第三节动物细胞工程第二章第二章细胞工程细胞工程学习导航学习导航1. 简述动物细胞的培养过程。简述动物细胞的培养过程。(重难点重难点)2.举举例例说说出出细细胞胞融融合合和和单单克克隆隆抗抗体体的的制制备备。(重难点重难点)3.关注克隆技术的伦理问题。关注克隆技术的伦理问题。(重点重点)新新知知初初探探思思维维启启动动一、动物细胞与组织培养一、动物细胞与组织培养1.动物细胞工程动物细胞工程(1)技技术术：一一般般包包括括动动物物细细胞胞与与组组织织培培养养、_移移植植、_克克隆隆、细细胞胞融融合、单克隆抗体的制备等技术。合、单克隆抗体的制备等技术。(2)基础：基础：_。细胞核细胞核体细胞体细胞动物细胞与组织培养动物细胞与组织培养2.动物细胞培养与组织培养的相同点动物细胞培养与组织培养的相同点(1)条条件件：将将动动物物细细胞胞或或组组织织在在_、_和营养充足的条件下培养。和营养充足的条件下培养。(2)目目的的：使使其其继继续续生生长长、繁繁殖殖并并维维持持_的技术过程。的技术过程。无菌无菌温度适宜温度适宜原有结构和功能原有结构和功能3.动动物物细细胞胞培培养养与与动动物物组组织织培培养养方方法法的的主主要要区别区别(1)动物细胞培养过程中需要用动物细胞培养过程中需要用_等使组织块中的细胞离散。等使组织块中的细胞离散。(2)动动物物组组织织培培养养过过程程中中不不需需要要使使用用_等。等。胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋胰蛋白酶白酶4.培养过程培养过程(1)原原代代培培养养是是指指从从供供体体获获取取组组织织或或细细胞胞后后的的_培养。培养。(2)传传代代培培养养是是指指将将_的的细细胞胞分分离离稀释后转入新的培养瓶中继续培养。稀释后转入新的培养瓶中继续培养。(3)一一般般情情况况下下，传传代代培培养养_后后，细胞增殖会明显缓慢，甚至完全停止。细胞增殖会明显缓慢，甚至完全停止。初次初次原代培养原代培养1050次次想一想想一想动物细胞培养如何检测有毒物质毒性的大小？动物细胞培养如何检测有毒物质毒性的大小？提提示示：用用含含有有一一定定浓浓度度有有毒毒物物质质的的细细胞胞培培养养液液和和正正常常细细胞胞培培养养液液同同时时培培养养正正常常细细胞胞，通通过过对对照观察变异细胞的百分数来确定其毒性强弱。照观察变异细胞的百分数来确定其毒性强弱。 二、细胞核移植与动物体细胞克隆二、细胞核移植与动物体细胞克隆1.动物体细胞克隆动物体细胞克隆(1)概概念念：将将供供体体体体细细胞胞的的_与与受受体体去去核核卵卵细细胞胞的的细细胞胞质质进进行行_，借借助助于于_的的发发育育能能力力，经经过过培培养养发发育育成胚胎进而形成成胚胎进而形成_的技术。的技术。(2)关键技术：关键技术：_技术。技术。细胞核细胞核人工组合人工组合卵细胞卵细胞个体个体细胞核移植细胞核移植2.细细胞胞核核移移植植：是是一一种种利利用用显显微微操操作作技技术术将将某某种种动动物物的的细细胞胞核核移移入入同同种种或或异异种种动动物物的的去去除细胞核的成熟除细胞核的成熟_内的技术。内的技术。三、细胞融合和单克隆抗体三、细胞融合和单克隆抗体1.细胞融合细胞融合(1)概概念念：指指在在一一定定条条件件下下将将_细胞融合为细胞融合为_细胞的过程。细胞的过程。卵细胞卵细胞两个或多个两个或多个一个一个(2)促促进进细细胞胞融融合合的的方方法法：主主要要有有_ (如如电电激激法法)、化化学学法法(如如用用_作作为为诱诱导导剂剂)和和生生物物法法(如如用用灭灭活活的的_作作为为诱诱导导剂剂)。目目前前物物理理法法融融合合效效率率较较高高，且且对对细细胞胞伤伤害害小小，易易操操作作、控控制制和和观观察察，在在实验室被广泛使用。实验室被广泛使用。(3)最重要的用途：制备最重要的用途：制备_。物理法物理法聚乙二醇聚乙二醇仙台病毒仙台病毒单克隆抗体单克隆抗体2.单克隆抗体制备的基本原理单克隆抗体制备的基本原理单单个个的的效效应应B淋淋巴巴细细胞胞只只能能产产生生_抗抗体体，骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞具具有有_的的能能力力，若若将将小小鼠鼠的的B淋淋巴巴细细胞胞与与骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞相相融融合合,首首先先形形成成_细细胞胞，随随后后该该细细胞胞通通过过多多次次增增殖殖形形成成一一群群这这样样的的细细胞胞，这这些些细细胞胞即即可可产生大量的产生大量的_抗体。抗体。一种一种无限增殖无限增殖杂交杂交单克隆单克隆判一判判一判(1)动动物物体体细细胞胞克克隆隆的的动动物物核核遗遗传传物物质质来来源源唯一唯一()(2)核移植的供体和受体一定是同一物种核移植的供体和受体一定是同一物种()(3)鼠鼠的的单单克克隆隆抗抗体体能能用用于于人人体体疾疾病病的的治治疗疗()要要点点突突破破讲讲练练互互动动要点突破要点突破要点突破要点突破要点一要点一动物细胞与组织培养动物细胞与组织培养1.基本条件基本条件(1)无无菌菌环环境境：应应保保证证被被培培养养的的细细胞胞处处于于无无菌菌，即即对对培培养养液液和和所所有有的的培培养养用用具具进进行行无无菌菌处理。处理。(2)营营养养：细细胞胞体体外外培培养养所所需需营营养养物物质质与与体体内内的的环环境境基基本本相相同同。例例如如,需需要要有有糖糖、氨氨基基酸酸、促促生生长长因因子子、无无机机盐盐、微微量量元元素素等等。将将细细胞胞所所需需的的上上述述营营养养物物质质按按其其种种类类和和所所需需数数量量严严格格配配制制而而成成的的培培养养基基,称称为为合合成成培培养养基基。在在使使用用合合成成培培养养基基时时，通通常常需需加加入入血血清清、血血浆浆等等一些天然成分。一些天然成分。(3)温温度度和和pH：细细胞胞体体外外培培养养的的适适宜宜温温度度一一般般与与动动物物的的体体温温相相近近，哺哺乳乳动动物物多多以以36.50.5 为为宜宜。多多数数细细胞胞生生存存的的适适宜宜pH为为7.27.4。(4)气气体体环环境境：细细胞胞培培养养所所需需气气体体主主要要有有O2和和CO2，O2是是细细胞胞代代谢谢所所必必需需的的，CO2的的主要作用是维持培养液的主要作用是维持培养液的pH。特别提醒特别提醒(1)细细胞胞培培养养过过程程还还需需要要无无毒毒环环境境。在在细细胞胞培培养养液液中中添添加加一一定定量量的的抗抗生生素素，以以防防培培养养过过程程中中的的污污染染。应应定定期期更更换换培培养养液液，以以便便清清除除代代谢谢产产物物，防防止止细细胞胞代代谢谢产产物物积积累累对对细细胞胞自自身造成危害。身造成危害。(2)气气体体环环境境。进进行行细细胞胞培培养养时时,通通常常采采用用培培养养皿皿或或松松盖盖培培养养瓶瓶,将将其其置置于于含含95%空空气气加加5% CO2的混合气体的培养箱中进行培养。的混合气体的培养箱中进行培养。2.培养过程培养过程(1)原代培养原代培养材材料料：动动物物早早期期胚胚胎胎或或出出生生不不久久的的幼幼龄龄动动物物的的器器官官或或组组织织，因因为为这这些些组组织织或或器器官官中中的的细胞分化程度低细胞分化程度低,生命力旺盛生命力旺盛,分裂能力强。分裂能力强。过过程程：直直接接从从动动物物体体内内取取出出的的组组织织块块，用用胰胰蛋蛋白白酶酶使使其其分分散散成成单单个个细细胞胞，然然后后转转入入培培养瓶中进行培养的过程。养瓶中进行培养的过程。应用：适合药物测试、基因表达的研究。应用：适合药物测试、基因表达的研究。(2)传代培养传代培养原原代代培培养养到到一一定定程程度度，空空间间会会变变小小，营营养养会会减减少少，而而且且细细胞胞会会出出现现接接触触抑抑制制，如如果果还还需需要要继继续续进进行行细细胞胞培培养养，就就要要用用胰胰蛋蛋白白酶酶使使细细胞胞从从瓶瓶壁壁上上脱脱离离下下来来，重重新新形形成成悬悬浮浮细细胞胞，分装到多个培养瓶中继续培养。分装到多个培养瓶中继续培养。(3)培养流程图培养流程图例例例例1 1 动动物物器器官官的的体体外外培培养养技技术术对对于于研研究究器器官官的的生生理理、病病理理过过程程及及其其机机制制意意义义重重大大。如如图图是是一一个个新新生生小小鼠鼠的的肝肝脏脏小小块块培培养养装装置置示示意意图图。请回答下列问题：请回答下列问题：(1)肝肝脏脏切切成成小小薄薄片片，这这有有利利于于肝肝脏脏细细胞胞_。(2)气气室室中中充充入入5%CO2气气体体的的主主要要作作用用是是_。(3)培培养养液液中中添添加加抗抗生生素素是是为为了了抑抑制制细细菌菌生生长长，但但要要注注意意选选择择抗抗生生素素的的_，以以保保证抗生素对肝脏无害。证抗生素对肝脏无害。(4)有机物有机物X有毒性，可诱发染色体断裂。利有毒性，可诱发染色体断裂。利用上图所示装置和提供的下列材料用具，探用上图所示装置和提供的下列材料用具，探究肝脏小块对有机物究肝脏小块对有机物X是否具有解毒作用。是否具有解毒作用。材料用具：材料用具：肝肝脏脏小小块块，外外周周血血淋淋巴巴细细胞胞，淋淋巴巴细细胞胞培培养养液，植物凝集素液，植物凝集素(刺激淋巴细胞分裂刺激淋巴细胞分裂)，显微，显微镜镜，载载玻玻片片，盖盖玻玻片片，玻玻璃璃皿皿，滴滴管管，吉吉姆姆萨染液萨染液(使染色体着色使染色体着色)，有机物，有机物X溶液等。溶液等。实验过程：实验过程：在在淋淋巴巴细细胞胞培培养养液液中中加加入入植植物物凝凝集集素素培培养养淋巴细胞，取淋巴细胞，取4等份备用。等份备用。利利用用甲甲、乙乙、丙丙、丁丁4组组上上图图所所示示装装置置,按按下表步骤操作下表步骤操作(“”表示已完成的步骤表示已完成的步骤)。甲甲乙乙丙丙丁丁步骤一：加入步骤一：加入肝脏培养液肝脏培养液步骤二：加入步骤二：加入有机物有机物X溶液溶液步骤三：放置步骤三：放置肝脏小块肝脏小块上表中还需进行的操作是上表中还需进行的操作是_。培培养养一一段段时时间间后后，取取4组组装装置置中中的的等等量量培培养养液液，分分别别添添加加到到4份份备备用用的的淋淋巴巴细细胞胞培培养养液中继续培养。液中继续培养。一段时间后取淋巴细胞分别染色、制片。一段时间后取淋巴细胞分别染色、制片。在显微镜下观察在显微镜下观察_，并对比分析。若，并对比分析。若丙组淋巴细胞出现异常，而甲组的淋巴细胞丙组淋巴细胞出现异常，而甲组的淋巴细胞正常，则说明正常，则说明_。【思思路路点点拨拨】考考查查了了动动物物细细胞胞组组织织培培养养技技术术的的应应用用。围围绕绕细细胞胞与与培培养养液液之之间间的的物物质质交交换换，气气体体条条件件，无无毒毒环环境境的的需需求求，结结合合染染色色体体的的变变异异考考查查动动物物细细胞胞培培养养在在物物质质毒毒性性鉴鉴定定方面的应用。方面的应用。【解解析析】肝肝脏脏是是动动物物体体内内最最大大的的消消化化腺腺，还还有有造造血血和和解解毒毒功功能能。将将肝肝脏脏切切成成小小薄薄片片，可可使使肝肝细细胞胞直直接接接接触触培培养养液液，有有利利于于肝肝细细胞胞吸吸收收氧氧气气和和营营养养物物质质、排排出出代代谢谢废废物物。向向培培养养液液中中充充入入5%CO2，有有利利于于维维持持培培养养液液的的pH。添添加加抗抗生生素素可可抑抑制制细细菌菌生生长长，但但不不能能用错、用多，否则会伤害甚至杀死肝细胞。用错、用多，否则会伤害甚至杀死肝细胞。【答答案案】(1)吸吸收收氧氧气气和和营营养养物物质质、排排出出代谢废物代谢废物(2)维持培养液适宜的维持培养液适宜的pH(3)种类和剂量种类和剂量(4)向向乙乙(或或丁丁)组组装装置置中中放放置置肝肝脏脏小小块块染染色色体体形形态态和和数数量量肝肝脏脏小小块块对对有有机机物物X具有解毒作用具有解毒作用变式训练变式训练1.(2012东东北北师师大大附附中中高高二二期期末末)某某研研究究小小组组为为测测定定药药物物对对体体外外培培养养细细胞胞的的毒毒性性，准准备备对对某某种种动动物物的的肝肝肿肿瘤瘤细细胞胞(甲甲)和和正正常常肝肝细细胞胞(乙乙)进进行行动动物物细细胞胞培培养养。下下列列叙叙述述中中，不不正正确确的的是是() A当当贴贴壁壁的的甲甲细细胞胞分分裂裂生生长长到到表表面面相相互互接接触触时时，细细胞胞就就会会停停止止分分裂裂增增殖殖，称称为为接接触触性性抑制抑制B为为了了防防止止细细胞胞培培养养过过程程中中细细菌菌的的污污染染，可向培养液中加入适量的抗生素可向培养液中加入适量的抗生素C甲甲、乙乙细细胞胞培培养养都都应应在在36.50.5 、pH 7.27.4环境中环境中D人人们们通通常常将将从从正正常常肝肝脏脏组组织织消消化化后后初初次次培养乙细胞的过程为原代培养培养乙细胞的过程为原代培养解析：选解析：选A。甲细胞是肝肿瘤细胞，在体外。甲细胞是肝肿瘤细胞，在体外培养是无限增殖，癌细胞表面糖蛋白减少，培养是无限增殖，癌细胞表面糖蛋白减少，不存在接触抑制的现象。不存在接触抑制的现象。要点二要点二细胞核移植与动物体细胞细胞核移植与动物体细胞克隆克隆1.原理：细胞核的全能性。原理：细胞核的全能性。2.动物细胞全能性的特点动物细胞全能性的特点动动物物细细胞胞的的全全能能性性随随着着动动物物细细胞胞分分化化程程度度的的提提高高而而逐逐渐渐受受到到抑抑制制，全全能能性性表表达达很很难难，但但动动物物的的细细胞胞核核内内仍仍含含有有该该种种动动物物的的全全部部遗遗传传基基因因，具具有有发发育育成成完完整整个个体体的的潜潜能能，即即动动物物的细胞核仍具有全能性。的细胞核仍具有全能性。3.细胞核全能性表达的条件细胞核全能性表达的条件不不能能只只靠靠动动物物的的细细胞胞核核，必必须须提提供供促促进进细细胞胞核核表表达达全全能能性性的的物物质质和和营营养养条条件件，才才能能保保证证细细胞胞核核全全能能性性的的表表达达，去去核核的的卵卵母母细细胞胞是是最最合合适适的的细细胞胞，因因为为卵卵母母细细胞胞含含有有促促使使细细胞胞核核表表达达全全能能性性的的物物质质和和营营养养条条件件,另另外外体体积积大大、易操作。易操作。(3)体细胞核移植技术的应用体细胞核移植技术的应用加加速速家家畜畜遗遗传传改改良良进进程程，促促进进优优良良畜畜群群繁繁育育。保保护护濒濒危危物物种种,增增大大存存活活数数量量。生生产珍贵的医用蛋白产珍贵的医用蛋白.作为异种移植的供体作为异种移植的供体.用于组织、器官移植等。用于组织、器官移植等。5.动物体细胞克隆的一般过程动物体细胞克隆的一般过程特别提醒特别提醒(1)动动物物细细胞胞克克隆隆利利用用的的技技术术主主要要包包括括动动物物体体细细胞胞核核移移植植技技术术、动动物物细细胞胞培培养养技技术术和和胚胚胎胎移植。移植。(2)动物体细胞核移植产生的新个体的亲本有动物体细胞核移植产生的新个体的亲本有三个：体细胞核供体、卵细胞细胞质供体、三个：体细胞核供体、卵细胞细胞质供体、代孕母体。新个体细胞核基因型与体细胞核代孕母体。新个体细胞核基因型与体细胞核供体完全一样，因此新个体性状与体细胞核供体完全一样，因此新个体性状与体细胞核供体基本相同。卵细胞细胞质中也有少量供体基本相同。卵细胞细胞质中也有少量DNA，即线粒体，即线粒体DNA，新个体性状与卵细，新个体性状与卵细胞供体也有一些地方相同。代孕母体没有为胞供体也有一些地方相同。代孕母体没有为新个体提供遗传物质，性状之间没有联系。新个体提供遗传物质，性状之间没有联系。(3)克克隆隆可可分分以以下下三三个个层层次次：分分子子水水平平，如如DNA复复制制；细细胞胞水水平平，如如动动物物细细胞胞培培养；养；个体水平，如个体水平，如“多利多利”羊的诞生。羊的诞生。例例例例2 2 下下图图是是利利用用核核移移植植技技术术培培育育克克隆隆牛牛的的过程示意图。下列有关叙述错误的是过程示意图。下列有关叙述错误的是()A供供体体乳乳腺腺细细胞胞不不经经过过核核质质分分离离也也可可以以整整个细胞注入去核的卵母细胞中个细胞注入去核的卵母细胞中B重重构构卵卵形形成成后后需需要要用用蛋蛋白白酶酶制制剂剂激激活活其其分裂能力分裂能力C当当重重构构卵卵进进行行细细胞胞分分裂裂和和分分化化形形成成早早期期胚胎时，就可以移植了胚胎时，就可以移植了D克克隆隆牛牛D的的性性状状大大部部分分和和良良种种母母牛牛B相相同同，如性别如性别【思思路路点点拨拨】本本题题考考查查了了体体细细胞胞克克隆隆的的基基本过程。以各个环节的特点和操作为考点。本过程。以各个环节的特点和操作为考点。【解解析析】 核核移移植植的的操操作作有有两两种种形形式式，一一种种是是利利用用微微型型吸吸管管吸吸取取细细胞胞核核，然然后后显显微微注注射射到到去去核核的的卵卵母母细细胞胞中中，另另外外是是直直接接显显微微注注入入细细胞胞，也也能能获获得得重重构构卵卵。重重构构卵卵的的激激活活需需要要电电脉脉冲冲、钙钙离离子子载载体体以以及及蛋蛋白白酶酶抑抑制制剂剂等等,不不是是蛋蛋白白酶酶制制剂剂。移移植植的的胚胚胎胎必必需需是是早早期期胚胚胎胎。克克隆隆牛牛D的的核核基基因因全全部部来来自自良良种种母母牛牛B，因因此此性状大部分相同。性状大部分相同。【答案答案】 B变式训练变式训练2.(2012无无锡锡高高二二检检测测)乙乙马马的的卵卵细细胞胞核核被被甲甲马马的的体体细细胞胞核核置置换换后后，这这个个卵卵细细胞胞经经过过多多次次分分裂裂，再再植植入入丙丙马马的的子子宫宫内内发发育育，结结果果产产下下一只小马。下列叙述正确的是一只小马。下列叙述正确的是()A直直接接在在体体外外对对甲甲马马的的体体细细胞胞进进行行诱诱导导也也能培养出胚胎来能培养出胚胎来B小马的性状完全与甲马相同小马的性状完全与甲马相同C此项技术可用于保护濒危物种此项技术可用于保护濒危物种D该该过过程程可可以以很很好好地地证证明明动动物物细细胞胞的的全全能能性性解解析析：选选C。克克隆隆过过程程中中细细胞胞质质中中遗遗传传物物质质来来自自一一方方,而而细细胞胞核核中中遗遗传传物物质质来来自自另另一一方方,所所以以小小马马与与甲甲马马不不完完全全一一致致，该该过过程程只只能能说说明明动动物物细细胞胞核核具具有有全全能能性性，而而动动物物细细胞胞全全能能性的体现目前还没成功。性的体现目前还没成功。1.动物细胞融合动物细胞融合(1)概概念念：指指两两个个或或多多个个动动物物细细胞胞结结合合形形成成一一个个细细胞胞的的过过程程。不不同同类类型型的的动动物物细细胞胞之之间间能进行融合，形成杂种细胞。能进行融合，形成杂种细胞。 (2) 原理：细胞膜的流动性。原理：细胞膜的流动性。要要点三点三细胞融合和单克隆抗体细胞融合和单克隆抗体(3)诱诱导导方方法法：物物理理和和化化学学方方法法与与植植物物体体细细胞胞杂杂交交相相同同，如如用用聚聚乙乙二二醇醇、电电激激法法等等，还还可采用生物方法：灭活的病毒。可采用生物方法：灭活的病毒。(4)过过程程：细细胞胞融融合合的的过过程程依依次次是是细细胞胞膜膜(质质膜膜)融融合合、细细胞胞质质融融合合和和细细胞胞核核融融合合。细细胞胞膜膜融融合合是是细细胞胞融融合合的的先先导导。没没有有细细胞胞膜膜的的融融合，就不会有细胞质和细胞核的融合。合，就不会有细胞质和细胞核的融合。2.单克隆抗体单克隆抗体(1)概概念念：通通过过细细胞胞融融合合技技术术获获得得的的杂杂交交瘤瘤细细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体.(2)制备过程制备过程(3)特特点点：特特异异性性强强、灵灵敏敏度度高高、产产量量大大、容易标准化生产。容易标准化生产。(4)制制备备条条件件：无无菌菌、无无毒毒的的环环境境，营营养养全全面面,适宜的温度和适宜的温度和pH，气体条件符合要求。，气体条件符合要求。(5)作作用用：治治疗疗恶恶性性肿肿瘤瘤，治治疗疗免免疫疫系系统统的的紊紊乱乱导导致致的的各各种种疾疾病病，治治疗疗器器官官移移植植后后的的免免疫排斥。疫排斥。特别提醒特别提醒(1)从从小小鼠鼠或或其其他他动动物物体体中中取取B淋淋巴巴细细胞胞前前必必须须先先注注射射抗抗原原，使使其其体体内内发发生生免免疫疫反反应应，而而且且参参与与融融合合的的细细胞胞应应是是效效应应B细细胞胞(只只有有效效应应B细细胞胞能能产产生生抗抗体体)或或已已免免疫疫过过的的B淋淋巴巴细细胞胞,不能简单地说不能简单地说B淋巴细胞。淋巴细胞。(2)融融合合过过程程中中一一共共有有五五种种细细胞胞(一一般般只只考考虑虑了了细细胞胞两两两两融融合合)，未未融融合合的的有有两两种种，已已融融合的有三种，符合要求的只有杂交瘤细胞。合的有三种，符合要求的只有杂交瘤细胞。(3)两两次次筛筛选选：第第一一次次利利用用选选择择培培养养基基筛筛选选出出杂杂交交瘤瘤细细胞胞，第第二二次次是是筛筛选选出出能能分分泌泌特特定定抗体的杂交瘤细胞。抗体的杂交瘤细胞。 如如图图表表示示用用生生物物工工程程制制备备人人抗抗A抗抗体的过程。请回答下列问题。体的过程。请回答下列问题。(1)图图中中细细胞胞1是是小小鼠鼠体体内内注注入入人人A型型血血红红细细胞胞后后获获得得的的_细细胞胞，这这种种细细胞胞具具有有产产生生_的的特特点点，但但难难以以在在体体外外培培养养。甲甲培培养养皿皿中中培培养养的的细细胞胞2是是从从患患骨骨髓髓瘤瘤的的小小鼠鼠体体内内获获取取的的骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞，这这种种细细胞胞在在体体外外培培养时能养时能_，但不会产生抗体。，但不会产生抗体。例例例例3 3(2)为为了了能能充充分分发发挥挥上上述述两两种种细细胞胞各各自自的的特特点点，经经特特殊殊处处理理，在在促促细细胞胞融融合合因因子子的的作作用用下下，使使两两种种细细胞胞发发生生融融合合，形形成成图图中中的的细细胞胞3，这这种种细细胞胞称称为为_。把把它它在在乙乙培培养养皿皿中中进进行行培培养养，则则能能产产生生大大量量的的细细胞胞群群，这这种方法称为种方法称为_。(3)过程过程的主要目的是的主要目的是_。通过过程通过过程或或的培养方法能产生大量的培养方法能产生大量_抗体。抗体。【解析解析】由于抗体具有专一性，而不同的由于抗体具有专一性，而不同的效应效应B细胞产生的抗体是不同的，因此单克细胞产生的抗体是不同的，因此单克隆抗体的制备的首要步骤就是获得相应的效隆抗体的制备的首要步骤就是获得相应的效应应B细胞。图中细胞细胞。图中细胞1应是小鼠体内注入人应是小鼠体内注入人A型血红细胞后而获得的效应型血红细胞后而获得的效应B细胞，这种细细胞，这种细胞能分泌单一的特异性抗体。胞能分泌单一的特异性抗体。2是骨髓瘤细是骨髓瘤细胞，胞，3是骨髓瘤细胞和是骨髓瘤细胞和B细胞融合形成的杂交细胞融合形成的杂交瘤细胞。乙是在具有筛选作用的培养基上瘤细胞。乙是在具有筛选作用的培养基上培培养养，目目的的是是筛筛选选出出杂杂交交瘤瘤细细胞胞。这这种种细细胞胞既既具具有有效效应应B细细胞胞能能产产生生抗抗体体的的特特点点，又又具具有有骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞在在体体外外大大量量增增殖殖的的本本领领，因因此此可可获获得得大大量量的的化化学学性性质质单单一一的的抗抗体体。是是筛筛选选出出能能产产生生单单一一抗抗A型型血血抗抗体体的的杂杂交交细细胞胞。是是将将能能产产生生单单一一抗抗体体的的杂杂交交瘤瘤细细胞胞在在体体外外适适宜宜条条件件下下做做大大规规模模培培养养，或或注注射射到到小小鼠鼠腹腹腔内增殖。腔内增殖。【答答案案】(1)效效应应B淋淋巴巴单单一一的的抗抗A抗抗体体(或单一的特异性抗体或单一的特异性抗体)快速大量增殖快速大量增殖(2)杂杂交交瘤瘤细细胞胞单单克克隆隆(3)筛筛选选出出能能产产生生单一抗单一抗A抗体的杂交瘤细胞抗体的杂交瘤细胞抗抗A单克隆单克隆变式训练变式训练3.(2012无无锡锡期期末末)将将小小鼠鼠骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞与与一一种种效效应应B细细胞胞融融合合，融融合合的的细细胞胞经经培培养养产产生生单克隆抗体，下列相关叙述错误的是单克隆抗体，下列相关叙述错误的是()A效效应应B细细胞胞只只有有与与骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞融融合合后后才才能产生抗体能产生抗体B效效应应B细细胞胞与与骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞融融合合常常在在聚聚乙乙二醇或灭活的病毒诱导下完成二醇或灭活的病毒诱导下完成C获获取取效效应应B细细胞胞前前，要要给给小小鼠鼠注注射射相相应应的抗原的抗原D如如果果细细胞胞为为两两两两融融合合，则则培培养养液液中中一一共共可以收集到可以收集到3种不同的融合细胞种不同的融合细胞解解析析：选选A。效效应应B细细胞胞的的功功能能特特点点是是能能够够合合成成和和分分泌泌某某种种抗抗体体，与与是是否否与与骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞融融合合无无关关。诱诱导导动动物物细细胞胞融融合合有有物物理理的的、化化学学的的以以及及生生物物的的方方法法，使使用用聚聚乙乙二二醇醇是是化化学学方方法法，使使用用灭灭活活的的病病毒毒属属于于生生物物的的方方法法。给给小小鼠鼠注注射射相相应应的的抗抗原原能能够够促促进进小小鼠鼠发发生生特特异异性免疫反应。性免疫反应。易错警示易错警示易错警示易错警示体细胞克隆与单克隆抗体制备过程的比较体细胞克隆与单克隆抗体制备过程的比较【例例题题】(2012信信阳阳高高二二检检测测)下下面面两两幅幅图图分分别别是是单单克克隆隆抗抗体体制制备备过过程程和和克克隆隆羊羊培培育育过程示意图，请据图回答下列问题：过程示意图，请据图回答下列问题：(1)图图甲甲和和图图乙乙所所示示的的过过程程中中，都都必必须须用用到到的动物细胞工程技术手段是的动物细胞工程技术手段是_。(2)图图甲甲中中过过程程常常在在_诱诱导导下下完完成成，过过 程程 与与 体体 外外 培培 养养 相相 比比 ， 其其 优优 点点 是是_。(3)图图甲甲中中，单单克克隆隆抗抗体体最最终终可可从从_中提取。中提取。(4)单克隆抗体能定向攻击癌细胞，主要是单克隆抗体能定向攻击癌细胞，主要是利用其利用其_。(5)若不考虑环境因素影响，克隆羊的性状全部像白面绵羊吗？_。原因是_。(6)图乙过程的技术具有多种用途，但是不能()A有选择地繁殖某一性别的家畜B繁殖家畜中的优良个体 C用于保存物种D改变动物的核基因(7)在在目目前前现现有有技技术术条条件件下下，还还不不能能将将从从动动物物体体内内分分离离出出来来的的成成熟熟的的体体细细胞胞直直接接培培养养成成一一个个新新个个体体，而而是是必必须须将将体体细细胞胞的的细细胞胞核核移移植植到到去去核核的的卵卵细细胞胞中中才才能能发发育育成成新新个个体体，你你认为其原因最可能是认为其原因最可能是 ()A卵细胞大，便于操作卵细胞大，便于操作B卵细胞含有的营养物质多卵细胞含有的营养物质多C卵卵细细胞胞的的细细胞胞质质可可使使体体细细胞胞细细胞胞核核的的全全能性得到表达能性得到表达D重组细胞才具有全能性重组细胞才具有全能性【解析解析】单克隆抗体制备和克隆羊的培育过单克隆抗体制备和克隆羊的培育过程不同，但都用到了动物细胞培养技术。杂程不同，但都用到了动物细胞培养技术。杂交瘤细胞的体内培养不需要特定的培养基，交瘤细胞的体内培养不需要特定的培养基，亦无须严格的外界环境条件，在动物体内环亦无须严格的外界环境条件，在动物体内环境境(腹水腹水)中即可完成。产生单克隆抗体的杂中即可完成。产生单克隆抗体的杂交瘤细胞的克隆方式有两种交瘤细胞的克隆方式有两种(体外和体内培体外和体内培养养),因此可以从培养液或腹水中提取抗体。因此可以从培养液或腹水中提取抗体。单克隆抗体具有特异性强单克隆抗体具有特异性强,灵敏度高的特性。灵敏度高的特性。特异性强是生物导弹使用单克隆抗体的原因特异性强是生物导弹使用单克隆抗体的原因,能够准确的找到相应的细胞，体现了单克隆能够准确的找到相应的细胞，体现了单克隆抗体的导向作用。生物性状是由基因和环境抗体的导向作用。生物性状是由基因和环境因素共同作用的结果。体细胞克隆不能改变因素共同作用的结果。体细胞克隆不能改变核基因。核基因。【答案答案】(1)动物细胞培养动物细胞培养(2)灭灭活活的的病病毒毒不不需需特特定定的的培培养养基基，不不需需严格的外界环境条件严格的外界环境条件 (3)培养液或腹水培养液或腹水(4)导向作用导向作用 (5)不不是是卵卵细细胞胞细细胞胞质质的的遗遗传传物物质质也也能能控控制某些性状制某些性状(6)D(7)C【纠纠错错笔笔记记】(1)动动物物细细胞胞培培养养是是动动物物细细胞胞工工程程的的基基本本技技术术，在在核核移移植植和和细细胞胞融融合合中中都要利用到。都要利用到。(2)细胞核移植的受体细胞是去核的卵细胞。细胞核移植的受体细胞是去核的卵细胞。(3)体体细细胞胞克克隆隆证证明明了了高高度度分分化化的的动动物物细细胞胞核具有全能性。核具有全能性。(4)单单克克隆隆抗抗体体的的特特异异性性强强能能够够准准确确找找到到靶靶细胞。细胞。