病源性球菌与杆菌病源性球菌与杆菌一、实验目的一、实验目的1.掌握链球菌、脑膜炎双球菌、结核杆菌、白喉杆掌握链球菌、脑膜炎双球菌、结核杆菌、白喉杆菌的形态特征和染色特性。菌的形态特征和染色特性。2.熟悉肠道杆菌培养特征、生化反应及动力学等特熟悉肠道杆菌培养特征、生化反应及动力学等特性。性。3.了解三种葡萄球菌产生的色素。了解三种葡萄球菌产生的色素。4.了解乙型溶血型链球菌在血琼脂平板上的菌落特了解乙型溶血型链球菌在血琼脂平板上的菌落特点及溶血性。点及溶血性。5熟悉抗熟悉抗“o试验的方法及临床意义。试验的方法及临床意义。二、实验内容二、实验内容1.自己动手观察链球菌、脑膜炎双自己动手观察链球菌、脑膜炎双球菌的形态球菌的形态;示教观察结核杆菌、示教观察结核杆菌、白喉杆菌的形态。白喉杆菌的形态。2.观察肠道杆菌的双糖发酵，鉴别观察肠道杆菌的双糖发酵，鉴别培养基培养基ss培养基的生化反应。培养基的生化反应。3.化脓性球菌的鉴定化脓性球菌的鉴定三种葡萄球菌的色素观察三种葡萄球菌的色素观察乙型链球菌的溶血现象观察乙型链球菌的溶血现象观察抗抗“O实验。实验。三、作业：1.镜下绘出4种形态图2.根据生化特性及产生色素，葡萄球菌分为哪几种类型？ 管号加入物12345血清（Ab）1：250血清0.25ml1:500血清0.25ml1:750血清0.25ml缓冲液0.25ml0.25ml溶血素“O”(Ag)0.25ml0.25ml0.25ml0.25ml2%兔RBC0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml结果Salmonella -Shigella Mediun主要成分主要成分 基础营养基础营养 乳糖乳糖 指示剂指示剂 抑制剂抑制剂分解乳糖分解乳糖不分解乳糖不分解乳糖产酸产酸PH指示剂变红色指示剂变红色红色大菌落红色大菌落大肠杆菌等大肠杆菌等无明显变化无明显变化无色半透明小菌落无色半透明小菌落志贺菌等志贺菌等大肠杆菌痢疾杆菌结核分枝杆菌抗酸染色乙型溶血性链球菌溶血环白喉棒状杆菌异染颗粒实验四实验四 病原性球菌病原性球菌1. 1. 五类病原性球菌的形态、排列及染色性五类病原性球菌的形态、排列及染色性2. 2. 葡萄球菌、链球菌的培养物葡萄球菌、链球菌的培养物3. 3. 血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验-玻片法玻片法 试管法试管法4 4、抗链球菌溶血素、抗链球菌溶血素O O”（ASOASO乳胶试验乳胶试验5 5、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定示教示教示教示教（操作，（操作，1人人/组）组）示教示教示教示教示教示教示教示教示教示教示教示教（操作，（操作，1人人/组）组）肺炎球菌特殊染色可见的荚膜肺炎球菌特殊染色可见的荚膜 G+球菌：球菌：金葡菌金葡菌链球菌链球菌肺炎双球菌肺炎双球菌1. 五类病原性球菌的形态、排列及染色性五类病原性球菌的形态、排列及染色性示教示教示教示教 G-球菌：球菌： 淋球菌淋球菌 脑膜炎球菌脑膜炎球菌2. 葡萄球菌、链球菌的培养物葡萄球菌、链球菌的培养物示教示教示教示教 普通琼脂平板普通琼脂平板 血平血平板板 菌落形状菌落形状 色素色素 溶溶血性血性 金葡金葡 圆形凸起光滑中等大小圆形凸起光滑中等大小 金黄色金黄色 + +柠葡柠葡 同上同上 柠檬色柠檬色 - - 白葡白葡 同上同上 白色白色 - - 表表1 血平板血平板甲型链球菌甲型链球菌 针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环乙型链球菌乙型链球菌 针尖小菌落、透明宽大溶血环针尖小菌落、透明宽大溶血环 巧克力血平板巧克力血平板脑膜炎双球菌脑膜炎双球菌 菌落透明似露滴状菌落透明似露滴状 表表2 表表33. 血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验-玻片法玻片法（操作，（操作，1人人/组）组） 原理：原理：方法：方法： 兔血浆兔血浆 兔血浆兔血浆 生理盐水生理盐水 123金葡金葡 白葡白葡 金葡金葡 + + + + +凝集（凝集（+）不凝集（不凝集（-）不凝集（不凝集（-）4、血浆凝固酶试验试管法）、血浆凝固酶试验试管法） 金葡菌金葡菌 白葡菌白葡菌 + + + + 兔血浆兔血浆 兔血浆兔血浆 3730 3730水浴观察水浴观察凝凝集集为为阳阳性性不不凝凝集集为为阴阴性性示教示教示教示教凝固酶实验凝固酶实验试管法）试管法） 五、抗链球菌溶血素五、抗链球菌溶血素“O”（ASO） 快速胶乳法快速胶乳法 高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平水平 的抗体后，还有多余的抗体后，还有多余ASO，这些多余抗体即，这些多余抗体即与与SLO胶乳胶乳 试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。 （操作，（操作，1人人/组）组） 原理：原理： 阳性对照阳性对照 阴性对照阴性对照 待测血清待测血清 各加溶血素各加溶血素“O” 1滴轻摇滴轻摇1min 再加再加SLO胶乳胶乳1滴轻摇滴轻摇3min 观察结果观察结果 方法：方法：稀释度稀释度 ASO （IU/ml）1：15 4001：30 8001：60 1600ASO250 IU/ml 阴性阴性 结果判定：结果判定：本卷须知：本卷须知：1.液体量要一样，菌量一样。液体量要一样，菌量一样。2.血浆多挑几环一滴的量），菌少挑点，血浆多挑几环一滴的量），菌少挑点，3. 不能干。不能干。4.3. 涂菌时间一样，出现凝集为阳性，再涂涂菌时间一样，出现凝集为阳性，再涂5. 凝集物可被涂散，变阴性。凝集物可被涂散，变阴性。肠道杆菌n一、肠道杆菌的形态及染色性 n二、肠道杆菌的培养特性 n三、肠道杆菌的生化反应特点 n四、Widal实验肠道杆菌的形态及染色片肠道菌的菌落形态nEMB n大肠：菌落呈紫黑色，有金属光泽。 n伤寒 痢疾：菌落无色半透明。 nSS nD大肠：大而不透明的红色菌落。 n伤寒 痢疾：中等大小淡黄色菌落。大肠杆菌EMB培养基）肠道致病菌SS培养基）粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定 生化反应1单糖发酵n葡萄糖及乳糖发酵 n一实验目的与原理 n了解糖发酵试验方法 n二实验材料 n 1、菌种：大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌培养物 n 2、培养基：乳糖及葡萄糖发酵管 n 三实验方法 n、用接种环将大肠杆菌、伤寒杆菌分别各接种于葡萄糖及乳糖发酵管中方法同前）。 n 2、37孵育1824小时，取出观察结果。 n 动力检测菌名 葡萄糖 甘露醇 乳糖靛基质 甲基红 VP 实验 枸椽 酸盐 硫化氢 尿素 分解 动力 福氏志贺菌 + + /+ + 伤寒沙门菌 + + + /+ + + 乙型副伤寒沙门菌 + + + 大肠杆菌 + + + 产气杆菌 + + + 普通变形杆菌 + + /+ + + + 常常见肠道杆菌的生化反道杆菌的生化反应鉴别表表 斜面 底部 H2S 初步鉴定 + + 非病原菌 非病原菌 + +/ 副伤寒杆菌及其他沙门氏菌 + + 伤寒杆菌 + 痢疾杆菌 铁质双糖双糖琼脂基上各种脂基上各种肠道杆菌的生道杆菌的生长情况情况 肠道杆菌在KI培养基上的培养特性Indol实验生化反应2Indol实验2. 肠道杆菌在肠道杆菌在SS培养基上的生长现象培养基上的生长现象示教示教示教示教 大肠杆菌大肠杆菌 伤寒杆菌伤寒杆菌SS平板平板 红色大菌落红色大菌落 无色透明小菌落无色透明小菌落 基础培养基，乳糖基础培养基，乳糖(底物底物)，胆盐、煌绿，胆盐、煌绿(抑制非致抑制非致病菌病菌)，中性红指示剂）。，中性红指示剂）。SS培养基：培养基：3. 五类肠道杆菌的生化反应及动力五类肠道杆菌的生化反应及动力 示教示教示教示教大肠杆菌大肠杆菌 - - + + + / 变形杆菌变形杆菌 - + + +/- + - / 乙型副伤乙型副伤寒杆菌寒杆菌 - + - - + -/ 伤寒杆菌伤寒杆菌 + - +/- - - + -/+痢疾杆菌痢疾杆菌 + - - - +/- - -/+葡萄糖葡萄糖 乳糖乳糖 H2S 尿素尿素 靛基质靛基质 动力动力 双糖铁双糖铁4. 肠道杆菌未知菌肠道杆菌未知菌1和未知菌和未知菌2的鉴定的鉴定（操作，（操作，2人人/组）组）未知菌未知菌双糖铁培养基双糖铁培养基(乳糖乳糖/固体固体/上，葡萄糖上，葡萄糖/半固体半固体/下下)生化反应生化反应葡萄糖发酵葡萄糖发酵乳糖发酵乳糖发酵尿素酶试验尿素酶试验H2S试验试验靛基质试验蛋白胨水液体培养基）靛基质试验蛋白胨水液体培养基）动力试验半固体培养基）动力试验半固体培养基）（微量发酵管）（微量发酵管） 方法：方法：血清学鉴定玻片凝集反应）血清学鉴定玻片凝集反应）（371824h）伤寒诊断血清伤寒诊断血清 伤寒诊断血清伤寒诊断血清 + + 未知菌未知菌1 未知菌未知菌2血清学鉴定玻片凝集反应）血清学鉴定玻片凝集反应）？ ？ 结果：结果： 双糖铁双糖铁 葡葡 乳乳 尿尿 H2S 靛靛 动力动力 血清学血清学 未知菌未知菌1未知菌未知菌2 结论：结论：未知菌未知菌1：？：？未知菌未知菌2：？：？