食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）维生素的作用维生素的作用 维生素是维持人体正常生理功能必需的一类维生素是维持人体正常生理功能必需的一类天然有机化合物，其主要功用是通过作为辅酶的成分调节代天然有机化合物，其主要功用是通过作为辅酶的成分调节代谢。维生素一般在体内不能合成或合成数量较少，不能充分谢。维生素一般在体内不能合成或合成数量较少，不能充分满足机体需要，必须经常由食物来供给。满足机体需要，必须经常由食物来供给。维生素的种类维生素的种类 维生素的种类很多，可分为脂溶性维生素和维生素的种类很多，可分为脂溶性维生素和水溶性维生素。脂溶性维生素有水溶性维生素。脂溶性维生素有A、D、E、K等，水溶性维等，水溶性维生素有维生素生素有维生素C和和B。在这些维生素中，人体比较容易缺乏。在这些维生素中，人体比较容易缺乏而在营养上又较重要的维生素有：而在营养上又较重要的维生素有：A、D、 C 、 E、B1、B2、B6、 烟酸。烟酸。维生素的检验方法维生素的检验方法 检验方法检验方法 中有紫外可见分光光度法、荧中有紫外可见分光光度法、荧光光度法，光光度法， 这两种是多种维生素的标准分析方法。灵敏、这两种是多种维生素的标准分析方法。灵敏、快速，有较好的选择性。另外，各种色谱法以其高分离效能，快速，有较好的选择性。另外，各种色谱法以其高分离效能，在维生素分析方面占有重要的地位。在维生素分析方面占有重要的地位。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）1、维生素、维生素A的测定的测定三氯化锑光度法三氯化锑光度法 维生素维生素A的测定方法除三氯化锑光度法外，还有紫外分的测定方法除三氯化锑光度法外，还有紫外分光光度法、荧光法、气相色谱法和高效液相色谱法等。光光度法、荧光法、气相色谱法和高效液相色谱法等。（1）原理）原理 在氯仿溶液中，维生素在氯仿溶液中，维生素A与三氯化锑可相互作用，生成与三氯化锑可相互作用，生成蓝色可溶性配合物，其颜色深浅与溶液中所含维生素蓝色可溶性配合物，其颜色深浅与溶液中所含维生素A的含的含量成正比。该蓝色物质在一定时间内可用分光光度计测定其量成正比。该蓝色物质在一定时间内可用分光光度计测定其吸光度（于吸光度（于620nm波长处有最大吸收峰），其吸光度与维生波长处有最大吸收峰），其吸光度与维生素素A的含量在一定的范围内成正比，故可比色测定。的含量在一定的范围内成正比，故可比色测定。 一、脂溶性维生素的测定一、脂溶性维生素的测定 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）（2）试剂）试剂 无水硫酸钠无水硫酸钠 不吸附维生素不吸附维生素A 乙酸酐乙酸酐 无水乙醚无水乙醚 不含过氧化物不含过氧化物 无水乙醇无水乙醇 不含醛类物质不含醛类物质 三氯甲烷三氯甲烷 不含分解物不含分解物 250gL三氯化锑一三氯甲烷溶液三氯化锑一三氯甲烷溶液 1：1氢氧化钾溶液氢氧化钾溶液 （50%） 0.5molL氢氧化钾溶液氢氧化钾溶液 维生素维生素A标准溶液标准溶液 酚酞指示剂酚酞指示剂 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）（4）操作步骤）操作步骤 样品处理样品处理 根据样品性质，可采用皂化法或研磨法根据样品性质，可采用皂化法或研磨法 标准曲线的绘制标准曲线的绘制 准确取一定量的维生素标准液于个容量瓶中，准确取一定量的维生素标准液于个容量瓶中，以三氯甲烷配制标准系列。再取相同数量比色管顺次取以三氯甲烷配制标准系列。再取相同数量比色管顺次取mL三氯甲烷和标准系列使用液三氯甲烷和标准系列使用液mL，各管加入乙酸酐，各管加入乙酸酐1滴制成标准比色系列。于滴制成标准比色系列。于620nm波长外，以三氯甲烷调节波长外，以三氯甲烷调节吸光度至零点，将其标准比色系列按顺序移入光路前，迅吸光度至零点，将其标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加入速加入mL三氯化锑三氯甲烷溶液。于三氯化锑三氯甲烷溶液。于s内测定吸光内测定吸光度，绘出标准曲线图。度，绘出标准曲线图。 （3）仪器和设备）仪器和设备 分光光度计分光光度计回流冷凝装置回流冷凝装置 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）皂化法皂化法皂化法皂化法: :适用于维生素适用于维生素A含量不高的样品含量不高的样品(可减少脂溶性物质的干扰可减少脂溶性物质的干扰,但但费时费时,维生素维生素A易损失易损失)1、皂化：称取、皂化：称取0.55克样品于三角瓶中，加入克样品于三角瓶中，加入10mL氢氧化钾及氢氧化钾及2040mL乙醇，于电热板上回流乙醇，于电热板上回流30min至皂化完全为止。至皂化完全为止。2、提取：将皂化瓶内混合物移至分液漏斗，以、提取：将皂化瓶内混合物移至分液漏斗，以30mL水洗皂化瓶，洗液水洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。振摇并注意放气，静置分层后，水层放入第二个分液并入分液漏斗中。振摇并注意放气，静置分层后，水层放入第二个分液漏斗中。皂化瓶再用约漏斗中。皂化瓶再用约30mL乙醚分两次冲洗，洗液倾入第二个分液漏斗。乙醚分两次冲洗，洗液倾入第二个分液漏斗。振摇后，静置分层，水层放入三角瓶中，醚层与第一个分液漏斗合并。振摇后，静置分层，水层放入三角瓶中，醚层与第一个分液漏斗合并。重复至水液中无维生素重复至水液中无维生素A为止。为止。 样品测定样品测定 于一比色管中加入于一比色管中加入10mL三氯甲烷，加入滴乙酸酐三氯甲烷，加入滴乙酸酐为空白液。另一比色管中加入为空白液。另一比色管中加入mL三氯甲烷，其余比色三氯甲烷，其余比色管中分别加入管中分别加入mL 样品溶液及样品溶液及1滴乙酸酐。以下步骤同标滴乙酸酐。以下步骤同标准曲线的制备。准曲线的制备。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）3、洗涤：用约、洗涤：用约30mL水加入第一个分液漏斗中，轻摇，水加入第一个分液漏斗中，轻摇，静置片刻，放去水层，加静置片刻，放去水层，加1520mL0.5mol/L氢氧化钾液氢氧化钾液于分液漏斗中，轻摇后，弃去下层碱液，除去醚溶性酸于分液漏斗中，轻摇后，弃去下层碱液，除去醚溶性酸皂。再用水洗涤，每次用水约皂。再用水洗涤，每次用水约30mL，直至洗涤液与酚酞，直至洗涤液与酚酞指示剂呈无色为止。醚层液静置指示剂呈无色为止。醚层液静置1020min，小心放出析，小心放出析出的水。出的水。4、浓缩：将醚层液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用、浓缩：将醚层液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用约约25mL乙醚冲洗分液漏斗和硫酸钠乙醚冲洗分液漏斗和硫酸钠2次，洗液并入三角次，洗液并入三角瓶内。置水浴上蒸馏，收回乙醚。直到瓶中剩瓶内。置水浴上蒸馏，收回乙醚。直到瓶中剩5mL时取时取下，用减压抽气法至干，立即加入一定量的三氯甲烷使下，用减压抽气法至干，立即加入一定量的三氯甲烷使溶液中维生素溶液中维生素A含量在适宜浓度范围内。含量在适宜浓度范围内。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）研磨法：研磨法：研磨法：研磨法：适用于每克样品维生素适用于每克样品维生素A含量大于含量大于510g样品样品的测定（步骤简单，结果准确）的测定（步骤简单，结果准确）1、研磨：精确称取、研磨：精确称取25g样品，放入盛有样品，放入盛有35倍样品质量倍样品质量的无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，的无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。并均质化。2、提取：小心地将全部均质化样品移入带盖的三角瓶内，、提取：小心地将全部均质化样品移入带盖的三角瓶内，准确加入准确加入50100mL乙醚，紧压盖子，用力振摇乙醚，紧压盖子，用力振摇2min，使，使样品中维生素样品中维生素A溶于乙醚中，使其自行澄清（或离心澄清）溶于乙醚中，使其自行澄清（或离心澄清）。3、浓缩：取澄清乙醚液、浓缩：取澄清乙醚液25mL，放入比色管中，在，放入比色管中，在7080水浴上抽气蒸干，立即加入水浴上抽气蒸干，立即加入1mL三氯甲烷溶解残三氯甲烷溶解残渣。渣。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）（5）结果计算）结果计算 X-样品中维生素的含量，样品中维生素的含量，mg/100g（若按国际单位，每国际单位（若按国际单位，每国际单位相当于相当于.3g维生素）；维生素）； c-由标准曲线上查得样品中含维生素的含量，由标准曲线上查得样品中含维生素的含量，gmL； m-样品质量，样品质量，g；-提取后加三氯甲烷定量之体积，提取后加三氯甲烷定量之体积，mL；100-以每以每100g 样品计。样品计。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）（一）维生素（一）维生素C的测定的测定 维维生生素素C是是一一种种己己糖糖醛醛基基酸酸，有有抗抗坏坏血血病病的的作作用用，所所以以又又称称作作抗抗坏坏血血酸酸。新新鲜鲜的的水水果果蔬蔬菜菜，特特别别是是枣枣、辣辣椒椒、苦瓜、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。苦瓜、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。方方法法：测测定定维维生生素素C常常用用的的方方法法有有靛靛酚酚滴滴定定法法、苯苯肼肼比比色色法法、荧光法和高效液相色谱法等。荧光法和高效液相色谱法等。 以下介绍荧光法、以下介绍荧光法、2，4-二硝基苯肼光度法。二硝基苯肼光度法。1、荧光法、荧光法（1 1）原理：试样中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗原理：试样中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后，与邻苯二胺反应生成有荧光的喹唔啉，其荧光坏血酸后，与邻苯二胺反应生成有荧光的喹唔啉，其荧光强度与抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食强度与抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食品中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。品中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。二、水溶性维生素的测定二、水溶性维生素的测定 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）（2）试剂：）试剂：偏磷酸偏磷酸冰醋酸溶液：称取冰醋酸溶液：称取15g偏磷酸，加入偏磷酸，加入40mL冰醋冰醋酸，加水稀释至酸，加水稀释至500mL过滤后，贮存于冰箱中；过滤后，贮存于冰箱中；硫酸：硫酸：0.15mol/L偏磷酸偏磷酸乙酸乙酸硫酸溶液：称取硫酸溶液：称取15g偏磷酸，加入偏磷酸，加入40mL冰醋酸，用冰醋酸，用0.015molL-1硫酸稀释至硫酸稀释至500mL；乙酸钠溶液：称取乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠溶解并稀释至乙酸钠溶解并稀释至1L；硼酸硼酸乙酸钠溶液：称取硼酸乙酸钠溶液：称取硼酸9g，加入，加入35mL乙酸钠溶液，乙酸钠溶液，用水稀释至用水稀释至1000mL；邻苯二胺溶液：称取邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺盐酸盐溶于邻苯二胺盐酸盐溶于100mL水水中；中；抗坏血酸标准溶液：准确称取抗坏血酸标准溶液：准确称取0.500g抗坏血酸溶于偏磷酸抗坏血酸溶于偏磷酸冰醋酸溶液中，定容至冰醋酸溶液中，定容至500mL容量瓶中，吸取上述溶液容量瓶中，吸取上述溶液5mL，再用偏磷酸，再用偏磷酸冰醋酸溶液定容至冰醋酸溶液定容至50mL； 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）抗坏血酸标准使用溶液：抗坏血酸标准使用溶液：100g/mL百里酚蓝指示剂百里酚蓝指示剂(麝香草酚蓝麝香草酚蓝)：变色范围：变色范围pH1.2(红红)2.8(黄黄)；活性炭：取活性炭：取50g活性炭加入活性炭加入250mL10%盐酸，加热至沸，盐酸，加热至沸，减压过滤，用蒸馏水冲洗活性炭，检查滤液中无铁离子为止，减压过滤，用蒸馏水冲洗活性炭，检查滤液中无铁离子为止，于于110120烘干。烘干。（3）仪器：荧光分光光度计或具有）仪器：荧光分光光度计或具有350nm及及430nm 波长的波长的荧光计；捣碎机。荧光计；捣碎机。（4）操作步骤：）操作步骤：试样的制备：称取试样的制备：称取100克鲜样克鲜样,加加100mL偏磷酸偏磷酸-乙酸溶液，乙酸溶液，倒入捣碎机内打成匀浆，先取少量样品加入倒入捣碎机内打成匀浆，先取少量样品加入1滴百里酚蓝，滴百里酚蓝，若显红色若显红色(pH=1.2)，即用偏磷酸，即用偏磷酸冰醋酸溶液定容至冰醋酸溶液定容至100mL；若显黄色；若显黄色(pH=2.8)，即用偏磷酸，即用偏磷酸冰醋酸冰醋酸硫酸溶液定容硫酸溶液定容至至100mL，定容后过滤备用。，定容后过滤备用。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）测定：测定：氧化处理：将上述滤液及抗坏血酸标准使用液各氧化处理：将上述滤液及抗坏血酸标准使用液各100ml转入转入三角瓶中加入三角瓶中加入12g活性炭振摇活性炭振摇12分钟，过滤。即试样氧分钟，过滤。即试样氧化液和标准氧化液，待测定。化液和标准氧化液，待测定。各取各取10mL标准氧化液于标准氧化液于2个个100mL容量瓶中，分别标明容量瓶中，分别标明“标标准准”及及“标准空白标准空白”各取各取10mL试样氧化液于试样氧化液于2个个100mL容量瓶中，分别标明容量瓶中，分别标明“试试样样”及及“试样空白试样空白”于于“标准空白标准空白”及及“试样空白试样空白”中各加中各加5mL硼酸硼酸-乙酸钠溶乙酸钠溶液，混合摇动液，混合摇动15min，用水稀释至，用水稀释至100mL，在，在4冰箱中放冰箱中放置置23小时，即得小时，即得“标准空白标准空白”溶液及溶液及“试样空白试样空白”溶液，溶液，备用。备用。于于“试样试样”及及“标准标准”中各加中各加5mL /L乙酸钠溶液，用水稀乙酸钠溶液，用水稀释至释至100mL,即得即得“试样试样”溶液及溶液及“标准标准”溶液，备用。溶液，备用。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）标准曲线的制备：标准曲线的制备： 取上述取上述“标准标准”溶液（抗坏血酸含量溶液（抗坏血酸含量10g/mL）0.5、1.0、1.5和和2.0mL标准系列，取双份分别置于标准系列，取双份分别置于10mL带盖试管中，再带盖试管中，再用水补充至用水补充至2.0mL。 取中取中“标准空白标准空白”溶液，溶液，“样品空白样品空白”溶液及中溶液及中“样品样品”溶液各溶液各2mL，分别置于，分别置于10mL带盖试管中。在暗室迅速向各客带盖试管中。在暗室迅速向各客中加入中加入5mL邻苯二胺溶液，振摇混合，在室温下反应邻苯二胺溶液，振摇混合，在室温下反应35min，于激发光波长于激发光波长338nm、发射光波长、发射光波长420nm处测定荧光强度。标处测定荧光强度。标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标，对应的准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标，对应的抗坏血酸含量为横坐标，绘制标准曲线或进行相关计算，其直抗坏血酸含量为横坐标，绘制标准曲线或进行相关计算，其直线回归方程供计算时使用。线回归方程供计算时使用。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）（5）结果计算：）结果计算：式中式中 X-试样中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量，试样中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量，mg/100g； c-由标准曲线查得或由回归方程算得试样溶液浓度，由标准曲线查得或由回归方程算得试样溶液浓度， g/mL m-试样的质量，试样的质量，g； V-荧光反应所用试样体积，荧光反应所用试样体积，mL； F-试样溶液的稀释倍数。试样溶液的稀释倍数。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）（1）测定原理）测定原理 总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与氢抗坏血酸，再与2，4 二硝基苯肼作用生成红二硝基苯肼作用生成红色脎，根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸色脎，根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色定量。含量成正比，进行比色定量。2、 2，4-二硝基苯肼光度法二硝基苯肼光度法 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）（2）试剂）试剂 本实验用水均为蒸馏水。试剂纯度均为分析纯。本实验用水均为蒸馏水。试剂纯度均为分析纯。 4.5mol/L硫酸：谨慎地加硫酸：谨慎地加250mL硫酸（比重硫酸（比重1.84）于）于700mL水中，冷却水中，冷却后用水稀释至后用水稀释至1000mL。 85%硫酸：谨慎地加硫酸：谨慎地加90mL硫酸（比重硫酸（比重1.84）于）于100mL水中。水中。 2，4 二硝基苯肼溶液二硝基苯肼溶液2%：溶解：溶解2g 2，4 二硝基苯肼于二硝基苯肼于100mL 4.5mol/L硫酸内，过滤。不用时存于冰箱内，每次用前必须过滤。硫酸内，过滤。不用时存于冰箱内，每次用前必须过滤。 草酸溶液草酸溶液2% ：溶解：溶解20g草酸（草酸（H2C2O4）于）于700mL水中，稀释至水中，稀释至1000mL。 草酸溶液草酸溶液1% ：稀释：稀释500mL 2%草酸溶液到草酸溶液到1000mL。 硫脲溶液硫脲溶液1% ：溶解：溶解5g硫脲于硫脲于500mL 1%草酸溶液中。草酸溶液中。 硫脲溶液硫脲溶液2% ：溶解：溶解10g硫脲于硫脲于500mL 1%草酸溶液中。草酸溶液中。 盐酸盐酸1mol/L ：取：取100mL盐酸，加入水中，并稀释至盐酸，加入水中，并稀释至1200mL。 抗坏血酸标准溶液：溶解抗坏血酸标准溶液：溶解100mg纯抗坏血酸于纯抗坏血酸于100mL 1%草酸中，配成草酸中，配成每毫升相当于每毫升相当于1mg抗坏血酸。抗坏血酸。 活性炭：将活性炭：将100g活性炭加到活性炭加到750mL1mol/L盐酸中，回流盐酸中，回流12h，过滤，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子用水洗数次，至滤液中无铁离子(Fe3+)为止，然后置于为止，然后置于110烘箱中烘干。烘箱中烘干。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分） 检验铁离子方法：利用普鲁士蓝反应。将检验铁离子方法：利用普鲁士蓝反应。将2%亚铁氰化亚铁氰化钾与钾与1%盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁离子盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。则产生蓝色沉淀。 （3）仪器和设备）仪器和设备恒温箱：恒温箱：370.5 ；可见；可见 紫外分光光度计；捣碎机。紫外分光光度计；捣碎机。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）（4）操作步骤）操作步骤样品的制备：样品的制备：a、鲜样的制备：称、鲜样的制备：称100g鲜样和鲜样和100g 2%草酸溶液，倒入捣碎草酸溶液，倒入捣碎机中打成匀浆，取机中打成匀浆，取1040g匀浆（含匀浆（含12mg抗坏血酸）倒入抗坏血酸）倒入100mL容量瓶中，用容量瓶中，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。草酸溶液稀释至刻度，混匀。 b、干样制备：称、干样制备：称14g干样（含干样（含12mg抗坏血酸）放入乳钵抗坏血酸）放入乳钵内，加入内，加入1%草酸溶液磨成匀浆，倒入草酸溶液磨成匀浆，倒入100mL容量瓶内，用容量瓶内，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。草酸溶液稀释至刻度，混匀。 将上述滤液过滤，滤液备用。不易过滤的样品可用离心将上述滤液过滤，滤液备用。不易过滤的样品可用离心机沉淀后，倾出上清液，过滤，备用。机沉淀后，倾出上清液，过滤，备用。 氧化处理：取氧化处理：取25mL上述滤液，加入上述滤液，加入2g活性炭，振摇活性炭，振摇1 min，过滤，弃去最初数毫升滤液。取，过滤，弃去最初数毫升滤液。取10mL此氧化提取液，加此氧化提取液，加入入10mL2%硫脲溶液，混匀。硫脲溶液，混匀。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分） 标准曲线绘制：标准曲线绘制：a、加、加2g活性炭于活性炭于50mL标准溶液中，摇动标准溶液中，摇动1 min，过滤。，过滤。 b、取、取10mL滤液放入滤液放入500mL容量瓶中，加容量瓶中，加5.0g硫脲，用硫脲，用1%草酸溶液稀释至刻度，抗坏血酸浓度草酸溶液稀释至刻度，抗坏血酸浓度20g/mL。 c、取、取5mL，10mL，20mL，25mL，40mL，50mL，60mL稀释液，分别放入稀释液，分别放入7个个100mL容量瓶中，用容量瓶中，用1%硫脲硫脲溶液稀释至刻度，使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别溶液稀释至刻度，使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为为1，2，4，5，8，10，12g/mL。 d、按样品测定步骤形成脎并比色。、按样品测定步骤形成脎并比色。 e、以吸光值为纵坐标，以抗坏血酸浓度（、以吸光值为纵坐标，以抗坏血酸浓度（g/mL）为横）为横坐标绘制标准曲线。坐标绘制标准曲线。 食品中维生素的测定食品中维生素的测定食品安全检验技术（理化部分）食品安全检验技术（理化部分）（5）结果计算）结果计算式中：式中：X样品中总抗坏血酸含量，样品中总抗坏血酸含量，mg/100g； c由标准曲线查得或由回归议程算得由标准曲线查得或由回归议程算得“样品氧化液样品氧化液”中总抗中总抗坏血酸的浓度，坏血酸的浓度，g/mL； V试样用试样用1%草酸溶液定容的体积，草酸溶液定容的体积，mL； F样品氧化处理过程中的稀释倍数；样品氧化处理过程中的稀释倍数； m试样质量，试样质量，g。 结果的允许差结果的允许差 ：同一实验室平行或重复测定：同一实验室平行或重复测定 相对偏差绝对值相对偏差绝对值10%。