无菌粉针剂分装过程验证（培养基模拟分装试验)B1B1 李洁丽李洁丽 陈碧娴陈碧娴 莫榕彬莫榕彬 卢立焙卢立焙目录目录l一. 培养基模拟分装试验目的l二.验证前的准备l三.无菌模拟试验的通常流程l四. 实验记录表l五.粉针剂对培养基灌封的要求l六.培养基分装的合格标准l七.培养基灌装失败的原因分析l八.其他一一.培养基模拟分装试验培养基模拟分装试验目的目的l证明在无菌粉针分装过程中所采用的各种方法和各种规程以防止微生物的水平达到可接受的合格标准的能力，或提供保证所生产产品的无菌性的可信限度达到可接受的合格标准的证据。二二.验证前的准备验证前的准备（一）需要完成的验证1.公用设施确认和验证l空调系统的确认和验证l水系统的确认和验证l其它设施的验证2.设备的确认和验证（IQ,OQ,PQ等）3.灭菌工艺的验证l无菌室消毒验证l湿热，干热灭菌工艺l在线灭菌验证l除菌过滤的验证l过滤器的泡点测试4.清洗验证l胶塞的清洗l瓶子的清洗5.计算机验证(二）主要程序的建立l人流，物流的确定l设备使用要求和参数l无菌室消毒和维护的要求l粒子和微生物监控的要求和频率l.（三）人员培训l设备使用的培训l人员的更衣培训和无菌技术的培训l取样的培训三三.无菌模拟试验的通常流程无菌模拟试验的通常流程1.将培养基暴露于设备、容器胶塞密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。2.对装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长。l3.评价结果，确定实际生产中（如灌装前的调试、加入无菌原辅材料、无菌连接、灌装和密封）产品污染的可能性。（一）、培养基灌装试验的培养基和模拟替（一）、培养基灌装试验的培养基和模拟替代物代物l1. 培养基培养基l CASO-broth USPX XII l（胰酶酪胨大豆培养基（胰酶酪胨大豆培养基 ）l培养基的要求培养基的要求l无菌性试验合格无菌性试验合格l抑菌性试验合格抑菌性试验合格l2. 模拟替代物模拟替代物l抑菌性试验合格抑菌性试验合格l物理、化学性质相似试验物理、化学性质相似试验（二）MFT的前期工作的前期工作 1.模拟灌装试验人员的培训模拟灌装试验人员的培训l（1）模拟灌装试验人员无菌操作知识培训）模拟灌装试验人员无菌操作知识培训l（2）模拟灌装试验人员无菌检验知识培训）模拟灌装试验人员无菌检验知识培训l（3）模拟灌装装备检修人员的无菌设备维修）模拟灌装装备检修人员的无菌设备维修 知识培训知识培训l（4）模拟灌装试验）模拟灌装试验SOP培训（含生产、培训（含生产、QC、计量、装备）、计量、装备）l（5）模拟灌装试验）模拟灌装试验SOR培训（含生产、培训（含生产、 QC、计量、装备）、计量、装备）l2.环境验证环境验证l（1）HVAC系统的微生物、尘粒验证系统的微生物、尘粒验证l（2）洁净区压差验证）洁净区压差验证l（3）洁净区风速验证）洁净区风速验证l（4）B级背景下级背景下A级单向层流验证级单向层流验证 3.无菌生产设备的灭菌验证无菌生产设备的灭菌验证（注意：模拟分装设备应在无菌效期内进行）（注意：模拟分装设备应在无菌效期内进行）l（1）灭菌设备如隧道烘箱、干热灭菌柜、湿热灭菌柜灭菌效果验证）灭菌设备如隧道烘箱、干热灭菌柜、湿热灭菌柜灭菌效果验证l（2）直接接触无菌药品的设备、容器、管道灭菌效果验证）直接接触无菌药品的设备、容器、管道灭菌效果验证l（3）除菌过滤器除菌效果验证）除菌过滤器除菌效果验证4.物料、用品及用具的灭菌物料、用品及用具的灭菌l（1）无菌培养基的准备）无菌培养基的准备l（2）分装模拟替代物的灭菌）分装模拟替代物的灭菌l（3）中间体无菌验证。（如果需要的话）中间体无菌验证。（如果需要的话）l（4）直接接触无菌药品的内包材灭菌）直接接触无菌药品的内包材灭菌 A 塑料袋无菌验证塑料袋无菌验证 B 安瓿、西林瓶无菌验证。安瓿、西林瓶无菌验证。 C 胶塞无菌验证胶塞无菌验证l（5）进、出器具的消毒）进、出器具的消毒l（6）装载容器、用品及用具灭菌）装载容器、用品及用具灭菌l（7）无菌物料检测仪器、物品灭菌）无菌物料检测仪器、物品灭菌l（8）蠕动泵、管道输送灭菌）蠕动泵、管道输送灭菌5.生产检验人员的无菌或微生物验证生产检验人员的无菌或微生物验证l无菌服无菌验证无菌服无菌验证l人员的手套、手臂、口罩、胸部、前额（或眼人员的手套、手臂、口罩、胸部、前额（或眼罩）的微生物验证罩）的微生物验证（三）培养基灌装（三）培养基灌装流程流程l1.实验用培养基和培养温度的选择实验用培养基和培养温度的选择l选择时的注意事项适应广谱微生物生长，包括细菌和真菌较好的澄明度，较小的粘度易于除菌过滤常用培养基：3大豆胰蛋白肉汤（TSB）厌氧培养基仅在特殊情况下使用培养温度FDA - 20-35，目标值2.5，不少于14天；如选择两个温度，则每一温度下至少培养7天，从低温开始。PIC - 20-25下至少14天，或，先20-25下7天， 然后30-35下7天。l2.灌装体积与数量灌装体积与数量l灌装体积每只容器的灌装体积不少于总容积的1/3同样，灌装体积也不宜过大既要考虑到瓶倒转或旋转时，培养基能充分接触到容器和密封件的内表面，又要保证容器内有足够的氧气支持微生物生长。灌封数量综合考虑统计学要求和实际生产批量。FDA (5000瓶)：如果正常生产的批次量低于5000瓶，则培养基灌封至少应为实际生产线的最大批次量。PIC (3000瓶)：如果正常生产的批次量低于3000瓶，则培养基灌封至少应为实际生产线的最大批次量。l3.灌封时间与批次量控制灌封时间与批次量控制灌装时间对于初始性验证，培养基灌封实验应安排在一周内的不同时间进行。对于再验证，可选择在一周结束或其它最差条件下进行。灌封时间要涵盖实际生产班次。批次量控制初次验证，至少要连续成功灌封3个批次。再验证至少需要成功灌封1个批次。（四）试验结果（四）试验结果和分析结果判定：经试验灌装好的培养基按以上要求培养14天后，应将每瓶培养基对着灯光仔细目测。透明、澄清、无混浊的培养基判为无微生物生长；培养基混浊或有悬浮的菌丝或菌落，则需做进一步的微生物生长检查，以确定培养基是否真正染菌。一旦确认染菌，应明确记录瓶号、瓶数，同时应检查铝盖、胶塞的密封情况；若有破损应记录并检查其破损原因。对微生物污染的样品应进行鉴别试验，鉴别的内容至少应包括菌落、细胞形态学及革兰氏染色特性等。 l1.样品的培养样品的培养l置于置于3035的温度下至少培养的温度下至少培养7天，然后天，然后 转入转入2025至少培养至少培养7天。天。l在第三天和第七天至少观察培养基样品微在第三天和第七天至少观察培养基样品微生物的生长情况一次，并且在检测期间的生物的生长情况一次，并且在检测期间的最后一天至少再观察一次。最后一天至少再观察一次。2.结果的分析结果的分析l对微生物污染的样品应进行鉴别试验，鉴别的内容对微生物污染的样品应进行鉴别试验，鉴别的内容 至少应包括菌落、细胞形态学及革兰染色特性等。至少应包括菌落、细胞形态学及革兰染色特性等。l不成功（染菌）原因不成功（染菌）原因（1）环境（生产）环境（生产.检验检验.储存储存.）（2）设备）设备（3）物料）物料（4）转移过程的容器）转移过程的容器（5）水）水（6）检测）检测l（7）人员）人员A.更衣更衣?B.消毒消毒?C.操作过程操作过程?D.操作人员操作人员?E.QC人员人员?F.管理人员管理人员?G.其它人员其它人员?(如外来参观人员等如外来参观人员等) H.（8）细菌种类鉴别及污染源）细菌种类鉴别及污染源A. 链菌、球菌链菌、球菌 人员人员B. 杆菌杆菌 水系统水系统C. 其它细菌其它细菌 其它其它四四. 实验记录表实验记录表(实验记录表在Word文件里）五五.粉针剂对培养基灌封的要求粉针剂对培养基灌封的要求第一种方法在灌装线上直接灌装液体培养基，灌装后压塞-轧盖或熔封。第二种方法先灌装干粉培养基，再加入注射用水第三种方法先灌装惰性剂，再加入液体培养基要点采用第二、三种方法时，所用惰性剂或干粉培养基需事先经过辐射灭菌。常用惰性剂有聚乙二醇8000、羧甲基纤维素、乳糖。六六.培养基分装的合格标准培养基分装的合格标准lWHO 1973 合格标准： 0.3%lPDA mid-1970s合格标准： 0.1%lPDA mid-1980s 引入了统计学的概念l当样本3000瓶，可信限为95%时污染率小于等于0.1%为合格标准l计算公式：l实际污染率（95可信限的控制上限）100 模拟分装的瓶数l实际污染率应小于等于0.1%，判为合格污染瓶数，灌装瓶数和污染瓶数，灌装瓶数和95置信限值的关系置信限值的关系污染瓶数 01234595可信值 3 4.746.37.759.1510.51的控制上限最少的灌装3000475063007760916010520数量l举例：模拟分装了5000瓶，发现有一瓶污染，问结果是否合格？答：有一瓶污染，其95%可信值的控制上限为：4.74 实际污染率=4.74/5000 *100%=0.0949%0.1% 判为合格。培养基灌装的合格培养基灌装的合格标准准FDA和和EU要要求求l5000瓶l0污染，合格l1瓶污染，调查原因，3批再验证l5000瓶 10000瓶l1瓶污染，调查原因，重复一次验证l2瓶污染，调查原因，3批再验证培养基灌装的合格培养基灌装的合格标准企准企业的要求的要求l5000瓶l0污染，合格l1污染，调查原因，回顾最近3批验证l最近3批0污染，重复一次验证l最近3批有1污染，3批的再验证l2污染，调查原因，3批的再验证七七.培养基灌装失败的原因分析培养基灌装失败的原因分析无菌测试中产品无菌测试中产品阳性阳性培养基灌装时环培养基灌装时环境超标境超标日常生产时环境超日常生产时环境超标标无菌测试时环境无菌测试时环境超标超标培养基培养基灌装中灌装中发现阳发现阳性瓶性瓶增加MD灌装数量和环境监控的频率，特别是设备安装时的监控数据增加监控的频率，找出潜在的原因增加MD环境监控的频率审核一下培养基配制和消毒的过程无菌测无菌测试中产试中产品阳性品阳性增加培养基灌装的瓶数增加日常环境超标位置的取样频率增加培养基灌装的瓶数增加MD环境超标位置的取样频率审核无菌测试的程序审核测试房间的灭菌和消毒程序培养基培养基灌装时灌装时发现环发现环境超标境超标增加培养基灌装的瓶数，确定对产品影响审核取样过程审核人员的操作，更衣，消毒等审核取样过程审核人员的操作，更衣，消毒等日常生日常生产时环产时环境超标境超标审核取样过程审核人员的操作，更衣，消毒等八八.其他其他 1.再再验证（3批批验证）l新设施l新的设备或过程，并使用不同的操作原则l生产线被安装到新的厂房或新的房间l超过一年以上停止无菌生产l无菌区域多个地方同时进行房间或设备的整修l任何首次验证或确认验证失败l任何环境或无菌测试失败，质量部根据调查结果，所作出再验证的决定2.确确认验证（1批批验证）l一年二次验证（间隔48个月）l非计划的空气流向的改变（如停电等），并且根据QA判断，需要验证l无菌灌装间重大的，单个设备的维修或设备的改变l无菌灌装间灌装设备布局的重新调整l超过半年以上停止无菌生产l灌装验证中有一个阳性l非过程原因导致的模拟灌装验证的失败