第第第第 九九九九 章章章章维生素类药物的分析维生素类药物的分析AnalysisofvitaminsAnalysisofvitamins药物分析第09章维生素类药物的分析第一节第一节 概述概述维生素：维生素： 是维持人体正常代谢机能所是维持人体正常代谢机能所必需的必需的 微量营养物资。微量营养物资。 人体不能合成维生素。人体不能合成维生素。药物分析第09章维生素类药物的分析 VitA、D2、D3、 E、K1等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitBVitB族族(B(B1 1、B B2 2、B B6 6、B B1212) )VitCVitC、叶酸、烟酸、烟酰胺、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitMVitPPVitPP药物分析第09章维生素类药物的分析-H-H维生素维生素A A醇醇-COCH-COCH33维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯-COC-COC1515H H3131维生素维生素A A棕榈酸酯棕榈酸酯R:R:第二节第二节 维生素维生素A A药物分析第09章维生素类药物的分析为一个具有共轭多烯侧链的为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯环己烯（一）（一）结构与性质结构与性质一、一、v 具有具有UVUV吸收吸收v 存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物药物分析第09章维生素类药物的分析维生素维生素A325.5100%新维生素新维生素Aa32875%新维生素新维生素Ab320.524%新维生素新维生素Ac310.515%异维生素异维生素Aa32321%异维生素异维生素Ab32424% 相对生物效价相对生物效价药物分析第09章维生素类药物的分析VitAVitA2 2VitAVitA3 3v 易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应药物分析第09章维生素类药物的分析鲸醇鲸醇药物分析第09章维生素类药物的分析v 或有金属离子存在时氧化或有金属离子存在时氧化共轭多烯侧链共轭多烯侧链 易被氧化易被氧化（二）（二）药物分析第09章维生素类药物的分析环氧化物环氧化物VitAVitA醛醛VitAVitA酸酸药物分析第09章维生素类药物的分析（三）（三）与三氯化锑发生呈色反应与三氯化锑发生呈色反应CHClCHCl3 3溶解性溶解性（四）（四）不溶于水不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等易溶于有机溶剂和植物油等药物分析第09章维生素类药物的分析三氯化锑反应三氯化锑反应（一）（一）条件条件 无水无醇无水无醇CHClCHCl3 3鉴别鉴别二、二、药物分析第09章维生素类药物的分析蓝色蓝色紫红紫红药物分析第09章维生素类药物的分析（BPBP（19981998） maxmax为为326nm326nm一个吸收峰一个吸收峰UVUV法法（二）（二） maxmax为为350350390nm390nm三个吸收峰三个吸收峰药物分析第09章维生素类药物的分析去水去水VitAVitA（VitAVitA3 3）VitAVitA药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析USPUSP显色剂显色剂磷钼酸磷钼酸规定斑点颜色和规定斑点颜色和RfRf值值BPBP 杂质对照品法杂质对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑TLCTLC法法（三）（三）药物分析第09章维生素类药物的分析立体异构体立体异构体氧化产物及光照产物氧化产物及光照产物合成中间体合成中间体去氢维生素去氢维生素A A（ VitAVitA2 2）去水维生素去水维生素A A（ VitAVitA3 3）UVUV法法（一）（一）含量测定含量测定三、三、药物分析第09章维生素类药物的分析三点校正法三点校正法1.1.条件：条件：（1 1）杂质的吸收在）杂质的吸收在310340nm310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；波长的增大吸收度减小；（2 2）物质对光的吸收具有加和性。）物质对光的吸收具有加和性。药物分析第09章维生素类药物的分析2.2.波长的选择：波长的选择：（1 1） 1 1VitAVitA的的 maxmax（328nm328nm）（2 2） 22 3 3 分别在分别在 1 1的两侧各选一点的两侧各选一点药物分析第09章维生素类药物的分析测定对象测定对象 VitAVitA醋酸酯醋酸酯第一法第一法 等波长差法等波长差法药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析第二法第二法 等吸收度法等吸收度法( (皂化法皂化法) )测定对象测定对象 VitAVitA醇醇药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析3.测定法测定法4.（1 1）基本步骤）基本步骤: :v第一步第一步 A A选择选择选择依据：选择依据：所选所选A A值中杂质的干扰已基本消除值中杂质的干扰已基本消除药物分析第09章维生素类药物的分析注意：注意： CC为混合样品的浓度为混合样品的浓度 第二步第二步 求求药物分析第09章维生素类药物的分析第三步第三步 求效价求效价换算因数由纯品计算而得：换算因数由纯品计算而得：药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析第四步：求标示量第四步：求标示量药物分析第09章维生素类药物的分析 方法：方法：（2 2） 第一法第一法维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯药物分析第09章维生素类药物的分析 判断判断 是否在是否在326326329nm329nm之间之间在在326326329nm329nm之间之间改用第二法改用第二法是是否否 求算求算 并与规定值比较并与规定值比较药物分析第09章维生素类药物的分析 规定值规定值 差值差值药物分析第09章维生素类药物的分析 判断差值是否超过规定值的判断差值是否超过规定值的有一个以上有一个以上超过超过无超过无超过 计算计算 A A328328（校正）（校正） 用用A A328328计算计算药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析0 03%3%15%15%3%3%第二法第二法第二法第二法药物分析第09章维生素类药物的分析 VitAD胶丸中胶丸中VitA的含量测定的含量测定 精密称取本品精密称取本品(规格规格10000VitAIU/丸丸)装量差异项下（平均装量装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）丸）的内容物的内容物 0.2399g至至250ml量瓶中，用量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一，置另一20ml量瓶中，用环己烷量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为测定最大吸收波长为328nm，并在下列，并在下列波长处测得吸收度为波长处测得吸收度为药物分析第09章维生素类药物的分析A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A A300300/A/A328328：0.5550.555A A316316/A/A328328：0.9070.907A A328328/A/A328328：1.0001.000A A340340/A/A328328：0.8110.811A A360360/A/A328328：0.2990.299求本品中维生素求本品中维生素A A的含量？的含量？药物分析第09章维生素类药物的分析A A300300/A/A328328：0.5640.564A A316316/A/A328328：0.8930.893A A328328/A/A328328：1.0001.000A A340340/A/A328328：0.8330.833A A360360/A/A328328：0.3440.3440.5550.5550.9070.9071.0001.0000.8110.8110.2990.299 +0.01+0.010.010.0100+0.02+0.02+0.04+0.04= = = = = =药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析适用于维生素适用于维生素A A醇醇（等吸收度法）（等吸收度法） 第一法无法消除杂质干扰时用此法第一法无法消除杂质干扰时用此法 皂化法、皂化法、6/7A6/7A法法 （3 3）第二法）第二法药物分析第09章维生素类药物的分析水溶性水溶性脂溶性脂溶性药物分析第09章维生素类药物的分析 判断判断 maxmax是否在是否在323323327nm327nm之间之间取未皂化样品取未皂化样品采用色谱法纯采用色谱法纯化后再测定化后再测定 计算计算是是否否药物分析第09章维生素类药物的分析 判断判断 A A300300/A/A325325是否大于是否大于0.730.73是是否否取未皂化样品取未皂化样品采用色谱法纯采用色谱法纯化后再测定化后再测定 计算计算A A325(325(校正校正) )药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析0 03%3%3%3%药物分析第09章维生素类药物的分析三氯化锑比色法三氯化锑比色法（二）（二）优点优点 简便简便 快速快速maxmax618nm618nm620nm620nm标准曲线法标准曲线法缺点缺点呈色不稳定呈色不稳定 （510s510s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差11专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性药物分析第09章维生素类药物的分析苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇第三节第三节 维生素维生素E E 药物分析第09章维生素类药物的分析名名 称称R R1 1R R2 2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CHCH3 3CHCH3 3H HH HCHCH3 3H HCHCH3 3H H1.01.00.50.50.20.20.10.1*药物分析第09章维生素类药物的分析生物效价生物效价 右旋体右旋体 ： 消旋体消旋体 =1.4：10（天然品）（天然品）（合成品）（合成品）dl dl 生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯药物分析第09章维生素类药物的分析结构与性质结构与性质一、一、苯环苯环 +二氢吡喃环二氢吡喃环 +饱和烃链饱和烃链1 1、易溶于有机溶剂，不溶于水、易溶于有机溶剂，不溶于水2 2、UVUV3 3、酯键、酯键 易水解易水解药物分析第09章维生素类药物的分析75157515（一）（一）硝酸反应硝酸反应橙红色橙红色鉴别鉴别二、二、药物分析第09章维生素类药物的分析（橙红色）（橙红色）生育红生育红生育酚生育酚HNOHNO3 3强氧化剂强氧化剂药物分析第09章维生素类药物的分析 取本品约取本品约30mg30mg，加无水，加无水乙醇乙醇10ml10ml溶解后，加硝酸溶解后，加硝酸2ml2ml，摇匀，在，摇匀，在7575加热加热1515分钟，分钟，溶液应显橙红色。溶液应显橙红色。药物分析第09章维生素类药物的分析三氯化铁联吡啶反应三氯化铁联吡啶反应OO（二）（二）药物分析第09章维生素类药物的分析生育酚生育酚对对- -生育醌生育醌OO弱氧化弱氧化剂剂药物分析第09章维生素类药物的分析红色红色药物分析第09章维生素类药物的分析 =41.0=41.045.545.5maxmax=284nm=284nmminmin=254nm=254nm0.01%0.01%无水乙醇中无水乙醇中UVUV法法（三）（三）药物分析第09章维生素类药物的分析维生素维生素EUVEUV图图药物分析第09章维生素类药物的分析薄层板薄层板 硅胶硅胶G G展开剂展开剂 环己烷环己烷 - -乙醚（乙醚（44：1 1）显色剂显色剂 硫酸（硫酸（10510555） VitERVitERf f =0.7=0.7TLCTLC法法（四）（四）药物分析第09章维生素类药物的分析游离生育酚游离生育酚 硫酸铈滴定液（硫酸铈滴定液（0.01mol/L0.01mol/L）二苯胺（亮黄二苯胺（亮黄灰紫）灰紫） 利用游离生育酚的还原性，利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈将硫酸铈还原成硫酸亚铈 检查检查 三、三、原理原理（一）（一）试剂试剂（二）（二）药物分析第09章维生素类药物的分析（MM生育酚生育酚=430.8=430.8）例例取本品取本品0.10g0.10g，加无水乙醇，加无水乙醇5ml5ml溶解后，加二苯胺试液溶解后，加二苯胺试液1 1滴，滴，用硫酸铈液（用硫酸铈液（0.01mol/L0.01mol/L）滴定，）滴定，消耗硫酸铈液（消耗硫酸铈液（0.01mol/L0.01mol/L）不）不得过得过1.0ml1.0ml。药物分析第09章维生素类药物的分析2.152.15限量限量（三）（三）药物分析第09章维生素类药物的分析药典规定药典规定消耗硫酸铈液（消耗硫酸铈液（0.01mol/L0.01mol/L）1.0ml1.0ml设：应消耗硫酸铈液设：应消耗硫酸铈液 VmlVml0.011.00.011.0实际浓度实际浓度VV若硫酸铈液浓度不是若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L0.01000mol/L，应重新计算硫酸铈的消耗量应重新计算硫酸铈的消耗量药物分析第09章维生素类药物的分析例例 Ce(SO4)2=0.01020mol/L药物分析第09章维生素类药物的分析四、四、 含量测定含量测定GCGC法法（一）（一）GCGC特点特点1 1、选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不挥发性低、不稳定、极性强稳定、极性强衍生化易受衍生化易受样品蒸气压限样品蒸气压限制制药物分析第09章维生素类药物的分析载气载气N N2 2固定液固定液硅酮（硅酮（OV-17OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)(FID)内标内标正三十二烷正三十二烷 n500n500R2R2VitEVitE测定的色谱条件测定的色谱条件2 2、内标法加校正因子内标法加校正因子药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析内标法内标法供试液（样品供试液（样品+ +内标）内标）内标物内标物对照液（对照对照液（对照+ +内标）内标）是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近药物分析第09章维生素类药物的分析校正因子：校正因子：药物分析第09章维生素类药物的分析实际工作中的计算方法实际工作中的计算方法药物分析第09章维生素类药物的分析例例 内标液内标液 取正三十二烷加正己烷溶解取正三十二烷加正己烷溶解 并稀释成并稀释成1.0mg/ml1.0mg/ml溶液溶液对照液对照液 精密称取精密称取VitEVitE对照品对照品0.2011g0.2011g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内 标液标液10ml10ml，密塞，振摇使溶解，取，密塞，振摇使溶解，取 13ul13ul注入注入GCGC仪，测定，计算仪，测定，计算供试液供试液 精密称取供试品精密称取供试品0.1998g0.1998g置棕置棕 色具塞锥形瓶中，精密加入内标液色具塞锥形瓶中，精密加入内标液 10ml10ml，密塞，振摇使溶解，取，密塞，振摇使溶解，取13ul13ul注入注入GCGC仪，测定，计算仪，测定，计算药物分析第09章维生素类药物的分析对照液对照液供试液供试液0.3730.3730.3680.368本品含本品含C C3131H H5252O O3 3应为应为96.0102.0%96.0102.0%药物分析第09章维生素类药物的分析BPGCBPGC内标内标 正三十二烷正三十二烷 R1.4R1.4USPGCUSPGC内标内标 十六酸十六醇酯十六酸十六醇酯 R1.0R1.0JPHPLCJPHPLC外标外标dl dl 生育酚生育酚R1.4R1.4药物分析第09章维生素类药物的分析利用生育酚的易氧化性利用生育酚的易氧化性还原型还原型氧化型氧化型二苯胺（亮黄二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）原理原理1 1、铈量法铈量法（二）（二）指示剂指示剂2 2、药物分析第09章维生素类药物的分析防止防止Ce(SOCe(SO4 4) )2 2的水解的水解减慢生育酚被减慢生育酚被O O2 2氧化速度氧化速度C C、酸性条件、酸性条件Ce(SOCe(SO4 4) )2 2易溶于水易溶于水生育酚易溶于醇生育酚易溶于醇B B、溶剂、溶剂分子量较大，反应慢分子量较大，反应慢 易被易被O O2 2氧化氧化A A、反应速度、反应速度H H2 2SOSO4 4讨论讨论3 3、药物分析第09章维生素类药物的分析含量计算含量计算4 4、MMVitEVitE=472=472药物分析第09章维生素类药物的分析样品样品dldl 生育酚生育酚固定相固定相十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶流动相流动相甲醇甲醇- -水（水（4949：1 1）检测波长检测波长292nm292nmRR2.62.6RSD0.8%RSD0.8%JP-RP-HPLCJP-RP-HPLC法（外标法）法（外标法）（三）（三）药物分析第09章维生素类药物的分析测定对象测定对象血清中血清中VitAVitA和和VitEVitE固定相固定相十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶流动相流动相甲醇甲醇- -水（水（9696：4 4）检测波长检测波长 8 8前前330nm330nm88后后292nm292nmRP-HPLCRP-HPLC法（外标法）法（外标法）（四）（四）药物分析第09章维生素类药物的分析氨基嘧啶环氨基嘧啶环CHCH2 2噻唑环噻唑环( (季铵碱季铵碱) )第四节第四节 维生素维生素B B1 1HClHClClCl- -药物分析第09章维生素类药物的分析（一）（一）溶解性溶解性1 1、易溶于水、易溶于水2 2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性（二）（二）UVUV共轭双键共轭双键maxmax=246=246nmnm结构与性质结构与性质一、一、药物分析第09章维生素类药物的分析嘧啶环嘧啶环 伯氨伯氨噻唑环噻唑环 季铵季铵1 1、可与酸成盐、可与酸成盐2 2、与生物碱、与生物碱3 3、含量测定、含量测定 非水碱量法非水碱量法（三）（三）硫色素反应硫色素反应（四）（四）碱性碱性药物分析第09章维生素类药物的分析ChPChP鉴别试验鉴别试验二、二、（一）（一）硫色素反应硫色素反应药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析硫色素硫色素2H2H药物分析第09章维生素类药物的分析VitBVitB1 1H H+ +H H+ +H H+ +H H+ +（二）（二） 沉淀反应沉淀反应药物分析第09章维生素类药物的分析S S元素反应元素反应ClCl- -反应反应（三）（三） 其他反应其他反应药物分析第09章维生素类药物的分析三、三、 含量测定含量测定喹那啶红亚甲蓝喹那啶红亚甲蓝 （紫红（紫红天蓝）天蓝）（一）（一）非水溶液滴定法非水溶液滴定法药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析UVUV法法（二）（二）药物分析第09章维生素类药物的分析片剂、注射剂片剂、注射剂=421=421（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=%=A=ECLA=ECL规格规格g/g/片片g/100mlg/100mlg gChPChP药物分析第09章维生素类药物的分析（每（每mlml）相当于标示量的）相当于标示量的%=%=规格规格g/mlg/mlmlml药物分析第09章维生素类药物的分析准确度高准确度高灵敏度低灵敏度低操作繁琐操作繁琐设备简单设备简单（三）（三） 硅钨酸重量法硅钨酸重量法重量法特点重量法特点1 1、药物分析第09章维生素类药物的分析原理原理2 2、药物分析第09章维生素类药物的分析2337.272337.273479.223479.22药物分析第09章维生素类药物的分析取本品约取本品约50mg50mg，精密称定，加水，精密称定，加水50ml50ml溶解后，加盐酸溶解后，加盐酸2ml2ml，煮沸，立即，煮沸，立即滴加硅钨酸试液滴加硅钨酸试液4ml4ml，继续煮沸，继续煮沸2 2分钟，分钟，用用8080恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液淀先用煮沸的盐酸溶液（120120）20ml20ml分次洗涤，再用水分次洗涤，再用水10ml10ml洗涤洗涤1 1次，最后用丙酮洗涤次，最后用丙酮洗涤2 2次，次，每次每次5ml5ml，在，在8080干燥至恒重，精密称干燥至恒重，精密称定，所得重量与定，所得重量与0.19390.1939相乘，即得相乘，即得测定方法测定方法3 3、药物分析第09章维生素类药物的分析例例 精密称取本品精密称取本品0.0519g0.0519g，加水，加水5050mlml溶解，加盐酸溶解，加盐酸2ml2ml煮沸，立即滴加煮沸，立即滴加硅钨酸试液硅钨酸试液4ml4ml，继续煮沸，继续煮沸2 2分钟，用分钟，用8080恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液（先用煮沸的盐酸溶液（120120）20ml20ml分次洗涤，再用水分次洗涤，再用水10ml10ml洗涤洗涤1 1次，后次，后用丙酮洗涤用丙酮洗涤2 2次，每次次，每次5ml5ml。在。在8080干干燥至恒重，称得沉淀重量为燥至恒重，称得沉淀重量为0.2557g0.2557g。求本品的含量按干燥品计算为多少？求本品的含量按干燥品计算为多少？药物分析第09章维生素类药物的分析( (本品干燥失重项下测定结果为本品干燥失重项下测定结果为3.73%)3.73%)药物分析第09章维生素类药物的分析A.A.取样量取样量50mg50mg提高灵敏度提高灵敏度B.80B.80保持保持4 4个个H H2 2O OC.HClC.HCl增大沉淀颗粒增大沉淀颗粒D.D.硅钨酸硅钨酸 ：VitBVitB1 1=8=8：1 1使沉淀完全使沉淀完全E.E.硅钨酸边搅拌边缓慢加入硅钨酸边搅拌边缓慢加入 增大沉淀颗粒增大沉淀颗粒实验条件实验条件4 4、药物分析第09章维生素类药物的分析NaOHNaOH（四）（四） 硫色素荧光法硫色素荧光法原理原理1 1、药物分析第09章维生素类药物的分析激发波长激发波长365nm365nm发射波长发射波长435nm435nm方法与计算方法与计算2 2、药物分析第09章维生素类药物的分析+NaOH+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾 +异丁醇异丁醇+NaOH+NaOH+异丁醇异丁醇+NaOH+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾 +异丁醇异丁醇+NaOH+NaOH+异丁醇异丁醇S Sd dA Ab b对照液对照液供试液供试液药物分析第09章维生素类药物的分析特点特点3 3、（1 1）灵敏度高，线性范围宽）灵敏度高，线性范围宽（2 2）代谢产物不干扰，适用于）代谢产物不干扰，适用于 体液分析体液分析药物分析第09章维生素类药物的分析第五节第五节 维生素维生素C CL L抗坏血酸抗坏血酸药物分析第09章维生素类药物的分析1 1、易溶于水、易溶于水2 2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性结构与性质结构与性质一、一、（一）（一）溶解性溶解性药物分析第09章维生素类药物的分析二烯醇结构二烯醇结构二酮基结构二酮基结构二烯醇结构二烯醇结构（二）（二） 强还原性强还原性药物分析第09章维生素类药物的分析有活性有活性有活性有活性无活性无活性药物分析第09章维生素类药物的分析糖类的显色反应糖类的显色反应5050结构与糖类相似结构与糖类相似（三）（三）具糖的性质具糖的性质药物分析第09章维生素类药物的分析C C3 3OHOH的的pKa=4.17pKa=4.17C C2 2OHOH的的pKa=11.57pKa=11.57酸性酸性（四）（四）一元酸一元酸药物分析第09章维生素类药物的分析L(+)L(+)抗坏血酸抗坏血酸活性最强活性最强手性手性C C（C C4 4、C C5 5）（五）（五） 光学活性光学活性*药物分析第09章维生素类药物的分析与碱反应与碱反应（六）（六） 水解反应水解反应药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析（七）（七） UVUV特征特征药物分析第09章维生素类药物的分析与氧化剂的反应与氧化剂的反应（一）（一）鉴别试验鉴别试验二、二、药物分析第09章维生素类药物的分析1 1、与、与AgNOAgNO3 3反应反应2 2、与、与2 2，6-6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应(ChP2000)(ChP2000)氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色还原型还原型蓝色蓝色OHOH(ChP2000)(ChP2000)药物分析第09章维生素类药物的分析（玫瑰色）玫瑰色）（无色）（无色）药物分析第09章维生素类药物的分析3 3、与碱性酒石酸铜反应、与碱性酒石酸铜反应USPUSP4 4、与、与KMnOKMnO4 4反应反应药物分析第09章维生素类药物的分析糖类的反应糖类的反应（二）（二）或盐酸或盐酸5050 吡咯吡咯USPUSP药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析（蓝色）（蓝色）( (糠醛糠醛) )（戊糖）（戊糖）5050( (吡咯吡咯) )药物分析第09章维生素类药物的分析UVUV（三）（三）BPBP0.01mol/LHCl0.01mol/LHCl药物分析第09章维生素类药物的分析指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液原理原理1 1、碘量法碘量法（一）（一）含量测定含量测定三、三、药物分析第09章维生素类药物的分析H H+ +药物分析第09章维生素类药物的分析 取本品约取本品约0.2g0.2g，精密称定，加新，精密称定，加新沸过的冷水沸过的冷水100ml100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml1ml，立即用碘滴，立即用碘滴定液（定液（0.1mol/L0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝）滴定，至溶液显蓝色，在色，在3030秒内不褪。每秒内不褪。每1ml1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg8.806mg的的C C6 6H H8 8O O6 6方法方法2 2、药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析C CH HH HO OOaS3a S O+H2N H ON2252 2H HO O N NH H C CO OS S3 3a a药物分析第09章维生素类药物的分析2 2，6-6-二氯靛酚钠滴定法法二氯靛酚钠滴定法法（二）（二）USPUSPJPJP原理原理1 1、药物分析第09章维生素类药物的分析自身指示终点法自身指示终点法方法方法2 2、药物分析第09章维生素类药物的分析HPLCHPLC法法（三）（三）1 1、HPLCHPLC的优点的优点灵敏度高灵敏度高选择性高选择性高分离分析同步分离分析同步微量分析微量分析干扰少干扰少 快速快速药物分析第09章维生素类药物的分析2 2、HPLCHPLC法分离法分离VitCVitC常用方法及测常用方法及测 定对象定对象 对象对象 制剂、生物样品、果汁制剂、生物样品、果汁方法方法 离子交换色谱法离子交换色谱法 离子对色谱法离子对色谱法 分配色谱法（正、反相）分配色谱法（正、反相）血、尿、组织、细胞等血、尿、组织、细胞等药物分析第09章维生素类药物的分析例例多种维生素片中多种维生素片中VitAVitA、 VitBVitB1 1、 VitBVitB2 2 、VitBVitB6 6 、烟酰胺、烟酰胺、VitCVitC、VitEVitE的含量测定的含量测定色谱柱色谱柱 ODSODS流动相流动相 A A、水、水 - -甲醇（甲醇（44：1 1） B B、甲醇、甲醇 （梯度洗脱）（梯度洗脱）抗氧剂抗氧剂 二巯基丙烷磺酸钠二巯基丙烷磺酸钠药物分析第09章维生素类药物的分析水溶性维生素水溶性维生素 离子对色谱法（樟脑磺酸）离子对色谱法（樟脑磺酸） 内标法内标法 +校正因子校正因子 内标物内标物苯酚苯酚脂溶性维生素脂溶性维生素 外标法外标法药物分析第09章维生素类药物的分析药物分析第09章维生素类药物的分析