骨髓细胞染色体检验骨髓细胞染色体检验基础知识简介基础知识简介 1960年年Nowell和和Hungerford发现了慢性发现了慢性粒细胞白血病特异性染色体异常，即粒细胞白血病特异性染色体异常，即Ph染色染色体，从此推动了细胞遗传学在肿瘤细胞学上体，从此推动了细胞遗传学在肿瘤细胞学上的广泛应用，促进了血液肿瘤分子生物学的的广泛应用，促进了血液肿瘤分子生物学的发展。发展。 血细胞染色体检验技术血细胞染色体检验技术 主要包括主要包括染色体非显带技术、染色体显带技术染色体非显带技术、染色体显带技术、染色体高分辨技术、姐妹染色单体互换技术、染色体染色体高分辨技术、姐妹染色单体互换技术、染色体脆性部位显示技术和早熟凝集染色体技术等。脆性部位显示技术和早熟凝集染色体技术等。 80年代又发展了年代又发展了染色体原位杂交技术染色体原位杂交技术(FISH)，这，这一技术将分子探针与染色体杂交，拓展了检测范围，一技术将分子探针与染色体杂交，拓展了检测范围，提高了检测的灵敏度。提高了检测的灵敏度。 自动化染色体分析技术自动化染色体分析技术提供了菜单式操作，简单提供了菜单式操作，简单易行，在资料存储、染色体图像处理和核型分析方面易行，在资料存储、染色体图像处理和核型分析方面显示了独特优势。显示了独特优势。 一、染色体非显带技术一、染色体非显带技术F (一一)原理原理 染色体制备的关键是获得足够的分裂中期细胞。染色体制备的关键是获得足够的分裂中期细胞。如骨髓可直接得到分裂中期细胞，而外周血淋巴细胞如骨髓可直接得到分裂中期细胞，而外周血淋巴细胞需经体外培养，植物凝集素（需经体外培养，植物凝集素（PHA）刺激细胞分裂）刺激细胞分裂以获得分裂中期细胞。骨髓细胞常规染色体制备方法以获得分裂中期细胞。骨髓细胞常规染色体制备方法包括直接法和培养法两种。包括直接法和培养法两种。直接法直接法F1直接法：直接法：F 抗凝骨髓标本不经培养，以抗凝骨髓标本不经培养，以PBS稀释后加人秋稀释后加人秋水仙素水仙素“阻留阻留”中期细胞，经低渗液处理后，再经预中期细胞，经低渗液处理后，再经预固定、固定后即可染色作镜检。（固定、固定后即可染色作镜检。（秋水仙素能干扰有丝分秋水仙素能干扰有丝分裂纺锤体形成，使细胞裂纺锤体形成，使细胞“阻留阻留”在分裂中期，增加中期细胞数目。低渗处在分裂中期，增加中期细胞数目。低渗处理则使染色体彼此铺展开，便于分析。）理则使染色体彼此铺展开，便于分析。）短期培养法短期培养法F抗凝骨髓标本在含小牛血清的培养液中于抗凝骨髓标本在含小牛血清的培养液中于37培养培养24或或48h，加入秋水仙素，加入秋水仙素“阻留阻留”中期细胞，其他同直接法。中期细胞，其他同直接法。二、染色体常规显带技术二、染色体常规显带技术F 显带染色体显带染色体(banding chromosome) ：染色体经：染色体经过某种特殊的处理或特异的染色后，染色体上可显过某种特殊的处理或特异的染色后，染色体上可显示出一系列连续的明暗条纹，称为显带染色体。示出一系列连续的明暗条纹，称为显带染色体。F 1971年巴黎会议确定的四种显带技术是奎丫染年巴黎会议确定的四种显带技术是奎丫染色法、色法、Giemsa法、逆相法、逆相Giemsa法和着丝粒区异染色法和着丝粒区异染色质法，即质法，即Q带、带、G带带、R带和带和C带。带。F (一一)原理原理 F 1G显带（显带（Giemsa法）：法）：F DNA上富含上富含A-T碱基对的碱基对的DNA和组蛋白结和组蛋白结合紧密，和染料亲和力较强，呈深带；而富含合紧密，和染料亲和力较强，呈深带；而富含G-C碱基对的区段结合的蛋白质与染料亲和力碱基对的区段结合的蛋白质与染料亲和力降低，呈浅带。这样染色体上可显示出一系列降低，呈浅带。这样染色体上可显示出一系列连续的明暗条纹。连续的明暗条纹。F2R显带显带(逆相逆相Giemsa法法)：F 带纹与带纹与Q带、带、G带正好相反，即前者的阳带正好相反，即前者的阳性带相当于后者的阴性带，而前者的阴性带则性带相当于后者的阴性带，而前者的阴性带则相当于后者的阳性带。相当于后者的阳性带。R带按制备方法不同可带按制备方法不同可分为荧光分为荧光R带和姬姆萨带和姬姆萨R带两种类型。带两种类型。(二二)显带染色体的命名显带染色体的命名 F 显带染色体上的明暗条纹称作显带染色体上的明暗条纹称作带带(band)。染色体上。染色体上有明显而恒定的形态特征，如着丝粒和某些特别显著的有明显而恒定的形态特征，如着丝粒和某些特别显著的带，称作带，称作界标界标(1andmark)。两个界标之间的区域称为。两个界标之间的区域称为染染色体区色体区(region)。 F 区的划分是以着丝粒开始向短臂区的划分是以着丝粒开始向短臂(phocomelic arm，p)或长臂或长臂(q)的臂端延伸，依次编为的臂端延伸，依次编为l区、区、2区、区、3区等。区等。用作界标的带就是该区的用作界标的带就是该区的l号带，例如号带，例如6p23，即表示第，即表示第6号染色体短臂，号染色体短臂，2区，区，3带。带。F 在表示一个指定的带时需要四项内容，在表示一个指定的带时需要四项内容，即染色体号、臂号、区号和带号。如果一个即染色体号、臂号、区号和带号。如果一个带需要再分，就称为带需要再分，就称为亚带亚带(subband)，亚带的，亚带的描述就是在带的后面加一小数点，再写出指描述就是在带的后面加一小数点，再写出指定的亚带数。如定的亚带数。如6p23.1 ， 即指即指6号染色体短臂，号染色体短臂，2区区3带的第带的第l亚带。如果亚带又被再划分，则亚带。如果亚带又被再划分，则只在亚带后加数字，不再加标点。只在亚带后加数字，不再加标点。 三、临床评价三、临床评价F (一一)染色体异常染色体异常(chromosome aberration) 是指染色体数量异常和结构异常，又称染色体是指染色体数量异常和结构异常，又称染色体畸变。畸变。 1染色体数目异常染色体数目异常 多倍体多倍体(polyploid)：人类生殖细胞染色体为人类生殖细胞染色体为23条，体细胞染色体为条，体细胞染色体为46条，称二倍体条，称二倍体(diploid)(2n)。在某些病理情况下，细胞染色体数目成倍增加，。在某些病理情况下，细胞染色体数目成倍增加，称为多倍体，如三倍体称为多倍体，如三倍体(triploid)(3n)，四倍体，四倍体(tetraploid)(4n)等。在恶性血液病中常见有多倍体细等。在恶性血液病中常见有多倍体细胞。胞。F 非整倍体非整倍体(aneuploid)：染色体数目增加或减少不是染色体数目增加或减少不是成倍的，称为成倍的，称为非整倍体非整倍体。F 少于少于46条者称条者称亚二倍体亚二倍体(hypodiploid)，少于，少于69条者为条者为亚亚三倍体三倍体(hypotriploid)；多于；多于46条者称为条者称为超二倍体超二倍体(hyperdiploid)，多于，多于69条者称条者称超三倍体超三倍体(hypertriploid)。F 如果染色体数是如果染色体数是2n，但不是正常的，但不是正常的23对，而是个别染色对，而是个别染色体增加，其他染色体相应减少，称为体增加，其他染色体相应减少，称为假二倍体假二倍体(pseudodiploid)。在急白血病和恶性淋巴瘤等疾病常可见到。在急白血病和恶性淋巴瘤等疾病常可见到多种非整倍体异常。多种非整倍体异常。F 嵌合体嵌合体(mosaic)：同一个体具有两种或两种同一个体具有两种或两种以上不同核型的细胞，称为嵌合体。以上不同核型的细胞，称为嵌合体。F 分为性染色体嵌合体和常染色体嵌合体，常分为性染色体嵌合体和常染色体嵌合体，常见于先天性疾病。人体恶性肿瘤细胞核型的改变见于先天性疾病。人体恶性肿瘤细胞核型的改变不能算嵌合体。不能算嵌合体。F 2染色体结构的异常染色体结构的异常F 导致染色体结构改变的机制是断裂及断裂后的重导致染色体结构改变的机制是断裂及断裂后的重排。染色体的断裂可以是自发的，也可是致畸变因排。染色体的断裂可以是自发的，也可是致畸变因素引起的。素引起的。F 常见的染色体结构异常有如下几种：常见的染色体结构异常有如下几种： 缺失缺失(deletion，Del)：是指染色体长臂或短臂是指染色体长臂或短臂部分节段的丢失，包括末端缺失和中间缺失；如急部分节段的丢失，包括末端缺失和中间缺失；如急性单核细胞白血病的性单核细胞白血病的del(11)(q23)，即是在，即是在l 1号染色号染色体长臂体长臂2区区3带断裂，末端缺失。带断裂，末端缺失。2染色体结构的异常染色体结构的异常F倒位倒位(inversion，inv)： 一条染色体两处断裂后，形成三个断片，中一条染色体两处断裂后，形成三个断片，中间断片作间断片作180倒转后又重新接合，即倒位。臂内倒倒转后又重新接合，即倒位。臂内倒位是指染色体的长臂或短臂内发生的倒位；臂间倒位是指染色体的长臂或短臂内发生的倒位；臂间倒位是指两处断裂分别发生于长臂和短臂，中间含着位是指两处断裂分别发生于长臂和短臂，中间含着丝粒的断片倒转而再接合。如丝粒的断片倒转而再接合。如inv(3)(q2lq26)就是就是3号染色体长臂内的倒位。号染色体长臂内的倒位。2染色体结构的异常染色体结构的异常F 易位易位(translocation，t)：指染色体断裂的指染色体断裂的断片离开原来位置而接到同一条染色体的另一处或断片离开原来位置而接到同一条染色体的另一处或另一条染色体上，从而造成染色体的重排。另一条染色体上，从而造成染色体的重排。F 无着丝粒的断片易位到同一染色体的另一部位无着丝粒的断片易位到同一染色体的另一部位又称又称移位移位；无着丝粒的断片易位到另一染色体上又；无着丝粒的断片易位到另一染色体上又称称转位转位；两个染色体发生断裂后相互交换片段称；两个染色体发生断裂后相互交换片段称相相互易位互易位(reciprocal translocation)。F 易位是白血病、淋巴瘤中常见的染色体结构异易位是白血病、淋巴瘤中常见的染色体结构异常。常。2染色体结构的异常染色体结构的异常F 环状染色体环状染色体(ring chromosome)：当染色体的当染色体的长臂和短臂两末端处断裂，两端断面相互连接，即形长臂和短臂两末端处断裂，两端断面相互连接，即形成环状染色体，环状染色体在辐射损伤时常见。成环状染色体，环状染色体在辐射损伤时常见。2染色体结构的异常染色体结构的异常F 等臂染色体等臂染色体(isochromosome，i)：由于染由于染色体的分裂不是纵裂，而是横裂，结果产生的两条新色体的分裂不是纵裂，而是横裂，结果产生的两条新染色体，一条有原来染色体的两条长臂而没有短臂，染色体，一条有原来染色体的两条长臂而没有短臂，而另一条则只有原来染色体的两条短臂而没有长臂，而另一条则只有原来染色体的两条短臂而没有长臂，这种染色体称为等臂染色体这种染色体称为等臂染色体。2染色体结构的异常染色体结构的异常F 脆性位点脆性位点(fragile site)：指在接触某种特指在接触某种特殊的化学物质或体外培养条件所出现的非随机殊的化学物质或体外培养条件所出现的非随机的染色体裂隙、断裂。的染色体裂隙、断裂。3 .异常核型的描述异常核型的描述F 异常核型的描述：异常核型的描述： 临床多使用简式描述。对肿瘤细胞异常核型的描述，临床多使用简式描述。对肿瘤细胞异常核型的描述，按照按照ISCH对肿瘤细胞命名的原则进行对肿瘤细胞命名的原则进行 染色体数目异常的描述：在染色体号或性染色体前写染色体数目异常的描述：在染色体号或性染色体前写上上“+”或或“一一”号，表示该染色体增加或丢失；如在染色体号，表示该染色体增加或丢失；如在染色体后写后写“+”或或“一一”号，表示该染色体部分获得或部分丢失，号，表示该染色体部分获得或部分丢失，如如46，XY，-5，即表示少一条，即表示少一条5号染色体，号染色体，46，XY，5一，一，即表示即表示5号染色体部分缺失。号染色体部分缺失。3 .异常核型的描述异常核型的描述 描写结构异常，如描写结构异常，如46，XY，t(5；17)(q32；q12)，即表示第，即表示第5号和第号和第17号染色体出现相互易位，号染色体出现相互易位，断点在第断点在第5号染色体长臂第号染色体长臂第3区第区第2带以及第带以及第17号染号染色体长臂第色体长臂第l区第区第2带。带。 2.常用缩写符号常用缩写符号Thank you