病毒感染实验诊断 一般原则是特异敏感、快速和简一般原则是特异敏感、快速和简便。首先根据流行病学和临床特便。首先根据流行病学和临床特点，初步判断可能感染的病毒。点，初步判断可能感染的病毒。 然后根据可疑病毒的生物学特点、然后根据可疑病毒的生物学特点、机体免疫应答和临床过程，以及机体免疫应答和临床过程，以及病人当前所处的时机，确定实验病人当前所处的时机，确定实验诊断方法。诊断方法。1.1.对潜伏期短，发病时尚无抗体产对潜伏期短，发病时尚无抗体产 生，可选择测定病毒颗粒、病毒生，可选择测定病毒颗粒、病毒 抗原或核酸。抗原或核酸。2.2.对潜伏期超过十天的感染，可对潜伏期超过十天的感染，可 检测特异性的检测特异性的IgMIgM抗体来进行早抗体来进行早 期快速诊断，及区别初次和再期快速诊断，及区别初次和再 次感染。次感染。3.3.对可在体内形成持续感染或潜伏对可在体内形成持续感染或潜伏 感染的病毒，可检测急性期和恢感染的病毒，可检测急性期和恢 复期双份血清的复期双份血清的IgGIgG抗体有无抗体有无4 4倍倍 以上升高，或直接检测病毒核酸。以上升高，或直接检测病毒核酸。4.4.对原因不明或有新病毒感染时，对原因不明或有新病毒感染时， 应采集标本进行病毒分离，同应采集标本进行病毒分离，同 时应采取双份血清以确认分离时应采取双份血清以确认分离 的病毒为病原体。的病毒为病原体。5.5.对同一症状可有多种病毒引起的对同一症状可有多种病毒引起的 情况，应同时检测几种相关病毒情况，应同时检测几种相关病毒 的病毒颗粒、抗原或抗体，的病毒颗粒、抗原或抗体，6.6.对由多个型别组成的病毒可测定对由多个型别组成的病毒可测定 它们的共同抗原。它们的共同抗原。 第一节标本采集与运送 一、标本的采集一、标本的采集1.1.采样时间采样时间 尽可能在发病的初期，尽可能在发病的初期， 急性期或患者人院的当天进行。急性期或患者人院的当天进行。 2.2.标本种类的选择标本种类的选择 根据临床感染根据临床感染 的症状及流行病学资料，判断可的症状及流行病学资料，判断可 能感染病毒种类，选择相应部位能感染病毒种类，选择相应部位 采取标本。采取标本。 常见分离病毒标本的选择常见分离病毒标本的选择 病毒病毒咽拭子咽拭子粪便粪便血液血液脑脊液脑脊液 唾液唾液 组织组织 柯萨奇柯萨奇A和和B组组 +心心 单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒 +脑膜脑膜 腮腺炎病毒腮腺炎病毒 +流感病毒流感病毒 +轮状病毒轮状病毒 +HAV+HIV+ 精液精液3 3常见标本的采集方法常见标本的采集方法 (1)(1)血液：以无菌取抗凝血血液：以无菌取抗凝血10ml10ml。 抗凝选用抗凝选用100n100nmlml肝素钠。肝素钠。 用于分离用于分离CMVCMV、HSVHSV，、黄病，、黄病 毒、毒、EBVEBV、HIV-1HIV-1及新生儿肠及新生儿肠 道病毒。道病毒。(2)(2)脑脊液：以无菌取脑脊液脑脊液：以无菌取脑脊液 1 12ml2ml，冰浴立即送检。，冰浴立即送检。 在在44可存放可存放72h72h。用于分。用于分 离柯萨奇病毒、离柯萨奇病毒、ECHOECHO病毒、病毒、 肠道病毒、腮腺炎病毒。肠道病毒、腮腺炎病毒。(3)(3)宫颈或阴道拭子：采取病灶部宫颈或阴道拭子：采取病灶部 位分泌物，或将拭子伸人宫颈位分泌物，或将拭子伸人宫颈 约约lcmlcm停留停留5 5秒取出，冰浴立即秒取出，冰浴立即 送检。用于分离送检。用于分离 HSVHSV、CMVCMV。(4)(4)粪便标本：取粪便标本：取2 24 4粪便加粪便加 10ml10ml运送液立即送检，用于运送液立即送检，用于 分离腺病毒、肠道病毒和轮分离腺病毒、肠道病毒和轮 状病毒。状病毒。(5)(5)含漱液：用无菌生理盐水让含漱液：用无菌生理盐水让 患者含漱。用于分离流感病患者含漱。用于分离流感病 毒、副流感病毒、鼻病毒、毒、副流感病毒、鼻病毒、 RSVRSV等。等。 (6)(6)喉拭子：用压舌板避免唾液喉拭子：用压舌板避免唾液 污染，用拭子采取咽喉部表污染，用拭子采取咽喉部表 面。用于分离腺病毒、面。用于分离腺病毒、CMVCMV、 肠道病毒、肠道病毒、HSVHSV、流感病毒等。、流感病毒等。(7)(7)尿道拭子及尿液标本：尿道拭尿道拭子及尿液标本：尿道拭 子伸人尿道子伸人尿道4cm4cm转动转动3 3次，以获次，以获 得较多的上皮细胞，用于分离得较多的上皮细胞，用于分离 CMVCMV和和HSVHSV。(8)(8)尸检标本：死亡后尽早采集各尸检标本：死亡后尽早采集各 种器官，分别使用器械和容器。种器官，分别使用器械和容器。 二、标本的运送和保存病毒抵抗力弱，室温中容易灭活，病毒抵抗力弱，室温中容易灭活，用于分离培养的标本要尽快送检，用于分离培养的标本要尽快送检，44下数或下数或-70-70。冻存液中加入甘油或二甲基亚砜冻存液中加入甘油或二甲基亚砜(DMSO)(DMSO)等作保护。等作保护。病毒传送培养基以病毒传送培养基以HanksHanks液为基础加液为基础加灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加青霉素青霉素100U100Umlml和链霉素和链霉素100g100gmlml，为了抑制真菌的生长加入为了抑制真菌的生长加入2 25g5gmlml二性霉素二性霉素B B或或40g40gmlml制霉菌素。制霉菌素。 第二节 病毒分离与鉴定 一、病毒的分离方法一、病毒的分离方法1.1.组织细胞培养组织细胞培养 根据细胞的来源、根据细胞的来源、 特性和传代次数分为：特性和传代次数分为：(1)(1)原代细胞培养：将细胞悬液。原代细胞培养：将细胞悬液。 加入营养液培养。形成的单加入营养液培养。形成的单 层细胞，称之为原代细胞。层细胞，称之为原代细胞。 (2)(2)二倍体细胞株：仍保持二倍体二倍体细胞株：仍保持二倍体 特性。寿命一般为特性。寿命一般为40405050代，代， 如人胚肺细胞。广泛用于病毒如人胚肺细胞。广泛用于病毒 分离和疫苗制备。分离和疫苗制备。(3)(3)传代细胞系：来于肿瘤细胞，传代细胞系：来于肿瘤细胞， 染色体特征类似肿瘤细胞。染色体特征类似肿瘤细胞。 常用的有人宫颈癌细胞常用的有人宫颈癌细胞(Hela)(Hela)、 人喉上皮癌细胞人喉上皮癌细胞(Hep-2)(Hep-2)。2 2鸡胚接种鸡胚接种 鸡胚是用于分离粘鸡胚是用于分离粘 病毒科、疱疹病毒、痘类病毒病毒科、疱疹病毒、痘类病毒 的较为理想的材料。的较为理想的材料。 3 3动物接种动物接种 动物对病毒的敏感动物对病毒的敏感 性是不同的，选择合适动物十性是不同的，选择合适动物十 分重要。小鼠、乳鼠、家兔、分重要。小鼠、乳鼠、家兔、 豚鼠、猴等常用于分离病毒。豚鼠、猴等常用于分离病毒。 常用于病毒分离的细胞常用于病毒分离的细胞 细胞种类细胞种类可分离的病毒可分离的病毒 原代细胞原代细胞 非洲绿猴肾细胞非洲绿猴肾细胞 人单核细胞人单核细胞 人胚肾、肺细胞人胚肾、肺细胞 恒河猴猕猴肾细胞恒河猴猕猴肾细胞HSV、RSV、VZV、腮腺炎病毒、风疹病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒 HIV、HTLV、HHV-6腮腺炎病毒腮腺炎病毒、腺、腺病毒病毒ECHO、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇A、B组、组、RSV 二倍体细胞株二倍体细胞株 人胚肺成纤维细胞株人胚肺成纤维细胞株 WI-38、MRC5 CMV、VZV、鼻、鼻病毒病毒腮腺炎病毒腮腺炎病毒、腺、腺病毒病毒 传代细胞系传代细胞系 Hela Hep-2 Vero 柯萨奇柯萨奇A、B组、组、RSV腺腺病毒、病毒、RSVHSV、RSV、风疹病毒、风疹病毒 、轮状、轮状病毒、麻疹病毒病毒、麻疹病毒三、病毒的鉴定 必须通过全面了解其特性才能必须通过全面了解其特性才能得到鉴定。得到鉴定。1.1.根据临床特点，流行病学资根据临床特点，流行病学资 料，标本来源，大致了解病料，标本来源，大致了解病 毒的一些特性，有助于确认毒的一些特性，有助于确认 病毒的种类。病毒的种类。2.2.动物感染范围及特点动物感染范围及特点 病毒感病毒感 染动物的范围、发病的潜伏期。染动物的范围、发病的潜伏期。3.3.细胞培养特点。细胞培养特点。 综合上述资料作出鉴定。综合上述资料作出鉴定。病毒鉴定的方法1.1.细胞培养的结果观察细胞培养的结果观察 病毒增殖后导致细胞发生病毒增殖后导致细胞发生:细胞病细胞病 变效应变效应(CPE)(CPE)。细胞肿大，变圆堆积。细胞肿大，变圆堆积 成葡萄状，细胞溶解出现空斑，细胞成葡萄状，细胞溶解出现空斑，细胞 融合形成多核巨细胞，胞浆内或核内融合形成多核巨细胞，胞浆内或核内 出现嗜酸性或嗜碱性包涵体等；出现嗜酸性或嗜碱性包涵体等；不出现细胞病变现象。不出现细胞病变现象。细胞培养液细胞培养液pHpH的变化。的变化。 2.2.中和试验中和试验病毒与特异性抗体进行免疫反应，病毒与特异性抗体进行免疫反应，使病毒失去感染性，在细胞培养使病毒失去感染性，在细胞培养和活的机体内不出现病变的试验。和活的机体内不出现病变的试验。常用细胞培养进行中和试验。如常用细胞培养进行中和试验。如果特异性抗体能中和病毒，使之果特异性抗体能中和病毒，使之失去感染性，不出现细胞病变效失去感染性，不出现细胞病变效应，则该病毒为特异性抗体的同应，则该病毒为特异性抗体的同型病毒，型病毒，用于病毒的分型诊断最具敏感和用于病毒的分型诊断最具敏感和准确性。也可用于检查患者病后准确性。也可用于检查患者病后或人工免疫后，机体血清中抗体或人工免疫后，机体血清中抗体增加情况。增加情况。 3.3.空斑或蚀斑形成试验空斑或蚀斑形成试验 空斑是指在单层细胞中被病毒感染引空斑是指在单层细胞中被病毒感染引 起死亡的细胞区域，周围被活细胞包起死亡的细胞区域，周围被活细胞包 围。一般而言，一个空斑是由一个感染围。一般而言，一个空斑是由一个感染 性病毒颗粒感染所引起的。不同的病毒性病毒颗粒感染所引起的。不同的病毒 引起的空斑形态和大小不同。可进行病引起的空斑形态和大小不同。可进行病 毒颗粒的计数、纯化，结合中和试验可毒颗粒的计数、纯化，结合中和试验可 进行病毒的鉴定。进行病毒的鉴定。4.4.干扰现象干扰现象 某些病毒间存在着干扰现象，某些病毒间存在着干扰现象， 如某些型别的鼻病毒能干扰如某些型别的鼻病毒能干扰 以后进入的副流感病毒的增以后进入的副流感病毒的增 殖，从而阻抑后者的红细胞殖，从而阻抑后者的红细胞 吸附作用。吸附作用。5.5.红细胞吸附及吸附抑制试验红细胞吸附及吸附抑制试验正粘病毒，副粘病毒感染的宿主正粘病毒，副粘病毒感染的宿主细胞，病毒增殖后产生细胞病变，细胞，病毒增殖后产生细胞病变，但在细胞表面含有病毒某些抗原但在细胞表面含有病毒某些抗原成分成分( (血凝素血凝素) )，能吸附鸡、豚鼠，能吸附鸡、豚鼠或猴红细胞。或猴红细胞。可作为初步鉴定。如果在培养瓶可作为初步鉴定。如果在培养瓶中加入相应的血凝素抗血清后，中加入相应的血凝素抗血清后，不出现红细胞吸附现象，是为红不出现红细胞吸附现象，是为红细胞吸附抑制试验阳性，可作为细胞吸附抑制试验阳性，可作为病毒鉴定的依据。病毒鉴定的依据。4 4血凝试验及血凝抑制试验血凝试验及血凝抑制试验 某些病毒可与一定种类的哺乳某些病毒可与一定种类的哺乳 动物或禽类的红细胞产生血凝动物或禽类的红细胞产生血凝 现象。加入相应的血凝素抗体现象。加入相应的血凝素抗体 可抑制血凝现象的发生，是为可抑制血凝现象的发生，是为 血凝抑制试验。可作为病毒型血凝抑制试验。可作为病毒型 别确定的依据。别确定的依据。5病毒的大小及形态 可用电子显微镜观察病毒的可用电子显微镜观察病毒的 大小及形态。大小及形态。6 6核酸类型鉴别及序列测定核酸类型鉴别及序列测定 利用利用5 5溴溴-2-2-脱氧尿苷脱氧尿苷(BUDR)(BUDR)抑抑 制制DNADNA复制的特性，在细胞培养液中复制的特性，在细胞培养液中 加入该物质，可抑制加入该物质，可抑制DNADNA病毒的复制病毒的复制 和增殖，抑制细胞病变的出现，但对和增殖，抑制细胞病变的出现，但对 RNARNA病毒无抑制作用，以此判断病毒病毒无抑制作用，以此判断病毒 核酸类型。核酸类型。对病毒核酸特异序列或全序列的对病毒核酸特异序列或全序列的碱基排列测定或碱基排列测定或 DNADNA杂交、杂交、DNA-DNA-RNARNA杂交来鉴定病毒。杂交来鉴定病毒。 7 7耐酸试验耐酸试验 肠道病毒对酸有耐受力，而肠道病毒对酸有耐受力，而 鼻病毒在酸性环境下易被灭活。鼻病毒在酸性环境下易被灭活。 8 8乙醚敏感试验乙醚敏感试验 病毒外围如有类脂包膜，则易病毒外围如有类脂包膜，则易 被乙醚破坏，而失去感染性，不被乙醚破坏，而失去感染性，不 能感染细胞。可作为病毒是否具能感染细胞。可作为病毒是否具 有类脂包膜的依据，也可用氯仿有类脂包膜的依据，也可用氯仿 或去胆酸钠代替乙醚进行试验。或去胆酸钠代替乙醚进行试验。 9 9免疫荧光抗体染色免疫荧光抗体染色 将感染细胞固定，用特异抗血将感染细胞固定，用特异抗血 清荧光标记染色，在荧光显微镜清荧光标记染色，在荧光显微镜 下，可见细胞内荧光，即可确定下，可见细胞内荧光，即可确定 型别。型别。 第三节病毒感染快速诊断通过测定病毒的特异标志成分，如通过测定病毒的特异标志成分，如特殊形态、特异的抗原成分及病毒特殊形态、特异的抗原成分及病毒的核酸，早期确认病毒的感染，是的核酸，早期确认病毒的感染，是病毒学诊断的重大发展。病毒学诊断的重大发展。 一、形态学检查1 1光学显微镜光学显微镜 观察病毒感染细胞出现的包涵体。观察病毒感染细胞出现的包涵体。 根据特点可作出辅助诊断。狂犬病根据特点可作出辅助诊断。狂犬病 病毒在脑细胞出现嗜酸性的圆形或病毒在脑细胞出现嗜酸性的圆形或 椭圆形包涵体，称为内基小体。巨椭圆形包涵体，称为内基小体。巨 细胞病毒在上皮细胞的细胞核内出细胞病毒在上皮细胞的细胞核内出 现周围绕有一轮晕似现周围绕有一轮晕似“猫头鹰眼猫头鹰眼”样样 大型嗜酸性包涵体。大型嗜酸性包涵体。2 2电子显微镜检查电子显微镜检查 (1)(1)电镜直接检查：早期病毒感染标电镜直接检查：早期病毒感染标 本的病毒颗粒。如本的病毒颗粒。如“秋季泻秋季泻”患儿患儿 粪便中的轮状病毒、甲肝患者粪粪便中的轮状病毒、甲肝患者粪 便中的便中的HAVHAV，疱疹病毒的疱疹液，疱疹病毒的疱疹液， HBVHBV患者血清，均可观察到特征性患者血清，均可观察到特征性 病毒颗粒。病毒颗粒。 (2)(2)免疫电镜检查：在标本中加入免疫电镜检查：在标本中加入 抗体。使病毒聚集成块负染观抗体。使病毒聚集成块负染观 察，更易发现病毒体，灵敏度察，更易发现病毒体，灵敏度 可提高可提高100100倍。倍。 二、病毒抗原检测 病毒抗原是病毒特异性的标志，病毒抗原是病毒特异性的标志， 通过免疫学技术检测标本中特通过免疫学技术检测标本中特 异性抗原存在，可以早期诊断异性抗原存在，可以早期诊断 病毒感染。病毒感染。1 1免疫荧光技术免疫荧光技术 适合于型别少，适合于型别少， 细胞培养难以成功的病毒，如流细胞培养难以成功的病毒，如流 感病毒、副流感病毒、疱疹病毒、感病毒、副流感病毒、疱疹病毒、 巨细胞病毒、腺病毒等。肝活检巨细胞病毒、腺病毒等。肝活检 组织中的肝炎病毒、神经组织中组织中的肝炎病毒、神经组织中 的单纯疱疹病毒、脑组织中的狂的单纯疱疹病毒、脑组织中的狂 犬病毒或其他脱落细胞和活检组犬病毒或其他脱落细胞和活检组 织中的病毒抗原检测。织中的病毒抗原检测。2 2酶免疫技术酶免疫技术 有酶免疫组化和有酶免疫组化和 酶免疫吸附酶免疫吸附(ELlSA)(ELlSA)试验法。测试验法。测 定标本中游离的抗原或抗体。定标本中游离的抗原或抗体。 如检测乙型肝炎病毒的表面抗如检测乙型肝炎病毒的表面抗 原原(HBsAg)(HBsAg)，HIVHIV感染病人的感染病人的P24P24 抗体等。抗体等。3.3.其他技术其他技术 如固相放射免疫技术、如固相放射免疫技术、 发光免疫分析技术、胶体金标记发光免疫分析技术、胶体金标记 的免疫层析技术等。的免疫层析技术等。三、早期抗体检测 检检测测病病毒毒感感染染机机体体后后产产生生的的早早期期特特异异性性抗抗体体，如如测测定定特特异异性性IgMIgM可可以以快快速速明明确确诊诊断断各各种种病病毒毒引引起起的的新新生生儿儿先先天天性性感感染染，测测定定HAVHAV感感染染后后抗抗HAVHAV的的IgMIgM抗体可以明确诊断抗体可以明确诊断HAHA等。等。四、病毒核酸检测 只要有完整的特异基因片段存在，只要有完整的特异基因片段存在， 就可进行诊断。就可进行诊断。1 1斑点杂交法斑点杂交法 将将待待测测的的DNADNA或或RNARNA直直接接点点在在杂杂交交滤滤膜膜上上，变变性性后后，用用标标记记的的核核酸酸探探针针进进行行杂杂交交。用用3232p p或或131131I I同同位位素素标标记记的的探探针针通通过过放放射射白白显显影影，可可直直接接观观察察。现现用用地地高高辛辛、生生物物素素等等非非同同位位素素物物质质标标记记，然然后后采采用用酶酶反反应应或或酶酶免免疫疫技技术术进进行行检检测测，已已被被越越来来越越多的实验室广泛使用。多的实验室广泛使用。2 2固相杂交技术固相杂交技术 将核酸探针包被聚苯乙烯微孔将核酸探针包被聚苯乙烯微孔 板中，加人待测的核酸序列和板中，加人待测的核酸序列和 标记的指示探针标记的指示探针杂交液中进行杂交液中进行 杂交，洗涤后，用酶免疫技术杂交，洗涤后，用酶免疫技术 进行检测。进行检测。3.3.原位分子杂交技术原位分子杂交技术 在细胞原位暴露在细胞原位暴露DNADNA或或RNARNA，加入标，加入标记特异核酸探针进行杂交。通过显记特异核酸探针进行杂交。通过显色技术可显示特定杂交探针在细胞色技术可显示特定杂交探针在细胞内的位置和核酸的数量。内的位置和核酸的数量。印迹和Northern印迹法 SouthernSouthern印迹法用于印迹法用于DNADNA的杂交。提取的杂交。提取 DNA,DNA,用内切酶切割后，进行琼脂糖电泳用内切酶切割后，进行琼脂糖电泳 按分子量使按分子量使DNADNA分开，将分开，将DNADNA移至硝酸纤移至硝酸纤 维膜上，用标记探针进行杂交。可以检维膜上，用标记探针进行杂交。可以检 测病毒测病毒DNADNA特异序列。特异序列。 NorthernNorthern印迹法用于印迹法用于RNARNA杂交分析。将杂交分析。将 琼脂糖电泳后的琼脂糖电泳后的RNARNA移至移至DBMDBM膜上，用标膜上，用标 记探针进行杂交。用于检测记探针进行杂交。用于检测RNARNA或或mRNAmRNA。 5 5聚合酶链反应聚合酶链反应(PCR)(PCR) 选择病毒的特异保守片段作为靶基选择病毒的特异保守片段作为靶基因，进行引物设计和扩增可诊断病因，进行引物设计和扩增可诊断病毒性感染。选择病毒的易变区，结毒性感染。选择病毒的易变区，结合合RFLPRFLP，测序等技术可以对病毒进，测序等技术可以对病毒进行分型和突变的研究。行分型和突变的研究。(1)DNA(1)DNA病毒：可直接进行病毒：可直接进行PCRPCR扩增扩增 其特异片段。其特异片段。(2)RNA(2)RNA病毒：可通过病毒：可通过RT-PCRRT-PCR技术，技术， 将将RNARNA逆转录为逆转录为cDNAcDNA，再进行，再进行 PCRPCR扩增。扩增。(3)(3)定量定量PCRPCR技术：对扩增的产物进技术：对扩增的产物进 行原始标本定量，对病毒感染的行原始标本定量，对病毒感染的 诊断起到了量化的作用。同时，诊断起到了量化的作用。同时， 对研究病毒和机体之间的关系提对研究病毒和机体之间的关系提 供了参考。供了参考。 有些病毒如轮状病毒的核酸具有典有些病毒如轮状病毒的核酸具有典型的分节段特点。可以从标本中直型的分节段特点。可以从标本中直接提取轮状病毒的核酸。通过聚丙接提取轮状病毒的核酸。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳烯酰胺凝胶电泳(PAGE)(PAGE)，观察其特，观察其特有的有的1111个核酸节段的条带排列情况，个核酸节段的条带排列情况，进行诊断。进行诊断。 6 6病毒核酸的直接检测病毒核酸的直接检测五、病毒检验的结果评价 通过实验手段，从标本中获得有通过实验手段，从标本中获得有 关病毒感染的证据，从而确定病毒关病毒感染的证据，从而确定病毒 感染和临床疾病之间的因果关系，感染和临床疾病之间的因果关系， 是病毒实验诊断的目标。是病毒实验诊断的目标。 通过分离和鉴定获得致病性病毒，通过分离和鉴定获得致病性病毒，发现病毒感染的特异征象，如机发现病毒感染的特异征象，如机体内产生特异性抗体体内产生特异性抗体, ,急性期和恢急性期和恢复期血清中相应的特异性抗体有复期血清中相应的特异性抗体有4 4倍以上的升高，细胞内包涵体的形倍以上的升高，细胞内包涵体的形成等成等, ,就可得出病原学诊断。就可得出病原学诊断。 感染病毒的临床意义必须结合流感染病毒的临床意义必须结合流行病学资料、临床表现、病毒种行病学资料、临床表现、病毒种类及机体的病理变化作综合分析，类及机体的病理变化作综合分析，才能判定。才能判定。