第三章第三章 血型与输血（血型与输血（2）三、三、Rh血型系统血型系统vRh阳性：阳性：含含D抗原抗原的红细胞的红细胞vRh阴性：阴性：不含不含D抗原抗原的红细胞的红细胞v汉族人中汉族人中Rh阴性率阴性率1% （一）（一）Rh血型系统抗体血型系统抗体v1. Rh抗体的产生抗体的产生RhRh抗体绝大多数是通过抗体绝大多数是通过抗体绝大多数是通过抗体绝大多数是通过RhRh血型不合输血或妊娠产生的免疫血型不合输血或妊娠产生的免疫血型不合输血或妊娠产生的免疫血型不合输血或妊娠产生的免疫性抗体，性抗体，性抗体，性抗体，这些抗体均为这些抗体均为这些抗体均为这些抗体均为IgGIgG v2. Rh抗体的种类抗体的种类主要有主要有5种，即抗种，即抗D、抗、抗E、抗、抗C、抗、抗c、抗、抗e，最，最常见的是抗常见的是抗D，凡被检红细胞和抗，凡被检红细胞和抗D血清凝集者血清凝集者为为Rh阳性，不凝集为阳性，不凝集为Rh阴性阴性v3. Rh抗体的特性抗体的特性为免疫性抗体为免疫性抗体IgG （二）（二）Rh血型鉴定方法及评价血型鉴定方法及评价v1. 酶介质法酶介质法 分为直接酶介质法、间接酶介质分为直接酶介质法、间接酶介质法法v2. 抗球蛋白试验（抗球蛋白试验（Coombs test） 分为直接抗球蛋白试验（分为直接抗球蛋白试验（分为直接抗球蛋白试验（分为直接抗球蛋白试验（DATDAT）和间接抗球蛋白试验）和间接抗球蛋白试验）和间接抗球蛋白试验）和间接抗球蛋白试验（IATIAT）v3. 凝聚胺试验（凝聚胺试验（polybrene test） v4. 人源盐水介质抗人源盐水介质抗D试验试验 (临床应用广泛临床应用广泛)v 5. 低离子强度（盐）溶液试验低离子强度（盐）溶液试验 在酶处理下在酶处理下IgG抗体可凝集抗体可凝集RBCu1. 酶介质法1. 酶介质法离心离心看结果看结果阳阳性性阴阴性性37 37水浴水浴30分钟分钟2.抗球蛋白（抗球蛋白（Coombs）试验）试验vDAT（直抗）（直抗）:直接检测红细胞表面有无不完直接检测红细胞表面有无不完全抗体吸附的试验。全抗体吸附的试验。vIAT（间抗）：通过体外致敏红细胞，再检测（间抗）：通过体外致敏红细胞，再检测红细胞上有无不完全抗体吸附的试验。红细胞上有无不完全抗体吸附的试验。在盐水介质中IgM抗体凝集RBC示意图在盐水介质中、 IgG抗体不凝集RBC抗球蛋白抗球蛋白2.抗球蛋白试验抗球蛋白试验3.凝聚胺技术原理 凝聚胺（Polybrene），一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。在凝聚胺处理下在凝聚胺处理下IgG抗体可凝集抗体可凝集RBC4.人源盐水介质试验人源盐水介质试验v原理：加入蛋白变性剂，使原理：加入蛋白变性剂，使IgG抗抗D抗体转变抗体转变为类似大分子的为类似大分子的“IgM”，在盐水中发生肉眼，在盐水中发生肉眼可见的凝集反应。可见的凝集反应。 临床应用广范临床应用广范5.LISS(低离子强度溶液低离子强度溶液)的原理的原理抗抗原原非离子静电作用力抗抗体体静电作用力离子抗抗原原抗抗体体当溶液中离子增多时，抗原抗体之间的静电作用力减弱当溶液中缺少离子时，抗原抗体之间的静电作用力较强（三）（三）Rh血型鉴定的临床意义血型鉴定的临床意义v1. 输血前的检查输血前的检查 v2. 新生儿溶血病诊断新生儿溶血病诊断 v3. 协助治疗协助治疗 医院坚持验血后输血医院坚持验血后输血 失血孕妇苦等失血孕妇苦等6小时逝去小时逝去v稀有血型孕妇董明霞在引产时出现大出血，稀有血型孕妇董明霞在引产时出现大出血，家属要求先输血救命并愿意承担一切后果，家属要求先输血救命并愿意承担一切后果，但医院坚持严格按照法律规定输血。经过但医院坚持严格按照法律规定输血。经过6个个多小时的焦虑等待，这位山东济阳的孕妇终多小时的焦虑等待，这位山东济阳的孕妇终于于9日下午在山东大学齐鲁医院含恨死去。日下午在山东大学齐鲁医院含恨死去。（齐鲁晚报（齐鲁晚报 2008年年10月月10日）日） v 血液中心冷冻库提供的血液中心冷冻库提供的4个单位个单位（800ml）RH阴性阴性O型血浆，每个单位按照型血浆，每个单位按照常规最快也要常规最快也要3个小时才能解冻，且不能满足个小时才能解冻，且不能满足需要，只能临时从稀有血型志愿者中采集需要，只能临时从稀有血型志愿者中采集7个个单位（单位（1400ml）的血液，这样的血液又需要）的血液，这样的血液又需要3个小时的检验，待其筹足之时，抢救的最佳个小时的检验，待其筹足之时，抢救的最佳时间已经过去时间已经过去 。v尽管病人家属要求先输血救命并愿意承担一尽管病人家属要求先输血救命并愿意承担一切后果，但医院仍坚持严格按照法律规定等切后果，但医院仍坚持严格按照法律规定等到血液检验完毕才能输血。经过到血液检验完毕才能输血。经过6个多小时等个多小时等待后，引产大出血的济阳患者董明霞最终于待后，引产大出血的济阳患者董明霞最终于9日下午不幸去世日下午不幸去世 v一个省会所在的大医院，为什么自己不备有一个省会所在的大医院，为什么自己不备有RH阴性阴性O型等稀有血浆？为什么不建立稀有型等稀有血浆？为什么不建立稀有血型志愿者队伍？在紧急情况下，为什么不血型志愿者队伍？在紧急情况下，为什么不及时组织稀有血志愿者紧急采集及时组织稀有血志愿者紧急采集 ？四、红细胞血型系统交叉配血试验四、红细胞血型系统交叉配血试验 交叉配血试验的原理 交叉配血试验中红细胞血型抗原与相应抗体的凝集反应，可用盐水配血试验、酶介质试验 、抗球蛋白试验、凝聚胺试验、低离子强度溶液试验及微柱凝胶试验进行观察。 盐水介质配血方法患患者者献献血血者者主主侧侧次次侧侧离心离心看结果看结果阳阳性性阴阴性性交叉配血试验（盐水配血法）交叉配血试验（盐水配血法）原理原理原理原理 ：完全抗体分子链较长，在电解质学液中，能克：完全抗体分子链较长，在电解质学液中，能克：完全抗体分子链较长，在电解质学液中，能克：完全抗体分子链较长，在电解质学液中，能克服红细胞表面电荷排斥力，与相对应的抗原结合，使服红细胞表面电荷排斥力，与相对应的抗原结合，使服红细胞表面电荷排斥力，与相对应的抗原结合，使服红细胞表面电荷排斥力，与相对应的抗原结合，使红细胞凝集，从而发现配血不合，有对应抗原抗体存红细胞凝集，从而发现配血不合，有对应抗原抗体存红细胞凝集，从而发现配血不合，有对应抗原抗体存红细胞凝集，从而发现配血不合，有对应抗原抗体存在。在。在。在。方法：方法：方法：方法：1 1、自被检者静脉采血、自被检者静脉采血、自被检者静脉采血、自被检者静脉采血2323ml,ml,分离血清，并配制分离血清，并配制分离血清，并配制分离血清，并配制5%5%红细红细红细红细胞悬液。胞悬液。胞悬液。胞悬液。2 2、主侧：病人血清、主侧：病人血清、主侧：病人血清、主侧：病人血清+ +献血员红细胞献血员红细胞献血员红细胞献血员红细胞 次侧：献血员血清次侧：献血员血清次侧：献血员血清次侧：献血员血清+ +病人红细胞病人红细胞病人红细胞病人红细胞混匀，混匀，混匀，混匀，10001000转转转转/ /分，然后观察结果。分，然后观察结果。分，然后观察结果。分，然后观察结果。报告方式报告方式： 交叉配合试验（交叉配合试验（交叉配合试验（交叉配合试验（*法）法）法）法）受血者受血者受血者受血者*（* *）型血清）型血清）型血清）型血清+*+*（* *）型红细胞不凝集，无溶血。）型红细胞不凝集，无溶血。）型红细胞不凝集，无溶血。）型红细胞不凝集，无溶血。受血者受血者受血者受血者*红细胞红细胞红细胞红细胞+*+*血清不凝集。无溶血血清不凝集。无溶血血清不凝集。无溶血血清不凝集。无溶血结果判断：结果判断： 同型配血，主侧、次侧均不凝集，表示无配血禁忌，可同型配血，主侧、次侧均不凝集，表示无配血禁忌，可同型配血，主侧、次侧均不凝集，表示无配血禁忌，可同型配血，主侧、次侧均不凝集，表示无配血禁忌，可以输血；异型配血时，主侧无凝集，无溶血，次侧凝集，但以输血；异型配血时，主侧无凝集，无溶血，次侧凝集，但以输血；异型配血时，主侧无凝集，无溶血，次侧凝集，但以输血；异型配血时，主侧无凝集，无溶血，次侧凝集，但效价效价效价效价11：6464，无溶血，可以输给少量，如次侧不凝集时，应，无溶血，可以输给少量，如次侧不凝集时，应，无溶血，可以输给少量，如次侧不凝集时，应，无溶血，可以输给少量，如次侧不凝集时，应追查原因。追查原因。追查原因。追查原因。大量交叉配血大量交叉配血献血员之间应进行交叉配备献血员之间应进行交叉配备如：献如：献1血清血清+献献2红细胞红细胞 献献1红细胞红细胞+献献2血清血清 抗球蛋白配血方法患患者者献献血血者者主主侧侧次次侧侧37 37水浴水浴30分钟分钟三洗三洗 抗球蛋白方法配血方法加加抗抗球球蛋蛋白白离心离心看结果看结果阳阳性性阴阴性性 酶介质配血方法主次侧主次侧均加酶均加酶患患者者献献血血者者主主侧侧次次侧侧 酶介质配血方法离心离心看结果看结果阳阳性性阴阴性性37 37水浴水浴30分钟分钟凝聚胺技术原理原理 凝凝聚聚胺胺（PolybrenePolybrene），一一种种高高价价离离子子季季胺胺盐盐多多聚聚物物，溶溶解解后后能能产产生生很很多多正正电电荷荷，可可以以中中和和红红细细胞胞表表面面的的负负电电荷荷，使使红红细细胞胞之之间间距距离离减减少少，能能引引起起正正常常红红细细胞胞可可逆逆性性的的非非特特异异性性凝凝集集。如如果果是是抗抗体体致致敏敏的的红红细细胞胞被被聚聚凝凝胺胺凝凝集集，则凝集则凝集不可逆不可逆。 聚凝胺(Polybrene)配血方法患患者者献献血血者者主主侧侧次次侧侧室温放置室温放置1 分钟分钟主次侧均主次侧均加聚凝胺加聚凝胺 聚凝胺(Polybrene)配血方法离离心心聚凝胺引起聚凝胺引起红细胞非特红细胞非特异性凝集异性凝集阳阳性性阴阴性性主次侧均主次侧均加重悬液加重悬液看结果看结果基本操作方法基本操作方法1 1、试管中加入待检血清或血浆、试管中加入待检血清或血浆1 1滴滴2 2、加入用、加入用LIMLIM溶液配置的溶液配置的2323的红细胞悬液的红细胞悬液2323滴滴3 3、摇匀，室温放置、摇匀，室温放置1 1分钟（时间长，效果好）分钟（时间长，效果好）4 4、加聚凝胺试剂、加聚凝胺试剂1 1滴，混匀后滴，混匀后3400rpm3400rpm离心离心1515秒秒5 5、轻摇观察由聚凝胺引起的红细胞非特异性凝集，、轻摇观察由聚凝胺引起的红细胞非特异性凝集，若未见红细胞凝集则需重做试验若未见红细胞凝集则需重做试验6 6、加入、加入1 1滴重悬液，轻摇观察结果滴重悬液，轻摇观察结果 由聚凝胺引起的非特异性凝集应在由聚凝胺引起的非特异性凝集应在1 1分钟内完分钟内完全散开，若是由免疫抗体引起的凝集反应则不会散全散开，若是由免疫抗体引起的凝集反应则不会散开开微柱凝胶介质配血法微柱凝胶介质配血法v红细胞抗原与相应抗体在红细胞抗原与相应抗体在红细胞抗原与相应抗体在红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶介质微柱凝胶介质微柱凝胶介质微柱凝胶介质中发生凝集中发生凝集中发生凝集中发生凝集发应发应发应发应 凝胶试验使用的试剂和器材交叉配血试验的方法学评价交叉配血试验的方法学评价 方法方法 优点优点 缺点缺点盐水配血试验盐水配血试验 简单、快速简单、快速简单、快速简单、快速 检不出检不出检不出检不出IgGIgGIgGIgG型抗体型抗体型抗体型抗体酶介质试验酶介质试验 简便、经济简便、经济简便、经济简便、经济 准确性、稳定性差准确性、稳定性差准确性、稳定性差准确性、稳定性差抗球蛋白试验抗球蛋白试验 最准确最准确最准确最准确、可靠、可靠、可靠、可靠 复杂、费时、试剂贵复杂、费时、试剂贵复杂、费时、试剂贵复杂、费时、试剂贵凝聚胺试验凝聚胺试验 快速、准确快速、准确快速、准确快速、准确 需特殊试剂及器材需特殊试剂及器材需特殊试剂及器材需特殊试剂及器材微柱凝胶试验微柱凝胶试验 灵敏灵敏灵敏灵敏 成本高成本高成本高成本高交叉配血的质量保证交叉配血的质量保证检测前：标本、试剂及实验器材的要求检测中：工作态度严谨，高度责任感检测后：标本存放7天以上交叉配血的临床意义 保证输血安全 发现亚型和不规则抗体 第五节 新生儿溶血病(一)ABO新生儿溶血病 是由于母婴血型不合，母体的IgG抗A(B)经过胎盘进入胎儿血循环破坏胎儿红细胞所引起。ABO溶血症溶血症父母血型匹配，子女父母血型匹配，子女才能才能优优生。生。如果父母血型不匹配，如果父母血型不匹配，子女很可能得母子女很可能得母婴婴血血型不合型不合溶血症溶血症。 此种溶血症主要此种溶血症主要此种溶血症主要此种溶血症主要发发发发生在母生在母生在母生在母亲为亲为亲为亲为O O O O型，型，型，型，婴婴婴婴儿儿儿儿为为为为A A A A型或型或型或型或B B B B型者。型者。型者。型者。所以也叫所以也叫所以也叫所以也叫ABOABOABOABO溶血溶血溶血溶血症。症。症。症。(二) Rh血型引起的新生儿溶血分娩分娩分娩分娩 时胎儿时胎儿时胎儿时胎儿 红细胞大量进入母体使母亲受到免疫红细胞大量进入母体使母亲受到免疫红细胞大量进入母体使母亲受到免疫红细胞大量进入母体使母亲受到免疫HDN HDN 的发病示意图的发病示意图二、实验室检查（产前检查）v1. 血型鉴定血型鉴定v2.检查没亲血清中有无检查没亲血清中有无IgG性质的抗体并检测性质的抗体并检测其效价其效价v3.羊水分析羊水分析二、实验室检查 （患儿血标本检查）u直接抗球蛋白试验u红细胞抗体放散试验红细胞抗体放散试验: :与直接抗球蛋白相同，与直接抗球蛋白相同，也是检测新生儿红细胞上是否存在免疫抗体。也是检测新生儿红细胞上是否存在免疫抗体。u游离抗体试验游离抗体试验: :是检测新生儿血清中的血型抗是检测新生儿血清中的血型抗体。体。三、新生儿溶血病治疗与预防u1.药物治疗与血浆置换u2. 提早分娩u3. 宫内换血u4.光照治疗与换血疗法u5.预防第六节第六节 自动化血型分析技术自动化血型分析技术v1.微柱凝胶法微柱凝胶法v2.微板法微板法(血站较普及血站较普及)v3.全自动血型分析仪检测法全自动血型分析仪检测法小结小结v本章节的重点内容是：本章节的重点内容是：ABO血型亚型、血型血型亚型、血型的鉴定、交叉配血的方法及临床意义！的鉴定、交叉配血的方法及临床意义！一、名词解释一、名词解释一、名词解释一、名词解释血型血型血型血型 血型鉴正向定型血型鉴正向定型血型鉴正向定型血型鉴正向定型 血型鉴反向定型血型鉴反向定型血型鉴反向定型血型鉴反向定型 交叉配血交叉配血交叉配血交叉配血试验试验试验试验二、选择题二、选择题二、选择题二、选择题1 1、交叉配血时交叉配血时交叉配血时交叉配血时, ,当血清和红细胞发生肉眼可见的凝集当血清和红细胞发生肉眼可见的凝集当血清和红细胞发生肉眼可见的凝集当血清和红细胞发生肉眼可见的凝集反应反应反应反应, ,则血清中的抗体是则血清中的抗体是则血清中的抗体是则血清中的抗体是 A IgM B IgG A IgM B IgG C IgE D C IgE D 以上均是以上均是以上均是以上均是 课后练习课后练习2 2、ABOABO新生儿溶血症可见于母亲为新生儿溶血症可见于母亲为新生儿溶血症可见于母亲为新生儿溶血症可见于母亲为OO型型型型, ,胎儿的血型可为胎儿的血型可为胎儿的血型可为胎儿的血型可为A AA A型型型型 B BB B型型型型 C AC A型和型和型和型和B B型型型型 D OD O型型型型