实验二黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导实验二黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导一实验目的一实验目的掌握黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导技术，熟习掌握黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导技术，熟习植物组织继代培育操作过程。植物组织继代培育操作过程。二实验原理二实验原理在一定的条件下，不同器官根、茎、在一定的条件下，不同器官根、茎、叶等来源的外植体均可以脱分化构叶等来源的外植体均可以脱分化构成愈伤组织。成愈伤组织。三实验资料和器具三实验资料和器具 实验资料：黄瓜无菌苗实验资料：黄瓜无菌苗实验药品：实验药品：MS、 1mg/ml NAA 、 1mg/ml 6-BA、1mol/L HCl、1mol/L NaOH、蒸馏水、蒸馏水、灯用酒精、灯用酒精、70酒精、无菌水酒精、无菌水 。灭菌培育基：灭菌培育基：MS1MS+1.0mg/LBA+0.5mg/L NAA实验器具：实验器具：天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。试纸、电炉、高压灭菌锅。无菌室、无菌滤纸、无菌培育皿、烧杯、解无菌室、无菌滤纸、无菌培育皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培育滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培育箱。箱。四四实验步步骤 配制以下培育基各配制以下培育基各100ml ：MS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/L NAAMS3：MS+2.0mg/LBA+0.5mg/L NAAMS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/L NAA取取200ml烧杯杯3只，只，标志，各参与志，各参与4g MS培培育基和育基和100ml蒸蒸馏水，加水，加热直至完全溶直至完全溶解。解。 各参与各参与 1mg/ml 6-BA 200l，并不断，并不断搅拌。拌。分分别参与参与 1mg/ml NAA 10、50、200l，并，并不断不断搅拌。拌。用用1mol/L HCl或或NaOH调理理pH至至5.86.0。2.分装。将分装。将分装。将分装。将3 3种培育基分种培育基分种培育基分种培育基分别别分装到分装到分装到分装到4 4个三角瓶中，做个三角瓶中，做个三角瓶中，做个三角瓶中，做好好好好标标志。志。志。志。3.灭灭菌。用高菌。用高菌。用高菌。用高压压蒸汽蒸汽蒸汽蒸汽灭灭菌菌菌菌锅锅在在在在121121、 0.1MPa 0.1MPa条件条件条件条件下下下下灭灭菌菌菌菌151520min20min。操作按。操作按。操作按。操作按仪仪器操作步器操作步器操作步器操作步骤进骤进展。展。展。展。灭灭菌后待菌后待菌后待菌后待压压力下降到力下降到力下降到力下降到0Pa0Pa时时取出，凝固后待用。取出，凝固后待用。取出，凝固后待用。取出，凝固后待用。4. 4. 接种接种接种接种进进入无菌室，用入无菌室，用入无菌室，用入无菌室，用7070乙醇擦洗双手和任乙醇擦洗双手和任乙醇擦洗双手和任乙醇擦洗双手和任务务台面，点燃酒精灯。台面，点燃酒精灯。台面，点燃酒精灯。台面，点燃酒精灯。解开三角瓶的解开三角瓶的解开三角瓶的解开三角瓶的绳绳子，将三角瓶按运用先后子，将三角瓶按运用先后子，将三角瓶按运用先后子，将三角瓶按运用先后顺顺序排好。序排好。序排好。序排好。再次消毒双手和任再次消毒双手和任再次消毒双手和任再次消毒双手和任务务台面，取出无菌台面，取出无菌台面，取出无菌台面，取出无菌滤纸滤纸，用无菌水，用无菌水，用无菌水，用无菌水润润湿。湿。湿。湿。在火焰在火焰在火焰在火焰边边翻开三角瓶的封口翻开三角瓶的封口翻开三角瓶的封口翻开三角瓶的封口纸纸，烧烧灼瓶口和灼瓶口和灼瓶口和灼瓶口和镊镊子，待子，待子，待子，待镊镊子冷子冷子冷子冷却后取出无菌苗，放置在无菌却后取出无菌苗，放置在无菌却后取出无菌苗，放置在无菌却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸滤纸上。上。上。上。剪成剪成剪成剪成5 510mm10mm小段根部去掉部分根尖，叶片去叶小段根部去掉部分根尖，叶片去叶小段根部去掉部分根尖，叶片去叶小段根部去掉部分根尖，叶片去叶缘缘后剪成后剪成后剪成后剪成50mm250mm2左右的小片，每平皿接种左右的小片，每平皿接种左右的小片，每平皿接种左右的小片，每平皿接种3 35 5段片。每段片。每段片。每段片。每组组接种接种接种接种8 8瓶，根、茎段、茎尖、叶各瓶，根、茎段、茎尖、叶各瓶，根、茎段、茎尖、叶各瓶，根、茎段、茎尖、叶各2 2瓶。瓶。瓶。瓶。光照培育箱光照培育箱光照培育箱光照培育箱2525暗培育。暗培育。暗培育。暗培育。作业作业1.1 1周周周周后后后后察察察察看看看看培培培培育育育育体体体体系系系系有有有有无无无无污污染染染染，计计算算算算每每每每一一一一个个个个平平平平皿皿皿皿内内内内染染染染菌菌菌菌外外外外植植植植体体体体数数数数和和和和外外外外植植植植体体体体外外外外的的的的菌菌菌菌落落落落数数数数，分分分分析析析析染染染染菌菌菌菌缘缘由。由。由。由。2.1 1周周周周后后后后计计算算算算每每每每种种种种外外外外植植植植体体体体的的的的愈愈愈愈伤伤组组织织诱诱导导率率率率构构构构成成成成愈愈愈愈伤组织伤组织的外植体数的外植体数的外植体数的外植体数/ /总总接种外植体数接种外植体数接种外植体数接种外植体数100100。实验报告内容实验报告内容n n实验称号实验称号n n实验目的实验目的n n实验原理实验原理n n实验资料和器具实验资料和器具n n实验步骤实验步骤n n实验结果与分析实验结果与分析