酶联免疫吸附实验酶联免疫吸附实验(shyn)(shyn)(ELISA)(ELISA)第1页/共13页第一页，共14页。目的(md)和要求掌握ELISA的原理(yunl)、操作过程及注意事项了解ELISA实验结果的读取和分析第2页/共13页第二页，共14页。实验实验(shyn)原理原理借助酶标记抗体（或抗原）在体外与抗原（或抗体）结合，通过相应底物被酶解后出现显色反应。反应颜色深浅(shnqin)与抗原（或抗体）量的多少有关。特点：灵敏、特异类型： 双抗体夹心法、竞争法、间接法等第3页/共13页第三页，共14页。 双抗夹心双抗夹心(jixn)(jixn)法法ELISAELISA第4页/共13页第四页，共14页。 竞争法 ELISAELISA第5页/共13页第五页，共14页。第6页/共13页第六页，共14页。实验实验(shyn)材材料料BSA包被的测定板酶标抗鼠IgG抗体待检血清，阳性血清，阴性血清洗涤液：PBS吐温-20底物(dw)液：邻苯二胺（OPD）终止液：10%H2S04第7页/共13页第七页，共14页。实验实验(shyn)步骤步骤加入加入(jir)(jir)稀释好的待测血清每孔稀释好的待测血清每孔100ul100ul， 37 37孵育孵育40min40min加入加入100ul100ul酶标抗体酶标抗体(kngt), 37(kngt), 37孵孵育育30min30min洗板洗板3 3次次, ,每次每次1min1min洗板洗板3 3次次, ,每次每次1min1min第8页/共13页第八页，共14页。实验实验(shyn)步骤步骤加入加入100ulTMB100ulTMB底物底物(d w)(d w)液液避光室温孵育避光室温孵育15min15min终止反应终止反应(fnyng):(fnyng):每孔加每孔加1 1滴滴1010硫酸硫酸结果观察结果观察第9页/共13页第九页，共14页。第10页/共13页第十页，共14页。注意事项注意事项u加样：应将所加物加在加样：应将所加物加在ELISAELISA板孔的底部，并注意板孔的底部，并注意不可溅出，不可产生气泡。不可溅出，不可产生气泡。u洗板：每次洗液加入后，应静置洗板：每次洗液加入后，应静置1 1分钟使清洗更加分钟使清洗更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。彻底。末次洗板尽量将水甩干。u液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行(pngxng)(pngxng)轻轻晃动轻轻晃动3030秒，混匀液体。秒，混匀液体。u底物有毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避免底物有毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避免接触。接触。第11页/共13页第十一页，共14页。感谢您的观看(gunkn)！第13页/共13页第十三页，共14页。内容(nirng)总结酶联免疫吸附实验(ELISA)。借助酶标记抗体(kngt)（或抗原）在体外与抗原（或抗体(kngt)）结合，通过相应底物被酶解后出现显色反应。双抗体(kngt)夹心法、竞争法、间接法等。加样：应将所加物加在ELISA板孔的底部，并注意不可溅出，不可产生气泡。液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。底物有毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避免接触。将待测血清1:100稀释后，再做倍比稀释到各孔，每孔100l，见表第十四页，共14页。