b b第六章植物基因工程下第六章植物基因工程下三、改进转基因的技术三、改进转基因的技术在在转转基基因因研研究究中中经经常常碰碰到到一一种种引引起起基基因因失失活活的的现现象称为象称为基因沉默基因沉默（gene silencing）。）。基基因因沉沉默默可可以以发发生生在在染染色色体体DNA、转转录录和和转转录录后后3种不同的层次上：种不同的层次上：1. 发发生生在在染染色色体体DNA水水平平上上的的转转基基因因沉沉默默叫叫位位置置效应效应；2. 发发生生在在RNA转转录录水水平平上上的的转转基基因因沉沉默默叫叫转转录录失失活活；3. 发生在转录后水平的转基因沉默叫发生在转录后水平的转基因沉默叫共抑制共抑制。（一）转基因植物中外源基因的沉默（一）转基因植物中外源基因的沉默1. 位置效应位置效应位位置置效效应应是是指指基基因因受受寄寄主主染染色色体体基基因因组组上上的的插插入入部位及周围核苷酸组成的影响。部位及周围核苷酸组成的影响。如如果果整整合合发发生生在在转转录录活活跃跃的的常常染染色色体体上上，毗毗邻邻寄寄主基因的调控系列将影响到外源基因的表达；主基因的调控系列将影响到外源基因的表达；如如果果插插入入到到重重复复DNA或或异异染染色色体体中中或或旁旁边边，外外源源基因可能会失活。基因可能会失活。2. DNA甲基化甲基化植植物物DNA 甲甲基基化化程程度度是是较较高高的的，核核基基因因组组中中几几乎乎20%-30%的胞嘧啶处于甲基化状态。的胞嘧啶处于甲基化状态。外外源源基基因因编编码码区区域域的的甲甲基基化化对对基基因因表表达达的的作作用用不不明显，通常检测不到对转录的影响；明显，通常检测不到对转录的影响；外外源源基基因因启启动动子子区区域域或或5端端非非编编码码区区域域的的甲甲基基化化会会引引起起启启动动子子失失活活或或不不能能起起始始转转录录，在在转转录录水水平平上诱导了外源基因的沉默。上诱导了外源基因的沉默。3. 重复序列诱发基因沉默重复序列诱发基因沉默通通过过电电击击法法等等将将DNA直直接接导导入入植植株株，外外源源基基因因往往往以多拷贝串联的方式整合在寄主的基因组内。往以多拷贝串联的方式整合在寄主的基因组内。重重复复序序列列诱诱发发的的基基因因沉沉默默（repeat induced gene silencing, RIGS）与与重重复复序序列列间间的的异异位位配配对对和和DNA的甲基化相关。的甲基化相关。一一般般一一个个位位点点插插入入的的外外源源基基因因的的拷拷贝贝数数越越多多，失失活的程度越高。活的程度越高。3. 重复序列诱发基因沉默重复序列诱发基因沉默解决方案有：解决方案有：1. 对对外外源源基基因因及及启启动动子子进进行行改改造造，保保证证设设计计的的序序列列与与植植物基因组有很短的同源序列，避免异位配对的发生；物基因组有很短的同源序列，避免异位配对的发生；2. 使使用用基基因因枪枪法法及及电电击击法法等等直直接接DNA导导入入法法容容易易引引起起多多拷拷贝贝基基因因的的插插入入，而而使使用用农农杆杆菌菌转转化化法法可可在在一一定定的的程程度度上避免多拷贝基因的插入；上避免多拷贝基因的插入；3. 在在筛筛选选作作为为育育种种材材料料的的转转基基因因植植物物时时，尽尽量量选选择择单单拷拷贝贝插插入入的的个个体体，采采用用RT-PCR法法可可以以筛筛选选到到单单拷拷贝贝插插入入的的个体。个体。4. 共抑制共抑制共共抑抑制制是是一一种种基基因因间间相相互互作作用用引引起起的的沉沉默默现现象象。当当引引入入一一个个与与植植物物内内源源基基因因有有部部分分同同源源性性的的DNA 时时，不不但但外外源源基基因因不不能能高高效效表表达达，反反而而抑抑制制了了内内源基因的表达。源基因的表达。二、提高外源基因表达水平的策略二、提高外源基因表达水平的策略1. 转化方法的影响转化方法的影响基因直接转化法容易引起多拷贝转基因在寄主细基因直接转化法容易引起多拷贝转基因在寄主细胞中的整合，导致转基因沉默，而农杆菌介导的胞中的整合，导致转基因沉默，而农杆菌介导的遗传转化法由于产生的拷贝数相对较少，可以在遗传转化法由于产生的拷贝数相对较少，可以在一定的程度上避免这个问题。一定的程度上避免这个问题。2. 使用信号肽使用信号肽植物蛋白质分子的定向运输需要特殊多肽信号的植物蛋白质分子的定向运输需要特殊多肽信号的引导作用。为提高转基因在植物的专门组织中的引导作用。为提高转基因在植物的专门组织中的表达，除使用专门的启动子外，使用特定的信号表达，除使用专门的启动子外，使用特定的信号肽序列是必需的。肽序列是必需的。3. 选择强启动子和诱导型启动子选择强启动子和诱导型启动子选择合适的植物启动子选择合适的植物启动子是增强外源基因表达的一个有效手是增强外源基因表达的一个有效手段。通常来源于双子叶植物的启动子，在双子叶植物中的段。通常来源于双子叶植物的启动子，在双子叶植物中的表达效率要比在单子叶植物中高得多，反之亦然。表达效率要比在单子叶植物中高得多，反之亦然。有时人们并不需要外源基因在受体植物中的高效表达，而有时人们并不需要外源基因在受体植物中的高效表达，而要求其能够在转基因植物中实现特异的时空表达。这就需要求其能够在转基因植物中实现特异的时空表达。这就需要使用诱导型启动子，其在特定的条件下诱导在某些器官要使用诱导型启动子，其在特定的条件下诱导在某些器官组织中特异性地启动目的基因的表达。组织中特异性地启动目的基因的表达。4. 强终止子强终止子在在植植物物转转化化的的研研究究中中，两两个个常常用用的的终终止止子子是是CaMV 35S启启动动子子和和根根瘤瘤土土壤壤杆杆菌菌T-DNA的的胭胭脂脂氨基酸合成酶基因的氨基酸合成酶基因的nos终止子。终止子。其其PolyA尾尾巴巴和和其其中中的的茎茎-环环结结构构，可可有有效效地地抵抵御御核酸酶的水解作用，使核酸酶的水解作用，使mRNA 分子保持稳定性。分子保持稳定性。5. 消除甲基化的影响消除甲基化的影响已已知知用用5-氮氮胞胞嘧嘧啶啶处处理理植植株株具具有有很很好好的的抑抑制制甲甲基基化和脱甲基化作用。化和脱甲基化作用。人人们们还还试试图图在在载载体体上上加加上上去去甲甲基基化化功功能能的的序序列列来来防止甲基化。防止甲基化。6. 使用植物偏爱的密码子使用植物偏爱的密码子转转基基因因的的密密码码子子和和植植物物基基因因组组DNA的的不不同同容容易易引引起甲基化和表达效率低。起甲基化和表达效率低。在在遗遗传传转转化化前前有有必必要要优优化化转转基基因因的的密密码码子子，尽尽量量使用一些植物偏爱的密码子。使用一些植物偏爱的密码子。7. 使用使用MAR序列序列基基质质结结合合区区（matrix attachment region, MAR）也也叫叫核核骨骨架架结结合合区区（scaffold attachment region, SAR）长长度度一一般般为为300-1000bp，它它可可以以与与核核骨骨架架结结合合，在在两两个个MAR 间间的的染染色色质质区区域域可可形形成成DNA 环环，环环的的大大小小为为5-200kb，每每一一个个环环为为一一个个独独立立的表达结构。的表达结构。利利用用MAR 的的这这一一特特性性，可可创创造造一一个个独独立立的的结结构构域域，减减少少了了插插入入位位点点附附近近染染色色质质的的影影响响，从从而而可可以以避避免免位位置置效效应应的的影影响响，还可以提高外源基因在转化细胞中的稳定性和表达水平。还可以提高外源基因在转化细胞中的稳定性和表达水平。8. 使用增强子使用增强子动动物物免免疫疫球球蛋蛋白白K链链基基因因的的增增强强子子可可在在细细胞胞发发育育的的特特定定阶阶段段指指导导该该基基因因区区段段的的去去甲甲基基化化，启启动动基基因的转录。因的转录。在在植植物物中中分分离离相相应应的的增增强强子子，并并和和外外源源基基因因重重组组，可确保转基因按合适的调控模式表达。可确保转基因按合适的调控模式表达。9. 外源基因的修饰和改造外源基因的修饰和改造（1）避免基因间的同源性；）避免基因间的同源性；（2）避免重复序列的出现；）避免重复序列的出现；（3）在载体上加增强翻译序列和核糖体结合位点。）在载体上加增强翻译序列和核糖体结合位点。（1）避免基因间的同源性）避免基因间的同源性重重复复或或同同源源序序列列是是基基因因沉沉默默的的诱诱因因，在在构构建建表表达达载载体体时时，应应尽尽量量降降低低所所设设计计的的序序列列与与内内源源基基因因的的同同源源性性，以以减减少少或或避免配对避免配对。应应尽尽量量使使外外源源DNA碱碱基基组组成成与与植植物物DNA碱碱基基组组成成一一致致，避免被植物限制修饰机制所识别。避免被植物限制修饰机制所识别。也也可可采采用用定定点点插插入入方方法法，将将外外源源基基因因插插入入到到具具有有与与其其相相似似碱基组成的染色体区域。碱基组成的染色体区域。（2）避免重复序列的出现）避免重复序列的出现在在筛筛选选作作为为育育种种材材料料的的转转基基因因植植物物时时，应应尽尽量量选选择单拷贝插入的个体，来减少重复序列的存在。择单拷贝插入的个体，来减少重复序列的存在。（3）在载体上加增强翻译序列和核糖体结合位点）在载体上加增强翻译序列和核糖体结合位点基基因因5端端和和3端端非非翻翻译译序序列列及及密密码码子子周周边边序序列列都都影响到基因的高效表达。影响到基因的高效表达。起起始始密密码码子子周周边边序序列列对对翻翻译译水水平平有有明明显显影影响响，通通常常植植物物起起始始密密码码子子周周边边序序列列有有如如下下特特征征：AACAAUGGC，起始甲硫氨酸后紧跟丙氨酸，起始甲硫氨酸后紧跟丙氨酸。10. 以叶绿体作为转化受体以叶绿体作为转化受体叶叶绿绿体体的的基基因因转转录录和和翻翻译译机机制制类类似似于于原原核核生生物物，在在叶绿体内的转化有如下优点：叶绿体内的转化有如下优点：A. 可能大量表达外源基因；可能大量表达外源基因；B. 叶绿体结构简单，背景清楚，便于体外遗传操作；叶绿体结构简单，背景清楚，便于体外遗传操作；C. 能更有效的控制外源基因，防止向环境释放。能更有效的控制外源基因，防止向环境释放。11. 使用一些病毒编码蛋白使用一些病毒编码蛋白最最近近研研究究证证明明一一些些病病毒毒能能编编码码某某种种抑抑制制寄寄主主基基因因沉沉默默的的蛋蛋白白质质。克克隆隆这这些些蛋蛋白白的的基基因因，改改造造后后与与目目的的基基因因相相连连，转转入入植植物物时时同同时时表表达达，可可在在一一定定程度上抑制基因沉默的出现。程度上抑制基因沉默的出现。12. 在有性生殖后代中筛选单拷贝植株在有性生殖后代中筛选单拷贝植株可可在在分分子子水水平平和和育育种种过过程程中中筛筛选选单单拷拷贝贝的的转转基基因因植植株株，通通过过PCR技技术术、Southern杂杂交交等等方方法法进进行行筛选。筛选。四、农作物基因工程四、农作物基因工程（一）利用转基因植物来生产蛋白药物（一）利用转基因植物来生产蛋白药物哺乳类动物细胞产生蛋白药物极其昂贵，而植物生长成本较哺乳类动物细胞产生蛋白药物极其昂贵，而植物生长成本较低可换得大量蛋白质药物。在实验室里进行的有：如人的脑低可换得大量蛋白质药物。在实验室里进行的有：如人的脑腓肽、人血清蛋白、及小鼠的单克隆抗体等。腓肽、人血清蛋白、及小鼠的单克隆抗体等。例例如如将将小小鼠鼠的的抗抗体体轻轻链链和和重重链链基基因因分分别别在在两两种种烟烟草草植植物物中中表表达达，转转基基因因植植物物由由根根瘤瘤农农杆杆菌菌介介导导的的基基因因转转化化方方法法构构建建。然然后后两两种种植植物物品品系系杂杂交交，产产生生的的子子代代植植物物表表达达小小鼠鼠的的重重链链轻轻链链两两种种蛋蛋白白。从从烟烟草草的的叶叶子子里里可可检检测测到到完完整整的的抗抗体体分分子子，含含量量为叶细胞蛋白总量的为叶细胞蛋白总量的1.5%。 （二）抗虫转基因作物（二）抗虫转基因作物天天 然然 的的 微微 生生 物物 杀杀 虫虫 剂剂 如如 苏苏 云云 金金 芽芽 孢孢 杆杆 菌菌 （ Bacillus thurigiensis, Bt），该该细细菌菌能能产产生生晶晶体体毒毒蛋蛋白白，对对许许多多昆昆虫虫的幼虫有毒性，但对成虫和脊髓动物无作用。的幼虫有毒性，但对成虫和脊髓动物无作用。BtBt合合成成的的只只是是无无活活性性的的毒毒素素原原蛋蛋白白。幼幼虫虫接接触触毒毒素素原原蛋蛋白白后后，其其消消化化道道中中的的蛋蛋白白酶酶便便将将毒毒素素原原蛋蛋白白水水解解成成毒毒性性片片段段，并并与与幼幼虫虫中中肠肠细细胞胞表表面面的的受受体体结结合合，从从而而干干扰扰细细胞胞的的正正常常功功能能。最近含修饰的最近含修饰的Bt毒蛋白的转基因棉花已问世。毒蛋白的转基因棉花已问世。 （三）抗病毒作物（三）抗病毒作物 转基因植物利用一些转基因植物利用一些病毒包衣蛋白基因病毒包衣蛋白基因构建了构建了抗病毒优良品种，如：烟草花叶病毒基因组编码四抗病毒优良品种，如：烟草花叶病毒基因组编码四种多肽：两个复制酶亚基、一个包衣蛋白、一个与种多肽：两个复制酶亚基、一个包衣蛋白、一个与细胞结合有关的蛋白。细胞结合有关的蛋白。 由根瘤农杆菌介导的基因转化构建了表达。由根瘤农杆菌介导的基因转化构建了表达。TMV包衣蛋白包衣蛋白CP的转烟草植物，该转基因植物在的转烟草植物，该转基因植物在TMV存在时，能抗病毒感染存在时，能抗病毒感染30天左右，正常植物天左右，正常植物34天之后使被天之后使被TMV感染。感染。 最近的实验结果表明，最近的实验结果表明，CP表达抵御病毒侵袭表达抵御病毒侵袭也在其它谷物中成功，如马铃薯、番茄、苜蓿等。也在其它谷物中成功，如马铃薯、番茄、苜蓿等。 （四）抗除草剂转基因作物（四）抗除草剂转基因作物 杂草的存在可使农作物减产杂草的存在可使农作物减产10%。（1）强化表达除草剂的靶蛋白（酶）基因：）强化表达除草剂的靶蛋白（酶）基因： 5-烯烯醇醇式式丙丙酮酮莽莽草草酸酸3磷磷酸酸盐盐合合成成酶酶（EPSPS），是是植植物物叶叶绿绿体体中中芳芳香香族族必必需需氨氨基基酸酸生生物物合合成成中中的的一一个个酶酶，而而除除草草剂剂glyphosate通通过过抑抑制制该该酶酶而而杀杀死死植植物物的的。很很少少的的剂剂量量就就能能杀杀灭灭广谱杂草。广谱杂草。 将将来来自自矮矮牵牵牛牛花花的的EPSPS cDNA转转入入植植物物中中，转转基基因因酶酶活活比比非非转转基基因因植植物物提提高高了了20倍倍，使使得转基因植物较好地耐受得转基因植物较好地耐受glyphosate的存在。的存在。 （2）表达除草剂的突变靶蛋白（酶）基因：）表达除草剂的突变靶蛋白（酶）基因： 溴溴腈腈衍衍生生物物（Bromoxynil）是是一一种种抑抑制制光光合合成成反反应应的的除除草草剂剂，Klebsiella ozaenae有有一一基基因因编编码码一一种种腈腈水水解解酶酶，能能将将Bromoxynil降降解解为为3, 5-二二溴溴-4-羟羟-苯甲酸。将该基因转入烟草中已获成功。苯甲酸。将该基因转入烟草中已获成功。 （四）抗除草剂转基因作物（四）抗除草剂转基因作物 环环境境大大气气层层中中的的氧氧自自由由基基（超超氧氧化化物物负负离离子子）对植物的损伤是严重的。对植物的损伤是严重的。 在在生生理理状状况况下下，植植物物体体内内的的超超氧氧化化歧歧化化酶酶（SOD）将将之之转转化化为为过过氧氧化化氢氢，后后者者经经过过过过氧氧化化氢氢酶酶作作用用后后，分分解解释释放放出出水水和和氧氧气气。但但过过量量的的氧氧自自由由基则对植物的某些组织如花卉的寿命有所影响。基则对植物的某些组织如花卉的寿命有所影响。 将将SOD基基因因转转入入花花卉卉植植物物中中，可可以以节节省省氧氧气气的的需需求量，以增加鲜花的保存期。求量，以增加鲜花的保存期。 另另外外，抗抗盐盐、抗抗碱碱、抗抗寒寒、抗抗旱旱抗抗热热的的转转基基因因植植物也在研究中。物也在研究中。 （五）抗环境压力的转基因作物（五）抗环境压力的转基因作物五、转基因植物的安全性五、转基因植物的安全性 从从从从20202020世世世世纪纪纪纪70707070年年年年代代代代重重重重组组组组DNADNADNADNA技技技技术术术术创创创创建建建建到到到到1983198319831983年年年年第第第第一一一一株株株株转转转转基基基基因因因因烟烟烟烟草草草草获获获获得得得得以以以以来来来来，国国国国际际际际上上上上对对对对转转转转基基基基因因因因作作作作物物物物就就就就存存存存在着截然不同的观点。在着截然不同的观点。在着截然不同的观点。在着截然不同的观点。 有人认为转基因作物造福于人类；有人认为转基因作物造福于人类；有人认为转基因作物造福于人类；有人认为转基因作物造福于人类； 有有有有人人人人认认认认为为为为转转转转基基基基因因因因作作作作物物物物可可可可能能能能给给给给人人人人类类类类带带带带来来来来环环环环境境境境、健健健健康康康康与生态的危险；与生态的危险；与生态的危险；与生态的危险； 基基基基因因因因工工工工程程程程技技技技术术术术在在在在整整整整个个个个世世世世界界界界引引引引起起起起极极极极大大大大的的的的关关关关注注注注与与与与争争争争议议议议，并并并并且且且且随随随随着着着着转转转转基基基基因因因因作作作作物物物物的的的的成成成成功功功功获获获获得得得得、商商商商品品品品化化化化、负负负负面面面面现现现现象象象象频频频频繁繁繁繁出出出出现现现现等等等等，甚甚甚甚至至至至有有有有完完完完全全全全拒拒拒拒绝绝绝绝转转转转基基基基因因因因食食食食品品品品进进进进入市场的举措入市场的举措入市场的举措入市场的举措. . . .（一）转基因植物的安全性评价（一）转基因植物的安全性评价转基因植物技术相关事件转基因植物技术相关事件转基因植物技术相关事件转基因植物技术相关事件纽纽纽纽约约约约大大大大学学学学研研研研究究究究人人人人员员员员发发发发现现现现，在在在在室室室室内内内内种种种种植植植植的的的的转转转转基基基基因因因因B2B2B2B2玉玉玉玉米米米米植植植植株株株株中中中中的的的的杀杀杀杀虫虫虫虫毒毒毒毒素素素素可可可可以以以以渗渗渗渗入入入入到到到到土土土土壤壤壤壤中中中中，在在在在玉玉玉玉米米米米根根根根系系系系周周周周围围围围土土土土壤壤壤壤提提提提取取取取物物物物中中中中仍仍仍仍含含含含有有有有BtBtBtBt毒毒毒毒素素素素，可可可可以以以以杀杀杀杀死死死死幼幼幼幼虫虫虫虫，其其其其活活活活性性性性可可可可持持持持续续续续25252525天天天天。研研研研究究究究人人人人员员员员认为此毒素普遍地影响土壤生态学。认为此毒素普遍地影响土壤生态学。认为此毒素普遍地影响土壤生态学。认为此毒素普遍地影响土壤生态学。(1999(1999(1999(1999年年年年) ) ) )孟孟孟孟山山山山都都都都公公公公司司司司培培培培育育育育的的的的抗抗抗抗虫虫虫虫转转转转基基基基因因因因棉棉棉棉花花花花在在在在1996199619961996年年年年进进进进行行行行大大大大规规规规模模模模种种种种植植植植，部部部部分分分分地地地地区区区区出出出出现现现现大大大大量量量量存存存存活活活活的的的的棉棉棉棉铃铃铃铃虫虫虫虫，导导导导致致致致棉棉棉棉花花花花不不不不同同同同程程程程度度度度地地地地受受受受害害害害，需要追喷杀虫剂。需要追喷杀虫剂。需要追喷杀虫剂。需要追喷杀虫剂。孟孟孟孟山山山山都都都都公公公公司司司司开开开开发发发发的的的的抗抗抗抗除除除除草草草草剂剂剂剂草草草草甘甘甘甘膦膦膦膦转转转转基基基基因因因因棉棉棉棉花花花花于于于于1997199719971997年年年年大大大大规规规规模种植，棉花主产区模种植，棉花主产区模种植，棉花主产区模种植，棉花主产区DettaDettaDettaDetta收获的棉花多大量落铃或棉桃畸形。收获的棉花多大量落铃或棉桃畸形。收获的棉花多大量落铃或棉桃畸形。收获的棉花多大量落铃或棉桃畸形。1994199419941994年年年年美美美美国国国国第第第第一一一一个个个个批批批批准准准准商商商商品品品品化化化化的的的的延延延延迟迟迟迟成成成成熟熟熟熟期期期期的的的的转转转转基基基基因因因因番番番番茄茄茄茄也也也也因种种原因停止了生产。因种种原因停止了生产。因种种原因停止了生产。因种种原因停止了生产。 转基因植物技术相关事件转基因植物技术相关事件转基因植物技术相关事件转基因植物技术相关事件 苏苏苏苏格格格格兰兰兰兰P P P P owettowettowettowett研研研研究究究究所所所所用用用用转转转转凝凝凝凝集集集集素素素素基基基基因因因因的的的的马马马马铃铃铃铃薯薯薯薯喂喂喂喂饲饲饲饲大大大大鼠鼠鼠鼠，在在在在电电电电视视视视上上上上宣宣宣宣传传传传大大大大鼠鼠鼠鼠食食食食用用用用后后后后引引引引起起起起器器器器官官官官生生生生长长长长异异异异常常常常，体体体体重重重重和和和和器器器器官官官官重重重重量量量量减轻，破坏免疫系统，引起国际轰动。减轻，破坏免疫系统，引起国际轰动。减轻，破坏免疫系统，引起国际轰动。减轻，破坏免疫系统，引起国际轰动。(1998(1998(1998(1998年年年年) ) ) )印印印印度度度度于于于于1998199819981998年年年年11111111月月月月焚焚焚焚烧烧烧烧了了了了美美美美国国国国孟孟孟孟山山山山都都都都公公公公司司司司的的的的两两两两块块块块实实实实验验验验地地地地，反反反反对对对对该该该该公公公公司司司司的的的的“ “终终终终止止止止技技技技术术术术” ”，即即即即转转转转基基基基因因因因作作作作物物物物雄雄雄雄性性性性不不不不育育育育，农农农农民民民民不不不不能能能能自己留种。这实际上涉及到的是垄断问题。自己留种。这实际上涉及到的是垄断问题。自己留种。这实际上涉及到的是垄断问题。自己留种。这实际上涉及到的是垄断问题。种种种种植植植植抗抗抗抗虫虫虫虫转转转转基基基基因因因因玉玉玉玉米米米米的的的的地地地地区区区区(1999(1999(1999(1999年年年年) ) ) )，发发发发现现现现马马马马利利利利筋筋筋筋峡峡峡峡蝶蝶蝶蝶大大大大量量量量减少，是蛱蝶因吮食花粉过度而死。减少，是蛱蝶因吮食花粉过度而死。减少，是蛱蝶因吮食花粉过度而死。减少，是蛱蝶因吮食花粉过度而死。丹丹丹丹麦麦麦麦国国国国立立立立利利利利索索索索研研研研究究究究所所所所把把把把耐耐耐耐除除除除草草草草剂剂剂剂的的的的转转转转基基基基因因因因油油油油菜菜菜菜籽籽籽籽和和和和杂杂杂杂草草草草一一一一起起起起培培培培育育育育，产产产产生生生生耐耐耐耐除除除除草草草草剂剂剂剂的的的的杂杂杂杂草草草草，转转转转基基基基因因因因技技技技术术术术产产产产生生生生的的的的基基基基因因因因可可可可扩扩扩扩散散散散到到到到自然界中去。自然界中去。自然界中去。自然界中去。(1996(1996(1996(1996年年年年) ) ) )欧欧欧欧盟盟盟盟国国国国家家家家决决决决定定定定，在在在在新新新新的的的的法法法法规规规规制制制制定定定定出出出出来来来来之之之之前前前前，暂暂暂暂停停停停转转转转基基基基因因因因农农农农作作作作物的种植和流通。物的种植和流通。物的种植和流通。物的种植和流通。(2000(2000(2000(2000年年年年) ) ) )转基因植物释放后可能导致的生态学潜在风险转基因植物释放后可能导致的生态学潜在风险转基因植物释放后可能导致的生态学潜在风险转基因植物释放后可能导致的生态学潜在风险转基因入侵的风险；转基因入侵的风险；转基因入侵的风险；转基因入侵的风险；转转转转基基基基因因因因通通通通过过过过与与与与野野野野生生生生亲亲亲亲缘缘缘缘种种种种间间间间的的的的基基基基因因因因交交交交流流流流而而而而发发发发生生生生逃逃逃逃逸逸逸逸的的的的风风风风险险险险群群群群，使使使使遗遗遗遗传传传传性性性性状状状状改改改改变变变变，破破破破坏坏坏坏生生生生态态态态平平平平衡衡衡衡，给给给给农农农农作作作作物物物物带带带带来来来来严严严严重重重重威威威威胁；胁；胁；胁；抗病毒作物产生新病毒的风险；抗病毒作物产生新病毒的风险；抗病毒作物产生新病毒的风险；抗病毒作物产生新病毒的风险；转转转转基基基基因因因因植植植植物物物物释释释释放放放放后后后后对对对对土土土土壤壤壤壤生生生生态态态态系系系系统统统统及及及及生生生生物物物物地地地地球球球球化化化化学学学学循循循循环环环环的的的的影响风险；同时鱼类与其他动物也会受到不良影响；影响风险；同时鱼类与其他动物也会受到不良影响；影响风险；同时鱼类与其他动物也会受到不良影响；影响风险；同时鱼类与其他动物也会受到不良影响；结束结束