实验十实验十 杀菌剂的生物测定杀菌剂的生物测定-生长速率法生长速率法一、实验目的一、实验目的一、实验目的一、实验目的学习并掌握杀菌剂的生物测定方法之一学习并掌握杀菌剂的生物测定方法之一学习并掌握杀菌剂的生物测定方法之一学习并掌握杀菌剂的生物测定方法之一-生长速率法生长速率法生长速率法生长速率法二、实验原理二、实验原理生长速率法是杀菌剂毒力测定的常规方法之一，适用于不生长速率法是杀菌剂毒力测定的常规方法之一，适用于不长孢子而菌丝生长较快的真菌，是通过菌落生长的速度快长孢子而菌丝生长较快的真菌，是通过菌落生长的速度快慢来衡量药剂的毒力大小慢来衡量药剂的毒力大小生长速率法又叫含毒介质法，它是将供试药剂与培养基混生长速率法又叫含毒介质法，它是将供试药剂与培养基混合，以培养基上菌落的生长速度来衡量化合物的毒力大小。合，以培养基上菌落的生长速度来衡量化合物的毒力大小。一般多用于那些不产孢子或孢子量少而菌丝较密的真菌一般多用于那些不产孢子或孢子量少而菌丝较密的真菌u菌落生长速率的表示方法菌落生长速率的表示方法u菌落达到一个给定的大小所需要的时间（天或小时）菌落达到一个给定的大小所需要的时间（天或小时）u在单位时间内菌落直径的大小在单位时间内菌落直径的大小u生长速率法常用的菌种生长速率法常用的菌种u棉花枯萎病菌（棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporium）u苹果腐烂病菌（苹果腐烂病菌（Valsa mali）u小麦纹枯病菌（小麦纹枯病菌（Rhzoctonia solani ）u葡萄白腐病菌（葡萄白腐病菌（Coniothyrium diplodiella）u小麦全蚀病菌（小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminis）u辣椒疫霉病菌（辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）三、试剂和仪器设备三、试剂和仪器设备三、试剂和仪器设备三、试剂和仪器设备l l高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种针、纱布、吸高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种针、纱布、吸高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种针、纱布、吸高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种针、纱布、吸管、消毒培养皿、打孔器、无菌小烧杯管、消毒培养皿、打孔器、无菌小烧杯管、消毒培养皿、打孔器、无菌小烧杯管、消毒培养皿、打孔器、无菌小烧杯l lPDAPDAPDAPDA培养基培养基培养基培养基l l病原菌（苹果腐烂病菌）病原菌（苹果腐烂病菌）病原菌（苹果腐烂病菌）病原菌（苹果腐烂病菌）l l供试杀菌剂供试杀菌剂供试杀菌剂供试杀菌剂( ( ( (多菌灵多菌灵多菌灵多菌灵) ) ) )四、实验步骤四、实验步骤四、实验步骤四、实验步骤uu将培养基加热溶化，冷却至将培养基加热溶化，冷却至将培养基加热溶化，冷却至将培养基加热溶化，冷却至45-5045-5045-5045-50，加入供试药液制成，加入供试药液制成，加入供试药液制成，加入供试药液制成含药液的培养基，并分别倒入培养皿中冷却含药液的培养基，并分别倒入培养皿中冷却含药液的培养基，并分别倒入培养皿中冷却含药液的培养基，并分别倒入培养皿中冷却uu以无菌操作手续，用打孔器打取圆形菌块后用接种针挑至以无菌操作手续，用打孔器打取圆形菌块后用接种针挑至以无菌操作手续，用打孔器打取圆形菌块后用接种针挑至以无菌操作手续，用打孔器打取圆形菌块后用接种针挑至培养皿中央，然后将培养皿置于培养箱（培养皿中央，然后将培养皿置于培养箱（培养皿中央，然后将培养皿置于培养箱（培养皿中央，然后将培养皿置于培养箱（27272727）中培养即可）中培养即可）中培养即可）中培养即可uu于处理后不同时间观察测定菌丝的生长情况于处理后不同时间观察测定菌丝的生长情况于处理后不同时间观察测定菌丝的生长情况于处理后不同时间观察测定菌丝的生长情况五、实验数据及其处理五、实验数据及其处理五、实验数据及其处理五、实验数据及其处理纯生长量纯生长量纯生长量纯生长量= = = =菌落平均直径菌落平均直径菌落平均直径菌落平均直径- - - -菌饼直径菌饼直径菌饼直径菌饼直径抑菌率（抑菌率（抑菌率（抑菌率（% % % %）=(=(=(=(对照菌落纯生长量对照菌落纯生长量对照菌落纯生长量对照菌落纯生长量- - - -处理菌落纯生长量处理菌落纯生长量处理菌落纯生长量处理菌落纯生长量/ / / /对照纯生长量对照纯生长量对照纯生长量对照纯生长量100%100%100%100%药药剂剂浓度浓度（mg/Lmg/L）浓度浓度对数对数菌落直径（菌落直径（mmmm）抑制抑制（% %）机机率率值值平均平均50%多菌灵对苹果腐烂病菌的抑制作用(生长速率法)六、问题讨论六、问题讨论六、问题讨论六、问题讨论根据实验结果比较各种供试药剂之间对病原菌菌丝生长根据实验结果比较各种供试药剂之间对病原菌菌丝生长根据实验结果比较各种供试药剂之间对病原菌菌丝生长根据实验结果比较各种供试药剂之间对病原菌菌丝生长的抑制作用的抑制作用的抑制作用的抑制作用