第三章第三章 药物的杂质检查药物的杂质检查药物分析课件药物分析课件药物的杂质检查(12)一、什么是药物的杂质？一、什么是药物的杂质？无治疗作用无治疗作用影响制剂质量影响制剂质量对人体有危害作用对人体有危害作用 氯化物、硫酸盐氯化物、硫酸盐水分水分砷盐、重金属砷盐、重金属处方中各种附加剂不称杂质处方中各种附加剂不称杂质第一节第一节 杂质和杂质限量检查杂质和杂质限量检查 药物的杂质检查(12) 药物的纯度药物的纯度 指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣，含有杂质是影响药物纯度的主要因素。 药物的杂质检查(12) 药物的纯度考虑杂质的生理作用，药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格药品只有两个等级：合格或不合格 化学试剂有很多等级，如基准试剂、化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（优级纯（GRGR）、分析纯（）、分析纯（ARAR）、化学）、化学纯（纯（CPCP）、色谱纯、光谱纯）、色谱纯、光谱纯药物纯度与化学纯度不同药物纯度与化学纯度不同药物的杂质检查(12)二、药物中杂质的来源与分类二、药物中杂质的来源与分类1. 生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物 （2）试剂、溶剂、催化剂类 （3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质药物的杂质检查(12)2. 贮藏过程中产生 水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等 药物的杂质检查(12)易发生水解反应的结构：易发生水解反应的结构： 酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等易发生氧化反应的结构：易发生氧化反应的结构： 醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等双键等药物的杂质检查(12)96：131在药物生产过程中引入杂质的途径为 A. 原料不纯或部分未反应完全的原料造成 B. 合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成 C. 需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成 D. 所用金属器皿及装置等引入杂质 E. 由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质 药物的杂质检查(12)3.杂质的分类杂质的分类 药物中的杂质按来源分为 1) 一般杂质：分布广泛，多数药物含有的如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质检查方法收载在中国药典的附录中药物的杂质检查(12) 2) 特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质 阿司匹林中的游离水杨酸 异烟肼中的游离肼 甾体激素中的其他甾体 特殊杂质检查方法收载在中国药典正文中药物的杂质检查(12)99x：85中中国国药药典典（1995年年版版）中中规规定定的的一一般般杂杂质质检检查查中中不不包包括括的的项项目目是是 A. 硫酸盐检查 B. 氯化物检查 C. 溶出度检查 D. 重金属检查 E. 砷盐检查 药物的杂质检查(12)杂质量杂质量 杂质限量杂质限量 杂质量杂质量药品合格药品合格药品不合格药品不合格（一）杂质检查法（一）杂质检查法 限量检查法限量检查法三、药物的限量检查三、药物的限量检查 在不影响疗效和不产生毒副作用的前提下，允许制在不影响疗效和不产生毒副作用的前提下，允许制剂中的杂质在一定限度范围内存在。因此，中国药典剂中的杂质在一定限度范围内存在。因此，中国药典规定的杂质检查规定的杂质检查均为限量检查均为限量检查。一般不要求准确测定含量，一般不要求准确测定含量， 只检查杂质是否超过限量只检查杂质是否超过限量药物的杂质检查(12)（二）杂质限量（二）杂质限量 允许药物含有杂质的最大量允许药物含有杂质的最大量（三（三 ）杂质限量的表示方法）杂质限量的表示方法（1）百分之几）百分之几（%）（2）百万分之几）百万分之几 （ppm 或或106）part per million0.000001或或110-6药物的杂质检查(12)（四）杂质限量的计算方法（四）杂质限量的计算方法VcSL药物的杂质检查(12)药物的杂质检查(12)（五）限量检查方法（五）限量检查方法 对照法对照法 即取一定量与被检杂质相同的纯即取一定量与被检杂质相同的纯物质或其他对照品配制成标准溶液，与一定量物质或其他对照品配制成标准溶液，与一定量供试品溶液，在相同实验条件下，比较反应结供试品溶液，在相同实验条件下，比较反应结果（如颜色深浅），从而确定杂质的含量是否果（如颜色深浅），从而确定杂质的含量是否超过规定的限度。超过规定的限度。药物的杂质检查(12)供试品供试品供试液供试液对照品对照品对照液对照液平行操作平行操作色斑色斑比较比较色斑色斑颜色颜色比色比色浑浊浑浊比浊比浊杂质最大杂质最大允许量允许量是否稀释是否稀释对照法：对照法：药物的杂质检查(12) 比比较较法法 采采用用重重量量法法、仪仪器器分分析析法法等等测测定定杂质的参数，并与杂质限量比较做出判断。杂质的参数，并与杂质限量比较做出判断。 灵敏度法灵敏度法 该法不用标准溶液进行对比分该法不用标准溶液进行对比分析，而是在供试品溶液中加入检测试剂，在一析，而是在供试品溶液中加入检测试剂，在一定条件下，观察有无反应发生，即以该反应的定条件下，观察有无反应发生，即以该反应的灵敏度来控制杂质限量。灵敏度来控制杂质限量。药物的杂质检查(12) 对乙酰胺基酚中氯化物的检查：取对乙酰胺基酚中氯化物的检查：取本品本品2.0g，加水，加水100ml，加热溶解后，冷，加热溶解后，冷却，滤过，取滤液却，滤过，取滤液25ml，依法检查，与，依法检查，与标准氯化钠溶液标准氯化钠溶液5.0ml（每（每1ml相当于相当于10ug的的Cl）制成的对照液比较，浊度不得）制成的对照液比较，浊度不得更大。问氯化物限量为多少？更大。问氯化物限量为多少？药物的杂质检查(12) 葡萄糖中重金属的检查：取本品葡萄糖中重金属的检查：取本品4.0g，加水加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液（溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，依法检查，含重金属量不得过，依法检查，含重金属量不得过百万分之五。问应取标准铅溶液多少百万分之五。问应取标准铅溶液多少ml（每（每1ml相当于相当于10ug的的Pb）？）？药物的杂质检查(12) 溴化钠中砷盐的检查：本品依法溴化钠中砷盐的检查：本品依法检查，应取标准溶液检查，应取标准溶液2.0ml（每（每1ml相相当于当于1ug的的As）制备砷斑，含砷量不）制备砷斑，含砷量不得过得过0.0004%。问应取供试品多少克？。问应取供试品多少克？药物的杂质检查(12) 检查维生素检查维生素C中的重金属时中的重金属时, 若取样量为若取样量为1.0g，要求含重金属不得，要求含重金属不得 过百万分之十，问应吸取标准铅溶液过百万分之十，问应吸取标准铅溶液 （每（每1ml0.01mg的的Pb）多少）多少ml？ A、0.2ml B、0.4ml C、2ml D、1ml E、20ml药物的杂质检查(12) 检查某药物中的砷盐，取标准检查某药物中的砷盐，取标准 砷溶液砷溶液2ml（每（每1ml相当于相当于1 g的的 As）制备标准砷斑，砷盐限量为）制备标准砷斑，砷盐限量为 0.0001，应取供试品的量为，应取供试品的量为 A、0.20g B、2.0g C、0.020g D、1.0g E、0.10g药物的杂质检查(12)第二节第二节 一般杂质检查一般杂质检查一般杂质检查规则一般杂质检查规则 药品检验操作标准规定： 遵循平行操作原则（1）仪器的配对性）仪器的配对性 （2）对照品与供试品的同步操作）对照品与供试品的同步操作药物的杂质检查(12) 对照 样品样品管所显颜色或浑浊浅于对照管样品管所显颜色或浑浊浅于对照管日光日光平行操作纳氏比色管背景（颜色）背景（颜色）药物的杂质检查(12)图甲管 乙管甲管 乙管自上向下透视自上向下透视药物的杂质检查(12)一、氯化物检查法一、氯化物检查法 c VS（一）原理（一）原理 对照法 药物的杂质检查(12)（二）操作（二）操作H2O至至40 ml H2O至至50 ml 供试液供试液对照液对照液1稀稀HNO3 10 ml2AgNO3TS 1 ml3暗处放置暗处放置5 min4比浊比浊5药物的杂质检查(12)1、酸性条件、酸性条件 （1）加速加速AgCl形成，产生较好的白色乳浊形成，产生较好的白色乳浊稀硝酸稀硝酸50ml溶液中含稀硝酸溶液中含稀硝酸10ml为宜为宜如如 Ag2CO3、Ag3PO4和和Ag2O（2）避免弱酸银盐的形成避免弱酸银盐的形成（三）测定条件（三）测定条件（3）避免氧化银沉淀生成避免氧化银沉淀生成药物的杂质检查(12)2、标准溶液标准溶液 氯化钠氯化钠 浓度浓度 10 g Cl /ml （所显浑浊梯度明显，相当于标准氯化钠（所显浑浊梯度明显，相当于标准氯化钠58ml）适宜检测范围适宜检测范围 5080 g / 50ml3、沉淀剂、沉淀剂 供试液和对照液稀释后，加硝酸银溶供试液和对照液稀释后，加硝酸银溶液，使生成液，使生成白色浑浊白色浑浊而不是白色沉淀而不是白色沉淀硝酸银硝酸银药物的杂质检查(12)4、避光、暗处放置、避光、暗处放置5分钟分钟后比浊后比浊 5、比浊方法、比浊方法 同置于同置于黑色背景黑色背景上，上， 自上向下观察自上向下观察因氯化银见光易分解因氯化银见光易分解药物的杂质检查(12)（四）干扰及排除（四）干扰及排除1、供试液若不澄清、供试液若不澄清 需过滤需过滤 用用含硝酸含硝酸的水洗净滤纸中的氯化物后再过滤样品的水洗净滤纸中的氯化物后再过滤样品2、供试品若有色、供试品若有色 （1）内消色法（倍量法）内消色法（倍量法）（2）外消色法）外消色法 使对照液与供试液颜色一致，再进行检查使对照液与供试液颜色一致，再进行检查药物的杂质检查(12)（1）内消色法（倍量法）内消色法（倍量法）两倍两倍量供量供试品试品溶液溶液溶液溶液1溶液溶液2反复反复过滤过滤加入标准加入标准 NaCl溶液溶液平分平分+ +AgNO3对照液对照液供试液供试液如如 枸橼酸铁铵（棕黄色）枸橼酸铁铵（棕黄色）药物的杂质检查(12)（2）外消色法）外消色法1、加合适的试剂使供试液褪色、加合适的试剂使供试液褪色 如如 KMnO7+乙醇乙醇褪色褪色2、向对照液加其他无干扰的有色、向对照液加其他无干扰的有色 溶液使与供试液颜色一致溶液使与供试液颜色一致 如如 稀焦糖溶液或标准比色液稀焦糖溶液或标准比色液药物的杂质检查(12)例1. 中国药典 （2000年版） 规定，检查氯化物杂质时，一般取用标准氯化钠溶液（10gCl/ml）58ml的原因是（D）A. 使检查反应完全B. 药物中含氯化物的量均在此范围C. 加速反应D. 所产生的浊度梯度明显E. 避免干扰 药物的杂质检查(12)例2. 采用硝酸银试液检查氯化物时，加 入 硝 酸 使 溶 液 酸 化 的 目 的 是（ABCDE）A加速生成氯化银浑浊反应B消除某些弱酸盐的干扰C消除碳酸盐干扰D消除磷酸盐干扰E避免氧化银沉淀生成药物的杂质检查(12)例3. 当采用比浊法检查氯化物杂质时，若药物本身有颜色而干扰检查的话，应该选用的处理方法为（AB）A内消色法B外消色法C比色法D差示比浊法 E差示可见分光法 药物的杂质检查(12)例4. 若要进行高锰酸钾中氯化物的检查，最佳方法是（D）A. 加入一定量氯仿提取后测定B. 氧瓶燃烧C. 倍量法D. 加入一定量乙醇E. 以上都不对药物的杂质检查(12)例5. 下列哪些条件为药物中氯化物检查的必要条件（ABC）A. 所用比色管需配套B. 稀硝酸酸性下(10ml/50ml)C. 避光放置5分钟D. 用硝酸银标准溶液做对照E. 在白色背景下观察 药物的杂质检查(12)二、硫酸盐检查法二、硫酸盐检查法（一）原理 对照法药物的杂质检查(12)H2O至至40 ml H2O至至50 ml 放置放置10 min（二）操作（二）操作供试液供试液对照液对照液1稀稀HCl 2 ml2BaCl2 5ml3比浊比浊4药物的杂质检查(12)（三）测定条件（三）测定条件 1、标准溶液标准溶液 硫酸钾硫酸钾 浓度浓度 100 g SO4 /ml 适宜检测范围适宜检测范围 100500 g / 50ml（相当于标准硫酸钾溶液（相当于标准硫酸钾溶液15ml)药物的杂质检查(12)2、酸性条件、酸性条件 稀盐酸稀盐酸50ml溶液中含稀盐酸溶液中含稀盐酸2ml为宜为宜4、比浊方法、比浊方法 同置于同置于黑色背景黑色背景上，上， 自上向下观察自上向下观察3、沉淀剂、沉淀剂 25氯化钡氯化钡 稀释后再加，使生成白色浑浊而不是稀释后再加，使生成白色浑浊而不是白色沉淀白色沉淀药物的杂质检查(12)5、供试液若不澄清、供试液若不澄清 需过滤需过滤 先用先用含盐酸含盐酸的水洗净滤纸中的水洗净滤纸中的硫酸盐后再过滤样品的硫酸盐后再过滤样品6、供试品若有色、供试品若有色 内消色法内消色法药物的杂质检查(12)三、铁盐检查法三、铁盐检查法1. 原理 对照法（一）硫氰酸盐法 ChP（2005）、USP（29）过硫酸铵过硫酸铵过硫酸铵过硫酸铵药物的杂质检查(12)（二）操作（二）操作2稀稀HCl 4 mlH2O至至35 ml H2O至至50 ml 1供试液供试液对照液对照液6比色比色3过硫酸铵过硫酸铵50mg4硫氰酸铵硫氰酸铵sol 3 ml环状结构的药物：需经炽灼破坏，使铁盐转环状结构的药物：需经炽灼破坏，使铁盐转 变成三氧化二铁变成三氧化二铁药物的杂质检查(12)（三）测定条件（三）测定条件1、标准溶液标准溶液 硫酸铁铵硫酸铁铵 FeNH4(SO4)212H2O 浓度浓度 10 gFe/ml 适宜检测范围适宜检测范围 1050 g / 50ml（相当于标准铁溶液（相当于标准铁溶液15ml）药物的杂质检查(12) 2、酸性条件、酸性条件 3、加过硫酸铵的目的加过硫酸铵的目的50ml溶液中含稀盐酸溶液中含稀盐酸4ml为宜为宜稀盐酸稀盐酸B、防止光线使反应产物硫氰、防止光线使反应产物硫氰 酸铁还原或分解褪色酸铁还原或分解褪色A、氧化氧化 Fe2+ 为为 Fe3+防止铁盐水解，避免弱酸盐的干扰药物的杂质检查(12)4、若供试液与对照液颜色不一致或、若供试液与对照液颜色不一致或 红色太浅红色太浅 可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色5、显色剂、显色剂 30%硫氰酸铵溶液硫氰酸铵溶液6、比色方法、比色方法 同置于同置于白色背景白色背景上，上， 自上向下观察自上向下观察药物的杂质检查(12)（二）巯基醋酸法 BP 对照法本法灵敏度较高，但试剂较贵本法灵敏度较高，但试剂较贵 药物的杂质检查(12)例1. 中国药典（2005年版）规定铁盐的检查方法为（A）A. 硫氰酸盐法B. 巯基醋酸法C. 普鲁士蓝法D 邻二氮菲法E. 水杨酸显色法药物的杂质检查(12)例2. 中国药典（2005年版）规定，硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸按的目的是（AB） A. 使药物中铁盐都转变为Fe3+ B. 防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色 C. 使产生的红色产物颜色更深 D防止干扰 E便于观察、比较 药物的杂质检查(12)例3. 某药物（黄色）欲进行铁盐检查，应采用下面哪种方法（E）A. 倍量法B. 微孔滤膜过滤法C. 调色法D. 600700炽灼残渣后测定E. 以上都不对 药物的杂质检查(12)例4. 中国药典收载的铁盐检查，主要是检查（D）A. FeB. Fe2+C. Fe3+D. Fe2+和Fe3+ E. 以上都不对 药物的杂质检查(12)四、重金属检查法四、重金属检查法（Heavy Metal Test） 重重金金属属定定义义 系系指指在在实实验验条条件件下下能能与与硫硫代代乙乙酰酰胺胺或或硫硫化化钠钠作作用用显显色色的的金金属属杂杂质质。药药品品中中常常见见的的重重金金属属有有铅铅、汞汞、砷砷、镉镉、铜铜等等，由由于于铅铅较较易易带带入入药药品品中中，且且对对人人体体危危害害较较大大，故故进进行行重金属检查时重金属检查时一般以铅为代表一般以铅为代表。 检查意义检查意义 重金属毒性较大，易积蓄，可导致机体严重中重金属毒性较大，易积蓄，可导致机体严重中毒症状。为保证药品的毒症状。为保证药品的安全性安全性，中国药典加强了重金属检查，中国药典加强了重金属检查力度，规定了重金属检查项目。力度，规定了重金属检查项目。例如阿胶的重金属限量不得例如阿胶的重金属限量不得过过30ppm30ppm，黄连上清丸的重金属限量不得过，黄连上清丸的重金属限量不得过25ppm25ppm，地奥心血，地奥心血康的重金属限量不得过康的重金属限量不得过20ppm20ppm 药物的杂质检查(12)（以铅为代表以铅为代表） ChP（2005）共收载四法）共收载四法 第四法（微孔滤膜法）第四法（微孔滤膜法）第三法（硫化钠法）第三法（硫化钠法）第二法（炽灼残渣法）第二法（炽灼残渣法）第一法（硫代乙酰胺法）第一法（硫代乙酰胺法）药物的杂质检查(12)（一）第一法（一）第一法1、原理、原理适用溶于适用溶于水、稀酸和乙醇水、稀酸和乙醇的药物的药物（硫代乙酰胺法）（硫代乙酰胺法）药物的杂质检查(12)2、操作、操作1供试液供试液对照液对照液H2O至至25 ml 放置放置2+pH 3.5缓冲液缓冲液2ml2硫代乙酰胺硫代乙酰胺2ml3比浊比浊4药物的杂质检查(12)3、测定条件、测定条件1）标准溶液标准溶液 硝酸铅硝酸铅 浓度浓度 10 g Pb/ml 适宜检测范围适宜检测范围 1020 g / 25ml（相当于标准铅溶液（相当于标准铅溶液12ml)药物的杂质检查(12)2）酸性条件）酸性条件3）沉淀剂）沉淀剂4）比浊方法）比浊方法 同置于同置于白色背景白色背景上，上， 自上向下观察自上向下观察（pH在在33.5时呈色完全）时呈色完全）25ml溶液中含缓冲液溶液中含缓冲液2ml为宜为宜醋酸盐缓冲液（醋酸盐缓冲液（pH3.5)硫代乙酰胺硫代乙酰胺药物的杂质检查(12)5、供试液若有色、供试液若有色（1）外消色法）外消色法 （3）改用第四法）改用第四法（2）内消色法）内消色法 向对照管中加稀焦糖溶液或向对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液其他无干扰的有色溶液（微孔滤膜法）（微孔滤膜法）药物的杂质检查(12)（二）第二法（二）第二法 （炽灼残渣法（炽灼残渣法 ） 适用于含芳环、杂环以及不溶于适用于含芳环、杂环以及不溶于 水、稀酸、乙醇及碱的有机药物水、稀酸、乙醇及碱的有机药物 将样品经将样品经500600炽灼炽灼后的残渣，后的残渣，用硝酸、盐酸处理后，按第一法检查用硝酸、盐酸处理后，按第一法检查注：含钠盐或氟的有机药物腐蚀瓷坩锅引入注：含钠盐或氟的有机药物腐蚀瓷坩锅引入重金属，应改用重金属，应改用铂坩锅或硬质玻璃蒸发皿铂坩锅或硬质玻璃蒸发皿药物的杂质检查(12)（三）第三法（三）第三法1、原理、原理 适用于适用于溶于碱而不溶于稀酸溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生或在稀酸中生成沉淀的药物，如磺胺类、巴比妥类药物等成沉淀的药物，如磺胺类、巴比妥类药物等（硫化钠法）（硫化钠法）药物的杂质检查(12)2、操作、操作供试液供试液对照液对照液 H2O 20ml比浊比浊 NaOH T.S. 5ml1 Na2ST.S. 5d2药物的杂质检查(12)3、测定条件、测定条件（1）碱性条件）碱性条件 （2）沉淀剂）沉淀剂氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液25ml溶液中含溶液中含5ml硫化钠硫化钠v注意：注意：Na2S对玻璃有一定腐蚀性，对玻璃有一定腐蚀性， 久置会产生絮状物，应临用新制久置会产生絮状物，应临用新制药物的杂质检查(12)（四）第四法（四）第四法 1、原理同第一法、原理同第一法2、试剂量减少、试剂量减少3、反应时间延长、反应时间延长（微孔滤膜法）（微孔滤膜法） 适用于含适用于含25 g重金属杂质及重金属杂质及有色供试液的检查有色供试液的检查依一法检查，结果微孔滤膜过滤后比较色斑依一法检查，结果微孔滤膜过滤后比较色斑药物的杂质检查(12)供试液供试液对照液对照液操作操作H2O 至至10mlpH 3.5缓冲液缓冲液2ml硫代乙酰胺硫代乙酰胺1ml放置放置10过滤过滤1ml/min比较比较铅斑铅斑v药典规定的一、二、四法是在酸性溶液 中，以硫代乙酰胺为显色剂； 三法则在碱性溶液中以硫化钠为显色剂药物的杂质检查(12)硫代乙酰胺硫代乙酰胺0.010.02mg Pb2+ /25ml33.5检测检测 范围范围pH试剂试剂适用适用范围范围第一法第一法第二法第二法第三法第三法第四法第四法NaOH33.50.002 0.005mg硫化钠硫化钠硫代硫代乙酰胺乙酰胺可溶于水可溶于水,稀酸和乙稀酸和乙醇的药物醇的药物不溶于水不溶于水,稀酸和乙稀酸和乙醇的药物醇的药物溶于碱溶于碱 的药物的药物25 g重金属、重金属、有色溶液有色溶液药物的杂质检查(12)97：78重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是（B）A. 1.5 B. 3.5 C7.5D. 9.5 E. 11.5药物的杂质检查(12)95： 84 微 孔 滤 膜 法 是 用 来 检 查（C）A. 氯化物 B. 砷盐C. 重金属 D. 硫化物E. 氰化物药物的杂质检查(12)例例1. 中国药典(2000年版)重金属检查法中，所使用的显色剂是（BC） A. 硫化氢试液 B. 硫代乙酰胺试液 C. 硫化钠试液 D. 氰化钾试液 E. 硫氰酸铵试液药物的杂质检查(12)例2. 葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是（C）A. 用硫代乙酰胺为标准对照液B. 用10ml稀硝酸/50ml酸化C. 在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中D. 用硫化钠为试液E. 结果需在黑色背景下观察 药物的杂质检查(12)例3. 现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用中国药典上收载的重金属检查的哪种方法（C）A. 一法B. 二法C. 三法D. 四法E. 以上都不对药物的杂质检查(12) 定义定义 砷盐检查系指用于药品中微量砷盐（以砷盐检查系指用于药品中微量砷盐（以AsAs计算）计算）的限量检查方法。的限量检查方法。 意义意义 三价砷盐毒性极强，可引起严重的中毒症，危三价砷盐毒性极强，可引起严重的中毒症，危害生命安全。中国药典规定了砷盐限量检查项目，害生命安全。中国药典规定了砷盐限量检查项目，如阿胶中砷盐含量不得过如阿胶中砷盐含量不得过3ppm3ppm，黄连上清丸中砷盐含量，黄连上清丸中砷盐含量不得过不得过2ppm2ppm。五、砷盐检查法（五、砷盐检查法（ Arsenic TestArsenic Test ） 药物的杂质检查(12)ChP（2005）古蔡氏法古蔡氏法二乙基二硫代氨基甲酸银法二乙基二硫代氨基甲酸银法Ag-DDC法法 药物的杂质检查(12)（一）古蔡氏法（一）古蔡氏法 1、原理、原理(黄色棕色黄色棕色)有机破坏有机破坏药物的杂质检查(12)2、操作、操作 （平行操作）（平行操作）H2O至至28ml Zn 2g放置放置 10供试液供试液对照液对照液1HCl5ml2 KI5ml3SnCl2 5滴滴4Pb(Ac)2 棉花棉花5HgBr2 试纸试纸6 4525407比较比较砷斑砷斑8锌粒应无砷锌粒应无砷立即观察立即观察药物的杂质检查(12)结果判断结果判断 供试品砷斑颜色比标准砷斑颜色浅或接近，则砷盐限量检查符合规定供试品砷斑颜色比标准砷斑颜色浅或接近，则砷盐限量检查符合规定 若供试品砷斑颜色比标准砷斑颜色深，则砷盐限量检查不符合规定若供试品砷斑颜色比标准砷斑颜色深，则砷盐限量检查不符合规定样品溶液样品溶液标准砷溶液标准砷溶液样品砷斑样品砷斑标准砷斑标准砷斑醋酸铅棉花醋酸铅棉花 H2S AsH3 还原反应还原反应 (25-40 )溴化汞试纸溴化汞试纸(三氧化二砷三氧化二砷)药物的杂质检查(12)3、测定条件、测定条件（1）标准溶液标准溶液 三氧化二砷三氧化二砷 (临用新配临用新配) 浓度浓度 1 gAs/ml适宜检测浓度适宜检测浓度 2 g / 33ml （相当于标准砷溶液（相当于标准砷溶液 2ml） 药典规定用药典规定用2ml制备标准砷斑制备标准砷斑（2）酸性条件）酸性条件33ml溶液中含溶液中含5ml盐酸盐酸2mol/l（亦是反应物）（亦是反应物）药物的杂质检查(12) （4）酸性氯化亚锡酸性氯化亚锡（SnCl2 0.3）A、使、使 As5+ As3+ C、与锌形成锌锡齐（去极化）、与锌形成锌锡齐（去极化） 使氢气均匀而连续地发生使氢气均匀而连续地发生B、 （褪色褪色） （3）碘化钾碘化钾（KI 2.5） 使使 As5+ As3+D、抑制、抑制SbH3的生成，消除微量的生成，消除微量Sb干扰干扰 催化加速生成催化加速生成AsH3反应反应能与能与Zn2+形成稳定的配位离子形成稳定的配位离子药物的杂质检查(12) （5）醋酸铅棉花）醋酸铅棉花 Pb(Ac) 2 消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰（6）溴化汞试纸）溴化汞试纸 Hg(Br) 2 与砷化氢作用形成砷斑与砷化氢作用形成砷斑醋酸铅棉花醋酸铅棉花60mg装管高度装管高度6080mm药物的杂质检查(12)测测砷砷瓶瓶测测砷砷管管Hg(Br)2试纸试纸Pb(Ac)2棉花棉花玻璃玻璃试管试管古古蔡蔡法法Ag(DDC)反应液反应液Ag(DDC)法法适用不含或含适用不含或含SbSb小于小于100100 g g供试供试品品 适用含适用含SbSb量量小于小于500500 g g的供试品的供试品药物的杂质检查(12)（二）（二）Ag-DDC法法直接比色或于直接比色或于510nm波长处测定吸收度波长处测定吸收度1、原理、原理(红色胶态红色胶态)药物的杂质检查(12)2、优点、优点（3）消除消除Sb干扰干扰（500 gSb不干扰测定）不干扰测定）（1）灵敏度高）灵敏度高 1 gAs/40ml （2）重现性好）重现性好药物的杂质检查(12)氯化物氯化物硫酸盐硫酸盐铁盐铁盐重金属重金属砷盐砷盐适宜适宜检测检测浓度浓度0.050.08mg/50ml0.20.5mg/50ml0.010.05mg/50ml0.010.02mg/25ml0.002mg/33ml标准标准溶液溶液氯化钠氯化钠10 g/ml硫酸钾硫酸钾100 g/ml硫酸铁铵硫酸铁铵10 g/ml硝酸铅硝酸铅10 g/ml三氧化二三氧化二砷砷1 g/ml沉淀沉淀或显或显色剂色剂硝酸银硝酸银氯化钡氯化钡硫氰硫氰酸铵酸铵硫代乙酰硫代乙酰胺或硫化胺或硫化钠钠溴化汞试溴化汞试纸纸Ag-DDC试试剂剂10 ml稀硝酸稀硝酸2 ml稀盐酸稀盐酸4 ml稀盐酸稀盐酸2ml醋酸醋酸盐缓冲液盐缓冲液5ml盐酸盐酸药物的杂质检查(12)六、溶液颜色检查法六、溶液颜色检查法 控制药物中有色杂质限量的方法 ChP(2005)采用三种方法检查 第一法第一法 目视比色法目视比色法 第二法第二法 分光光度法分光光度法 单一波长定量单一波长定量第三法第三法 色差计法色差计法 全波长范围定量全波长范围定量药物的杂质检查(12)观察方法观察方法 白色背景标准比色液的配制标准比色液的配制 药物的杂质检查(12)七、易炭化物检查法七、易炭化物检查法 检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质。 方法：H2SO4炭化后与对照液比较 药物的杂质检查(12)八、溶液澄清度检查法八、溶液澄清度检查法 检查药物中的微量不溶性杂质用作注射剂的原料药一般应作此项检查 1. 检查方法 对照法 等量等量药物的杂质检查(12) 2. 浊度标准液的配制药典规定浊度标准液作为澄清度检查的标准反应原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。浊度标准液（5个级号）须临用新制 (CH(CH2 2) )6 6N N4 4+6H+6H2 2O6HCHO+4NHO6HCHO+4NH3 3HCHO+HHCHO+H2 2N-NHN-NH2 2HH2 2C=N-CHC=N-CH2 2+H+H2 2O O药物的杂质检查(12) 检查有机药物中混入的无机杂质检查有机药物中混入的无机杂质 (金金属属氧氧化化物物或或无无机机盐盐类类) 亦亦称称为为硫硫酸酸灰灰分分原理原理 样样品品炭炭化化后后+ H2SO4湿湿润润700800炽灼至恒重炽灼至恒重炽灼残渣（炽灼残渣（硫酸灰分硫酸灰分）九、炽灼残渣检查法九、炽灼残渣检查法药物的杂质检查(12)v注意：加加硫酸硫酸处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐，处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐，并帮助有机物炭化并帮助有机物炭化遗留的炽灼残渣需留作重金属检查时，遗留的炽灼残渣需留作重金属检查时， 炽炽灼温度应控制在灼温度应控制在500-600500-600药物的杂质检查(12)例1. 炽灼残渣检查法一般加热恒重的温度为（C）A. 500600B. 600700C. 700800D. 8001000E. 10001200药物的杂质检查(12)例2. 炽灼残渣检查后，将残渣留作重金属检查时，炽灼温度应为（A）A. 500600B. 600700C. 700800D. 8001000E. 10001200药物的杂质检查(12)十、干燥失重测定法 干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，主要是水分，也包括其它挥发性物质药物的杂质检查(12)（一）常压恒温干燥法（一）常压恒温干燥法 适用于受热较稳定的药物,干燥温度一般为105 干燥失重：干燥时间一般在达到指定温度后干燥2-4h，第二次及以后各次称重均在规定条件下继续干燥1h后进行，直至恒重供试品平铺在称量瓶中的厚度供试品平铺在称量瓶中的厚度一般不超过一般不超过5mm药物的杂质检查(12)应用实例应用实例 板蓝根颗粒板蓝根颗粒( (无糖型无糖型) )的水分及挥发性成分测定的水分及挥发性成分测定药物的杂质检查(12) 计算计算 失重率（失重率（% %）=(m=(m1 1- -. .m m2 2)/m)/ms s100%100% m ml l 为测试前供试品和称量瓶重量，为测试前供试品和称量瓶重量，g g m m2 2 为干燥后供试品和称量瓶重量，为干燥后供试品和称量瓶重量，g g m ms s 为供试品重量，为供试品重量，g g恒重判断恒重判断 干干燥燥至至恒恒重重是是指指连连续续两两次次干干燥燥后后的的重重量量差差异异在在0.3mg0.3mg以下以下药物的杂质检查(12)（二）干燥剂干燥法（二）干燥剂干燥法 适用于受热易分解或挥发的药物适用于受热易分解或挥发的药物 干燥剂：硅胶、干燥剂：硅胶、P2O5、H2SO4 （95版药典改为无水版药典改为无水CaCl2）药物的杂质检查(12)（三）减压干燥法 适用于适用于熔点低，受热不稳定或水分熔点低，受热不稳定或水分难赶除难赶除的药物的药物 干燥剂：五氧化二磷干燥剂：五氧化二磷除除另另有有规规定定外外，压压力力应应在在2.67kPa（20mmHg）以下）以下药物的杂质检查(12)例. 干燥失重测定中应注意哪几个方面（ABCD） A. 供试品平铺在称量瓶中的厚度一般不超过5mm B. 干燥温度一般为105 C. 可用干燥剂干燥 D. 主要指水分和挥发性物质 E. 测定时间不超过3小时药物的杂质检查(12)（四）热分析法（四）热分析法热重法是在热重法是在程序控制温度程序控制温度下，测量下，测量物质物质质量与温度关系质量与温度关系的一种技术的一种技术 适用：贵重、易挥发、干燥有变化的药物贵重、易挥发、干燥有变化的药物测定方法测定方法 热重分析法热重分析法（TGATGA）质量变化质量变化 差示热分析法差示热分析法（DTADTA）温差温差 差示扫描量热法差示扫描量热法（DSCDSC）能量差能量差药物的杂质检查(12)十一、有机溶剂残留量测定法十一、有机溶剂残留量测定法 用以检查药物在生产过程中引入的用以检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂，包括有害有机溶剂，包括苯、氯仿、二氧六苯、氯仿、二氧六环、二氯甲烷、吡啶、甲苯及环氧乙烷环、二氯甲烷、吡啶、甲苯及环氧乙烷 检查方法检查方法 气相色谱法气相色谱法（ChP）药物的杂质检查(12)色谱条件色谱条件固定相固定相 填充柱、毛细管柱填充柱、毛细管柱载气载气 氮气氮气检测器检测器 氢火焰离子化氢火焰离子化 FID柱温柱温 40100系统适用性试验系统适用性试验药物的杂质检查(12)测定法测定法第一法第一法 溶液直接进样法溶液直接进样法 第二法第二法 顶空进样法顶空进样法 适用于挥发性大的组分适用于挥发性大的组分 使样品加热挥发后进样，可免去样品的使样品加热挥发后进样，可免去样品的萃取、浓集萃取、浓集等步骤等步骤内标法内标法RSD5 %（n=5）外标法外标法- RSD10 %（n=5）药物的杂质检查(12)顶空分析法顶空分析法（head space chromatography） 也称液上气相色谱分析，是指用气相色谱法也称液上气相色谱分析，是指用气相色谱法来分析来分析封闭系统封闭系统中与液体（或固体）样品相中与液体（或固体）样品相平衡的气体的一种方法平衡的气体的一种方法恒温水浴样品10-20mL玻璃瓶（具有硅橡胶隔垫片盖）1-2g固体或3-5mL液体（平衡30-45min）恒温水浴样品药物的杂质检查(12)第三节第三节 特殊杂质检查方法特殊杂质检查方法利用药物和杂质在物理性质上的差异利用药物和杂质在物理性质上的差异利用药物和杂质在化学性质上的差异利用药物和杂质在化学性质上的差异药物的杂质检查(12)物理性质物理性质臭味及挥发性、颜色、溶解行为的差异臭味及挥发性、颜色、溶解行为的差异旋光性质的差异旋光性质的差异对光吸收性质的差异对光吸收性质的差异吸附或分配性质的差异吸附或分配性质的差异药物的杂质检查(12)吸附或分配性质的差异吸附或分配性质的差异vTLCTLC法法杂质对照品法（杂质对照品法（A A）供试品自身稀释对照法（高低浓度对比法）（供试品自身稀释对照法（高低浓度对比法）（B B） 样样 对对 样样 对对A B要求：要求：Rf （0. 2 0. 8 ） 分离度（清晰分离的斑点）分离度（清晰分离的斑点）药物的杂质检查(12)化学性质化学性质酸碱性差异酸碱性差异化学反应差异化学反应差异药物的杂质检查(12)氧化还原性差异氧化还原性差异例例 氯化钠中检查碘化物或溴化物，利氯化钠中检查碘化物或溴化物，利用氯的电位较碘、溴大，用硝酸、氯胺用氯的电位较碘、溴大，用硝酸、氯胺T T氧化碘、溴。氧化碘、溴。I I- -淀粉混合液淀粉混合液（含（含NaNONaNO3 3和和H H2 2SOSO4 4）5min 5min 内不得显兰色。（内不得显兰色。（ I I- - II2 2）Br Br - - 氯胺氯胺T T Br Br2 2，在氯仿层中显黄，在氯仿层中显黄色，与一定量标准对照液同法处理进行色，与一定量标准对照液同法处理进行比较，不得更深。比较，不得更深。药物的杂质检查(12)本章小结本章小结重点：重点：掌握药物杂质来源分类，限量检查及计算掌握药物杂质来源分类，限量检查及计算掌握重金属、砷盐的检查原理及实验条件掌握重金属、砷盐的检查原理及实验条件熟悉氯化物、硫酸盐、铁盐检查中相关试剂的作用熟悉氯化物、硫酸盐、铁盐检查中相关试剂的作用熟悉一般杂质的所有检查项目熟悉一般杂质的所有检查项目TLC用于杂质检查的方法：杂质对照品法和高低浓用于杂质检查的方法：杂质对照品法和高低浓度对比法度对比法药物的杂质检查(12)药物的杂质检查(12)