淋球菌适宜临床检验技术介绍淋球菌适宜临床检验技术介绍 张树文张树文中国医学科学院皮肤病医院中国医学科学院皮肤病医院全国性病麻风病控制中心全国性病麻风病控制中心淋球菌，学名淋病奈瑟球菌，是淋病的病淋球菌，学名淋病奈瑟球菌，是淋病的病原体，属奈瑟球菌。原体，属奈瑟球菌。 典型男性淋病病人图片典型男性淋病病人图片 典型女性淋病病人图片典型女性淋病病人图片 60%的女性淋病患者无明显自觉症状，呈亚临床或带菌状态。 无症状女性淋病携带者在传播淋球菌感染中起重要作用，也是引起新生儿淋病的主要原因。 所以，在孕前准确地筛查出女性淋病携带者对于预防新生儿淋病有重要意义。 微生物三大类检测方法微生物三大类检测方法1 1、微生物涂片及分离培养、微生物涂片及分离培养+ +生化鉴定生化鉴定 是传统的经典的方法，已有100多年历史。 目的：目的：寻找病原体。2 2、免疫学检测方法、免疫学检测方法 测抗原测抗原：多用于局部感染局部感染的微生物，如淋球菌、衣原体、白念、滴虫等。 测抗体测抗体：多用于血行或全身血行或全身感染的微生物，如艾滋、梅毒、乙肝、丙肝等。 自70年代开始发展，目前有酶免法、免疫层析法、化学发光法、荧光免 疫法等。 目的目的：寻找能代表病原体的特殊蛋白成分（抗原）或人产生的针对该种微生物的 特异性抗体。3 3、分子生物学方法、分子生物学方法 自90年代迅速发展，检测DNA或RNA，其中最具代表性的为PCR检测。 目的目的：寻找能代表病原体的核酸。 淋球菌三大类检测方法1.病原体检查：涂片加培养及其生化鉴定2.免疫学检测：免疫层析法测抗原3.分子生物学检测：PCR测DNA一、涂片法一、涂片法用拭子取男性前尿道分泌物，或女性宫颈分泌物均匀涂抹在玻片上，经固定及革兰氏染色后，在显微镜下寻找具有典型形态特征的淋球菌。 涂片法优点：简便快捷，成本低廉； 对男性淋病的准确度可达到90%以上 。涂片法缺点：1.患者就诊前曾经服用抗生素，涂片 法将难以找到典型特征的淋球菌。 2.不能用于女性淋病的筛查。 二二、培养法培养法 用T-M淋球菌培养基对男、女生殖道分泌物标本进行分离培养，如有典型的淋球菌菌落生长，必要时辅助某些生化反应，如氧化酶试验，可对疑似菌落进行确认。 优点：培养阳性能确认淋病患者无误，特异性为100%。 缺点：漏检较多；耗时2天，操作繁琐。 淋球菌培养要求在标本取材、运送、培养三个环节中，淋球菌必须保持活性。但在孕检项目实施过程中难以保证一一做到。 计生系统工作特点（县乡共同服务流程下乡、现场采集标本、标本运回县计生站统一检验）决定了标本中淋球菌难以存活。三、核酸检测三、核酸检测PCR是核酸类检测方法的代表。它检测的是淋球菌的DNA。优点：敏感性高，特异性好；对标本采集及运送的要求不高。缺点：需要PCR仪，对场地、人员和设备等要求均很高，操作过程复杂，试剂成本比较贵。 四、抗原检测四、抗原检测 检测标本中是否含有淋球菌特异性抗原的存在来判断标本中是否含有淋球菌。 该类方法因检测对象为淋球菌抗原，所以无论标本中淋球菌死活均可以顺利检出。 目前，商品化的抗原检测方法有免疫荧光法及免疫层析法。免疫荧光法免疫荧光法免疫荧光法因需用户配备荧光显微镜而不适宜基层使用。 免疫层析法免疫层析法免疫层析法因无需任何辅助仪器设备，可在15分钟内获得结果，应该是孕前优生项目实施过程中最适宜的技术。 免疫层析试剂示意图测试线测试线 （T线）线）控制线（控制线（C线）线）胶体金胶体金/乳胶垫乳胶垫吸水滤纸吸水滤纸样品垫样品垫NC膜（硝酸纤维素膜）膜（硝酸纤维素膜）层析方向层析方向PVC底板底板样品样品五、其他方法五、其他方法1.氧化酶实验：该方法应该由于淋球菌培养之后，对可疑菌落进行鉴定时使用。原理是淋球菌分泌产生的氧化酶可与氧化酶试条反应使其变色。 此方法并不能直接用于病人标本检测。因为取自病人的标本中，除淋球菌外，其它一些杂菌也可以分泌氧化酶。因此，直接用氧化酶试条与病人标本反应，既容易造成假阳性，也可因标本中淋球菌死亡而漏检。 2.过氧化氢酶试验：原理是利用淋球菌产生的过氧化氢酶水解过氧化氢产生氧和水，在淋球菌菌落上形成细小的气泡。俗称“发泡试验”：向患者尿液中滴加数滴过氧化氢溶液，摇晃后观察有无泡沫产生来判断是否为淋病。该方法的主要错误是：女性淋病主要感染宫颈，仅20%左右患者合并有尿路感染。测定女性尿液如何能判断宫颈部位是否有淋球菌？凡是尿液中蛋白质含量增多的情况，如肾小球肾炎等，均可因摇晃尿液而产生泡沫。患者标本中除淋球菌外，尚有大量其它杂菌，有些杂菌也可以产生过氧化氢酶，导致假阳性结果的产生，从而出现误诊。 综上所述，上述各种实验诊断方法各有优缺点，各单位可根据自己的工作条件，技术能力酌情采用适合的方法。 但无论采用什么方法或试剂时，需注意两点： 1.应有药监部门颁发的医疗器械注册证； 2.更应考虑该方法或试剂的科学性。 最终目的是：应该将有症状、无症状淋病患者准确地筛查出来。 就淋病而言，男性患者症状、体征明显，即使没有实验室检查也能依靠典型的临床症状体征基本正确诊断男性淋病患者。 女淋病患者多无明显症状及体征，因此，能否准确地筛查出无症状女性淋病携带者，成为评价一个实验室淋球菌检测能力的核心指标。 淋球菌检测方法及商品化试剂一览表淋球菌检测方法及商品化试剂一览表（至（至2012年年12月止）月止）方法或试剂注册证号主要优点主要缺点计生系统使用情况试剂成本(元/每人份)一、涂片镜检法一、涂片镜检法成本低廉，快速不能用于女性淋病筛查多，约占50% 低廉，0.1二、培养法二、培养法T-M培养基生产厂家众多，质量参差不齐特异性100%敏感性不够，常漏检；方法复杂，实用性差少，5%8三、抗原检测方法三、抗原检测方法免疫层析法免疫层析法a 南京黎明www.limingbio.com国食药监械(准)字2011第3401517号简便快速敏感特异；用同一支标本可同时检测衣原体成本稍贵10%15；淋球菌衣原体二联检测合计30b杭州艾康www.aconlabs.com.cn国食药监械(准)字2010第3400389号简便快速敏感性好成本稍贵10%15c 汕头润和www.runbio-bio.com粤食药监械（准）字2008第2400278号价廉快速敏感性较差，有漏检10%5免疫荧光法免疫荧光法深圳迈科龙www.microprofit.com国食药监械(准)字2010第3401157敏感性高特异性差，易假阳性；需配置荧光显微镜少，1%30淋球菌检测方法及商品化试剂一览表淋球菌检测方法及商品化试剂一览表（至（至2012年年12月止）月止）四、四、PCR方法方法广州达安基因www.daangene.com国食药监械(准)字2012第3401096号敏感性好，特异性高价格比较贵需PCR实验条件少，0.1%30五、其他方法五、其他方法桂林中辉桂食药监械(准)字2009第2400065号价廉快速科学性不够，准确性待查约10%3郑州安图www.autobio.com.cn豫食药监械(准)字2012第2400123号价廉快速科学性不够，准确性待查约10%5郑州博赛www.chinabiocell.com豫食药监械(准)字2009第2400052号方法或试剂注册证号主要优点主要缺点计生系统使用情况试剂成本(元/每人份)注：上述各试剂价格参自各产品在全国各地卫生系统中的中标价格，详情可参阅负责全国各地卫生系统医药耗材招标的“海虹医药电子交易中心”。谢谢！谢谢！