细细 胞胞 工工 程程2013 . 2 . 1 . 考点动物细胞培养和动物细胞克隆动物细胞培养和动物细胞克隆1动动物细胞培养物细胞培养(1)流程流程幼龄动物组织或胚胎幼龄动物组织或胚胎细胞贴壁生长细胞贴壁生长单个细胞单个细胞细胞悬液细胞悬液细胞悬液细胞悬液细胞株或细胞系细胞株或细胞系选用幼龄动物组织或胚胎的原因：它们的细胞分化程度选用幼龄动物组织或胚胎的原因：它们的细胞分化程度低，增殖能力很强，更易于培养低，增殖能力很强，更易于培养。进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，不用胃进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，不用胃蛋白酶的原因：胃蛋白酶作用的适宜蛋白酶的原因：胃蛋白酶作用的适宜pH 约为约为 2，当，当 pH 大于大于 6时，胃蛋白酶就会失去活性。而胰蛋白酶作用的适宜时，胃蛋白酶就会失去活性。而胰蛋白酶作用的适宜pH 为为7.28.4，多数动物细胞培养的适宜，多数动物细胞培养的适宜 pH 为为7.27.4，因此胰蛋白酶，因此胰蛋白酶适用于细胞培养时细胞间质适用于细胞培养时细胞间质(主要为蛋白质主要为蛋白质)的分解。的分解。(2)细胞贴壁和接触抑制细胞贴壁和接触抑制细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上。细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上。接触抑制：细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面接触抑制：细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖的现象相互接触时，细胞就会停止分裂增殖的现象。(3)(3)动物细胞培养需要满足以下条件动物细胞培养需要满足以下条件充足的营养供给：微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、充足的营养供给：微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。促生长因子、血清等。适宜的温度：适宜的温度：36.5 36.5 0.5 0.5 。适宜的适宜的 pH pH：7.27.27.47.4。气体环境气体环境O2：有氧呼吸、细胞代谢(95%的空气)CO2：维持 pH(5%)无菌、无毒环境：培养液和培养用具杀菌消毒，培养过无菌、无毒环境：培养液和培养用具杀菌消毒，培养过程加抗生素杀菌，定期更换培养液，清除代谢产物程加抗生素杀菌，定期更换培养液，清除代谢产物。 技术技术 内容内容项目项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞的增殖细胞的增殖培养基培养基成分成分矿质元素、蔗糖矿质元素、蔗糖、维生素、维生素、植物激素和有机添加剂植物激素和有机添加剂(如甘氨酸、琼脂等如甘氨酸、琼脂等)，属，属于于固体培养基固体培养基葡萄糖、葡萄糖、氨基酸、无机盐、氨基酸、无机盐、维生素、维生素、动物血清动物血清等，属等，属于于液体培养基液体培养基取材取材较幼嫩的细胞、组织、器较幼嫩的细胞、组织、器官官动物动物胚胎或出生不久的幼胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织龄动物的器官或组织培养过程培养过程培养结果培养结果可以获得植株，也可以获得可以获得植株，也可以获得大量细胞大量细胞只能获得大量细胞，不能只能获得大量细胞，不能得到生物个体得到生物个体应用应用植物快速繁殖与脱毒植物植物快速繁殖与脱毒植物培养培养生产细胞产品生产细胞产品制造人工种子制造人工种子用于转基因植物的培育用于转基因植物的培育生产蛋白质生物制品生产蛋白质生物制品培养皮肤移植的材料培养皮肤移植的材料检测有毒物质检测有毒物质用于生理、病理、药理用于生理、病理、药理学的研究学的研究相同点相同点都需人工条件下的无菌操作都需人工条件下的无菌操作都是合成培养基都是合成培养基都需适宜的温度、都需适宜的温度、pH等条件等条件特特别别提提醒醒：植植物物组组织织培培养养需需要要生生长长素素和和细细胞胞分分裂裂素素，其其中中生生长长素素可可诱诱导导愈愈伤伤组组织织生生根根，细细胞胞分分裂裂素素可可促促进进愈愈伤伤组组织织生生芽。芽。在在动物细胞动物细胞的的传代传代培养中，培养中，细胞可能癌变细胞可能癌变。两两种种技技术术手手段段培培养养过过程程中中都都进进行行了了有有丝丝分分裂裂，都都是是无无性性繁繁殖，都可称克隆，殖，都可称克隆，都不涉及减数分裂。都不涉及减数分裂。植植物物组组织织培培养养最最终终产产生生新新个个体体，体体现现了了细细胞胞的的全全能能性性；动动物物细细胞胞培培养养产产生生大大量量细细胞胞，不不形形成成新新个个体体，故故不不能能体体现现细细胞胞的全能性。的全能性。1原理：原理：动物物细胞核的全能性。胞核的全能性。动物物细胞核移植是将胞核移植是将动物的一个物的一个细胞的胞的细胞核，胞核，移入一个已移入一个已经去掉去掉细胞核的卵母胞核的卵母细胞中，使其重胞中，使其重组并并发育成一个新的胚胎，育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最个新的胚胎最终发育育为动物个体。用核移植的方法得到的物个体。用核移植的方法得到的动物称物称为克隆克隆动物。物。2供核细胞：供核细胞：一般一般选优良良动物的物的传代培养代培养10代以内的代以内的细胞胞。3 3受体细胞：受体细胞：去核的去核的MM期卵母细胞。期卵母细胞。4 4过程过程5在克隆多利羊的过程中，下列哪项技术没有运用到在克隆多利羊的过程中，下列哪项技术没有运用到()A细胞培养技术细胞培养技术 B细胞核移植细胞核移植C胚胎移植技术胚胎移植技术 D基因工程技术基因工程技术解析：解析：克隆技术需利用核移植以产生重组细胞，重组细胞经细克隆技术需利用核移植以产生重组细胞，重组细胞经细胞培养形成早期胚胎后，需移植到母体子宫发育成个体。胞培养形成早期胚胎后，需移植到母体子宫发育成个体。 答案：答案：D植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合( (单克隆抗体制备单克隆抗体制备) )理论基础理论基础( (原理原理) )细胞膜的流动性、细胞细胞膜的流动性、细胞的全能性的全能性细胞膜的流动性、细胞细胞膜的流动性、细胞增殖增殖融合前处理融合前处理酶解法酶解法( (纤维素酶、果胶纤维素酶、果胶酶酶) )去除细胞壁去除细胞壁注射特定抗原使正常小注射特定抗原使正常小鼠产生免疫反应鼠产生免疫反应促融方法促融方法物理法：离心、振动、物理法：离心、振动、电刺激等；电刺激等；化学法：化学法：聚乙二醇聚乙二醇(PEG)(PEG)物化法：与植物细胞物化法：与植物细胞融合相同；融合相同；生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒过过程程第一第一步步原生质体的原生质体的制备制备( (酶解法酶解法) )正常小鼠免疫正常小鼠免疫处理处理第二第二步步原生质体融原生质体融合合( (物化法物化法) )动物细胞融合动物细胞融合第三第三步步杂种细胞的杂种细胞的筛选与培养筛选与培养杂交瘤细胞的杂交瘤细胞的筛选与培养筛选与培养第四第四步步杂种植株诱杂种植株诱导与鉴定导与鉴定单克隆抗体的单克隆抗体的提纯提纯意意义义和和用用途途克服远缘杂交不亲和的障碍，克服远缘杂交不亲和的障碍，大大扩展了可用于杂交的亲本大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围；组合范围；突破有性杂交的母系遗传，突破有性杂交的母系遗传，获得细胞质基因的杂合子，研获得细胞质基因的杂合子，研究细胞质遗传究细胞质遗传制备单克隆抗体；制备单克隆抗体；诊断、治疗和预防疾病，例诊断、治疗和预防疾病，例如：如：a.肿瘤定位诊断肿瘤定位诊断,放射性放射性肿瘤；肿瘤；b.生物导弹治疗生物导弹治疗,抗体抗体抗癌药物抗癌药物肿瘤肿瘤4下下列关于单克隆抗体制备过程的叙述，正确的是列关于单克隆抗体制备过程的叙述，正确的是() A制备过程中不需要动物细胞培养技术制备过程中不需要动物细胞培养技术B杂交瘤细胞具有浆细胞与癌细胞的所有特点杂交瘤细胞具有浆细胞与癌细胞的所有特点C经经选选择择性性培培养养基基筛筛选选出出来来的的杂杂交交瘤瘤细细胞胞即即可可用用于于单单克克隆抗体的生产隆抗体的生产D单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂解解析析：单单克克隆隆抗抗体体的的制制备备是是将将骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞与与浆浆细细胞胞结结合合，经经过过选选择择培培养养基基的的筛筛选选得得到到杂杂交交瘤瘤细细胞胞并并经经单单一一抗抗体体检检测测后后，培培养养能能产产生生特特定定抗抗体体的的杂杂交交瘤瘤细细胞胞即即可可得得单单克克隆隆抗抗体体，杂杂交交瘤细胞能无限繁殖但不具有癌细胞的转移能力。瘤细胞能无限繁殖但不具有癌细胞的转移能力。答案：答案：D D