单克隆抗体获得杂交细胞获得杂交细胞制备制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振动、电刺激）动、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合杂交前细胞处理杂交前细胞处理细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目比较植物、动物细胞融合比较植物、动物细胞融合单克隆抗体克隆抗体1.常规抗体的制备常规抗体的制备方法方法 ：缺陷：缺陷：向动物体内反复注射某种抗原，使动向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。所需抗体。产量低，纯度低，特异性差。产量低，纯度低，特异性差。为什么产量低？为什么产量低？为什么纯度低？为什么纯度低？1.抗原抗原诱导动物物产生的效生的效应B细胞数量有限。胞数量有限。 2.抗原比较复杂，可能诱导产生多种效应抗原比较复杂，可能诱导产生多种效应B细细胞，产生多种抗体。胞，产生多种抗体。3. 另动物在未接触注射的抗原之前，体内可能另动物在未接触注射的抗原之前，体内可能就存在多种效应就存在多种效应B细胞，多种抗体。细胞，多种抗体。 据研究，动物在免疫的过程中，体内产生的特异据研究，动物在免疫的过程中，体内产生的特异性抗体种类可达百万种以上，但每一个性抗体种类可达百万种以上，但每一个B B淋巴细胞淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。只分泌一种特异性抗体。 如何获得纯度高、产量大的抗体呢？如何获得纯度高、产量大的抗体呢？设计方案：设计方案：一个一个B淋巴淋巴细胞胞（只分泌只分泌一种特异性抗体一种特异性抗体）小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞 （能无限增殖）（能无限增殖）细胞融合细胞融合克隆克隆杂杂交交瘤瘤细细胞胞大大量量抗抗体体 （1）.定义：克隆单一的杂交瘤细胞定义：克隆单一的杂交瘤细胞 所产生的大量抗体。所产生的大量抗体。2、单克隆抗体、单克隆抗体 由于每个淋巴细胞只能分泌一种抗体，由于每个淋巴细胞只能分泌一种抗体，则每个杂交瘤细胞只能分泌一种抗体，由一则每个杂交瘤细胞只能分泌一种抗体，由一 个杂交瘤个杂交瘤 细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份也是单一的。化学成份也是单一的。（2 2）制备过程（图解）：）制备过程（图解）：1注射抗原的目的是什么？注射抗原的目的是什么？2从小鼠脾脏中提取的从小鼠脾脏中提取的B细胞细胞都能产生抗体吗？都能产生抗体吗？3都能产生所需抗体吗？都能产生所需抗体吗？1诱导其融合的方法有哪些？诱导其融合的方法有哪些？2为什么要用许多为什么要用许多B细胞和许多细胞和许多瘤细胞融合？瘤细胞融合？3用一个用一个B细胞和细胞和1个瘤细胞融个瘤细胞融合行吗？合行吗？1融合后培养液中有几种细胞？融合后培养液中有几种细胞？2其中杂交瘤细胞有几种？其中杂交瘤细胞有几种？1怎样筛选出杂交瘤细胞？怎样筛选出杂交瘤细胞？2淘汰了哪些细胞？淘汰了哪些细胞？3筛选出的杂交瘤已经符合要筛选出的杂交瘤已经符合要求了吗？求了吗？4杂交瘤细胞有何优点？杂交瘤细胞有何优点？1 1为何要进行克隆化培养？为何要进行克隆化培养？2 2为何进行为何进行专一抗体检测？专一抗体检测？ 3 3筛选的出杂交瘤细胞为什么筛选的出杂交瘤细胞为什么还要再次筛选，并多次筛选？还要再次筛选，并多次筛选？怎样筛选？怎样筛选？1注射到小鼠血液中培养行吗？注射到小鼠血液中培养行吗？2体内培养为何优于外培养？体内培养为何优于外培养？整个制备过程整个制备过程至少至少要经过要经过两次两次筛选筛选第一次筛选在选择性培养基上进行，得到第一次筛选在选择性培养基上进行，得到杂交瘤细胞（多种），杂交瘤细胞（多种），第二次筛选在多孔培养板上进行，在每孔只有一第二次筛选在多孔培养板上进行，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，并进行专一抗个杂交瘤细胞的情况下开始培养，并进行专一抗体检测，从而筛选出能产生特异性抗体的细胞群。体检测，从而筛选出能产生特异性抗体的细胞群。该筛选要重复多次，确保筛选出的细胞群来自单该筛选要重复多次，确保筛选出的细胞群来自单个杂交瘤细胞。个杂交瘤细胞。细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是胞克隆的含义，只不过克隆的不是B B淋巴细胞，淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。而是杂交瘤细胞。介绍一种选择性培养基介绍一种选择性培养基已知细胞合成已知细胞合成DNA有有D和和S两条途径，其两条途径，其中中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条中有这两条DNA合成途径，但一般不分合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加管中混合，加PEG促融，在筛选培养基促融，在筛选培养基上筛选获得杂种细胞。上筛选获得杂种细胞。（2）过程）过程(文字文字)B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞诱导诱导融合融合B-B细胞细胞B-瘤细胞瘤细胞瘤瘤-瘤细胞瘤细胞选择培养选择培养杂交瘤细胞杂交瘤细胞（ B-瘤细胞）瘤细胞）克隆化培养克隆化培养抗体检测抗体检测获得足够数获得足够数量的能分泌量的能分泌所需抗体的所需抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体（3 3）.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大量大作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的微作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的微细差异，并与其特异性结合细差异，并与其特异性结合。具有准确、高效。具有准确、高效简易、快速的优点。如简易、快速的优点。如“ “早早孕诊断试剂盒早早孕诊断试剂盒” ”。用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”=抗癌细胞抗癌细胞 的单克隆抗体的单克隆抗体+药物药物 药物：放射性同位素、化学药物和毒素等物质药物：放射性同位素、化学药物和毒素等物质治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗问题思考问题思考 除通除通过杂交瘤交瘤细胞胞产生生单克隆抗体外，克隆抗体外，还有什么方法？有什么方法？1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A2.动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是-（ ）A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B. 制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新品种培育新品种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D. 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 AD4. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（ ）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D4. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A B C D C5由由单克隆抗体研制而成的克隆抗体研制而成的“生物生物导弹”由两由两部分部分组成，一是成，一是“瞄准装置瞄准装置”，二是，二是杀伤性性“弹头”，下列，下列对此描述正确的是此描述正确的是(多多选)（）A“瞄准装置瞄准装置”是由是由识别肿瘤的瘤的单克隆抗体克隆抗体构成构成B“弹头”是由放射性同位素、化学是由放射性同位素、化学药物和物和毒素毒素等物等物质构成构成C“弹头”中的中的药物有物有选择杀伤肿瘤瘤细胞的胞的功能功能D“生物生物导弹”是利用是利用细胞工程制胞工程制备出来的出来的ABD6.填空填空题 （1）技技术是是单克隆克隆抗体技抗体技术的基的基础。（2）单克隆抗体与常克隆抗体与常规抗体相比，最大的抗体相比，最大的优越性越性是是（3）动物物细胞融合除了采用植物胞融合除了采用植物细胞原生胞原生质体融合体融合的的诱导剂外，外，还可以可以 采用采用。（4）选出的出的杂交瘤交瘤细胞既具胞既具备骨髓瘤的骨髓瘤的的特点，又具的特点，又具备淋巴淋巴细胞的胞的特点特点（5）淋巴）淋巴细胞是由胞是由动物体物体中的中的细胞分化胞分化发育而来。育而来。（6）杂交瘤交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是主要方式是 动物细胞培养动物细胞培养特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高灭活的病毒灭活的病毒体外无限增殖体外无限增殖分泌特异抗体分泌特异抗体骨髓骨髓造血干造血干主动运输主动运输