免疫测定室内免疫测定室内(sh ni)质控血清的应质控血清的应用用张 瑞卫生部临床(ln chun)检验中心第一页，共二十一页。免疫测定用室内质控血清免疫测定用室内质控血清(xuqng)的调整的调整 随着(su zhe)临床实验室检验水平的不断提高和检测试剂质量的不断改进，原有的室内质控物已经不能满足室内质控工作的需要，因此部中心对免疫测定用室内质控血清的含量进行了调整，同时改进了包装。第二页，共二十一页。针对针对(zhndu)(zhndu)的检测项目的检测项目HBsAg抗HCV抗HIV梅毒(mid)螺旋体抗体提供不同(b tn)含量的质控物是为了实验室根据不同(b tn)试剂的检测值选择合适的质控物，使质控物的检测值（S/CO值）在1.54之间。第三页，共二十一页。HBsAg质控血清质控血清(xuqng)定值的调整定值的调整HBsAg定值单位改变：2004年，WHO研制(ynzh)了第二代HBsAg标准物质，并将定值单位从ng/ml改为IU/ml。现1IU/ml0.5ng/ml定值（调整前）定值（调整后）调整原因0.2IU/ml用于一些灵敏度较高的试剂0.5IU/ml0.5ng/ml1IU/ml 1ng/ml 2IU/ml 2ng/ml 4IU/ml5ng/ml 浓度较高1万ng/ml “钩状效应”第四页，共二十一页。HBsAg室内室内(sh ni)(sh ni)质控品的选用质控品的选用定值适用试剂0.2IU/mlMurex，生物梅里埃试剂0.5IU/mlOrtho，Bio-Rad试剂，雅培i2000和Axsym检测系统和配套试剂1IU/ml国产试剂盒（万泰、新创、科华），血站和医院用2IU/ml国产试剂盒（万泰、新创、科华），医院用4IU/ml国产试剂盒（万泰、新创、科华），医院用第五页，共二十一页。抗抗HCV质控血清质控血清(xuqng)定值的调整及选用定值的调整及选用定值（调整前）定值（调整后）适用试剂1NCU/ml国产试剂盒（万泰、新创、科华、丽珠）和DiaSorin的试剂1NCU/ml2NCU/mlMurex、Ortho等试剂2NCU/ml 4NCU/ml雅培i2000和Axsym检测系统和配套试剂现现1NCU/ml0.5NCU/ml第六页，共二十一页。抗抗HIV质控血清质控血清(xuqng)定值的调整及选用定值的调整及选用定值（调整前）定值（调整后）适用试剂1NCU/ml国产试剂盒（万泰、新创、科华、丽珠）1NCU/ml2NCU/mlBio-Rad等试剂2NCU/ml 4NCU/ml进口试剂及配套仪器4NCU/ml8NCU/ml进口试剂及配套仪器现现1NCU/ml0.5NCU/ml1NCU/ml的确定：参考国际单位的确定：参考国际单位(dnwi)定值方法，采用定值方法，采用5种或以上试剂盒，结果种或以上试剂盒，结果63的试剂盒（按泊松分布计算）检测结果为阳性的值为的试剂盒（按泊松分布计算）检测结果为阳性的值为1NCU/ml。第七页，共二十一页。梅毒螺旋体抗体定值的调整梅毒螺旋体抗体定值的调整(tiozhng)及选及选用用定值（调整前）定值（调整后）适用试剂1NCU/ml（特异）国产试剂盒2NCU/ml（特异）国产试剂盒2NCU/ml（特异） 4NCU/ml（特异）进口试剂及/或配套仪器2NCU/ml（非特异）2NCU/ml（非特异）RPR、TRUST现现1NCU/ml0.25NCU/ml第八页，共二十一页。注意事项注意事项室内质控物仅用于相应项目的室内质量控制，不能用于阴阳性结果的判断。定值质控物不适合评价试剂盒整体性能是否合格,但可用于试剂的批内、批间变异和测定下限的评价质检。如果需要对试剂进行比较评价和全面(qunmin)质检请选用相应项目的临床考核血清盘。第九页，共二十一页。临床考核临床考核(koh)血清盘血清盘项目项目规格规格支数/套HBsAg0.5ml/支40抗HCV0.25ml/支40梅毒螺旋体抗体 0.5ml/支40第十页，共二十一页。HBsAg血清血清(xuqng)盘盘l灵敏度l特异性lHBsAg变异的检测能力：如G145R等lHook效应(xioyng)导致的假阴性第十一页，共二十一页。样本样本编号编号含量含量(IU/ml)A（S/CO)B（S/CO)C（S/CO)D （S/CO)E（S/CO)1680.20.40.49.57.328101.00.70.49.814.910200000040.837.636.227.124.116约约160000040.043.941.047.135.08阴性阴性20.91.50.40.70.719阴性阴性9.47.719.20.40.427阴性阴性16.60.30.80.50.6360.5-1.01.61.62.97.38.5370.5-1.01.11.33.03.86.838约约0.20.60.81.82.43.9390.2-0.50.20.60.91.13.0HBsAg血清血清(xuqng)盘盘第十二页，共二十一页。抗抗HCV血清血清(xuqng)盘盘l不同试剂厂家的不同试剂厂家的ELISAELISA试剂盒所用包被抗原的差异：试剂盒所用包被抗原的差异：目前目前抗抗HCVHCV检测检测ELISAELISA试剂盒均采用试剂盒均采用HCVHCV的基因工程或合成多肽抗原的基因工程或合成多肽抗原(kngyun)(kngyun)（核心区、（核心区、NS3NS3、NS4NS4和和NS5NS5等）包被固相，以间接法进行测定，上述等）包被固相，以间接法进行测定，上述HCVHCV抗原的组合、来源及用量等方面的差异而造成检测结果不一致。抗原的组合、来源及用量等方面的差异而造成检测结果不一致。 l抗抗HCV ELISAHCV ELISA出现假阳性的主要原因有：出现假阳性的主要原因有： 1.1.类风湿因子（类风湿因子（RFRF）的干扰）的干扰 2. 2.高免疫球蛋白血症高免疫球蛋白血症 3. 3.标本中超氧化物歧化酶（标本中超氧化物歧化酶（SODSOD）的干扰）的干扰 4. 4.用于固相包被的用于固相包被的HCVHCV基因工程抗原不纯基因工程抗原不纯第十三页，共二十一页。抗抗HCV血清血清(xuqng)盘盘样本样本编号编号ABCDEFGRIBANS4NS3CNS5281.221.870.650.780.770.670.3+337.8311.96.324.286.24.760.62+340.920.680.610.841.140.650.3+356.414.111.862.992.812.040.34+381.62.061.860.681.682.051.38+152.42 0.820.550.65 0.5 0.5 0.5第十四页，共二十一页。检测方法1.检测非特异性抗体-使用类脂质抗原(kngyun)的血清学试验 ：RPR、TRUST2.检测特异性抗体-使用密螺旋体抗原的血清学试验：FTA-ABS、TPHA、TPPA 、ELISA 、WB梅毒螺旋体抗体梅毒螺旋体抗体(kngt)血清盘血清盘第十五页，共二十一页。梅毒梅毒(mid)螺旋体抗体血清盘螺旋体抗体血清盘TP14TP17TP45TP47EUIgMEUIgGA(OD值)BC(OD值)D(OD值)RPR胶体金胶体金1+0.090.7363.19927.353.7763.604+4+ +0.3350.964.04127.612.1692.006+7+ +0.2561.120.65431.241.2150.978+23+/-+/-+0.2251.133.94830.241.8971.367+33+0.1600.082 1.329 0.90 0.027 0.662 +Hook效应(xioyng) 第十六页，共二十一页。原倍原倍1：101：201：401：801：16013.3572.9462.0991.4280.9360.49042.2772.2561.9701.6151.0600.60371.7033.0662.9383.0233.1252.289232.3603.0892.8842.9752.2581.481梅毒梅毒(mid)螺旋体抗体血清盘螺旋体抗体血清盘1、4、7、23号血清(xuqng)稀释结果显示存在hook效应。第十七页，共二十一页。IgM抗体(kngt)漏检梅毒螺旋体抗体梅毒螺旋体抗体(kngt)血清盘血清盘TP14TP17TP45TP47EUIgMEUIgGA(OD值)BC(OD值)D(OD值)RPR胶体金胶体金1+0.090.7363.19927.353.7763.604+4+ +0.3350.964.04127.612.1692.006+7+ +0.2561.120.65431.241.2150.978+23+/-+/-+0.2251.133.94830.241.8971.367+33+0.1600.082 1.329 0.90 0.027 0.662 +第十八页，共二十一页。使用使用(shyng)(shyng)方法方法质控血清质控血清(xuqng)(xuqng)都经过灭活处理，但仍应按照有潜在生物传都经过灭活处理，但仍应按照有潜在生物传染性样本对待。染性样本对待。HBsAgHBsAg，抗，抗HCVHCV，抗，抗HIVHIV，梅毒螺旋体抗体的质控血清加样时，梅毒螺旋体抗体的质控血清加样时按待测病人原始样本对待，依照试剂盒说明书进行操作。按待测病人原始样本对待，依照试剂盒说明书进行操作。实验室收到血清后应将血清保存在实验室收到血清后应将血清保存在1818以下，保质期为以下，保质期为1 1年。使用时将血清在室温复融，应注意待血清完全融化年。使用时将血清在室温复融，应注意待血清完全融化后平衡至室温并充分混匀。复融后的血清如果当日未使后平衡至室温并充分混匀。复融后的血清如果当日未使用完且无污染，可保存在用完且无污染，可保存在2828，限，限1 1周内用完，避免反周内用完，避免反复冻融和重新分装质控血清样本。复冻融和重新分装质控血清样本。第十九页，共二十一页。谢谢 谢！谢！第二十页，共二十一页。内容(nirng)总结免疫测定室内(sh ni)质控血清的应用。随着临床实验室检验水平的不断提高和检测试剂质量的不断改进，原有的室内(sh ni)质控物已经不能满足室内(sh ni)质控工作的需要，因此部中心对免疫测定用室内(sh ni)质控血清的含量进行了调整，同时改进了包装。提供不同含量的质控物是为了实验室根据不同试剂的检测值选择合适的质控物，使质控物的检测值（S/CO值）在1.54之间。现1IU/ml0.5ng/ml。国产试剂盒（万泰、新创、科华。谢 谢第二十一页，共二十一页。