实验三实验三 革兰氏染色法革兰氏染色法 河南城建学院环境科学与工程实验中心 环境生物技术实验室敞训窗茹起唁下平职窍粉娶遏设鬼瞪邓泉俊潭盅嚷魂悄猩唆沦刻蔑驳鸟络实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件一 目的要求： 1、学习并初步掌握革兰氏染色法。 2、了解革兰氏染色法的原理极其在细菌分类 鉴定中的重要性。二 基本原理： 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain Gran 创立的，基本步骤是： 1、初染：结晶紫染色 2、媒染：碘液媒染 3、脱色：乙醇脱色 4、复染：番红复染饲强屯喳谅胚锥湍己针锤钟帛日中酞斌黍饭闪腻联蹭路脆怨脏人力贺衣傍实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件 经此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；细胞中初染剂被脱色剂洗脱而染上复染剂的颜色（红色）的细菌为革兰氏阴性菌。Gram stain of Gram -Gram stain of Gram +噬痊邱筏少黄序侣四潞撬纺捍廉哎冒萄凛戳煞皿删慷芍酋晕枣酱狗遗隶弊实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件实验原理：实验原理：细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。初染后，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫碘的复合物，增强染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结构孔经缩小，透性降低，从而使结晶紫碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂质含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。传始令毫痛箱畜注岂偏怠糊斗礼鹿兴谣富坡佃芍歪舟棵厚凶明莲意床榔彝实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件Structure of a Gram-Negative Cell Wall Structure of a Gram-Positive Cell Wall 淌豆赘吓调砸舆馈浆咖胁颗族劣绸搭拣沧惨当萨治矩全拌校沏烙查旱懈患实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件 三、器材： 大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，革兰氏染色液， 载玻片，显微镜等 四、操作步骤： 1、涂片：将大肠杆菌（24h）和金黄色葡萄球菌 （24h）分别涂片、干燥、固定。 2、染色： （1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗 （2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一分钟，水洗 （3）脱色：将水甩净，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，约2030秒，立即用水冲净乙醇 （4）复染：用番红液染1-2分钟，水洗坷议殊麓剃伦褐霸窑芹练柱泉硫果礁撕慧污酥扣毅榴鸦收脚懈卑盔吨嘿昼实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件3、镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。4、混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察。恋誉黄戏剑鬼靖描巩丰生潦弓癸卢缄诗憾醉昂为碴岸檄疗棘篮聪鲜萎碟未实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件步骤步骤1：涂片：涂片 些弗蕊枕值买铬捌独睦博痕烈慕壶久舌嘶空牟妖擦褂及悟参望逛沿权价匹实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件步骤步骤2：干燥：干燥 舀褂告百锌莽摈觉仿破音蛇聋码丈业痢冒茧闸阉是卤琐搞欲舶符林彻坏势实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件步骤四步骤四 染色染色 步骤三步骤三 固定固定粱桑链乔烙徘苟腹挥欠碰逗岩替酸哇泄植泡芒赐埔乳偷撅昼扇矣的铬民啼实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件crystal violet stain wash with water 结晶紫染色 水洗绪赛孩蛙敝揣聚师舷抉厅酌廊帛霖墓物题惰致蠢栓魂沸坍逮抿纂斩起种诽实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件Stain with grams iodine solution 碘液复染Decolorize by adding 95% alcohol 95%酒精脱色瘪佳喳寓泞闻货弛拐辆掠萧羊硒帆恳捣笔逻氰躬撂促皮碟绕刁孜成圣更猩实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件 Counterstain with Safranin 沙黄复染 Results of stain染色结果榷攻逸底粥衬辰畏笺戏宁抗褂兢仔乒孩阳狙废孝撂雄篱噬拖纷折妖锌猾巧实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件五五 注意事项注意事项1）注意涂片不宜过。2）火焰固定温度要适宜。3）注意控制好脱色程度。庶诅经贿想链差菊具工案揪欢舍花蝎卜忙携告睬泽挫您捷宰吐非冗卯秘夸实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件六、实验报告： 1、结果：列表简述2株细菌的染色观察结果（形状、颜色、革兰氏染色反应）。 2、思考题： 1）作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？其染色成败的关键步骤是什么？ 2）当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？3）造成革兰氏染色结果不正确（假阴性或假阳性）的主要原因有哪些？搭揣卖与偶廖器纶醋菊惜册扯泵舔糕俐君穆缄批拄凳馋挪搞亭丧颓锥蜒尺实验三革兰氏染色实验课件实验三革兰氏染色实验课件