行粉碎.为防止样品为防止样品中被测组分发生变化中被测组分发生变化,应及早检测应及早检测.(三)提取和净化1.乙烷乙烷,甲醇甲醇,水提取法水提取法此法运用于含油量或色素较高的样品此法运用于含油量或色素较高的样品.以液以液-液分配法液分配法,样品中的样品中的油脂和大部分的素被己烷提取油脂和大部分的素被己烷提取,而而AFTB1与醇溶性色素溶解于甲与醇溶性色素溶解于甲醇水溶液中醇水溶液中.随后以氯仿净化随后以氯仿净化.将氯仿家道甲醇将氯仿家道甲醇-水水-溶液液层中溶液液层中,使使AFTB1进入氯仿层进入氯仿层,而醇溶性色素留存于甲醇水溶液中而醇溶性色素留存于甲醇水溶液中.此法所费时间较少此法所费时间较少,但处置色素含量较高的样品时但处置色素含量较高的样品时,需求进一步净需求进一步净化化.2.去油提取法此法用于油脂含量高的食品此法用于油脂含量高的食品.首先首先,用索氏提取法除去样品中的用索氏提取法除去样品中的油脂提取时间约为油脂提取时间约为812小时小时,然后用氯仿提取然后用氯仿提取AFTB1,由于此法由于此法所费时间较长所费时间较长,未被普遍采用未被普遍采用.3.直接提取法直接提取法此法运用于油脂含量低的食品此法运用于油脂含量低的食品,直接用氯仿提取直接用氯仿提取.4.先提取后净化法先提取后净化法将样品与硅藻土和氯仿混合将样品与硅藻土和氯仿混合,过滤过滤,滤液以硅胶柱净化滤液以硅胶柱净化,并以并以甲醇甲醇-氯仿氯仿(3:97V/V)洗脱洗脱,搜集洗脱液搜集洗脱液,得到黄曲霉素得到黄曲霉素. (四四)分别分析分别分析黄曲霉毒素常用的吸附剂为硅胶黄曲霉毒素常用的吸附剂为硅胶-G,展开剂为丙酮展开剂为丙酮-氯仿氯仿(10:90),亦可用甲醇亦可用甲醇-氯仿氯仿(4:96)或苯或苯-乙醇乙醇-水水(46:35:19)的上层溶液的上层溶液.假设用假设用丙酮加氯仿展开时丙酮加氯仿展开时,黄曲霉毒素的黄曲霉毒素的Bf值应控制在值应控制在0.60.7.假设假设Rf值值改动改动,那么应改动丙酮与氯仿的配比那么应改动丙酮与氯仿的配比,例如改为例如改为15:85或或2:98或或6:94.操作条件如下操作条件如下:1制板要求制板要求 硅胶和硫酸钙应选用质量好的硅胶和硫酸钙应选用质量好的.以保证将以保证将AFTB1,B2,G1,G2分别分别清楚清楚.硅胶粒度应为硅胶粒度应为200300目目.薄层厚度为薄层厚度为0.250.5毫米毫米.2点样要求点样要求3.展开条件展开条件4.定量方法定量方法5.黄曲霉毒素确实证实验 普统统过以下步骤进展确证：1由于影响Rf值重现性的要素很多，所以，通常并不根据Rf值 进展鉴定。具有规范毒素时，在测定中用规范品作对照最为可 靠。即 在试液两侧，滴加两个规范样，展开后，在两个规范 样的直线上，假设存在荧光点，那么初步断定样品呈阳性。2可以改换几种展开剂。将样品和规范样滴加在同一个原点上 展开后，察看两者的荧光点能否重叠。3与薄层板的AFTB1点上，滴加一滴三氟醋酸。经分散后，它的直径应以刚好能覆盖样品为宜。在室温放置5分钟，使反响完全。然后用40oC 左右热风吹5分钟，放置5分钟，以丙酮氯仿展开后，察看所产生的衍生物，其Rf值为0.1左右。这个实验只能确证AFTB1与G1。 4用鸡胚和鸭雏进展毒性实验，然后进一步对肝作用鸡胚和鸭雏进展毒性实验，然后进一步对肝作 病理切片，破费时间较长，仅适用于科研任务。病理切片，破费时间较长，仅适用于科研任务。5用无水乙醚处置阳性物质。运用乙醚展开后，维用无水乙醚处置阳性物质。运用乙醚展开后，维 持原位并未挪动持原位并未挪动 的荧光点，便是黄曲霉毒素。乙的荧光点，便是黄曲霉毒素。乙 醚中有水存在，将影响醚中有水存在，将影响Rf值。层析值。层析 时，层析槽内时，层析槽内 可铺上一层无水硫酸钠。可铺上一层无水硫酸钠。 五、花生中曲霉毒素的微柱层析测定法1.主要仪器 紫外光灯 、 玻璃微柱管2.主要试剂1氯仿、丙酮、石油醚、甲醇等化学纯或分析纯。 2氧化铝 (中性欲酸性两中层析用，100200目 3硅镁型吸附剂 层析用，100200目 4无水硫酸钠 分析纯，作层析用的需加工过筛，80100目 与4080目 作吸附剂用的酸性与中性氧化铝、硅镁型吸附剂，用前应在110120oC活化2小时，置于枯燥器内储存备用，普通可保管一周左右。无水硫酸钠的处置与吸附剂同。 5黄曲霉毒素规范液0.2微克/毫升用氯仿作溶剂。 (6)其他包括脱脂棉，中速或快速定性滤纸，次氯酸钠消毒 液等。 3.测定步骤1样品提取 将花生仁样品磨细2毫升筛过物,混匀， 准确 称取20克磨碎的样品，置于250毫升具塞三角瓶中，参与石油醚30毫升、100毫升甲醇-水溶液55：45，V/V，瓶塞涂一层水，盖严防漏，振荡半小时，再用力摇匀后，立刻将样液大量的倒入放有折叠式的快速定性滤纸直径约8.5厘米 中，滤液流入50毫升量筒或比色管中勿将石油醚用过滤纸带进滤中，准确搜集最初的甲醇溶液25毫升，然后准确参与氯仿10毫升，振摇2分钟，翻开塞子，待分层后，用衔接减压安装的移液管抽去上层的甲醇水溶液，再加水至50毫升，悄然颠倒四次，洗去残留的甲醇，再同上法将上层液抽掉，参与无水硫酸钠4克，盖严，延续摇动10分钟，此即样品试液，每毫升样品试液含有0.5克样品。(3)微柱控制备 取微柱管置于微柱架上，按图13-4先后顺序参与各种试剂，脱脂棉作底层，无水硫酸钠80100目1厘米，硅镁型吸附试剂，100200目0.5厘米，无水硫酸钠80100目0.5 厘米，中性氧化铝1厘米，酸性氧化铝1厘米，无水硫酸钠4080目1.5厘米，装管时管要垂直，每装一种试剂要适当敲紧，两种试剂之间的界面要平，微柱管要随装随用，或边装边放于枯燥筒内保管，等所 需的 微柱管装完后再一同参与试剂，以免管内吸附剂暴露于空气中 的时间较长，减低活性。(2)规范系列的制备规范系列的制备 取氯仿配置懂得黄曲霉毒素取氯仿配置懂得黄曲霉毒素B1规范液规范液, 按下表配置成各种不同浓度的规范系列按下表配置成各种不同浓度的规范系列. 规范系列的配置见表规范系列的配置见表13-6P3614层析 取装好的柱管1支，参与样品试剂1毫升，另 取4支分别参与每 毫升含有0.005、0.010、0.015、0.025微克作为规范空白管。分别参与展开剂丙酮-氯仿1：9V/V1毫升。在加样品或展开时，柱管都要坚持垂直。待展开剂流完后，即可察看结果。5结果察看与评定 于365纳米波长紫外光灯下，将层析后的样品管与标 准系列管比较，假设样品管内硅镁型吸附剂层只现微黄色荧光环，那么样品中黄曲霉毒素含量为未检出；假设出现蓝紫色荧光环，那么与规范管比较，即可测定样品中黄曲霉素含量。如超越规范范围的，需作定量，那么可按其荧光强度少加样品试液再用氯仿补足到1毫升或稀释后再定量，普通在作完柱层析后，最好在23小时内进展察看。 (1)本法可用于开展花生中黄曲霉毒素的普查，以及快速本法可用于开展花生中黄曲霉毒素的普查，以及快速帅选及时发现污染。至于花生中黄曲霉毒素的测定结果要作帅选及时发现污染。至于花生中黄曲霉毒素的测定结果要作为断定根据时，那么仍需求进一步按薄层层析法进展测定和确为断定根据时，那么仍需求进一步按薄层层析法进展测定和确定。定。(2)关于微柱管吸附剂的细度关于微柱管吸附剂的细度,硅镁型吸附剂选用硅镁型吸附剂选用100200目目,其其上下两层的无水硫酸钠选用上下两层的无水硫酸钠选用80100目目,在微柱中出现的荧光环在微柱中出现的荧光环比较好比较好.否那么就会呵斥荧光环不均匀否那么就会呵斥荧光环不均匀,影响结果判别影响结果判别.5.讨论讨论(3)荧光环分散的缘由荧光环分散的缘由,能够由于吸附剂活性降低所致，应将吸附剂能够由于吸附剂活性降低所致，应将吸附剂于于oC烘烤，在空气潮湿条件下于烘烤，在空气潮湿条件下于 oC烘烤烘烤为宜，假设规范管不分散，而样品关分散，能够是样品脱水不完为宜，假设规范管不分散，而样品关分散，能够是样品脱水不完全留意在参与无水硫酸钠之前，一定要将氯仿上层的水层抽尽，全留意在参与无水硫酸钠之前，一定要将氯仿上层的水层抽尽，以及选择运用吸水性能强的无水硫酸钠或补加适量的无水硫酸钠以及选择运用吸水性能强的无水硫酸钠或补加适量的无水硫酸钠测定样品时，氧花铝层上蓝白色荧光杂质带，普通应出现测定样品时，氧花铝层上蓝白色荧光杂质带，普通应出现酸性氧化铝层，假设这种杂质被带下至中性氧化铝底层时，那么酸性氧化铝层，假设这种杂质被带下至中性氧化铝底层时，那么杂质进入硅镁型吸附剂层，会影响测定结果的评定杂质进入硅镁型吸附剂层，会影响测定结果的评定在做回收实验时，假设配制规范液的溶剂与提取剂不同，须在做回收实验时，假设配制规范液的溶剂与提取剂不同，须先将规范液置于容器内，用冷风吹干后，再参与样品作测定，否那先将规范液置于容器内，用冷风吹干后，再参与样品作测定，否那么能够回使结果偏低么能够回使结果偏低当实验条件未全面掌握好时，能够会出现假阴性或假阳性当实验条件未全面掌握好时，能够会出现假阴性或假阳性假阴性往往是由于黄曲霉毒素停留在氧化铝层，未到达硅镁吸附假阴性往往是由于黄曲霉毒素停留在氧化铝层，未到达硅镁吸附剂层而呵斥的，假阳性那么多由于应冲洗出管外的蓝色荧光杂质未剂层而呵斥的，假阳性那么多由于应冲洗出管外的蓝色荧光杂质未冲掉，仍停留在硅镁吸附层呵斥的出现上述两种情况时都应适冲掉，仍停留在硅镁吸附层呵斥的出现上述两种情况时都应适当添加展开剂用量可多加毫升因此，可在当添加展开剂用量可多加毫升因此，可在实验开场前，作黄曲霉毒素的实验开场前，作黄曲霉毒素的ppb程度的回收实验，程度的回收实验，以掌握好实验条件以掌握好实验条件