第六章第六章胚胎培养和离体授粉胚胎培养和离体授粉胚胚培养培养胚乳培养胚乳培养胚珠和子房培养胚珠和子房培养离体授粉离体授粉1一、胚培养一、胚培养1、意义、意义（5）q促使发育不良或中途败育的胚发育成熟促使发育不良或中途败育的胚发育成熟q打破休眠期促进胚萌发打破休眠期促进胚萌发q克服多胚品种珠心胚的干扰克服多胚品种珠心胚的干扰q快速繁殖良种砧木快速繁殖良种砧木q诱导胚性愈伤组织诱导胚性愈伤组织232、离体胚培养的发育途径、离体胚培养的发育途径按按正常胚胎发育途径形成植株正常胚胎发育途径形成植株脱分化形成愈伤组织脱分化形成愈伤组织胚胚“早熟萌发早熟萌发”4成熟胚成熟胚未成熟胚未成熟胚维持胚的生长，进行正常的胚胎发维持胚的生长，进行正常的胚胎发育成熟，完成胚胎发育的全过程。育成熟，完成胚胎发育的全过程。正常发育形成小苗正常发育形成小苗2.1 按正常胚胎发育途径形成植株按正常胚胎发育途径形成植株52.2 脱分化形成愈伤组织脱分化形成愈伤组织离体胚离体胚小植株小植株愈伤组织愈伤组织激素浓度高激素浓度高胚状体或不定芽胚状体或不定芽分化培养基分化培养基62.3 胚胚“早熟萌发早熟萌发”畸形苗畸形苗发育不正常而死发育不正常而死未成熟幼胚未成熟幼胚分离变异体分离变异体73、成熟胚的培养、成熟胚的培养3-1、材料的消毒与接种、材料的消毒与接种通常来自成年健康、品种优良的母树或杂交种子通常来自成年健康、品种优良的母树或杂交种子3-2、培养基、培养基q谷氨酰胺谷氨酰胺作为氮源，可以促进胚生长作为氮源，可以促进胚生长qLHLH、MEME和和YEYE促进胚生长促进胚生长q硫氨素促进胚根的伸长硫氨素促进胚根的伸长q生长素低浓度促进胚的发育（胚根）生长素低浓度促进胚的发育（胚根）q赤霉素促进有后熟作用的种子萌发赤霉素促进有后熟作用的种子萌发3-3、培养条件、培养条件1212小时光照和小时光照和2525 C C，热带兰花杂交种胚，热带兰花杂交种胚30 30 C C附加成分附加成分84、原胚的培养、原胚的培养无机氮：无机氮：渗透压：渗透压：复杂的天然提取物：复杂的天然提取物：活性炭：活性炭：硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐；硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐；蔗糖，蔗糖，8%-10%8%-10%，不同发育期，渗，不同发育期，渗透压不一样，初期高透压不一样，初期高（WHYWHY）椰乳椰乳吸附有毒物质吸附有毒物质9二、胚乳培养二、胚乳培养1、用途、用途胚乳培养再生植株证明了全能性理论；胚乳培养再生植株证明了全能性理论；研究胚和胚乳的关系及胚乳组织的功能；研究胚和胚乳的关系及胚乳组织的功能；再生植株多为三倍体，产生无籽果实；再生植株多为三倍体，产生无籽果实；研究育种和性状遗传。研究育种和性状遗传。柑桔、苹果、枇杷、枣、梨、桃、猕猴桃、马铃薯柑桔、苹果、枇杷、枣、梨、桃、猕猴桃、马铃薯102、胚乳培养、胚乳培养胚乳胚乳胚状体发育成苗胚状体发育成苗不定芽苗不定芽苗柑桔和枣柑桔和枣苹果和枇杷苹果和枇杷愈伤组织愈伤组织形态发生形态发生11For culture of mature endosperm, fruits are surface sterilized and endosperm plus embryo are dissected out under aseptic conditions. For culture of immature endosperm, entireseeds are sterilized and the endosperm tissue is carefully excised under aseptic conditions using a stereoscopic microscope. It is desirable to dissecting out endosperm explants free of embryo tissue. Failure in this regard couldlead to contamination of the endosperm calluswith the tissue of embryo origin (diploid tissue). 12三、胚珠和子房培养三、胚珠和子房培养1、作用、作用q促进原胚继续生长，使幼胚发育促进原胚继续生长，使幼胚发育成熟；成熟；成功：四季桔、柑、凤仙花、洋葱成功：四季桔、柑、凤仙花、洋葱成功的植物：西葫芦、莴苣、百合等成功的植物：西葫芦、莴苣、百合等q未授粉胚珠和子房，诱导孤雌未授粉胚珠和子房，诱导孤雌生殖，产生雌性单倍体生殖，产生雌性单倍体132、外植体消毒和接种、外植体消毒和接种3、培养基及培养条件、培养基及培养条件4、离体培养胚胎的发育、离体培养胚胎的发育q胚珠或授粉子房培养，合子胚可以更好地发胚珠或授粉子房培养，合子胚可以更好地发育成植株。但如果条件不适，也容易从幼胚育成植株。但如果条件不适，也容易从幼胚或珠心组织产生愈伤组织。或珠心组织产生愈伤组织。q芸香科易产生珠心胚。培养胚珠，获得大量芸香科易产生珠心胚。培养胚珠，获得大量珠心胚，用以品种复壮、快速繁殖和获得无珠心胚，用以品种复壮、快速繁殖和获得无病毒苗。同时，通过珠心组织培养，产生胚病毒苗。同时，通过珠心组织培养，产生胚性愈伤组织，建立胚性组织培养实验体系。性愈伤组织，建立胚性组织培养实验体系。14四、离体授粉（四、离体授粉（In vitro pollination）也叫离体受精（也叫离体受精（In vitro fertilizationi）、试管）、试管受精（受精（Test-tube fertilization）就是把未授粉的胚珠或子房从母体上切离下来，就是把未授粉的胚珠或子房从母体上切离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌的花进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌的花粉，使之在试管内实现受精。可以克服自亲不粉，使之在试管内实现受精。可以克服自亲不亲和，从而得到远缘杂种。亲和，从而得到远缘杂种。15取即将开花的花蕾，灭菌，切离子房，取即将开花的花蕾，灭菌，切离子房，引入引入花粉花粉1-1、直接引入法、直接引入法刀刀片片在在子子房房壁壁或或子子房房顶顶端端切切开开一一个个切切口口，把把花花粉粉配配成成花花粉粉悬悬浮液滴于切口处浮液滴于切口处1-2、注射法、注射法16离体开花（离体开花（in vitro flowering）Physiology of flowerIn vitro pollination for breeding purposeShort day plants:Plumbago indica 17思考题胚和胚乳培养的意义及方法胚和胚培养注意事项全书全书内容内容18个人观点供参考，欢迎讨论