白血病白血病/淋巴瘤免疫分型淋巴瘤免疫分型临检血液 蒋能刚应用目的：l l 确定淋巴系病变的起源和分化程度；确定淋巴系病变的起源和分化程度；l l 鉴别反应性与克隆性淋巴细胞增生性疾病；鉴别反应性与克隆性淋巴细胞增生性疾病；l l 确定髓系白血病各亚型；确定髓系白血病各亚型；l l 对形态学分类不明细胞进行定性；对形态学分类不明细胞进行定性；l l 诊断急性未分化型白血病；诊断急性未分化型白血病；l l 诊断急性混合细胞白血病；诊断急性混合细胞白血病；l l 诊断微小残留白血病或白血病浸润；诊断微小残留白血病或白血病浸润；l l 判断白血病判断白血病/ /淋巴瘤预后。淋巴瘤预后。 流式细胞术(Flow Cytometry): 对高速流过检测区的单个细胞或生物颗粒进行多参数、快速分析（或分选）的一种技术。数据显示方式： 单参数直方图 双参数二维点图 等高图 二维密度图 三维图单参数直方图双参数点图荧光素荧光素n nFITC(异硫氰酸荧光素）：530nm（绿）n nPE（藻红蛋白）：575nm（橙黄） n nPI(碘化丙啶）： 620nm（橙红）n nPerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白）：675nm（深红）n nAPC(别藻兰蛋白）： 660nm（红） 检测物： 细胞表面、胞浆或胞核抗原性物质CD（cluster of differentiation）：1982年起将识别同一分化抗原的来自不同实验室的单克隆抗体归为一个分化群，并进行流水编号。一个CD相关抗体可包含多个克隆号。其他非CD系列抗原：如TCR、HLA等正常血细胞中的抗原表达特点正常血细胞中的抗原表达特点 1. 1. 系列保守性系列保守性 2. 2. 时序性时序性 3. 3. 抗原表达量的模式化抗原表达量的模式化干细胞嗜碱性细胞嗜酸性细胞定向髓系干细胞红系巨核系粒单核系粒系单核系CD36 CD71 CD235aCD41 CD42a/b CD61CD4 CD11b CD14 CD64 HLA-DRCD36CD15 CD71 CD16(TDT CD7)CD34 CD117 CD13 CD33CD38 MPOCD34 CD13 CD33 CD117MPO抗原刺激干细胞早前B前B静止期BPro-B ALLPre-B ALLCommon-B ALLCLL/SLL免疫母细胞浆细胞样淋巴细胞大B细胞淋巴瘤淋巴浆细胞淋巴瘤外套细胞滤泡区母细胞中心母细胞中心细胞边缘带细胞浆细胞套细胞淋巴瘤伯基特淋巴瘤大B细胞淋巴瘤滤泡淋巴瘤边缘带淋巴瘤骨髓瘤TDT+ CD34+ cCD79a+CD19+ CD10 c-TDT+ CD34+ cCD79a+ CD19+ CD20 CD10+ c-TDT+ CD34 cCD79a+CD19+ CD20+ CD10 c+CD5+ CD19+ CD20 CD22+ CD23 + sIg+ FMC7-CD38 CD138 CD56 cIg CD19- CD45-CD22+ CD5-CD10- CD23- CD22+ CD10+ FMC7+ CD23 bcl-2+ CD5- CD19+ CD20+ CD22+ CD38+ IgM+ sIg+ CD22+ CD10+ sIg+ CD34-TDT- CD5+ CD22+ sIg+ FMC7+ Cyclin D1+ CD23- CD22+ bcl-6+ CD10 CD5 CD30 干细胞胸腺期胸腺期TDT+CD34+CD2cCD3CD7CD71TDT+CD34CD1aCD2cCD3CD7CD4CD8胸腺期TDT+CD2CD3CD5CD7CD4/CD8TCRPrecursor-T ALL成熟T细胞各分化群 造血细胞在其分化、发育过程中，细胞膜、造血细胞在其分化、发育过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的有无、表达强弱与血细胞的细胞浆或胞核抗原的有无、表达强弱与血细胞的分化发育阶段密切相关，表现出与分化发育阶段密切相关，表现出与细胞系列细胞系列及其及其分化程度分化程度相关的特性。相关的特性。白血病细胞中的抗原表达特点白血病细胞中的抗原表达特点 表达模式基本与相应阶段正常细胞相似，还具表达模式基本与相应阶段正常细胞相似，还具有以下特点：有以下特点： 1. 1. 跨系表达跨系表达 2. 2. 时相混乱时相混乱 3. 3. 抗原表达量的改变抗原表达量的改变免疫分型四种急性白血病免疫分型四种急性白血病n n单表型急性白血病n n表达某一个系列抗原为主的急性白血病n n双表型/双克隆急性白血病n n未分化型急性白血病各系急性白血病重要抗原指标各系急性白血病重要抗原指标 1. 1. 急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病 (AL)(AL) 敏感性敏感性 特异性特异性 B-ALL:B-ALL: CD19 100% CD19 100% 非特异非特异 cCD79a 99% cCD79a 99% 特异特异 T-ALL:T-ALL: CD7 100% CD7 100% 非特异非特异 cCD3 100% cCD3 100% 特异特异 2. 2. 急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病 (AML)(AML) 表达率表达率 特异性特异性 CD13 70% CD13 70% 非特异非特异 CD33 70% CD33 70% 非特异非特异 CD117 70% CD117 70% 特异特异 cMPOcMPO 70% 70% 特异特异错译表达（Ly+AML ，My+ALL ）： 白血病细胞表达非本系细胞抗原标志物，具有预后意义。ALL CD13， CD33t(9;22)AML CD2+， DR-M3 t(15;17)，或，或RAR+，t(11;17) CD2+， DR+M4Eo inv(16)或或 t(16;16) CD19+M0t(9:22)多见多见 M2t(8;21) TdT+, CD7+见于见于M0 CD56+ M5/M4双表型急性白血病记分系统双表型急性白血病记分系统 分值分值 B B系系 T T系系 髓系髓系 2 cCD79a cCD3 2 cCD79a cCD3 cMPOcMPO CD22 TCR CD22 TCR cIgMcIgM TCR TCR 1 1 CD19 CD2 CD117CD19 CD2 CD117 CD10 CD5 CD13 CD10 CD5 CD13 CD20 CD8 CD33 CD20 CD8 CD33 0.5 0.5 TdTTdT TdTTdT CD14 CD14 CD24 CD7 CD15 CD24 CD7 CD15 CD64 CD64部分慢性部分慢性B B淋巴细胞增殖性疾病的免疫表型淋巴细胞增殖性疾病的免疫表型 CD5CD5CD10CD10CD19CD19CD22CD22 CD23CD23 HLA-DRHLA-DRFMC7FMC7SIgSIgCD11cCD11cCLLCLL+ +- -+ +/-+/-+ + +- -+ +/-+/-PLLPLL- - -+ + +- -+ + + +- -MCLMCL+ +-/+-/+ + +- -+ + + +- -HCLHCL- - -+ + +- -+ + + + +FCLFCL- -+ + + +-/+-/+ +/-+/-+ +- -MZLMZL- - -+ + +- -+ + + +/-+/-LPLLPL- - -+ + +-/+-/+ +-/+-/+注：注：注：注：HCL CD103+ CD25+HCL CD103+ CD25+部分慢性部分慢性T淋巴细胞增殖性疾病的免疫表型淋巴细胞增殖性疾病的免疫表型CD2CD2CD3CD3CD5CD5CD7CD7CD4CD4CD8CD8CD25CD25CD56CD56CD57CD57T-CLL/PLLT-CLL/PLL+ + + + +/-+/-/+-/+- -T-LGLT-LGL+ + +/-+/-+/-+/- -+ +- -/+-/+ +NK-LGLNK-LGL+ +- - - -+/-+/- -+ +- -ATLATL+ + + +- -+ + +肝脾T细胞淋巴瘤：CD2+ CD3+ CD7+ TCR+ CD16+/- CD56+/- CD8-/+ CD4- TCR-n n标本种类：怀疑含有病变细胞的组织或体液，如外周血、骨髓、胸腹水、脑脊液、淋巴结等。n n标本要求：细胞有活性，最好不要超过48h。光散射特征与细胞形态的关系光散射特征与细胞形态的关系淋巴淋巴单核粒细胞CD45CD45M4/M5M 3正常正常白血病白血病L13, M02 M6, M7TSSCSSCMM 非造血非造血 来源细胞来源细胞CD45在免疫分型中的应用意义在免疫分型中的应用意义原始原始嗜嗜碱碱嗜酸嗜酸正常骨髓AML-M1AML-M1AML-M2AML-M2AML-M3AML-M3AML-M4/M5AML-M4/M5AML-M6AML-M6非造血细胞非造血细胞非特异性染色（死亡细胞）非特异性染色（死亡细胞）ALLALL分类不明细胞分类不明细胞B B细胞克隆性细胞克隆性结果报告 白血病免疫分型其他方法： 酶-底物显色 荧光显微镜 谢谢谢谢