微量铁的测定微量铁的测定 可见分光光度法可见分光光度法1微量铁的测定aOBJECTIVE1 1掌握分光光度法的基本原理掌握分光光度法的基本原理2 22 2 学会光度法测定物质的含量学会光度法测定物质的含量3 33 3 学习可见分光光度计的使用方法学习可见分光光度计的使用方法2微量铁的测定aPRINCIPLE有色物质对光的吸收具有选择性，溶液的不同颜有色物质对光的吸收具有选择性，溶液的不同颜色是由于溶液中有色物质选择地吸收各种颜色色是由于溶液中有色物质选择地吸收各种颜色的光引起的。有色溶液的颜色实质上是它所的光引起的。有色溶液的颜色实质上是它所选择吸收的光的互补色：选择吸收的光的互补色：当一束白光通过当一束白光通过铁黄色络离子溶液时，兰色光大部分被铁黄色络离子溶液时，兰色光大部分被吸收，其它色光透过吸收，其它色光透过.3微量铁的测定aBeer-Lamber:当一束单色光通过有色溶液时部分吸收，当一束单色光通过有色溶液时部分吸收，部分透过，有色物质对光的吸收度部分透过，有色物质对光的吸收度(吸光度吸光度A)与有色物质与有色物质的组成量度的组成量度(C)和液层厚度和液层厚度(L)的乘积成正比的乘积成正比.A = ELC =- lgT = - lgII0A: 吸光度吸光度 (absorbance) E: 吸光系数吸光系数 (absorptivity)L: 液层厚度液层厚度 C: 组成量度组成量度T: 透光率透光率(transmitance)4微量铁的测定aBeer-Lamber ：物质对单色光吸收的强弱与吸光物质浓度和厚度关系的定律：物质对单色光吸收的强弱与吸光物质浓度和厚度关系的定律Beer： 吸光与浓度的关系吸光与浓度的关系Lamber： 吸光与厚度间的关系吸光与厚度间的关系II0透光率透光率(transmitance, T)A=-lgT 吸光度吸光度 (absorbance)E 吸光系数吸光系数 (absorptivity)5微量铁的测定a吸收光谱吸收光谱(吸收曲线吸收曲线)6微量铁的测定a标准曲线标准曲线A=E LC A=KC7微量铁的测定a可见分光光度法可见分光光度法: 是对于能吸收可见光的有色溶液的测定是对于能吸收可见光的有色溶液的测定 方法，对于许多不吸收可见光的无色物方法，对于许多不吸收可见光的无色物 质可以用显色反应使之变成有色物质。质可以用显色反应使之变成有色物质。8微量铁的测定a1 显色反应及其条件显色反应及其条件 因素：试剂与溶剂、酸碱度、时间、温度及其它因素：试剂与溶剂、酸碱度、时间、温度及其它 故操作时，必须在平行原则的条件下进行故操作时，必须在平行原则的条件下进行2 测定方法：标准曲线法测定方法：标准曲线法 (空白溶液作对照空白溶液作对照)：消除溶剂或其它物质对入射光吸收等因素：消除溶剂或其它物质对入射光吸收等因素 溶剂空白：溶剂空白：显色剂及制备试液的其它试剂均无色；可用溶剂作空白显色剂及制备试液的其它试剂均无色；可用溶剂作空白 溶液溶液 试剂空白：试剂空白：显色剂有色；按显色反应相同条件下加入各种试剂和溶显色剂有色；按显色反应相同条件下加入各种试剂和溶 剂剂(不加试样溶液不加试样溶液) 试样空白：试样空白：试样基体有色，显色剂无色；不加显色剂但按显色反应试样基体有色，显色剂无色；不加显色剂但按显色反应 相同条件进行操作相同条件进行操作9微量铁的测定a显色剂：显色剂：磺基水杨酸磺基水杨酸 pH 1.82.5 淡紫色淡紫色 4.08.0 橙红色橙红色 8.011.5 黄色黄色 12 沉淀沉淀吸收波长：吸收波长：380480nm范围内，选择最大吸收波长范围内，选择最大吸收波长max(425nm)实验条件：实验条件：10微量铁的测定a11微量铁的测定aPROCEDURE1系列标准溶液和待测溶液的配制系列标准溶液和待测溶液的配制 编号编号 空白空白 1 2 3 4 5 6 未知未知标准溶液标准溶液(ml) 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 1.00(待测液待测液)10%磺基水杨酸磺基水杨酸(ml) 5.00缓冲液缓冲液(ml) 10蒸馏水蒸馏水 稀释至稀释至50.00ml12微量铁的测定a2标准曲线的制作标准曲线的制作波长波长425nm下，以空白溶液为参比溶液，分别由稀至浓下，以空白溶液为参比溶液，分别由稀至浓测定一系列标准溶液的吸光度以测定一系列标准溶液的吸光度以Fe3+含量为横坐标，含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线吸光度为纵坐标绘制标准曲线 编号编号 空白空白 1 2 3 4 5 6 Fe3+含量含量(mg/ml) 吸光度吸光度(A)波波 长长 425nm 13微量铁的测定a3 试样注入比色皿，插入试样槽试样注入比色皿，插入试样槽 调节波长调节波长 盖上试样盖，将空白试样移入光路盖上试样盖，将空白试样移入光路 MODE A明亮明亮 COARSE SET- REF钮，使钮，使A值在值在 0.0000.176内任一数值内任一数值 SET- REF 使使A 值为值为0.000(即置空白试样为即置空白试样为0.000) 推或拉推或拉SAMPLE 依次测试标准系列溶液依次测试标准系列溶液 1 POWER键，接通电源，预热键，接通电源，预热15min2 开启试样室盖，调开启试样室盖，调ZERO T钮钮, 使使T 0.000可见分光光度计操作：可见分光光度计操作：14微量铁的测定a0ACC样品样品A样品样品 相同条件下，测定未知溶液的吸光度，然后从标准曲线上相同条件下，测定未知溶液的吸光度，然后从标准曲线上 查出查出Fe3+的含量的含量.3 未知铁盐溶液中未知铁盐溶液中Fe3+含量的测定含量的测定 15微量铁的测定a表表1 微量铁含量测定结果微量铁含量测定结果DATA 编号编号 空白空白 1 2 3 4 5 6 未知未知Fe3+标准溶液标准溶液(ml) 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 1.00(待测液待测液)10%磺基水杨酸磺基水杨酸(ml) 5.00缓冲液缓冲液(ml) 10蒸蒸 馏馏 水水 稀释至稀释至50.00ml波波 长长 425nmFe3+ 含量含量(mg/ml)吸光度吸光度(A)16微量铁的测定aQUESTION & DISCUSSION1 本实验中的空白溶液能不能用蒸馏水代替？为什么？本实验中的空白溶液能不能用蒸馏水代替？为什么？ 2 为什么加入试剂的量、顺序和时间要一致？为什么加入试剂的量、顺序和时间要一致？17微量铁的测定a