细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology基础医学院微生物学教研室基础医学院微生物学教研室 王沛珍王沛珍 Tel：0373-3029130 E-mailE-mail：wpz246126.comwpz246126.com 实验二实验二 细菌形态学检查细菌形态学检查 消毒灭菌消毒灭菌 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology一、细菌形态学检查一、细菌形态学检查 形态学检查分类形态学检查分类革兰染色革兰染色细菌的特殊结构细菌的特殊结构细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology 一、不染色标本检查一、不染色标本检查( (活体）活体） 悬滴法悬滴法 压滴法压滴法 二、染色标本检查二、染色标本检查 单染法：简单染色，一种染料（美蓝染色）单染法：简单染色，一种染料（美蓝染色） 复染法：鉴别染色法，两种以上染料（革兰复染法：鉴别染色法，两种以上染料（革兰染色、抗酸染色）染色、抗酸染色）形态学检查分类形态学检查分类 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology 1884 1884年由丹麦细菌学家年由丹麦细菌学家Gram创立。创立。 革兰染色是最常用的一种染色方法，将革兰染色是最常用的一种染色方法，将 细菌初步分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，细菌初步分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，在临床上具有非常重要的意义。在临床上具有非常重要的意义。革兰染色革兰染色( (Gram stain) ) 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology一、目的一、目的1.1.掌握革兰染色及细菌涂片的制备方法。掌握革兰染色及细菌涂片的制备方法。 2.2.熟悉革兰染色的原理和临床意义。熟悉革兰染色的原理和临床意义。细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology二、二、原理原理通透性通透性学说学说等电点等电点学说学说化学学化学学说说细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology 通透性学说通透性学说G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联度高，脂质含量少，乙醇不易渗入。度高，脂质含量少，乙醇不易渗入。G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联度低，含大量脂质，乙醇易渗入。度低，含大量脂质，乙醇易渗入。细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology 1.1.菌种：白色葡萄球菌菌种：白色葡萄球菌 大肠杆菌大肠杆菌 2.2.试剂：试剂： 革兰染色液革兰染色液 初染液初染液 结晶紫结晶紫 媒染液媒染液 卢戈氏碘液卢戈氏碘液 脱色液脱色液 95%乙醇乙醇 复染液复染液 稀释石碳酸复红稀释石碳酸复红 3.3.其它：接种环、载玻片、染色盘、酒精灯等其它：接种环、载玻片、染色盘、酒精灯等 三、器材和试剂三、器材和试剂 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology冲洗冲洗 3.3.油镜观察实验结果油镜观察实验结果 四、四、方法与步骤方法与步骤 1.1.细菌涂片的制备细菌涂片的制备 涂片涂片 干燥干燥 固定固定 2.2.染色染色 初染初染（结晶紫）（结晶紫） 媒染媒染（卢戈氏碘液）（卢戈氏碘液） 脱色脱色 （95%乙醇）乙醇） 复染复染（稀释石碳酸复红）（稀释石碳酸复红） 吸水纸吸干吸水纸吸干 1min 1min 30s 30s 冲洗冲洗 冲洗冲洗 冲洗冲洗 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology五、结果五、结果 一 一 半 半结结晶晶紫紫 卢卢戈戈氏氏碘碘液液 95%乙乙醇醇 石石碳碳酸酸复复红红 初染初染 媒染媒染 脱色脱色 复染复染 G+菌菌 G-菌菌 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology图一图一 图二图二 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology无菌操作（接种环灭菌和取菌）。无菌操作（接种环灭菌和取菌）。涂片的厚度要适中。涂片的厚度要适中。染色的时间控制，一一半半。染色的时间控制，一一半半。冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗。冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗。六、注意事项六、注意事项细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology 七、意义七、意义 1.1.鉴别细菌鉴别细菌 2.2.研究与致病性研究与致病性 的关系的关系 3.3.指导临床用药指导临床用药 G+菌菌 G-菌菌G+菌：菌：外毒素外毒素 G-菌：菌： 内毒素内毒素 G+菌：青霉素、头孢菌素等菌：青霉素、头孢菌素等 G-菌：链霉素、庆大霉素等菌：链霉素、庆大霉素等 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology细菌的特殊结构（示教）细菌的特殊结构（示教）鞭毛鞭毛 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology荚膜荚膜 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology芽芽胞胞细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology1.1.寻找视野寻找视野2.增大光照增大光照强度强度3.滴加镜油、滴加镜油、换油镜头换油镜头4.转动细调节转动细调节器至物器至物像像清晰清晰5.清洗镜头清洗镜头注：油镜的使用方法注：油镜的使用方法细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology二、消毒灭菌二、消毒灭菌 高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法紫外线杀菌紫外线杀菌试试验验化学消毒剂对细菌的影响化学消毒剂对细菌的影响细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology一、高压蒸汽灭菌法一、高压蒸汽灭菌法 完全杀灭细菌的繁殖体和芽胞完全杀灭细菌的繁殖体和芽胞 压力：压力：103.4 KPa 温度温度: 121.3时间：时间：1520min细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology 加水至规定的水平面，放入物品，依次旋紧相对加水至规定的水平面，放入物品，依次旋紧相对的紧固螺旋。的紧固螺旋。 接通电源，开始加热，同时打开排气阀，使冷空接通电源，开始加热，同时打开排气阀，使冷空气逸出。待冷空气全部排出后，关闭排气阀。气逸出。待冷空气全部排出后，关闭排气阀。 继续加热，压力表指在所需数字开始计时，调节继续加热，压力表指在所需数字开始计时，调节热源，维持热源，维持1520min 停止加热，待压力表降至零时徐徐开放排气阀，停止加热，待压力表降至零时徐徐开放排气阀，排尽余气，打开锅盖取出灭菌物品。排尽余气，打开锅盖取出灭菌物品。1.1.使用方法使用方法 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology全全自自动动高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌锅锅 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology锅内物品不应放置过挤。锅内物品不应放置过挤。注意排出冷空气，否则气压表上压力并非全部是注意排出冷空气，否则气压表上压力并非全部是蒸汽压力，不能保证灭菌效果。蒸汽压力，不能保证灭菌效果。灭菌后排气不能过急，以免容器内液体外溢或引灭菌后排气不能过急，以免容器内液体外溢或引起破裂。起破裂。不耐高热高压的物品，不能用此法。不耐高热高压的物品，不能用此法。2. 注意事项注意事项 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology紫外线杀菌作用紫外线杀菌作用强强，而穿透能力，而穿透能力弱弱。紫外线中波长紫外线中波长265-266nm265-266nm的杀菌作用最强。的杀菌作用最强。常用于手术室、无菌实验室、传染病房的空常用于手术室、无菌实验室、传染病房的空气消毒及不耐热物品表面消毒。气消毒及不耐热物品表面消毒。二、紫外线杀菌试验二、紫外线杀菌试验 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology1.1.方法：纸片及玻璃遮盖法方法：纸片及玻璃遮盖法 用用密密涂涂接接种种法法将将细细菌菌涂涂布布于于普普通通琼琼脂脂平平板板上上，取取无无菌菌滤滤纸纸片片将将平平皿皿部部分分遮遮盖盖（或或打打开开一一半半平平皿皿盖盖），置置于于紫紫外外灯灯下下照照射射30min，拿拿开开纸纸片片，盖盖上上皿皿盖盖，37倒倒置置培培养养24h后后取取出出观观察察结结果果。滤纸片用后需要用火烧掉滤纸片用后需要用火烧掉细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology2.2.密涂接种密涂接种 分三次接种，分三次接种，每次取一环。第每次取一环。第一次密涂接种后一次密涂接种后旋转旋转6060度二次密度二次密涂接种，然后同涂接种，然后同方向旋转方向旋转6060度后度后再次密涂接种。再次密涂接种。 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology1 2 341：肥皂洗手：肥皂洗手 2：2.5%碘酒擦拭手指碘酒擦拭手指 3：75%酒精擦拭手指酒精擦拭手指 4：0.1%新洁尔灭擦拭手指新洁尔灭擦拭手指 注意：注意：“前和后前和后”手指要对应手指要对应 三、化学消毒剂对细菌的影响三、化学消毒剂对细菌的影响 细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology 实验报告的撰写实验报告的撰写 内容：革兰染色内容：革兰染色一、目的一、目的二、原理二、原理三、材料三、材料四、方法四、方法五、五、结果（结果（2+32+3幅图）幅图）六、意义六、意义七、注意事项七、注意事项细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology结果（结果（2+32+3幅图）幅图）1.1.绘制涂片染色的绘制涂片染色的G+菌及菌及G-菌的菌的形态图并注明放大形态图并注明放大倍数（红蓝铅笔）倍数（红蓝铅笔）2.2.绘制示教片中各细菌特殊结构形态图并注明放大绘制示教片中各细菌特殊结构形态图并注明放大 倍数（铅笔）倍数（铅笔）细菌形态学检查、消毒灭菌细菌形态学检查、消毒灭菌新乡医学院成人高等教育网络课程新乡医学院成人高等教育网络课程 Medical microbiology1.1.革兰染色的注意事项有哪些？革兰染色的注意事项有哪些？2.2.固定的目的是什么？固定的目的是什么？ 3.3.革兰染色的关键步骤是哪一步？为什么？革兰染色的关键步骤是哪一步？为什么？4.4.革兰染色的临床意义是什么？革兰染色的临床意义是什么？5.5.使用高压蒸汽灭菌锅的注意事项有哪些？使用高压蒸汽灭菌锅的注意事项有哪些？ 6.6.消毒和灭菌有什么异同？消毒和灭菌有什么异同？ 思考题思考题