肿瘤标志物的实验诊断及其进展 肿瘤现况：根据WHO资料，全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因，占总死亡人数的22%，并逐年增加。 10种常见肿瘤：胃癌、肝癌、食管癌、结直肠肛门癌、白血病、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。 肿瘤标志物(tumormarkers，TM) 1978197819781978年年HerbermanHerbermanHerbermanHerberman在美国国立癌症研究所召开的人类在美国国立癌症研究所召开的人类肿瘤免疫诊断会上提出的。肿瘤免疫诊断会上提出的。由肿瘤组织和细胞产生的与肿瘤的形成、发生相关由肿瘤组织和细胞产生的与肿瘤的形成、发生相关的物质的物质, ,这些物质存在于肿瘤细胞的胞核、胞质、胞这些物质存在于肿瘤细胞的胞核、胞质、胞膜上或体液中；不存在于正常成人组织而见于胚胎膜上或体液中；不存在于正常成人组织而见于胚胎组织组织, ,或在肿瘤组织中含量超过正常含量。或在肿瘤组织中含量超过正常含量。存在于肿瘤患者的组织、体液和排泄物中，能够用存在于肿瘤患者的组织、体液和排泄物中，能够用免疫学、生物学及化学的方法检测。免疫学、生物学及化学的方法检测。理想的TM ：特异性高特异性高，对肿瘤与非肿瘤鉴别的准确性可达对肿瘤与非肿瘤鉴别的准确性可达100%100%。敏感性高敏感性高，能在极早期发现肿瘤的存在能在极早期发现肿瘤的存在，不漏诊不漏诊。在体液中的浓度应与瘤体大小、临床分期密切相关在体液中的浓度应与瘤体大小、临床分期密切相关，并可据此判断预后并可据此判断预后。半衰期短半衰期短，可根据其水平的升降监测治疗效果及肿可根据其水平的升降监测治疗效果及肿瘤是否复发或转移瘤是否复发或转移。检测方法灵敏可靠检测方法灵敏可靠，操作简便操作简便，价格低廉。价格低廉。 肿瘤标志物的测定 ：肿瘤细胞特异或相关抗原的测定肿瘤相关酶含量活性的测定肿瘤相关激素水平及其受体数量的测定细胞刺激因子的测定癌胚基因产物、癌基因及其癌基因蛋白、抗癌基因等测定肿瘤标志物的用途: 肿瘤的筛选肿瘤的早期诊断肿瘤治疗后随访、疗效监测肿瘤复发的监测、预后判断利用肿瘤细胞表面标志选择性进行单克隆抗体治疗一 肿瘤标志物的分类 TM的分布广，分类和命名尚未统一， 一般可按蛋白质、酶、糖脂和糖蛋白类、多胺、激素类和基因等进行分类。 1 肿瘤相关性抗原及蛋白类： 甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原（CA50、CA199、CA125、CA242、CA153、CA724）、血清铁蛋白(SF)、组织多肽抗原(TPA)、血清2微球蛋白(2-MG)、前列腺特异抗原(PSA)、游离前列腺特异抗原(F-PSA)、尿本斯-琼斯蛋白(B-JB-J)、P53P53蛋白、Bcl-2蛋白、CYFRA21-1、和CD24蛋白等。 2酶类： 神经特异烯醇化酶(NSE)、肌酸激酶同工酶(CK-BB)、乳酸脱氢酶(LDH)、-谷氨酸转肽酶(-GT)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶（ALP）、谷胱甘肽-转移酶(GSTs)、1-抗胰蛋白酶(1-AT)、-岩藻糖苷酶(AFU)、半乳糖苷转移酶(GsI-T)、唾液酶基转移酶(ST) 等。 3 激素类： 绒毛膜促性腺激素（HCG） 降钙素（CT） 肾上腺皮质激素（ACTH） 4 细胞刺激因子： 转化生长因子(TGF)表皮生长因子(EGF)骨肉瘤生长因子(OGDF) 5 受体类： 激素受体：如雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)细胞膜受体：如上皮细胞生长因子受体(EGFR)和erB2受体等6 癌基因： -alb基因、Neu基因、myc基因族、Ras基因族、-sis和-gsp等。 7 抑癌基因： RB基因、P53基因、P16基因和DDC基因等。 8 其他： 超氧化物歧化酶(SOD)、DNA聚合酶(DNA-P)、血清唾液酸(SA)、胃泌素、尿伪尿核苷和血清促肾上腺皮质激素原氨基端肽(-POMC)等。 二 TM的标记免疫测量技术 放射性标记免疫技术：放射性标记免疫技术：用放射性核素用放射性核素125125标记抗原标记抗原或抗体，主要有放射免疫分析法和免疫放射分析法或抗体，主要有放射免疫分析法和免疫放射分析法两种。两种。非放射性标记免疫技术：用酶、化学发光物质、荧非放射性标记免疫技术：用酶、化学发光物质、荧光素、鲁米诺或镧系稀土元素等作为标记物。主要光素、鲁米诺或镧系稀土元素等作为标记物。主要有酶免疫分析、化学发光免疫分析、荧光免疫分析、有酶免疫分析、化学发光免疫分析、荧光免疫分析、时间分辨荧光免疫分析和金属离子免疫分析等。时间分辨荧光免疫分析和金属离子免疫分析等。 三 几种重要TM的特性及其临床应用 影响因素：影响因素： 肿瘤标志物具有特异性和非特异性的双重特点。肿瘤标志物具有特异性和非特异性的双重特点。 各种肿瘤特性的不同各种肿瘤特性的不同，如肿瘤的分期、大小、定位、如肿瘤的分期、大小、定位、组织来源及转移趋向等的不同。组织来源及转移趋向等的不同。 各种抗体的不同各种抗体的不同，如多克隆抗体、单克隆抗体、抗体如多克隆抗体、单克隆抗体、抗体决定簇和抗体亲和性等的不同。决定簇和抗体亲和性等的不同。 各种检测系统的不同各种检测系统的不同，如检测原理、标记物、实验条如检测原理、标记物、实验条件、检测技术、检测仪器和检测敏感度等的不同。件、检测技术、检测仪器和检测敏感度等的不同。 检验人员的专业水平和技术经验、以及实验室条件和检验人员的专业水平和技术经验、以及实验室条件和实验的可靠性等的差异。实验的可靠性等的差异。 1甲胎蛋白（AFP） 分子量约为分子量约为7 7万的糖蛋白，由万的糖蛋白，由590590590590个氨基酸组成，存个氨基酸组成，存在于胎儿肝脏和卵黄囊。在于胎儿肝脏和卵黄囊。 主要用于原发性肝癌的诊断和分类，以及非精原睾主要用于原发性肝癌的诊断和分类，以及非精原睾丸癌、畸胎瘤等的诊断，是唯一一种和癌症有明确丸癌、畸胎瘤等的诊断，是唯一一种和癌症有明确特点关系的特点关系的TMTM。在妊娠妇女和某些肝炎、肝硬化病在妊娠妇女和某些肝炎、肝硬化病人中轻度增高。人中轻度增高。 利用亲和电泳和免泳固定技术可将利用亲和电泳和免泳固定技术可将AFPAFPAFPAFP分为分为1 1、2 2、3 3型。其中型。其中3 3型是肝细胞癌早期特异性标志物型是肝细胞癌早期特异性标志物, ,在在检测小肝癌和区别肝癌与良性肝病有很大价值。检测小肝癌和区别肝癌与良性肝病有很大价值。 某些病理类型的肝癌某些病理类型的肝癌( (如假腺管型如假腺管型) )细胞可能不分泌细胞可能不分泌AFPAFPAFPAFP。 2 癌胚抗原（CEA）分子量约分子量约180180万的多糖蛋白复合物，位于胚胎和胎万的多糖蛋白复合物，位于胚胎和胎儿期的肠粘膜中。儿期的肠粘膜中。 分泌分泌CEACEACEACEA的肿瘤大多位于空腔脏器。首选为结、直肠的肿瘤大多位于空腔脏器。首选为结、直肠癌的标志物，特别是大肠癌，其次为胃、肝、肺、癌的标志物，特别是大肠癌，其次为胃、肝、肺、胰和乳腺癌的标志物。腺癌常高于上皮癌。未患癌胰和乳腺癌的标志物。腺癌常高于上皮癌。未患癌人群中吸烟者有轻度增高。人群中吸烟者有轻度增高。胰液和胆汁内胰液和胆汁内CEACEACEACEA 含量可用于诊断胰腺或胆道癌，含量可用于诊断胰腺或胆道癌，尿液中尿液中CEACEACEACEA含量可作为判断膀胱癌预后的参考。血清含量可作为判断膀胱癌预后的参考。血清CEACEACEACEA结合甲状腺钙素测定，有助于甲状腺髓样病的诊结合甲状腺钙素测定，有助于甲状腺髓样病的诊断和复发的估计。断和复发的估计。3 血清2微球蛋白（2 -MG） 分子量为11500的低分子量蛋白，为淋巴细胞、巨噬细胞分泌。临床用于诊断多发性骨髓瘤。在肾功能不良时也升高。 4 血清铁蛋白（SF） 分子量为43-45万的大分子蛋白，作为储存铁，存在于肝、脾和骨髓中。临床为诊断隐性贫血较灵敏的指标。癌细胞具有较强合成SF的能力，可协助对肿瘤的诊断和预后估计。 5 前列腺酸性磷酸酶（PAP）和前列腺特异抗原（PSA） PAPPAP为分子量约十万的糖蛋白，酸性磷酸酶同功酶为分子量约十万的糖蛋白，酸性磷酸酶同功酶之一之一, ,是细胞的溶解体和分泌物的正常成分。具有是细胞的溶解体和分泌物的正常成分。具有组织特异性，主要用于诊断前列腺癌。组织特异性，主要用于诊断前列腺癌。PSAPSA是前列腺上皮细胞分泌的一种激肽释放酶样的是前列腺上皮细胞分泌的一种激肽释放酶样的蛋白酶，分子量为蛋白酶，分子量为3300033000的单链糖蛋白。的单链糖蛋白。前列腺癌时前列腺癌时PSAPSA检出率为检出率为70%70%90%90%，在良性前列在良性前列腺组织增生和女性乳腺癌时也可升高。腺组织增生和女性乳腺癌时也可升高。 F-PSAF-PSA占占T-PSAT-PSA10%10%20%20%，前列腺癌时结合型前列腺癌时结合型PSAPSA显著增显著增加，故加，故F-PSA/T-PSAF-PSA/T-PSA比值下降。比值下降。 6 人绒毛膜促性腺激素（HCG）由胎盘滋养层细胞所分泌的一类分子量为由胎盘滋养层细胞所分泌的一类分子量为4.54.5万的万的糖蛋白类激素，含有糖蛋白类激素，含有145145个氨基酸，由两个独立个氨基酸，由两个独立的氨基酸肽链的氨基酸肽链 及及 亚单位组成。肿瘤细胞以分泌亚单位组成。肿瘤细胞以分泌 亚单位为特征。亚单位为特征。是绒毛膜上皮癌和恶性葡萄胎的肿瘤标志物。在是绒毛膜上皮癌和恶性葡萄胎的肿瘤标志物。在性腺器官如卵巢、睾丸等发生胚胎性癌时也可检性腺器官如卵巢、睾丸等发生胚胎性癌时也可检出，可作为这些疾病的疗效监测和预后判断。少出，可作为这些疾病的疗效监测和预后判断。少数肺癌、子宫内膜癌、子宫颈癌和白血病等恶性数肺癌、子宫内膜癌、子宫颈癌和白血病等恶性肿瘤亦能发现肿瘤亦能发现 -HCG-HCG升高，但阳性率不高。升高，但阳性率不高。7 神经特异性烯醇化酶（NSE） 是烯醇化酶的一种同工酶，分子量约为是烯醇化酶的一种同工酶，分子量约为8700087000， 是神经元、神经内分泌细胞中参与糖酵解的酶。是神经元、神经内分泌细胞中参与糖酵解的酶。肿瘤组织中糖酵解作用加强，细胞增殖周期加快，肿瘤组织中糖酵解作用加强，细胞增殖周期加快，细胞内的细胞内的NSENSENSENSE释放进入血液，导致在血清中含量增释放进入血液，导致在血清中含量增加。加。是小细胞肺癌首选的是小细胞肺癌首选的TMTMTMTM( (敏感性敏感性70%70%80%)80%)。在神。在神经母细胞瘤时升高。经母细胞瘤时升高。 脑脊液中脑脊液中NSENSENSENSE可作为脑损伤、脑梗死的诊断指标。可作为脑损伤、脑梗死的诊断指标。 8 细胞角蛋白相关 细胞角蛋白(CKCK)参与构成上皮细胞骨架。依其氨基酸序列不同分为CKCK1CKCK20共20种。Cyfra21-1为角蛋白19的片断，适用于非小细胞肺癌(总的敏感性52.9%)的诊断，尤其是鳞癌。 9鳞状上皮癌相关抗原（SCCA） 为组织抗原，可由妇女生殖道上皮以及不同器官的磷状上皮癌分泌。为宫颈鳞癌的首选TM，也用于肺、食管、口腔、颌、面鳞癌，敏感性比Cyfra21-1低。10胃蛋白酶原、（PGI、II) PGPG见于胃底粘膜的主细胞、颈粘液细胞及主颈粘见于胃底粘膜的主细胞、颈粘液细胞及主颈粘液移行细胞；液移行细胞；PGPG见于胃底腺主细胞、幽门腺、十见于胃底腺主细胞、幽门腺、十二指肠腺。二指肠腺。胃几乎是胃几乎是PGPG的唯一来源，的唯一来源，PGPG变化能够反映出胃粘变化能够反映出胃粘膜功能变化。胃癌患者血清膜功能变化。胃癌患者血清PGPG、GG/ /比值明显比值明显下降。下降。 日本学者以血清日本学者以血清PG70ng/mlPG70ng/ml、PGPG/ / PGPG比值比值390%。现有ELISA试剂盒（尿液标本），优点同上。uPM3检测PCA3。PCA3是一个特异在前列腺癌表达的蛋白质，而且表达量大。通过检测尿液中PCA3是诊断前列腺癌的又一新指标。uPM3试验的特异性和敏感性都超过tPSA仅次于前列腺活检。