思考与回忆：1 1、动物细胞全能性特点？、动物细胞全能性特点？ 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。能变窄。细胞核仍具有全能性。2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？成动物个体？ 不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，伴随一不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，伴随一定的组织分化，不管采用什么手段和培养条件，由于细定的组织分化，不管采用什么手段和培养条件，由于细胞的运动、变化，细胞发生结构功能变异，结果长时间胞的运动、变化，细胞发生结构功能变异，结果长时间的培养只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的培养只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。的细胞培养。3、动物的细胞培养的理论依据（原理）？、动物的细胞培养的理论依据（原理）？ 细胞增殖细胞增殖2动物细胞工程ha动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体技术单克隆抗体技术核移植核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术其它动物细胞工程的基础其它动物细胞工程的基础3动物细胞工程ha专题专题2.22.2动物细胞工程动物细胞工程4动物细胞工程ha一、动物细胞培养的应用和概念：一、动物细胞培养的应用和概念：1 1、概念：、概念：动物细动物细胞培养就是从动物胞培养就是从动物有机体中取出相关有机体中取出相关的的组织组织, ,将它分散将它分散成成单个细胞单个细胞, ,然后然后, ,放在适宜的放在适宜的培养基培养基中中, ,让这些让这些细胞生细胞生长和增殖长和增殖. .2、原理：、原理：细胞增殖细胞增殖5动物细胞工程ha动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液10代细胞代细胞50代细胞代细胞传代培养传代培养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液加培养液（分解弹性纤维）（分解弹性纤维）原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎细胞株细胞株细胞系细胞系遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变接触抑制接触抑制9动物细胞工程ha细胞株：传代细胞一般能传到细胞株：传代细胞一般能传到40-5040-50代，代，遗传物质一般不会发生改变遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。，叫细胞株。强调：细胞系、细胞株（强调：细胞系、细胞株（了解即可，老课本体系了解即可，老课本体系）细胞系：传代细胞系：传代5050代以后不能再传下去，代以后不能再传下去，部分细胞部分细胞遗传物质发生了改变遗传物质发生了改变，能连续传，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。代，获得不死性，叫细胞系。12动物细胞工程ha4.4.动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件: :1 1）无菌无毒）无菌无毒 的环境：的环境： 适宜的温度：适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为人和哺乳动物细胞最适温度为36.50.5。适宜的酸碱度：适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4液体合成培养基：（液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）因子、（水、无机盐、微量元素）等；通等；通常还需加入常还需加入血浆、血清等血浆、血清等天然成分。天然成分。4 4）气体环境：）气体环境：2 2）营养：）营养：3 3）温度和）温度和pHpH：“95空气空气+5CO2”的混合气体培养箱。的混合气体培养箱。氧氧气是细胞代谢必须的；气是细胞代谢必须的； CO2维持培养维持培养液的液的PHPH。对培养液和所有培养用具对培养液和所有培养用具无菌处理；无菌处理；培养液培养液中中添加抗生素添加抗生素防止培养过程中污染；防止培养过程中污染；定期更定期更换培养液换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。造成危害。补充合成培养基补充合成培养基中缺乏的物质中缺乏的物质14动物细胞工程ha二、动物体细胞核移植技术和克隆动物二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1、定义：定义： 动物核移植是将动物的动物核移植是将动物的一个细胞一个细胞的细胞核的细胞核, ,移入一个已经移入一个已经去掉细胞核的卵母去掉细胞核的卵母细胞中细胞中. .使其重组并发育成一个使其重组并发育成一个新的胚胎新的胚胎, ,这这个新的胚胎最终发育为个新的胚胎最终发育为动物个体动物个体. .3、分类：分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎细胞分化程胚胎细胞分化程度低，恢复其全度低，恢复其全能性相对容易。能性相对容易。动物体细胞分化动物体细胞分化程度高，恢复其程度高，恢复其全能性十分困难全能性十分困难2、原理：原理： 动物细胞核具有全能性动物细胞核具有全能性19动物细胞工程ha取供体细胞取供体细胞取卵母细胞取卵母细胞 供体细胞培养供体细胞培养培养到培养到 M中期中期 卵母细胞去核卵母细胞去核 供体细胞供体细胞注入去核的卵母细胞注入去核的卵母细胞 供体核进入受体卵母细胞供体核进入受体卵母细胞 重组胚胎重组胚胎 代孕母牛代孕母牛 生出与供体遗传物质基本相同的个体生出与供体遗传物质基本相同的个体2.2.过程：过程：24动物细胞工程ha专题专题2.22.2动物细胞工程动物细胞工程27动物细胞工程ha1 1、定义：、定义：指用自然或人工方指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。融合成一个细胞的过程。一、动物细胞融合一、动物细胞融合细胞杂交：细胞杂交：不同基因型的细不同基因型的细胞之间的融合就是胞之间的融合就是细胞杂交细胞杂交。杂交细胞：杂交细胞：融合后形成的具融合后形成的具有原来有原来两个或多个细胞遗传两个或多个细胞遗传信息信息的的单核细胞单核细胞成为杂交细成为杂交细胞胞。28动物细胞工程ha2、诱导融合的因素诱导融合的因素生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒诱导融合诱导融合. . ( (动物细胞融合所特有的。动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。 丧失感染性丧失感染性,保留融合活性保留融合活性) ) 化学法：化学法：聚乙二醇聚乙二醇PEGPEG诱导融合诱导融合. . 物理法：物理法：电激电激融合融合病毒颗粒黏病毒颗粒黏 附细胞表面附细胞表面细胞膜连接细胞膜连接细胞膜被细胞膜被 病毒颗粒穿通病毒颗粒穿通细胞融合、形成杂种细胞细胞融合、形成杂种细胞30动物细胞工程ha3 3、动物细胞融合技术的应用、动物细胞融合技术的应用意义：细胞融合技术突破了有性杂交的局意义：细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。限，使远缘杂交成为可能。应用：利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。应用：利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。33动物细胞工程ha主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振动、电刺激）动、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较34动物细胞工程ha杂交杂交杂交杂交 细胞细胞细胞细胞灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞经免疫经免疫经免疫经免疫的小鼠的小鼠的小鼠的小鼠提取提取杂交瘤杂交瘤杂交瘤杂交瘤细胞细胞细胞细胞第一次筛选第一次筛选第一次筛选第一次筛选用特定的用特定的选选择性培养基择性培养基第二次筛选第二次筛选第二次筛选第二次筛选能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养体外培养体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体37动物细胞工程ha1、作为诊断试剂作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等体内肿瘤的定位等, ,与常规抗体相比与常规抗体相比, ,具有具有准确、高效、准确、高效、简易、快速简易、快速特点特点.2、用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物：主要用于癌症治疗。主要用于癌症治疗。生物导弹：生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体抗癌细胞的单克隆抗体+ +放射性同位素放射性同位素+ +化学化学药物或细胞毒素药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）胞位置，原位杀死癌细胞。）2 2、单克隆抗体的优点：、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，可大量制备。特异性强，灵敏度高，可大量制备。3 3 3 3、单克隆抗体的应用、单克隆抗体的应用、单克隆抗体的应用、单克隆抗体的应用40动物细胞工程ha1.动物细胞工程技术的基础是：（）动物细胞工程技术的基础是：（）A动物细胞融合动物细胞融合B胚胎移植胚胎移植C动物细胞培养动物细胞培养D核移植核移植课堂练习课堂练习; ;43动物细胞工程ha在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）确的是（）A结果是相同的结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同44动物细胞工程ha.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞ABCDC45动物细胞工程ha1 1、科学家用小鼠骨髓细胞与某种细胞融合，、科学家用小鼠骨髓细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A46动物细胞工程ha2.动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是-（ ）A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B. 制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新品种培育新品种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 B.C. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D. 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 BD47动物细胞工程ha4. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（ ）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D48动物细胞工程ha 例题例题例题例题22（1 1）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时， 将抗原注射到小鼠体内，可获得将抗原注射到小鼠体内，可获得将抗原注射到小鼠体内，可获得将抗原注射到小鼠体内，可获得( (多选多选多选多选) ) （ ） A AT T淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞 B B效应效应效应效应B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞 C C抗体抗体抗体抗体 D D记忆细胞记忆细胞记忆细胞记忆细胞（2 2）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中， 正确的是正确的是正确的是正确的是 ( (多选多选多选多选) ) （ ） A AB B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台 病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导 B B融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克 隆抗体隆抗体隆抗体隆抗体 C C体外培养时，一个体外培养时，一个体外培养时，一个体外培养时，一个B B淋巴细胞可以产生一种抗体，但不淋巴细胞可以产生一种抗体，但不淋巴细胞可以产生一种抗体，但不淋巴细胞可以产生一种抗体，但不 能无限增殖能无限增殖能无限增殖能无限增殖 D D单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高， 优越性明显优越性明显优越性明显优越性明显 BCDBCD ACDACD49动物细胞工程ha50动物细胞工程ha51动物细胞工程ha 1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是变的细胞是 -（ ） A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 -（）（） A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD52动物细胞工程ha3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞是这样的组织细胞 （ ） A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B B具有更强的全能性具有更强的全能性 C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D53动物细胞工程ha 4.4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-（ ） A.A.培养基不同；培养基不同； B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。A54动物细胞工程ha体验高考(2008宁夏理综) (1)(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面裂生长到细胞表面 时，细胞会时，细胞会停止分裂增增殖，这种现象称为细胞的停止分裂增增殖，这种现象称为细胞的 。此时，瓶壁上形成的细胞层数。此时，瓶壁上形成的细胞层数是是 。要使贴壁细胞从瓶壁上分离下来，。要使贴壁细胞从瓶壁上分离下来，需要使用的酶是需要使用的酶是 。 相互接触相互接触 接触抑制接触抑制 单层单层 胰蛋白酶胰蛋白酶 55动物细胞工程ha体验高考(2008宁夏理综) (2)(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现胞分裂停止，进而出现 的现的现象；但极少数可以连续增殖，其中有些会因象；但极少数可以连续增殖，其中有些会因遗传物质发生改变面变成遗传物质发生改变面变成 细胞，该细胞，该种细胞的黏着性种细胞的黏着性，细胞膜表面蛋白质，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量（糖蛋白）的量 。衰老甚至死亡衰老甚至死亡不死性不死性 降低降低 减少减少 56动物细胞工程ha1.1.下列哪下列哪项属于克隆（项属于克隆（ ）A A将鸡的某个将鸡的某个DNADNA片段整合到小鼠的片段整合到小鼠的DNADNA分子中分子中 B B将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内C C将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞细胞 D D将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系D D2.2.（多选）美国杜克大学医疗中心的一个研究小组利用（多选）美国杜克大学医疗中心的一个研究小组利用成年猪的动脉血管细胞和模拟胚胎环境的新型生物反应成年猪的动脉血管细胞和模拟胚胎环境的新型生物反应器器, ,成功地在实验室里培育出新的动脉血管，这种血管的成功地在实验室里培育出新的动脉血管，这种血管的外形和功能都与真的血管一样外形和功能都与真的血管一样, ,这一研究成果是生物组织这一研究成果是生物组织培养领域的重大进展。下列关于以上技术的叙述中，正培养领域的重大进展。下列关于以上技术的叙述中，正确的是（确的是（ ）A A属于属于“克隆克隆” ” B B可能要利用去核卵细胞可能要利用去核卵细胞C C关键是激发血管细胞的全能性关键是激发血管细胞的全能性 D D关键是激发血管细胞发育成血管的潜能关键是激发血管细胞发育成血管的潜能ABDABD57动物细胞工程ha3 .3 .从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状（ ）A A、难以预测、难以预测 B B、像甲、像甲 C C、像乙、像乙 D D、像丙、像丙4.4.生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生复生”将不再将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功“复生复生”野驴的方法是野驴的方法是 （ ）A A将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体化、再分化，培育成新个体B B将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体体C C取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体经孕育培养成新个体D D将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体B B C C 58动物细胞工程ha5.5.下图所示为用两栖动物卵所做的实验图解，据图回答下图所示为用两栖动物卵所做的实验图解，据图回答下列问题：下列问题：蝌蚪肠上皮细胞核中含有青蛙发育所需的蝌蚪肠上皮细胞核中含有青蛙发育所需的_，重新组合的细胞相当于蛙的重新组合的细胞相当于蛙的_ 细胞，经过细胞，经过_ _ 和和_形成组织和器官。形成组织和器官。全部基因全部基因 受精卵受精卵 细胞分裂细胞分裂 细胞分化细胞分化 本实验结果说明本实验结果说明_具有全能性，具有全能性，图中图中A A过程采用的技术手段称做过程采用的技术手段称做_。 动物体细胞核动物体细胞核 核移植技术核移植技术59动物细胞工程ha1 1、基因型为、基因型为AaAa与基因型为与基因型为BbBb的动物体细胞混合，用灭活的动物体细胞混合，用灭活的仙台病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的细胞的仙台病毒处理后，不可能获得下列哪种基因型的细胞A AAAaa BAAaa BAaBb CAaBb CAabb DAabb DBBbbBBbb2 2、动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是、动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 所用的技术手段不相同所用的技术手段不相同所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞A.A.B. C.B. C. D. D.3 3、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞、动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是融合中有特殊性的是A A、融合的原理、融合的原理 B B、融合的优点、融合的优点 C C、融合的诱导手段、融合的诱导手段 D D、融合的过程、融合的过程C C C C C C 60动物细胞工程ha4.4.科学工作者用绿色和红色荧光材料，分别标记人和鼠的科学工作者用绿色和红色荧光材料，分别标记人和鼠的细胞膜上的蛋白质。当两个标记细胞融合成一个细胞后，细胞膜上的蛋白质。当两个标记细胞融合成一个细胞后，起初一半膜发出绿色荧光，另一半膜发出红色荧光，一段起初一半膜发出绿色荧光，另一半膜发出红色荧光，一段时间后，两种颜色的荧光点均匀分布，如图所示。请分析时间后，两种颜色的荧光点均匀分布，如图所示。请分析回答：回答： 该实验结果说明了细胞膜该实验结果说明了细胞膜，这是因为，这是因为若在两个细胞融合成一个细胞后，将融合细胞置于若在两个细胞融合成一个细胞后，将融合细胞置于0条件下再保持条件下再保持40min，则融合细胞仍然是一半膜发绿色荧，则融合细胞仍然是一半膜发绿色荧光，另一半膜发红色荧光，这说明光，另一半膜发红色荧光，这说明具有一定的流动性具有一定的流动性 构成细胞膜的磷脂分子和蛋白质大都是可以运动的构成细胞膜的磷脂分子和蛋白质大都是可以运动的 膜的流动性受温度影响，在低温下分子的运动受抑制膜的流动性受温度影响，在低温下分子的运动受抑制61动物细胞工程ha1 1、下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中、下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1 1过过程注射的物质和程注射的物质和A A细胞的名称为细胞的名称为( )( )A A、抗体、抗体、T T淋巴细胞淋巴细胞 B B、抗原、抗原、T T淋巴细胞淋巴细胞C C、抗体、抗体、B B淋巴细胞淋巴细胞 D D、抗原、浆细胞、抗原、浆细胞D D62动物细胞工程ha2 2、关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是、关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是A A、可以制成诊断盒用于疾病的珍断、可以制成诊断盒用于疾病的珍断 B B、可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗、可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗C C、可以利用基因工程技术生产、可以利用基因工程技术生产 D D、可以在生物体内生产，不能体外生产、可以在生物体内生产，不能体外生产3 3、“生物导弹生物导弹”是指是指A A、单克隆抗体、单克隆抗体 B B、带有特定药物的单克隆抗体、带有特定药物的单克隆抗体C C、杂交细胞、杂交细胞 D D、B B淋巴细胞淋巴细胞D D B B 4.4.单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述，错误中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是的是A A特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 B B与抗癌药物结合可制成与抗癌药物结合可制成“生物导弹生物导弹”C C体外培养体外培养B B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体D D由效应由效应B B细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞分泌C C 63动物细胞工程ha5.5.下图为细胞融合的简略过程（只考虑两个细胞的融合）下图为细胞融合的简略过程（只考虑两个细胞的融合）请据图回答：请据图回答： I I若若A A、B B是基因型分别为是基因型分别为rrHHrrHH、RRhhRRhh两个烟草品种细胞两个烟草品种细胞的花粉，且这两对基因位于非同源染色体上，由于一对的花粉，且这两对基因位于非同源染色体上，由于一对隐性纯合基因隐性纯合基因(rr(rr或或hh) hh) 的作用，在光照强度大于的作用，在光照强度大于800800勒勒克斯时，都不能生长。克斯时，都不能生长。实验开始时必须用实验开始时必须用 除去不利于原除去不利于原生质体融合的物质。生质体融合的物质。实验中除获得杂种细胞外，还有基因型实验中除获得杂种细胞外，还有基因型为为 的融合细胞。的融合细胞。纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶rrHHrrHH、RRhhRRhh 64动物细胞工程ha设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，方法：种细胞，方法： 将杂种细胞培养成杂种植株依据的理论基础将杂种细胞培养成杂种植株依据的理论基础是是 。IIII若该过程是制备治疗若该过程是制备治疗“SARS”SARS”病毒的单克隆抗体，病毒的单克隆抗体，A A为为人人B B淋巴细胞（染色体组成为淋巴细胞（染色体组成为2A2AXX=46XX=46），），B B为鼠骨髓瘤为鼠骨髓瘤细胞（染色体组成为细胞（染色体组成为2A2AXX=40XX=40）用单克隆抗体制成用单克隆抗体制成“生物导弹生物导弹”主要利用了抗体主要利用了抗体的的 特性。特性。A A细胞来自于细胞来自于 ，杂种细胞，杂种细胞C C共有共有 个个染色体组。染色体组。杂交瘤细胞在体外培养时与植物组织培养的主要区别是杂交瘤细胞在体外培养时与植物组织培养的主要区别是培养基要用培养基要用 培养基。（物理状态），培养基中除培养基。（物理状态），培养基中除了添加必要的营养物质为还需加入了添加必要的营养物质为还需加入 。置大于置大于800800勒克斯光照下培养，收集分化的勒克斯光照下培养，收集分化的 细胞团细胞团 细胞的全能性细胞的全能性 抗体与抗原结合，发挥特异性免疫效应抗体与抗原结合，发挥特异性免疫效应 非典患者非典患者 4 4 液体液体 动物血清动物血清 65动物细胞工程ha6.6.右图是制备分泌抗右图是制备分泌抗X X抗体的过程，根据图解回答问题：抗体的过程，根据图解回答问题： 66动物细胞工程ha给小鼠注射抗原的目的是给小鼠注射抗原的目的是_。在单克隆抗体制备过程中之所以选用在单克隆抗体制备过程中之所以选用B B淋巴细胞和骨髓淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有有_ 的特性。的特性。由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了_和和_的动物细胞工程技术手段，前者常用的诱的动物细胞工程技术手段，前者常用的诱导剂与植物原生质体融合不同的是可用导剂与植物原生质体融合不同的是可用_。动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有有_。获得能产生相应抗体的获得能产生相应抗体的B B细胞细胞 既能无限增殖，又能产生特定抗体既能无限增殖，又能产生特定抗体 动物细胞融合动物细胞融合 动物细胞培养动物细胞培养 灭活的病毒灭活的病毒 动物血清动物血清 67动物细胞工程ha在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞离散在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞离散开，以利于细胞融合，可用开，以利于细胞融合，可用_处理离体组处理离体组织细胞使之分散开。织细胞使之分散开。图中有两次筛选过程，其中步骤图中有两次筛选过程，其中步骤的目的是筛选出的目的是筛选出_，步骤，步骤的目的是筛选出的目的是筛选出_ _。胰蛋白酶胰蛋白酶 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 能产生特定抗体的杂交瘤细胞能产生特定抗体的杂交瘤细胞 68动物细胞工程ha已知细胞已知细胞已知细胞已知细胞合成合成合成合成DNADNA有有有有D D和和和和S S两条途径两条途径两条途径两条途径，其中，其中，其中，其中D D途径能被途径能被途径能被途径能被氨基嘌呤氨基嘌呤氨基嘌呤氨基嘌呤阻断。阻断。阻断。阻断。人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种DNADNA的合成途径，但一般不分裂增殖。的合成途径，但一般不分裂增殖。的合成途径，但一般不分裂增殖。的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨鼠骨鼠骨鼠骨髓瘤细胞中尽管没有髓瘤细胞中尽管没有髓瘤细胞中尽管没有髓瘤细胞中尽管没有S S途径途径途径途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答： （1 1）试管中除融合的杂种细胞外，还有）试管中除融合的杂种细胞外，还有）试管中除融合的杂种细胞外，还有）试管中除融合的杂种细胞外，还有 种融合细胞。种融合细胞。种融合细胞。种融合细胞。（2 2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出 杂种细胞，并说原理。杂种细胞，并说原理。杂种细胞，并说原理。杂种细胞，并说原理。 方法：方法：方法：方法： 。 原理：原理：原理：原理：培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞加入氨基嘌呤后加入氨基嘌呤后加入氨基嘌呤后加入氨基嘌呤后, ,使使使使D D合成的途径阻断合成的途径阻断合成的途径阻断合成的途径阻断, ,所以仅所以仅所以仅所以仅D D合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不能增殖能增殖能增殖能增殖, ,但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的S S途径合成途径合成途径合成途径合成DNADNA而增殖而增殖而增殖而增殖69动物细胞工程ha70动物细胞工程ha思考与探究思考与探究2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。胞，使其分化成所需要的组织或器官。71动物细胞工程ha3.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（Lucinda）的奶牛，年产奶量为）的奶牛，年产奶量为30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为我国奶牛产奶量年平均水平仅为34 t。（1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。可以。卢辛达的产奶量很高，有高产奶的遗传基础，可以。卢辛达的产奶量很高，有高产奶的遗传基础，利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全部来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗传基础，全部来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗传基础，如果精心培育和饲养，有可能在世界范围内推广，如果精心培育和饲养，有可能在世界范围内推广，克隆牛再与高产的公牛自然繁殖，可得到很多高产克隆牛再与高产的公牛自然繁殖，可得到很多高产的后代，从而加快奶牛改良进程。的后代，从而加快奶牛改良进程。该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多，尤该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多，尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛群出其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛群出现近亲繁殖而引起种质衰退。现近亲繁殖而引起种质衰退。72动物细胞工程ha（2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？对它进行克隆？从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组上容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，织（如软骨组织）的细胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成熟。用显微针去除卵母细胞抽取卵母细胞体外培养成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵的核，再将耳细胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母母细胞与体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核的细胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使其完成减数分裂和发育过程。核移植胚卵母细胞，使其完成减数分裂和发育过程。核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。同期发情处理的受体母牛体内。73动物细胞工程ha4.体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什么体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什么问题？请你查阅资料，了解这方面的前沿动态。问题？请你查阅资料，了解这方面的前沿动态。研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制尚不清研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研究中。高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研究中。应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距离。有一定距离。74动物细胞工程ha