细菌学各论细菌学各论 了解各种细菌的形态、培养特性、致病因子了解各种细菌的形态、培养特性、致病因子及微生物学诊断。及微生物学诊断。李丹毒，白结核，芽孢球菌除淋膜，李丹毒，白结核，芽孢球菌除淋膜，若问芽孢菌有何，炭肿气疽破三梭，若问芽孢菌有何，炭肿气疽破三梭，这些细菌均阳性，其他细菌阴性多。这些细菌均阳性，其他细菌阴性多。第一章第一章 革兰氏阳性球菌革兰氏阳性球菌球球 菌菌阳性：阳性：葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌阴性：阴性：淋球菌、脑膜炎球菌淋球菌、脑膜炎球菌第一节第一节 葡萄球菌属葡萄球菌属 Staphylococcus n 广泛存在于自然界，多数是不致广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。病的腐物寄生菌。n 致病性葡萄球菌可引起化脓性炎致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。症、败血症、食物中毒等。 分分 类类 （1）金黄色葡萄球菌）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病：多数致病 （2）表皮葡萄球菌）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病：偶可致病 （3）腐生葡萄球菌）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病：不致病金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌S. aureus 一、形态一、形态 球状，排列成葡萄串状，无芽孢和鞭毛，个别形成荚膜。球状，排列成葡萄串状，无芽孢和鞭毛，个别形成荚膜。一般特征：一般特征： 圆形，排列成葡萄串状，在脓汁或液体培养基圆形，排列成葡萄串状，在脓汁或液体培养基中成双球或短链排列，用青霉素可诱导成中成双球或短链排列，用青霉素可诱导成L L型，无型，无芽孢，无鞭毛，某些菌形成荚膜或粘液层，芽孢，无鞭毛，某些菌形成荚膜或粘液层，G+G+需需O O2 2兼性厌氧，接触酶兼性厌氧，接触酶+ +，氧化酶，不运动，营养，氧化酶，不运动，营养要求不高，不在麦康凯上生长，致病株产生金黄要求不高，不在麦康凯上生长，致病株产生金黄色色素。色色素。二、培养及生化特性二、培养及生化特性1.普通培养基上生长良好：普通培养基上生长良好：湿润，隆起的圆形湿润，隆起的圆形菌落，直径菌落，直径1-2mm1-2mm，有时达，有时达4-5mm4-5mm。菌落颜。菌落颜色依菌株而异，初为灰白色，继而为金黄色依菌株而异，初为灰白色，继而为金黄色，白色柠檬色。色，白色柠檬色。 2. 血平板上生长更佳，血平板上生长更佳，菌落较大，明显菌落较大，明显溶血，溶血菌株多为致病菌。溶血，溶血菌株多为致病菌。 3 3、普通肉汤：均匀沉浊，管底有絮状沉、普通肉汤：均匀沉浊，管底有絮状沉淀，培养淀，培养2 23 3天后，产生菌环，管底形成天后，产生菌环，管底形成多量粘稠沉淀。多量粘稠沉淀。 4. 高度耐盐高度耐盐5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，分解葡、乳、麦、蔗糖， 产酸不产气，产酸不产气， 致病菌株能分解甘露醇致病菌株能分解甘露醇。高盐培养基高盐培养基 糖发酵试验糖发酵试验三、抗原性三、抗原性1. 多糖抗原：磷壁酸中的核糖醇残基多糖抗原：磷壁酸中的核糖醇残基是是一一种种半半抗抗原原，具具有有型型特特异异性性。据据多多糖糖抗抗原原将将葡葡萄萄球菌分球菌分3 3个型：个型： A A型型多多糖糖抗抗原原：来来自自致致病病菌菌。（金金葡葡萄萄球球菌菌） 磷磷壁酸中的核糖醇残基壁酸中的核糖醇残基 B B型型多多糖糖抗抗原原：来来自自非非致致病病菌菌。（表表皮皮葡葡萄萄球球菌菌） 甘油残基甘油残基 C C型多糖抗原：致病菌非致病菌同有。型多糖抗原：致病菌非致病菌同有。 2. 蛋白质抗原：细胞壁的一种表面蛋白蛋白质抗原：细胞壁的一种表面蛋白人源菌株含人源菌株含SPA（Staphylococcus protein A), 能与许多动物血清中的能与许多动物血清中的IgGIgG分子的分子的FcFc段非段非特异性结合，结合后的特异性结合，结合后的IgGIgG仍能与相应抗仍能与相应抗原进行特异反应。这一现象已广泛用于原进行特异反应。这一现象已广泛用于免疫学及诊断技术。免疫学及诊断技术。 。 四、抵抗力四、抵抗力抵抗力较强，能在干燥抵抗力较强，能在干燥脓汁或血液中存活数月，脓汁或血液中存活数月，80 30min 30min可杀死，煮可杀死，煮沸迅速死亡，对多种抗沸迅速死亡，对多种抗生素产生耐药性。生素产生耐药性。 五、致病性和毒力因子五、致病性和毒力因子n侵袭性疾病：主要引起化脓性炎症。通过各种途径主要引起化脓性炎症。通过各种途径 侵入机体，导致皮肤或器官的多种感染，甚至败血症。侵入机体，导致皮肤或器官的多种感染，甚至败血症。 n毒素性疾病：由葡萄球菌产生的外毒素引起。由葡萄球菌产生的外毒素引起。 毒力因子主要包括酶和毒素，可引起两类疾病：毒力因子主要包括酶和毒素，可引起两类疾病：1.1.溶血素溶血素4 4种种毒素毒素( (AlphatoxinAlphatoxin) ) 损伤细胞膜的毒素，对多种哺乳动物红细胞有溶损伤细胞膜的毒素，对多种哺乳动物红细胞有溶 血作用，对白细胞、血小板、肝细胞、成纤维细胞、血作用，对白细胞、血小板、肝细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞等均有损伤作用。血管平滑肌细胞等均有损伤作用。毒素：毒素：引起绵羊、牛红引起绵羊、牛红C溶解，兔、鸡、马溶解，兔、鸡、马红红C不溶解，与乳腺炎有关，具有热冷溶血不溶解，与乳腺炎有关，具有热冷溶血现象（现象（37溶血，移至溶血，移至4时溶血）。动物时溶血）。动物分离株多产生分离株多产生毒素。毒素。毒素毒素：引起多种动物红引起多种动物红C溶解。溶解。型：型：培养时培养时CO2浓度增加时出现溶血现象，浓度增加时出现溶血现象，引起各种动物红引起各种动物红C溶解。溶解。2.2.肠毒素肠毒素( (enterotoxinenterotoxin) ) 按抗原性不同，分为按抗原性不同，分为A、B、C1、C2、C3、D和和E 7个血清型，均可引起个血清型，均可引起急性胃肠炎即呕吐为主要症状的食物急性胃肠炎即呕吐为主要症状的食物中毒。中毒。3. 3. 凝固酶凝固酶 能使含有抗凝剂的人或兔血浆发生凝集的酶类物质。能使含有抗凝剂的人或兔血浆发生凝集的酶类物质。 （1）游离凝固酶）游离凝固酶:使液态纤维蛋白原变成固态纤维蛋白。使液态纤维蛋白原变成固态纤维蛋白。 （2）结合凝固酶）结合凝固酶:使纤维蛋白原与菌体交联而致细菌凝聚。使纤维蛋白原与菌体交联而致细菌凝聚。 作用：有助于致病菌株抵抗吞噬细胞和杀菌物质。作用：有助于致病菌株抵抗吞噬细胞和杀菌物质。凝固酶试验凝固酶试验+-4.4.耐热核酸酶耐热核酸酶 、纤维蛋白溶酶、透明质酸酶等、纤维蛋白溶酶、透明质酸酶等 利于细菌扩散。利于细菌扩散。耐热核酸酶试验耐热核酸酶试验-+六、微生物学诊断六、微生物学诊断n标本的采集标本的采集 化脓性病灶采取脓汁、渗出液；败血症采化脓性病灶采取脓汁、渗出液；败血症采取血液；脑膜炎采取脑脊液；食物中毒则分别采集剩余的取血液；脑膜炎采取脑脊液；食物中毒则分别采集剩余的食物、呕吐物和粪便。食物、呕吐物和粪便。n直接涂片检查直接涂片检查n分离培养分离培养 普通平板培养、血液琼脂平板、高盐培养基。普通平板培养、血液琼脂平板、高盐培养基。生化实验生化实验葡葡萄萄糖糖+，麦麦+，乳乳+，蔗蔗+，甘甘露露醇醇+，靛靛基基质质，接触酶接触酶+，硝酸盐还原，硝酸盐还原+动物致病性试验动物致病性试验家家兔兔皮皮下下接接种种1ml1ml，24h24h肉肉汤汤培培养养物物，可可引引起起局局部部皮肤溃疡坏死；皮肤溃疡坏死；静静脉脉接接种种0.1-0.5ml0.1-0.5ml，于于接接种种后后24-48h24-48h死死亡亡，剖剖检可见脏器有大小不等脓肿。检可见脏器有大小不等脓肿。致病性葡萄球菌有以下致病性葡萄球菌有以下4 4大特点：大特点： （1 1）产生金黄色色素；）产生金黄色色素； （2 2）明显）明显溶血；溶血； （3 3）甘露醇发酵；）甘露醇发酵； （4 4）凝固酶）凝固酶+ +肠毒素的检查：肠毒素的检查： 发生食物中毒时发生食物中毒时将呕吐物离心取将呕吐物离心取上清上清10030min10030min破坏其它毒素破坏其它毒素注入注入幼猫静脉或腹腔幼猫静脉或腹腔15min-2h15min-2h内出现急性内出现急性肠炎症状，表明有肠毒素存在。肠炎症状，表明有肠毒素存在。第二节第二节 链球菌属链球菌属 Streptococcus 链球菌属细菌是化脓性链球菌属细菌是化脓性球菌中的另一大类常见细菌，球菌中的另一大类常见细菌，广泛分布于自然界，多数不广泛分布于自然界，多数不致病，有些可导致人或动物致病，有些可导致人或动物各种化脓性炎症、肺炎、乳各种化脓性炎症、肺炎、乳腺炎、败血症。腺炎、败血症。一、分类一、分类（一）根据抗原结构分（一）根据抗原结构分 1.属特异性抗原（属特异性抗原（P抗原）：抗原）：核蛋白抗原核蛋白抗原2.群特异性抗原（群特异性抗原（C抗原）：抗原）：多糖抗原多糖抗原3.型特异性抗原：型特异性抗原：蛋白质抗原，又称表面抗原。蛋白质抗原，又称表面抗原。 多与菌体毒力与免疫力有关。多与菌体毒力与免疫力有关。兰氏（兰氏（Lancefield)用温热的稀盐酸浸出用温热的稀盐酸浸出C抗原，与特异性血抗原，与特异性血清作沉淀反应，将链球菌分为清作沉淀反应，将链球菌分为20个血清群（个血清群（A-V，缺，缺I和和J）。）。同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同，又分不同型。同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同，又分不同型。兰氏分群法兰氏分群法 型溶血性链球菌型溶血性链球菌 菌落周围有不透明溶血环。多为菌落周围有不透明溶血环。多为条件性致病菌。条件性致病菌。 型溶血性链球菌型溶血性链球菌 菌落周菌落周围形成完全透明的无色的溶血环。围形成完全透明的无色的溶血环。致病力强。致病力强。（二）根据溶血现象分类（二）根据溶血现象分类 型链球菌型链球菌不产生溶血素，菌落周围无溶血环，也称为不溶不产生溶血素，菌落周围无溶血环，也称为不溶血性链球菌。无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔引起感染。血性链球菌。无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔引起感染。 二、形态二、形态圆形或卵圆形，排列成链状或成双排列，肉汤圆形或卵圆形，排列成链状或成双排列，肉汤中生长链较长，中生长链较长，G+G+无芽胞，无荚膜（肺炎链球无芽胞，无荚膜（肺炎链球菌有荚膜），除个别菌有荚膜），除个别D D群外均无鞭毛，接触酶群外均无鞭毛，接触酶（葡萄球菌（葡萄球菌+ +）三、三、培养特性培养特性 n大多数兼性厌氧，少数专性厌氧大多数兼性厌氧，少数专性厌氧n营养要求复杂，需补充血液、血营养要求复杂，需补充血液、血清、葡萄糖等。清、葡萄糖等。n血平板血平板上形成灰白色、上形成灰白色、光滑，湿光滑，湿润，露珠状，针尖大小的小菌落，润，露珠状，针尖大小的小菌落，致病菌株多有溶血能力。致病菌株多有溶血能力。n血清肉汤血清肉汤中易形成长链，管底呈絮状沉淀。中易形成长链，管底呈絮状沉淀。四、生化特征四、生化特征 葡萄糖葡萄糖+ +、蔗糖、蔗糖+ +、大多数发酵乳糖、大多数发酵乳糖 、接触酶、接触酶+ + 五、毒素和酶五、毒素和酶致病性链球菌产生多种毒素和酶，引起多种动物致病性链球菌产生多种毒素和酶，引起多种动物发病。发病。1 1溶血素：有溶解红溶血素：有溶解红C C，杀死白，杀死白C C和神经和神经C C，毒害，毒害心肌作用，分为对氧敏感和对氧稳定即心肌作用，分为对氧敏感和对氧稳定即O O和和S S两种。两种。 溶血素溶血素O O （SLOSLO）：为蛋白质，对氧敏感，）：为蛋白质，对氧敏感，耐热，遇耐热，遇O O2 2发生氧化失去溶血力，遇还原剂可发生氧化失去溶血力，遇还原剂可恢复溶血作用恢复溶血作用, ,抗原性强。抗原性强。 溶血素溶血素S S （SLSSLS）：含糖的小分子肽，对氧）：含糖的小分子肽，对氧稳定，对热和酸敏感，无抗原性。稳定，对热和酸敏感，无抗原性。2.2.致热外毒素（旧称红疹毒素）：致热外毒素（旧称红疹毒素）：A A群产生的一种群产生的一种 外毒素，皮内注射引起局部或全身红疹，有抗外毒素，皮内注射引起局部或全身红疹，有抗 原性。原性。3 3DNADNA酶酶4 4溶纤维蛋白酶溶纤维蛋白酶5 5细胞壁上的脂磷壁酸：使细菌吸附于粘膜上皮细胞壁上的脂磷壁酸：使细菌吸附于粘膜上皮 上，其荚膜成分、上，其荚膜成分、M M蛋白具有抗吞噬作用。蛋白具有抗吞噬作用。致病物质致病物质 ： n脂磷壁酸（脂磷壁酸（LTALTA）：重要的粘附素：重要的粘附素n M M蛋白蛋白：抗吞噬作用：抗吞噬作用 n 一旦病菌大量繁殖则产生一旦病菌大量繁殖则产生链球菌溶血素、致热外毒素链球菌溶血素、致热外毒素 等毒性物质，等毒性物质，透明质酸酶、链激酶、透明质酸酶、链激酶、DNADNA酶酶等侵袭性物质。等侵袭性物质。 六、致病性六、致病性所致疾病：可引起多种动物发病可引起多种动物发病n无乳链球菌无乳链球菌（S.agalactiae）n停乳链球菌停乳链球菌(S.dysgalactiae)n乳房链球菌乳房链球菌 (S.uberis)n马链球菌兽疫亚种马链球菌兽疫亚种(S.equi subsp. zooepidemicus)n马链球菌马亚种马链球菌马亚种(S. equi subsp. equi)n猪链球菌猪链球菌(S.suis)n化脓链球菌化脓链球菌(S.pyogenes)n肺炎链球菌肺炎链球菌(S.pneumoniae)乳腺炎乳腺炎多种动物炎症多种动物炎症及败血症及败血症马腺疫马腺疫人和猪炎症及败血症人和猪炎症及败血症幼畜炎症及败血症幼畜炎症及败血症牛乳腺炎牛乳腺炎猪链球菌病猪链球菌病猪链球菌（猪链球菌（Streptococcus suis）2型型S. equi subsp ATCC35246 S. suis type 2 HA9801 五、微生物学诊断五、微生物学诊断取材：取材：采集适当的标本采集适当的标本渗出液、脓汁、乳腺炎渗出液、脓汁、乳腺炎 乳液、脑脊髓液、尿液和感染组织。乳液、脑脊髓液、尿液和感染组织。 涂片镜检：涂片镜检： 可直接涂片，革兰氏染色镜检。可直接涂片，革兰氏染色镜检。分离培养分离培养: 接种血平板，观察菌落形态和溶血情况。接种血平板，观察菌落形态和溶血情况。生理生化试验生理生化试验动物致病性试验动物致病性试验：小白鼠腹腔注射小白鼠腹腔注射0.2-0.5ml 24h肉汤培肉汤培 养物，养物，24h 48h死亡。死亡。分群定型：分群定型：必须作血清学试验必须作血清学试验 几种重要的链球菌几种重要的链球菌 1 1无乳链球菌，停乳链球菌，乳房链球菌。无乳链球菌，停乳链球菌，乳房链球菌。都都是是引引起起牛牛，山山羊羊，绵绵羊羊乳乳房房炎炎的的病病感感体体，凡凡是是有有乳乳牛地方，有本菌存在。牛地方，有本菌存在。CAMPCAMP试试验验：Christie, Christie, Atkins, Atkins, Much-Much-petersonpeterson三三个个人人名名的的缩缩写写。在在血血平平板板上上先先接接种种一一条条金金色色葡葡萄萄球球菌菌的的划划线线，与与此此线线垂垂直直接接种种乳乳汁汁或或分分离离培培养养物物（但但不不接接触触），原原来来不不溶溶血血或或溶溶血血不不明明显显的的无无乳乳链链球球菌菌在在有有金金色色葡葡萄萄球球菌菌产产物物存存在在时时，产产生生明明显显型型溶溶血血。此此实实验验可可以以区区分无乳链球菌与其它链球菌。分无乳链球菌与其它链球菌。CAMPCAMP试试验验不不是是特特异异的的，C C、F F、G G群群中中有有些些链链球球菌菌也也可可产产生生CAMP CAMP 现现象象。猪猪放线杆菌也有放线杆菌也有CAMPCAMP现象。现象。（了了解解）原原因因：无无乳乳链链球球菌菌产产生生CAMPCAMP因因子子，这这种种因因子子可可接接合合于于被被葡葡萄萄球球菌菌神神经经磷磷脂脂酶酶C C改改变变了了的的红红细细胞胞膜上，引起红膜上，引起红C C大量溶解。大量溶解。2 2马链球菌兽疫亚种马链球菌兽疫亚种（旧称兽疫链球菌）（旧称兽疫链球菌） 引起马的创伤感染，败血症、子宫炎、流产；引起马的创伤感染，败血症、子宫炎、流产；牛乳房炎、子宫炎。牛乳房炎、子宫炎。猪：败血症，关节炎，流产；猪：败血症，关节炎，流产；羊：败血症，心肌炎，腹膜为，肺炎。羊：败血症，心肌炎，腹膜为，肺炎。鸡：败血症。鸡：败血症。 3 3马链球菌马亚种马链球菌马亚种（旧称马腺疫链球菌）（旧称马腺疫链球菌） 引引起起马马的的腺腺疫疫，存存在在于于马马下下颌颌淋淋巴巴结结的的脓脓灶灶，鼻鼻液及脓汁中，主要侵害液及脓汁中，主要侵害0.5-50.5-5岁的马。岁的马。4 4肺炎链球菌：肺炎链球菌： 引起人的大叶性肺炎或脑膜炎，引起动物的败引起人的大叶性肺炎或脑膜炎，引起动物的败血症或肺炎。血症或肺炎。形态：排列为双球状，菌体呈卵圆形，矛头状或爪形态：排列为双球状，菌体呈卵圆形，矛头状或爪 子仁状，有明显荚膜。子仁状，有明显荚膜。5 5猪链球菌：猪链球菌： 引起猪的脑膜炎，关节炎，肺炎，心肌膜炎，引起猪的脑膜炎，关节炎，肺炎，心肌膜炎，流产和局部脓肿，由于败血症突然死亡。猪链球流产和局部脓肿，由于败血症突然死亡。猪链球菌菌2 2型可致人的脑膜炎，败血症，心，内内膜炎并型可致人的脑膜炎，败血症，心，内内膜炎并可致死，多发于从事屠宰业或与猪肉打交道的人。可致死，多发于从事屠宰业或与猪肉打交道的人。1.1.金黄色葡萄球菌可产生的毒素、酶及其致病作用。金黄色葡萄球菌可产生的毒素、酶及其致病作用。2.2.链球菌产生的毒素、酶及其致病作用。链球菌产生的毒素、酶及其致病作用。3.3.链球菌在血液琼脂培养基上的溶血表现。链球菌在血液琼脂培养基上的溶血表现。4.4. 如何从污染的病料组织中分离致病性葡萄球菌？如何从污染的病料组织中分离致病性葡萄球菌？复习思考题复习思考题