实验室检测方法能力的确认举例举例举例举例：某实验室扩项农药残留检测方法某实验室扩项农药残留检测方法某实验室扩项农药残留检测方法某实验室扩项农药残留检测方法 GB/T19648-2006GB/T19648-2006水果和蔬菜中水果和蔬菜中500500种农药及相关化学种农药及相关化学品残留量的测定品残留量的测定评审员现场见实验室提供了一份含有评审员现场见实验室提供了一份含有400400多种农药和化学品多种农药和化学品的回收率报告，报告结论是批准了扩项要求。的回收率报告，报告结论是批准了扩项要求。评审员查阅了该回收率的数据，见有百分之十几、二十几、评审员查阅了该回收率的数据，见有百分之十几、二十几、三十几三十几-八十几不等的数据，即问回收率达到多少可通八十几不等的数据，即问回收率达到多少可通过？回答：只要做过回收率即可通过就是有检测能力了。过？回答：只要做过回收率即可通过就是有检测能力了。评审员又问对扩项除了提供回收率数据外还做了什么试验项评审员又问对扩项除了提供回收率数据外还做了什么试验项目？对新项目开展前是否有策划？回答是目？对新项目开展前是否有策划？回答是“ “没有没有” ”。实验室如何对扩展的检测方法能力进行确认？实验室如何对扩展的检测方法能力进行确认？实验室如何开展新扩的检测方法项目的验证？实验室如何开展新扩的检测方法项目的验证？ 实验室实验室是从事在科学上为阐明某一现象而创造是从事在科学上为阐明某一现象而创造特定的条件以便观察它的变化和结果的机构。特定的条件以便观察它的变化和结果的机构。检检测实验室测实验室是从事检测工作的实验室。实验室为了是从事检测工作的实验室。实验室为了向社会提供准确可靠的检测数据和结果，它在技向社会提供准确可靠的检测数据和结果，它在技术经济活动和社会发展过程中都占有重要的地位：术经济活动和社会发展过程中都占有重要的地位：如政府部门要依据有关的检测结果来制定和实施如政府部门要依据有关的检测结果来制定和实施各种方法及政策；司法部门也可以利用检测数据各种方法及政策；司法部门也可以利用检测数据作为调解或仲裁的依据；消费者则利用各种检测作为调解或仲裁的依据；消费者则利用各种检测结果来保护自己的权益等等。由于实验室最终成结果来保护自己的权益等等。由于实验室最终成果的体现是果的体现是检测报告检测报告- -向社会出具高质量向社会出具高质量( (准确、准确、可靠、及时可靠、及时) )的报告，并得到社会各界的信赖和认的报告，并得到社会各界的信赖和认可，所以就必须在管理体系上加以规范。可，所以就必须在管理体系上加以规范。CNAS-CL09 实验室现场评审核查表检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明 5.4.2* 实验室在采用新的方法进行检测前，是否对方法进行验证并保留验证记录？依据CNAS-CL01准则 实验室现场评审核查表 5.4 检测和校准方法及方法确认实验室制定的方法或被实验室采用的方法，如果满足预期用途并经过验证，是否也予以使用？在引入检测或校准前，是否确认实验室能够正确地运用这些标准方法？如果标准方法有改变，实验室是否重新进行证实？ 应证实能力应证实能力 依据CNAS-CL01准则 实验室现场评审核查表5.4.5方法的确认5.4.5.1.实验室是否通过检查并提供客观证据，证实 某一特定预期用途的特定要求得到满足?5.4.5.2实验室是否对非标准方法、实验室设计（制 定）的方法、超出其预定范围使用的标准方法、 扩充和修改过的标准方法进行确认，以证实该方 法适合于预期的用途？ 确认是否尽可能全面，以满足预定用途或应用领 域的需要？ 实验室是否记录所获得的结果、使用的确认程序 以及该方法是否适于预期用途的声明？CNAS-CL10:2012检测和校准实验室能力认可准则在化学检测领域的应用说明5.4.2 b) 实验室是否对首次采用的检测方法进行技术能力的验证，如检出限、回收率、正确度和精密度等？5.4.5 b) 实验室是否通过试验方法的检出限、精密度、回收率、适用的浓度范围和样品基体等特性来对检测方法进行确认？实验室是否能解释和说明检出限和报告限的获得？报告限是否设定在一定置信度下可获得定量结果的水平？ 确认确认 validationvalidation 定义：定义：定义：定义： 通过检查并提供客观证据以证实某一特定的预期用通过检查并提供客观证据以证实某一特定的预期用通过检查并提供客观证据以证实某一特定的预期用通过检查并提供客观证据以证实某一特定的预期用 途的特殊要求或应用要求已得到满足的认定途的特殊要求或应用要求已得到满足的认定途的特殊要求或应用要求已得到满足的认定途的特殊要求或应用要求已得到满足的认定 。 确认确认应尽可能的广泛全面，以满足预定用途或应用领域应尽可能的广泛全面，以满足预定用途或应用领域 的需要，证实实验室能够正确地执行标准方法。的需要，证实实验室能够正确地执行标准方法。 实验室应对实验室应对4 4种方法进行确认，以证实这些方法适用于种方法进行确认，以证实这些方法适用于 预期用途（即标准方法应用实施前、非标准方法、自己新预期用途（即标准方法应用实施前、非标准方法、自己新 设计开发、超过预期范围使用的标准方法设计开发、超过预期范围使用的标准方法/ /扩充和修改过的扩充和修改过的 标准方法）。标准方法）。 验证验证 verificationverification定义：通过提供客观证据对规定要求已得到满足的认定。定义：通过提供客观证据对规定要求已得到满足的认定。l l目的：确保与实际检测相符，整个检测方法的有效性；目的：确保与实际检测相符，整个检测方法的有效性；l l验证是一个持续的过程，一般方法有：验证是一个持续的过程，一般方法有： （1 1）应对方法的技术要素（）应对方法的技术要素（参见参见GB/T27404-2008GB/T27404-2008附录附录F F） ； （2 2）与其它方法所得的结果进行比较；）与其它方法所得的结果进行比较； （3 3）将将新新设设计计开开发发检检验验方方法法与与已已证证实实的的类类似似方方法法进进行行比比较；较； （4 4）实验室间的比对；）实验室间的比对； （5 5）使用参考标准或标准物质进行校准；。）使用参考标准或标准物质进行校准；。验证与确认不同及关系：验证与确认不同及关系：l l确确认认 是是运运行行前前和和变变化化后后实实施施的的评评定定，目目的的在在于于证证明明各各检检测测/ /验验方方法法能能力力能能够够达达到到预预期期的的控控制制水水平平（或或满满足足可可接受水平）；接受水平）；l l验验证证是是在在运运行行中中和和运运行行后后进进行行的的评评定定，目目的的在在于于证证明明确确实达到了预期的控制水平（和实达到了预期的控制水平（和/ /或满足了可接受水平）或满足了可接受水平） 检测方法的分类检测方法的分类1 1、标准方法包括：、标准方法包括： a) a) 国际标准：国际标准：ISOISO、WHOWHO、UNFAOUNFAO、CACCAC等等 b) b) 国家（或区域性）标准：国家（或区域性）标准：GBGB、ENEN、ANSIANSI、BSBS、 DINDIN、JISJIS、AFNORAFNOR、FOCTFOCT、药典等；、药典等； c) c) 行业标准、地方标准、标准化主管部门备案的企业标行业标准、地方标准、标准化主管部门备案的企业标 准。准。 2 2、非标准方法包括：、非标准方法包括： a a） 技术组织发布的方法：技术组织发布的方法：AOACAOAC、FCCFCC等；等； b b） 科学文献或期刊公布的方法；科学文献或期刊公布的方法； c c） 仪器生产厂家提供的指导方法；仪器生产厂家提供的指导方法； d d） 实验室制定的内部方法。实验室制定的内部方法。3 3、允许偏离的标准方法包括：、允许偏离的标准方法包括： a a） 超出标准规定范围使用的标准方法；超出标准规定范围使用的标准方法； b b） 经过扩充或更改的标准方法。经过扩充或更改的标准方法。 检测方法的选择检测方法的选择检测方法的选择检测方法的选择 1 1 、选择检测方法的基本原则：、选择检测方法的基本原则： a) a) 采用的检测方法满足客户要求并适合所进行的检测工采用的检测方法满足客户要求并适合所进行的检测工作；作； b b） 推荐采用国际标准、国家（或区域性）标准、行业标推荐采用国际标准、国家（或区域性）标准、行业标准；准； c c） 保证采用的标准系最新有效版本；保证采用的标准系最新有效版本； 2 2 、按下述排列顺序优先选择检测方法；、按下述排列顺序优先选择检测方法； a) a) 客户指定的方法客户指定的方法 b b） 法律法规规定的标准；法律法规规定的标准； c c） 国际标准、国家（或区域性）标准国际标准、国家（或区域性）标准 d d） 行业标准、地方标准、标准化主管部门备案的企业标行业标准、地方标准、标准化主管部门备案的企业标准；准； e) e) 非标准方法、允许偏离的标准方法。非标准方法、允许偏离的标准方法。 GB/T27404-2008GB/T27404-2008实验室质量控制规范实验室质量控制规范实验室质量控制规范实验室质量控制规范 食品理化食品理化食品理化食品理化检测）检测）检测）检测）A A、标准方法的控制标准方法的控制标准方法的控制标准方法的控制 实验室实验室首先首先应使用应使用受控的标准方法受控的标准方法，并定期跟，并定期跟踪检查标准方法的时效性，确保实验室使用的标踪检查标准方法的时效性，确保实验室使用的标准方法是现行有效的。准方法是现行有效的。标准方法的标准方法的标准方法的标准方法的确认确认确认确认1 1 、首次首次采用的标准方法，在应用于样品检测前应对采用的标准方法，在应用于样品检测前应对方法的技术要素（参见方法的技术要素（参见GB/T27404-2008GB/T27404-2008附录附录F F）进行进行验证验证。2 2 、验证验证发现标准方法中未能祥述，但会影响检测结发现标准方法中未能祥述，但会影响检测结果处，应将详细操作步骤写成果处，应将详细操作步骤写成作业指导书作业指导书，经审，经审核批准后作为标准方法的补充。核批准后作为标准方法的补充。B、 非标准方法的制定非标准方法的制定1 、引用方法、引用方法11 需要引用权威技术组织发布的方法、科学文献或期刊公布的方法、仪器生产厂家提供的指导方法时，应对方法的技术要素进行验证。12 验证发现引用方法原文中未能详述，但会影响检测结果处，应将详细操作步骤编写成作业指导书，作为原方法的补充。2 、实验室内部方法实验室内部方法21 实验室需要研制新方法时，应检索国内外状况，设计技术路线，明确预期达到的目的，制定工作计划，提出书面申请，报经批准。22 实验室应保证新技术、新方法研制工作所需要的资源和时间。23 在建立新方法或改进原方法的研究过程中，应同时对方法的技术要素（参见GB/T27404-2008附录F）进行试验。24 实验室内部方法应按GB/T1.1规定的格式编写。 依据CNAS-CL01准则 实验室现场评审核查表5.4.3实验室制定的方法 实验室为采用自己应用而制定检测和校准方法过程的活动，是否是一种有计划的活动？ 是否指定具有足够资源的有资格的人员来进行该项活动？ 是否随着方法制定的进度加以更新计划，并确保在所有有关人员之间中有效沟通？ 3 、 非标准方法的控制非标准方法的控制 31 非标准方法应经试验、验证、编制、审核和批准。 32 实验室应指定具相应资格的技术人员编制非标准方法，并组织技术人员进行技术审核。 33 经批准的非标准方法应受控管理，所有材料归档保管。 34 非标准方法应是在征得客户同意后使用。C、 允许偏离的标准方法的控制允许偏离的标准方法的控制 1 1 允许偏离的标准方法允许偏离的标准方法应经验证应经验证，编制偏离标准，编制偏离标准的的作业指导书，作业指导书，经审核批准后方可使用。经审核批准后方可使用。 2 2 以下列情况时，标准方法允许偏离：以下列情况时，标准方法允许偏离： a) a) 通过对标准方法的偏离（如试验条件适当放通过对标准方法的偏离（如试验条件适当放宽，对操作步骤适当简化），以缩短检测时间，且宽，对操作步骤适当简化），以缩短检测时间，且这种偏离已被证实对结果的影响在标准允许的范围这种偏离已被证实对结果的影响在标准允许的范围之内；之内； b) b) 对标准方法中某一步骤采用新的检测技术，对标准方法中某一步骤采用新的检测技术，能在保证检测结果准确度的情况下，提高效率，或能在保证检测结果准确度的情况下，提高效率，或是能提高原标准方法的灵敏度和准确度；是能提高原标准方法的灵敏度和准确度； c) c) 由于实验室条件的限制，无法严格按标准方法由于实验室条件的限制，无法严格按标准方法中所述的要求进行检测，不得不作偏离，但在检测中所述的要求进行检测，不得不作偏离，但在检测过程中同时使用标准物质或参考物质加以对照，以过程中同时使用标准物质或参考物质加以对照，以抵消条件变化带来的影响。抵消条件变化带来的影响。GB/T27404-2008 GB/T27404-2008 附附 录录 F F（验证方法的技术要素）（验证方法的技术要素） F1F1、 回收率回收率回收率回收率： 对于食品中的禁用物质，回收率应在方法测定低限、两对于食品中的禁用物质，回收率应在方法测定低限、两倍方法测定低限和十倍方法测定低限进行倍方法测定低限和十倍方法测定低限进行三水平三水平试验；试验； 对于已制定最高残留限量（对于已制定最高残留限量（MRLMRL）的，回收率应在方法）的，回收率应在方法测定低限、测定低限、MRLMRL、选一合适点进行、选一合适点进行三水平三水平试验；对于未制试验；对于未制定定MRLMRL的，回收率应在方法测定低限、常见限量指标、选的，回收率应在方法测定低限、常见限量指标、选一适点进行一适点进行三水平三水平试验。回收率的参考范围见表试验。回收率的参考范围见表F F1 1 表表F.1 F.1 回收率范围回收率范围回收率范围回收率范围 被测组分含量被测组分含量/ /（mg/kgmg/kg） 回收率范围回收率范围/%/% 100 95100 95105105 1 1100 90100 90110110 0.1 0.11 801 80110110 0.1 600.1 60120120加标回收率加标回收率： 是向试样中加入已知量的被测组分的标准物质，是向试样中加入已知量的被测组分的标准物质，最后看加入的已知量的标准物质是否能定量回收，最后看加入的已知量的标准物质是否能定量回收，以判断分析过程是否存在系统误差。以判断分析过程是否存在系统误差。 在样品中加入标准物质，测定其回收率，可以在样品中加入标准物质，测定其回收率，可以检验分析方法的准确程度和样品所引起的干扰误检验分析方法的准确程度和样品所引起的干扰误差。差。 回收率回收率回收率回收率%=%=%=%=实测标准物的量实测标准物的量实测标准物的量实测标准物的量/ / / /加入的标准物质的量加入的标准物质的量加入的标准物质的量加入的标准物质的量 X 100%X 100%X 100%X 100%例：例：镉添加水平镉添加水平50ng/ml*0.1ml,50ng/ml*0.1ml, 镉实测值镉实测值0.10mg/kg,0.10mg/kg, 回收率回收率81.1%81.1%；CNAS-CL10:2012 / 5.6 测量溯源性5.6.1总则实验室是否按检测方法的要求建立校准曲线？所用标样是否覆盖被测样品的浓度范围？最低浓度的标样是否在接近检测方法报告限的水平,并建立和执行线性校准曲线相关系数的准则？F.2F.2 校准曲线校准曲线校准曲线校准曲线 应描述校准曲线的数学方程以及校准曲线的工作范围，应描述校准曲线的数学方程以及校准曲线的工作范围，浓度范围尽可能覆盖浓度范围尽可能覆盖一个数量一个数量 级级（如（如0.1-1.0)0.1-1.0)，至少作，至少作5 5个个点点( (不包括空白不包括空白) )，为不同浓度水平上画出一条标准曲线。，为不同浓度水平上画出一条标准曲线。对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不应应低于低于0.980.98，对于确证方法，相关系数不应低于对于确证方法，相关系数不应低于0.990.99。测试溶液中被测。测试溶液中被测组分浓度应该在校准曲线的线性范围内。组分浓度应该在校准曲线的线性范围内。 对于给出良好的线性度的方法，用测量标准在对于给出良好的线性度的方法，用测量标准在5 5个不同个不同浓度水平上画出一条标准曲线就够了。当线性度差时，就浓度水平上画出一条标准曲线就够了。当线性度差时，就需要更多个测量标准。定量分析方法的线性都是通过分析需要更多个测量标准。定量分析方法的线性都是通过分析具有覆盖方法所要求浓度范围的分析物的样品来确定，具有覆盖方法所要求浓度范围的分析物的样品来确定，应应用最小二乘法将其结果用于计算回归线用最小二乘法将其结果用于计算回归线。如果某一检测方。如果某一检测方法在一特定范围内是线性的（但不是绝对的要求），这就法在一特定范围内是线性的（但不是绝对的要求），这就比较理想。比较理想。 y y= =a+a+b bx x 相关系数相关系数R=0.999R=0.9999 9在分析测试中常会遇到处理两个变量之间的关系，例如在建立校准曲线时需要了解被测组分的浓度和响应值之间的关系。两个变量x与y之间的关系存在着函数关系，y值随着x值按照确定的规律变化，由一个 xi值可以精确地求出yi值。值。 见图： (x,y)的散布图 y=f(x) 如回归函数是一个线性函数，则称变量间是线性相关的。一元线性回归方程：y=a+bx 由于存在测定误差， x与y不是函数关系，而是相关关系（相关关系是统计关系）。 a -截距 b-斜率 1.校准曲线的绘制 每种应用校准曲线的分析方法在初次使用时，可通过绘制校准曲线以确定它的检测上限，并结合检测下限确定其检测范围。绘制校准曲线应注意：1）校准曲线一般可根据4-6个浓度及其测量信号响应值绘制；2）测量信号值的最小分度应与纵坐标的最小分格相适应；3）浓度的整数值应落在横坐标的中格或大格的粗线上，以便于分小格查阅，并尽量使校准曲线的几何斜率接近于1（与横坐标约成45度角），以使在两个轴上的读数误差相近。 4）校准曲线的斜率常因温度、试剂批号等条件的变化而变化。在测定未知样品的同时测绘校准曲线是最理想的。否则，应在测定未知样品的同时，平行测定线性范围内的中等浓度标准溶液和空白溶液各二份，取均值相减后，与以前绘制的校准曲线上相同点进行核对，二者的相对差值根据方法精度要求=0.999。否则可参照上述 影响线性关系的诸因素，找出原因并尽可能加以纠正，重新测定和绘制新的校准曲线。 对于成熟的分析方法和熟练的分析人员如能细心操作能使校准曲线的相关系数绝对值IrI=0.999,在实验条件不变情况下校准曲线的斜率一般很稳定，其截距等于零。 y=a+bx 因变量y与自变量x之间是否确实存在相关关系在求线性回归方程的过程中也可用最小二乘法求得“回归方程”，画出一条直线，这可用相关系数检验法检验。1）由样本值计算相关系数r r=Sxyxy/SxxxxSyyyy 2)由相关系数临界值表中查出临界值ra,na,n3) 比较比较IrI与与ra,na,n的大小，若的大小，若的大小，若的大小，若IrI=ra,n,a,n,则认为则认为则认为则认为X X与y之间存在线性相关关系； 若若若若IrI r0.05,5 ,说明确立的回归方程是有意义的。 注： Sxy=xy - (x) ( y) ； Sxx=x平方-（x）平方/n Syy=y平方-（y）平方/n F.3F.3精密度精密度精密度精密度 精密度就是几次平行测定精密度就是几次平行测定（分析分析）结果相互接近的程度。结果相互接近的程度。精密度的高低用精密度的高低用偏差偏差来衡量。来衡量。 对于食品中的对于食品中的禁用物质禁用物质，精度度实验应在方法，精度度实验应在方法测定低限、两倍方法测定低限和十倍方法测定低测定低限、两倍方法测定低限和十倍方法测定低限三个水平进行；限三个水平进行； 对于已制定对于已制定MRLMRL（最高残留限量）的，精密度（最高残留限量）的，精密度实验应在方法测定低限、实验应在方法测定低限、MRLMRL、选一合适点三个、选一合适点三个水平进行；水平进行； 对于对于未制定未制定MRLMRL的，精密度实验应在方法测定的，精密度实验应在方法测定低限、常见限量指标、选一合适点三个水平进行。低限、常见限量指标、选一合适点三个水平进行。 重复测定次数至少为重复测定次数至少为6 6。实验室内部的。实验室内部的变异系数变异系数参考范围见表参考范围见表F.2F.2。 表表F.2实验室内实验室内变异系数变异系数 被测组分含量被测组分含量 实验室内变异系数（实验室内变异系数（CVCV）/%/% 0.1g/kg 43 0.1g/kg 43 1g/kg 30 1g/kg 30 10g/kg 21 10g/kg 21 100g/kg 15 100g/kg 15 1mg/kg 11 1mg/kg 11 10 mg/kg 7.5 10 mg/kg 7.5 100 mg/kg 5.3 100 mg/kg 5.3 1000 mg/kg 3.8 1000 mg/kg 3.8 1% 2.7 1% 2.7 10% 2.0 10% 2.0 100% 1.3 100% 1.3 偏差:是指单次测定结果值与几次测定结果的平均值之间的差别. 绝对偏差=单次测得值-测得结果平均值 相对偏差=绝对偏差/ /测得平均值100% 平均偏差各次测量值偏差的绝对值之和被测量次数除。 相对平均偏差平均偏差/平均结果x100% 极差极差 ：也称全距R，是一组数据极大值与极小值之差。 R=XmaxXmin 目前普遍采用目前普遍采用标准差的相对值标准差的相对值来反映数据的相对来反映数据的相对波动度，标准差的相对值称为波动度，标准差的相对值称为相对标准偏差相对标准偏差RDRD。 单次单次测量结果的相对标准偏差又称测量结果的相对标准偏差又称变异系数变异系数变异系数变异系数 CVCV。 CV%=S/XCV%=S/X的平均值的平均值 x100%x100% 例：测定试样中的氟化物含量，重复测定例：测定试样中的氟化物含量，重复测定5 5次，其数据为：次，其数据为： 0.45; 0.39; 0.47; 0.40; 0.43 mg/L,0.45; 0.39; 0.47; 0.40; 0.43 mg/L,试求极差？平均极差试求极差？平均极差？标准差？变异系数？标准差？变异系数？ Xi mg/L 0.45 0.39 0.47 0.40 0.43 Xi mg/L 0.45 0.39 0.47 0.40 0.43 I Xi-X I Xi-X 平均平均 I 0.02 0.04 0.04 0.03 0.00I 0.02 0.04 0.04 0.03 0.00(Xi-X (Xi-X 平均平均 ) ) o.004 0.0016 0.0016 0.0009 0.0000 o.004 0.0016 0.0016 0.0009 0.0000 X X平均平均=0.43 =0.43 ， I Xi-X Xi-X 平均平均 I =0.13 =0.13 ; ; (Xi-X (Xi-X 平均平均 ) ) =0.0045 =0.0045 计算计算 结果：极差结果：极差R=0.47-0.39=0.08 mg/LR=0.47-0.39=0.08 mg/L 平均偏差平均偏差d=d=I0.130.13I / 5=0.026 mg/L 5=0.026 mg/L 标准差标准差S=S=0.0045 0.0045 /(5-1)=0.033 mg/L(5-1)=0.033 mg/L 变异系数变异系数 CV=0.033/0.43x100%=7.7%CV=0.033/0.43x100%=7.7% 标准差的作用标准差的作用标准差的作用标准差的作用：1 1）表示观察值分布的离散程度）表示观察值分布的离散程度( (由偶然误差决定）由偶然误差决定）。当两组观察值在单位相同，两均数相近的条件下，当两组观察值在单位相同，两均数相近的条件下，标准差较大，说明观察值得变异程度较大，即观标准差较大，说明观察值得变异程度较大，即观察值围绕均数的分布较离散，均数的代表性较差；察值围绕均数的分布较离散，均数的代表性较差；反之均数的代表性就较好。反之均数的代表性就较好。 在理化检验工作中，例如摸索某一检验方法的实验在理化检验工作中，例如摸索某一检验方法的实验在理化检验工作中，例如摸索某一检验方法的实验在理化检验工作中，例如摸索某一检验方法的实验条件或比较两种检测方法时，都常用到标准差条件或比较两种检测方法时，都常用到标准差条件或比较两种检测方法时，都常用到标准差条件或比较两种检测方法时，都常用到标准差。2 2）当两组观察值单位不同，或两均数相差较大时，）当两组观察值单位不同，或两均数相差较大时，不能直接用标准差比较其变异程度的大小，这时不能直接用标准差比较其变异程度的大小，这时可用变异系（可用变异系（CVCV）进行比较。）进行比较。用标准差计算变异用标准差计算变异系数系数。 CV=CV=标准偏差标准偏差/ /平均值平均值X100%X100%变异系数愈小，说明观察值得变异程度愈小；变异系数愈小，说明观察值得变异程度愈小； 变异系数愈大，说明观察值的变异程度愈大。变异系数愈大，说明观察值的变异程度愈大。 理化检验方法的精密度就是用变异系数表示的。理化检验方法的精密度就是用变异系数表示的。理化检验方法的精密度就是用变异系数表示的。理化检验方法的精密度就是用变异系数表示的。 重复性试验重复性试验：目的是为了预测：目的是为了预测精密度精密度精密度精密度 平行测定的次数愈多，其平均值愈接近真实值平行测定的次数愈多，其平均值愈接近真实值。合理的反映实验室对一个分析方法的精密度应该合理的反映实验室对一个分析方法的精密度应该通过在通过在一个时期阶段（一个时期阶段（一个时期阶段（一个时期阶段（1-21-21-21-2周）周）周）周）内若干批的试验中内若干批的试验中得到，这样可以区分出批内和批间的变异而指出得到，这样可以区分出批内和批间的变异而指出产生随机误差的重要来源。另一方面从所有批的产生随机误差的重要来源。另一方面从所有批的批内的标准差合并值可以指出常规分析中随机误批内的标准差合并值可以指出常规分析中随机误差的规律。差的规律。 在实验设计中必需选择合适的批数在实验设计中必需选择合适的批数m m和重复测量次和重复测量次数数n,n,一般情况下一般情况下n=n=4 46 6 6 6次次,m=5,m=51010次为最合适。次为最合适。 F.4测定低限测定低限方法的测定低限按式（方法的测定低限按式（F.1F.1）计算：）计算： CLCL3Sb/b . (F.1)3Sb/b . (F.1) 式中：式中： CLCL方法的测定低限；方法的测定低限； SbSb空白值标准偏差（一般平行测定空白值标准偏差（一般平行测定2020次得到）；次得到）； b b方法校准曲线的斜率。方法校准曲线的斜率。 对于已制定对于已制定MRLMRL（最高残留限量）的物质，方法（最高残留限量）的物质，方法测定低限加上样品在测定低限加上样品在MRLMRL处的标准偏差的三倍，处的标准偏差的三倍，不应超过不应超过MRLMRL值。对于禁用物质，方法测定低限值。对于禁用物质，方法测定低限应尽可能低。应尽可能低。 测定低限测定低限测定低限测定低限又称检出限又称检出限又称检出限又称检出限/ /检测限检测限检测限检测限 ：把：把3 3倍空白值的的倍空白值的的标标标标准偏差准偏差准偏差准偏差（测定次数（测定次数n n 2020）相对应的质量或浓度称）相对应的质量或浓度称为测定低限为测定低限( (检出限检出限) )。如色谱法：设色谱仪最低响应值为如色谱法：设色谱仪最低响应值为S=3N S=3N (N (N为仪器噪音水平）为仪器噪音水平） 检出限检出限= =最低响应值最低响应值/b =S/b /b =S/b 式中：式中： b-b-标准曲线回归方程中的斜率标准曲线回归方程中的斜率 响应值响应值/ug/ug或响应值或响应值/ng/ng S- S-仪器噪音的仪器噪音的3 3倍倍, ,即仪器能辨认的最小的物质信号。即仪器能辨认的最小的物质信号。检定低限（检出限检定低限（检出限/ /检测下限）分为三类：检测下限）分为三类：（1 1）仪器检测下限：即相当于背景，仪器检测的可靠最小信）仪器检测下限：即相当于背景，仪器检测的可靠最小信号，通常用信号噪声比表示，当号，通常用信号噪声比表示，当N/SN/S 时，时，定义为仪器检测下限。定义为仪器检测下限。（）方法检测下限，即某方法可检测的最小浓度。（）方法检测下限，即某方法可检测的最小浓度。 方法的测定低限方法的测定低限 ( (检测下限检测下限) CL) CL3Sb/b 3Sb/b 标准偏差标准偏差SbSb 标准曲线回归方程标准曲线回归方程 Y=bX+a b-Y=bX+a b-为斜率为斜率（）样品检测下限，即相对于空白可检测的最小样（）样品检测下限，即相对于空白可检测的最小样品的含量。定义样品检测下限为三倍空白标准偏差品的含量。定义样品检测下限为三倍空白标准偏差即空白，故而只有空白含量为零时，样品检测即空白，故而只有空白含量为零时，样品检测下限才等于方法检测下限，然而空白含量往往不等下限才等于方法检测下限，然而空白含量往往不等于零。于零。 F.5准确度准确度 重复分析标准物质（实物标样）或水平测试样品，测定重复分析标准物质（实物标样）或水平测试样品，测定含量（经回收率校准后）含量（经回收率校准后）平均值与真值的偏差平均值与真值的偏差指导范围见指导范围见表表F.3F.3。 表表F.3F.3测定值与真值的偏差指导范围测定值与真值的偏差指导范围 真值含量真值含量/ /（mg/kgmg/kg） 偏差范围偏差范围/%/% 0.001 -500.001 -50+20+20 0.001 0.0010.01 -300.01 -30+10 +10 0.010 0.01010 -2010 -20+10+10 10 101000 1000 1515 1000 100010000 10000 1010 10000 10000 5 5 准确度准确度准确度准确度表示分析结果与真实值接近的程度表示分析结果与真实值接近的程度。 分析结果和真实值之间的差值称为误差分析结果和真实值之间的差值称为误差分析结果和真实值之间的差值称为误差分析结果和真实值之间的差值称为误差，误差越小分析，误差越小分析结果的准确度越高；结果的准确度越高；误差越大误差越大分析结果的分析结果的准确度越低。准确度越低。 准确度的高低用误差来衡量准确度的高低用误差来衡量。 误差分为：误差分为： 绝对误差绝对误差测定值与真实值之间的差值；测定值与真实值之间的差值； 相对误差相对误差测定值与真实值之间的差值对真实值的百分数；测定值与真实值之间的差值对真实值的百分数； 例如：某物质的真实值为例如：某物质的真实值为1.0000g 1.0000g ， 测定值为测定值为0.9980g, 0.9980g, 其绝对误差为其绝对误差为-0.0020g,-0.0020g, 其相对误差为其相对误差为-0.0020/1.0000 x100%= - 0.2%-0.0020/1.0000 x100%= - 0.2% 将测得的组分的百分含量与公认的将测得的组分的百分含量与公认的“ “真值真值” ”之差，作为定量之差，作为定量分析的误差，以衡量某一分析方法或某一实验室的分析水分析的误差，以衡量某一分析方法或某一实验室的分析水平，或衡量某一分析者的技术熟练程度。平，或衡量某一分析者的技术熟练程度。 相对误差是误差在真值中所占的百分率相对误差是误差在真值中所占的百分率 相对误差相对误差= =绝对误差绝对误差/ /被测量真值被测量真值 x100% x100% F.6提取效率提取效率 提取效率可用以下方法进行试验： a) 用阳性的标准物质或水平测试的阳性样品进行试验； b) 阳性样品用同一溶剂反复提取，观察被分析物的浓度变化； c) 用不同提取技术或不同提取溶剂进行比较。 提取效率与样品的前处理有关： 由于食品本身（如蛋白质、脂肪、糖类等）对分析测定 常产生干扰，因此在定量分析测定之前必须对样品进行前 处理。样品在处理过程中，既要排除干扰的因素，又不致于使被测物受到损失，而且还应能使被测物达到一定浓度，从而使测定得到理想结果。 所以在分析过程中，样品的前处理是分析测定的重要步骤。在分析化学中，常用的分离方法有沉淀分离法、液-液萃取分离法、离子交换分离法、色谱分离法、蒸馏和挥发分离法等。 如液-液萃取分离又叫溶剂萃取分离，一般简称萃取分离。这种方法是利用与水不相混的有机溶剂同试液一起震荡，这时，一些组分进入有机相中，另一些组分仍留在水相中，从而达到分离的目的。 提取效率直接影响到检测回收率。 F.7 F.7特异性特异性特异性特异性（定性要求）（定性要求）（定性要求）（定性要求） 对于检测筛选方法和确证方法对于检测筛选方法和确证方法特异性特异性必应予以规必应予以规定，尤其对于定，尤其对于确证方法确证方法必应尽可能清楚地提供待必应尽可能清楚地提供待测物的测物的化学结构信息化学结构信息，仅基于色谱分析而没有使，仅基于色谱分析而没有使用分子光谱测定的方法，不能用于确证方法。确用分子光谱测定的方法，不能用于确证方法。确证方法可采用：证方法可采用： a) a) 气相色谱气相色谱- -质谱质谱 b)b)液相色谱液相色谱- -质谱质谱 c)c)免疫亲和色谱或气相色谱质谱免疫亲和色谱或气相色谱质谱 d)d)气相色谱红外光谱气相色谱红外光谱 e)e)液相色谱免疫层析液相色谱免疫层析 F.8F.8耐用性耐用性耐用性耐用性 方法应具有对可变试验因素的抗干扰能力，方法应具有对可变试验因素的抗干扰能力，当测定条件发生细小变动时，方法应具有一定的当测定条件发生细小变动时，方法应具有一定的保持测定结果不受影响的承受程度。保持测定结果不受影响的承受程度。 耐用性也称抗变性或稳健性。不同实验室在使用同一种耐用性也称抗变性或稳健性。不同实验室在使用同一种 检测方法，他们不可避免地会在程序方法上引入一些小的检测方法，他们不可避免地会在程序方法上引入一些小的 变动，这些变动可能会也可能不会对方法的工作特点产生变动，这些变动可能会也可能不会对方法的工作特点产生 重大影响。一种方法的耐用性（抗变性或稳健性）是通过重大影响。一种方法的耐用性（抗变性或稳健性）是通过 慎重地对检测方法引入某些小的改变并检查其影响结果来慎重地对检测方法引入某些小的改变并检查其影响结果来 测试的。测试的。 用同一样品由三个以上实验室按同样检测方法检验，用同一样品由三个以上实验室按同样检测方法检验， 该检测方法应具有一定的保持测定结果不受影响的承受该检测方法应具有一定的保持测定结果不受影响的承受 程度。程度。 再现性（复现性）再现性（复现性）再现性（复现性）再现性（复现性）表示不同分析人员或不同实表示不同分析人员或不同实验室之间在各自实验条件下所得分析结果的精密验室之间在各自实验条件下所得分析结果的精密度。度。 一个数值一个数值R R在再现性条件下，两次测试结果的在再现性条件下，两次测试结果的绝对差值不超过此数绝对差值不超过此数R R的概率为一个指定值（一的概率为一个指定值（一般为般为95%95%）。）。 所谓在再现性条件是指在两个不同实验室，不所谓在再现性条件是指在两个不同实验室，不同操作人员，不同仪器设备，在不同或相同的时同操作人员，不同仪器设备，在不同或相同的时间内，用同样试验方法程序对同一被试样品所得间内，用同样试验方法程序对同一被试样品所得的两个独立单次试验结果的再现试验条件。的两个独立单次试验结果的再现试验条件。 也可理解为在改变了的测量条件下，同一被也可理解为在改变了的测量条件下，同一被测量结果之间的一致性。测量结果之间的一致性。 举例：见报告案例举例：见报告案例 1 1、GB/T21729-2008GB/T21729-2008 茶叶中硒含量的检测方法茶叶中硒含量的检测方法 验证内容：验证内容：1 1）回收率）回收率 2 2）校准曲线）校准曲线 3 3）精密度）精密度 4 4）测定低限）测定低限 5 5）准确度）准确度 2 2、GB/T22388-2008(GB/T22388-2008(第三法）第三法） 原料乳与乳制品中三聚氰胺的检测方法原料乳与乳制品中三聚氰胺的检测方法 验证内容：验证内容： 1 1）回收率）回收率 2 2）校准曲线）校准曲线 3 3）精密度）精密度 4 4）测定低限）测定低限 5 5）准确度）准确度 6 6）特异性）特异性 7 7）提取效率）提取效率 首次采用的标准方法在应用于样品检测前，应对检验方法的技术要素（参见附录F）进行验证试验。案例：案例： SC/T3025-2006 SC/T3025-2006 水产品中甲醛的测定水产品中甲醛的测定 适用范围：适用于水产品中甲醛含量的定量的测定。适用范围：适用于水产品中甲醛含量的定量的测定。 1 1）立项申请：目的、人员、仪器设备及试剂、时）立项申请：目的、人员、仪器设备及试剂、时间安排及进度；间安排及进度； 2 2）计划任务书：人员、时间安排及进度、）计划任务书：人员、时间安排及进度、 策划验证项目、判定值、评价、确认的方法；策划验证项目、判定值、评价、确认的方法； 3 3）验证工作的实施；）验证工作的实施； 4 4）评价和确认。）评价和确认。 1 1、回收率、回收率 “对于食品中的禁用物质，回收率应在方法测定低限、两对于食品中的禁用物质，回收率应在方法测定低限、两倍方法测定低限和十倍方法测定低限进行三水平试验；对倍方法测定低限和十倍方法测定低限进行三水平试验；对于已制定最高残留限量（于已制定最高残留限量（MRLMRL）的，回收率应在方法测）的，回收率应在方法测定低限、定低限、MRLMRL、选一合适点进行三水平试验；对于未制、选一合适点进行三水平试验；对于未制定定MRLMRL的，回收率应在方法测定低限、常见限量指标、的，回收率应在方法测定低限、常见限量指标、选一适点进行三水平试验。选一适点进行三水平试验。” ” 甲醛为食品中的禁用物质，标准甲醛为食品中的禁用物质，标准(NY5172-2002)(NY5172-2002)已规定了已规定了最高残留限量（最高残留限量（MRLMRL）=10.0mg/kg, 0.98 R 0.98 故本项目能满足标准的要求。故本项目能满足标准的要求。3 3、精密度、精密度 同回收率部分进行三水平试验，每个水平重复同回收率部分进行三水平试验，每个水平重复6 6次，对变次，对变异系数进行考查。异系数进行考查。 L L1 1=0.450=0.450、0.4560.456、0.4440.444、0.4740.474、0.4680.468、0.456mg/kg 0.456mg/kg CV CVL1L1=2.44% 11% (1mg/kg);=2.44% 11% (1mg/kg); L L2 2=4.56 =4.56 、4.55 4.55 、4.60 4.60 、4.49 4.49 、4.54 4.54 、4.60mg/kg 4.60mg/kg CV CVL2L2=0.91% 7.5% (10mg/kg)=0.91% 7.5% (10mg/kg) L L3 3=9.45 =9.45 、9.33 9.33 、9.26 9.26 、9.24 9.24 、9.43 9.43 、9.42mg/kg 9.42mg/kg CVL CVL3 3=0.84% 7.5% (10mg/kg)=0.84% 7.5% (10mg/kg) 按照标准按照标准GB27404-2008GB27404-2008附录附录F.3F.3精密度的要求，故本项目精密度的要求，故本项目能满足标准的要求。能满足标准的要求。4.4.测定低限测定低限 方法的测定低限按式（方法的测定低限按式（F.1F.1）计算：）计算： CLCL3Sb/b . (F.1)3Sb/b . (F.1) 式中：式中： CLCL方法的测定低限；方法的测定低限； SbSb空白值标准偏差（平行测定空白值标准偏差（平行测定2020次得到）；次得到）； b b方法校准曲线的斜率。方法校准曲线的斜率。 对于已制定对于已制定MRLMRL的物质，方法测定低限加上样品在的物质，方法测定低限加上样品在MRLMRL处处的标准偏差的三倍，不应超过的标准偏差的三倍，不应超过MRLMRL值。对于禁用物质，方值。对于禁用物质，方法测定低限应尽可能低。法测定低限应尽可能低。 平均测定平均测定2020次空白，其吸光度为：次空白，其吸光度为：0.0010, 0.0012, 0.0012, 0.0008, 0.0009, 0.0011, 0.0010,0.0010, 0.0012, 0.0012, 0.0008, 0.0009, 0.0011, 0.0010,0.0012, 0.0008, 0.0012, 0.0014, 0.0008, 0.0011, 0.0013,0.0012, 0.0008, 0.0012, 0.0014, 0.0008, 0.0011, 0.0013,0.0012, 0.0010, 0.0009, 0.0007, 0.0010, 0.0009,0.0012, 0.0010, 0.0009, 0.0007, 0.0010, 0.0009,标准偏差（标准偏差（n=20) Sb=0.000190, n=20) Sb=0.000190, 标准曲线斜率标准曲线斜率=0.0171=0.0171 CL=3Sb/b=3x0.000190/0.0171=0.0333mg/kg CL=3Sb/b=3x0.000190/0.0171=0.0333mg/kg当取样量为当取样量为10g10g，稀释倍数为稀释倍数为1010，标样与样品比色体积都为，标样与样品比色体积都为10mL10mL时，时，CL=0.0333x10=0.333mg/kg,CL=0.0333x10=0.333mg/kg,低于低于SC/T3025-2006(4.1)SC/T3025-2006(4.1)检出限检出限0.50mg/kg0.50mg/kg的要求，故能满足的要求，故能满足最低检出限的要求。最低检出限的要求。 5、准确度 取阴性样品添加甲醛标准溶液，添加量为取阴性样品添加甲醛标准溶液，添加量为10.008mg/kg10.008mg/kg，取平均样测定，取平均样测定，mm1 1=10.00g=10.00g、 mm2 2=10.00g.=10.00g. 甲醛标准溶液浓度为甲醛标准溶液浓度为5.004mg/L,5.004mg/L, A1=0.0151 A1=0.0151、 A2=0.0152A2=0.0152 得得 X1=9.88mg/kgX1=9.88mg/kg、 X2=9.94mg/kgX2=9.94mg/kg X X平均值平均值=9.91mg/kg=9.91mg/kg测定值与真实值之间的差值对真实值的百分数 9.91-10.008 / 10.008 X 100% =0.98% 15% 6 6、提取效率、提取效率 提取效率可用以下方法进行试验：提取效率可用以下方法进行试验： a)a)用阳性的标准物质或水平测试的阳性样品进行试用阳性的标准物质或水平测试的阳性样品进行试验；验； b)b)阳性样品用同一溶剂反复提取，观察被分析物的阳性样品用同一溶剂反复提取，观察被分析物的浓度变化；浓度变化； c)c)用不同提取技术或不同提取溶剂进行比较。用不同提取技术或不同提取溶剂进行比较。验证验证：取甲醛标准溶液按照标准方法处理，收集蒸馏：取甲醛标准溶液按照标准方法处理，收集蒸馏液，取液，取10.0mL10.0mL进行比色反应，上机读吸光度；进行比色反应，上机读吸光度； 另取甲醛标准溶液另取甲醛标准溶液2.00mL2.00mL，稀释至，稀释至10.0mL10.0mL进行进行比色反应，上机读吸光度，比色反应，上机读吸光度，得：未经蒸馏提取甲醛标准溶液的吸光度得：未经蒸馏提取甲醛标准溶液的吸光度: : A 0.1688 X 9.93mg/kg A 0.1688 X 9.93mg/kg 经蒸馏提取甲醛标准溶液的吸光度经蒸馏提取甲醛标准溶液的吸光度: : A 0.0151 X 9.88mg/kg A 0.0151 X 9.88mg/kg 经蒸馏提取后的残液，再次蒸馏提取甲醛测得经蒸馏提取后的残液，再次蒸馏提取甲醛测得吸光度：吸光度： A 0.0003 X 1.2mg/kgA 0.0003 X 1.2mg/kg 在蒸馏提取处理过程中第一次收集了约在蒸馏提取处理过程中第一次收集了约99.5%,99.5%,约约0.5%0.5%的甲醛在第二次蒸馏提取处理中收集到。的甲醛在第二次蒸馏提取处理中收集到。 该方法提取效率本实验能满足要求。该方法提取效率本实验能满足要求。 7 7、特异性（略）、特异性（略） “ “对于检测筛选方法和确证方法特异性必应予以规对于检测筛选方法和确证方法特异性必应予以规定，尤其对于确证方法必应尽可能清楚地提供待定，尤其对于确证方法必应尽可能清楚地提供待测物的化学结构信息，仅基于色谱分析而没有使测物的化学结构信息，仅基于色谱分析而没有使用分子光谱测定的方法，不能用于确证方法。用分子光谱测定的方法，不能用于确证方法。” ” 定性定性- -确认被测物质确认被测物质 8 8、耐用性、耐用性“ “方法应具有对可变试验因素的抗干扰能力，当方法应具有对可变试验因素的抗干扰能力，当测定条件发生细小变动时，方法应具有一定的保测定条件发生细小变动时，方法应具有一定的保持测定结果不受影响的承受程度。持测定结果不受影响的承受程度。” ”验证验证：经过大量样品分析测试后，该方法在本实验：经过大量样品分析测试后，该方法在本实验室具有一定的保持测定结果不受影响的承受程度。室具有一定的保持测定结果不受影响的承受程度。 谢 谢 ！