实验性急性肾功能不全实验性急性肾功能不全实验性急性肾功能不全实验性急性肾功能不全武汉大学基础医学院武汉大学基础医学院武汉大学基础医学院武汉大学基础医学院武汉大学基础医学院武汉大学基础医学院病生教研室病生教研室病生教研室病生教研室病生教研室病生教研室 急急 性性 肾肾 功功 能能 不不 全全（Acute Renal insufficiency, ARI）各种病因引起各种病因引起双侧肾脏双侧肾脏在在短期短期内泌尿功能内泌尿功能急剧降低，导致机体内环境出现严重紊乱的急剧降低，导致机体内环境出现严重紊乱的病理生理过程。病理生理过程。了解实验性肾功能不全动物模型复制方法了解实验性肾功能不全动物模型复制方法观察升汞中毒家兔的一般状态，尿的变化、观察升汞中毒家兔的一般状态，尿的变化、血浆尿素氮水平以及肾脏大体形态改变血浆尿素氮水平以及肾脏大体形态改变根据实验指标，分析讨论急性肾功能不全的根据实验指标，分析讨论急性肾功能不全的病理生理变化病理生理变化实实 验验 目目 的的实验动物及模型复制的原理实验动物及模型复制的原理原原 理理 肾毒物肾毒物HgCl2 引起家兔肾小管引起家兔肾小管变性、坏死，导致严重的肾变性、坏死，导致严重的肾脏功能不全。脏功能不全。观观 察察 指指 标标 临床变化临床变化对象对象手术操作手术操作指指 标标GFRGFR下降、尿下降、尿量下降量下降 尿液尿液膀胱插管膀胱插管尿量尿量尿成分改变尿成分改变蛋白尿、血尿和管型蛋白尿、血尿和管型氮质血症氮质血症血液血液颈动脉插管颈动脉插管血浆尿素氮水平血浆尿素氮水平肾脏形态改肾脏形态改变变肾脏肾脏兔尸体解剖兔尸体解剖肾脏色泽、体积、皮肾脏色泽、体积、皮质条纹等质条纹等与对照家兔做比较：与对照家兔做比较：实实 验验 步步 骤骤1. 复制模型（已完成）复制模型（已完成）实验组实验组 HgCl2 肌肉注射肌肉注射 对照组对照组 NaCl 肌肉注射肌肉注射 (1) 称重麻醉称重麻醉: 腹腔注射腹腔注射20%乌拉坦，乌拉坦，5ml/kg2. 手术及操作手术及操作剑突剑突耻骨耻骨联合联合部位：部位：左下腹近腹中左下腹近腹中线线1cm方法：方法：与腹壁呈与腹壁呈45进进针，进入腹腔有落针，进入腹腔有落空感，回抽无血、空感，回抽无血、肠内容物，缓慢推肠内容物，缓慢推注注效果判断：效果判断：肌肉松弛，肌肉松弛，自然卧倒，眼睑反自然卧倒，眼睑反射迟钝，钳夹皮肤射迟钝，钳夹皮肤无反应等无反应等（2 2）固定备皮）固定备皮：固定：固定：备皮：备皮： 颈部正中：甲状软骨颈部正中：甲状软骨- - 胸骨上缘胸骨上缘 下腹正中：耻骨联合上下腹正中：耻骨联合上1 15cm5cm（3 3）膀胱插管收集尿液）膀胱插管收集尿液）膀胱插管收集尿液）膀胱插管收集尿液下腹部切口，分离组织，暴露膀胱下腹部切口，分离组织，暴露膀胱下腹部切口，分离组织，暴露膀胱下腹部切口，分离组织，暴露膀胱注射器抽膀胱内尿注射器抽膀胱内尿注射器抽膀胱内尿注射器抽膀胱内尿3ml(3ml(备用备用备用备用) )荷包缝合（荷包缝合（荷包缝合（荷包缝合（膀胱无血管区）膀胱无血管区）膀胱无血管区）膀胱无血管区）膀胱插管膀胱插管膀胱插管膀胱插管C左颈总动脉左颈总动脉迷走神迷走神经经颈内静脉颈内静脉胸骨舌骨肌胸骨舌骨肌胸锁乳突肌胸锁乳突肌（4 4 4 4）左颈总动脉插管）左颈总动脉插管）左颈总动脉插管）左颈总动脉插管分离分离抗凝抗凝 耳缘静脉耳缘静脉 肝素肝素(1ml/kg)插管插管左颈总动脉插管左颈总动脉插管3.3.远心端，远心端，4545剪口，约为管径的剪口，约为管径的1/21/24.4.朝心脏方向插管朝心脏方向插管 23cm并固定并固定颈颈总总动动脉脉1.1.结扎远心端结扎远心端12.2.夹闭近心端夹闭近心端2近心端近心端心脏心脏远心端远心端头部头部（5 5 5 5）尿液镜检，计录管型数和细胞数（）尿液镜检，计录管型数和细胞数（）尿液镜检，计录管型数和细胞数（）尿液镜检，计录管型数和细胞数（10101010个视野）个视野）个视野）个视野）管型管型（低倍镜）（低倍镜）细胞细胞（高倍镜）（高倍镜）（6 6 6 6）尿蛋白定性检查）尿蛋白定性检查）尿蛋白定性检查）尿蛋白定性检查取尿液取尿液取尿液取尿液3ml3ml3ml3ml于试管中于试管中于试管中于试管中酒精灯上加热至沸腾酒精灯上加热至沸腾酒精灯上加热至沸腾酒精灯上加热至沸腾若混浊，加入若混浊，加入若混浊，加入若混浊，加入5%5%5%5%醋酸醋酸醋酸醋酸3-53-53-53-5滴滴滴滴再煮沸再煮沸再煮沸再煮沸尿变清，尿内有尿酸盐尿变清，尿内有尿酸盐尿变清，尿内有尿酸盐尿变清，尿内有尿酸盐 混浊加重，尿中有蛋白混浊加重，尿中有蛋白混浊加重，尿中有蛋白混浊加重，尿中有蛋白 程度程度等级等级蛋白含量（蛋白含量（g%）清晰清晰0.5（6 6）尿蛋白定性检查）尿蛋白定性检查（7 7 7 7）血浆尿素氮测定）血浆尿素氮测定）血浆尿素氮测定）血浆尿素氮测定 原理：原理：原理：原理：血液中尿素在强酸条件下与二乙酰血液中尿素在强酸条件下与二乙酰血液中尿素在强酸条件下与二乙酰血液中尿素在强酸条件下与二乙酰- - - -肟和氨肟和氨肟和氨肟和氨硫脲（硫脲（硫脲（硫脲（DAM-TSCDAM-TSCDAM-TSCDAM-TSC）共煮沸，生成红色复合物，颜色）共煮沸，生成红色复合物，颜色）共煮沸，生成红色复合物，颜色）共煮沸，生成红色复合物，颜色深浅与尿素氮含量成正比例关系，用分光光度计深浅与尿素氮含量成正比例关系，用分光光度计深浅与尿素氮含量成正比例关系，用分光光度计深浅与尿素氮含量成正比例关系，用分光光度计测定测定测定测定ODODODOD值，可计算出尿素氮含量。值，可计算出尿素氮含量。值，可计算出尿素氮含量。值，可计算出尿素氮含量。方法方法 每组自颈总动脉取血每组自颈总动脉取血10ml10ml到离心管到离心管, ,离心离心,3000rpm 10min,3000rpm 10min,吸出上层血浆置于干净试管中备用；吸出上层血浆置于干净试管中备用； 按下表加入试剂按下表加入试剂：试剂（试剂（mlml）空白管空白管标准管标准管测定管测定管(ABCD)(ABCD)血浆血浆 - - - -0.020.02水水0.50.50.10.10.50.5尿素氮标准液尿素氮标准液- -0.40.4- -DAM-TSCDAM-TSC0.50.50.50.50.50.5酸混合液酸混合液4.04.04.04.04.04.0 各管加好混匀后置沸水锅中煮沸各管加好混匀后置沸水锅中煮沸各管加好混匀后置沸水锅中煮沸各管加好混匀后置沸水锅中煮沸10min10min，流水中冷却，流水中冷却，流水中冷却，流水中冷却3min3min后后后后测测测测ODOD值（值（值（值（520nm520nm波长）波长）波长）波长）, ,先以空白管调零，再读取测定管值；先以空白管调零，再读取测定管值；先以空白管调零，再读取测定管值；先以空白管调零，再读取测定管值； 计算：计算：计算：计算：测定管光密度测定管光密度(Du)标准管光密度标准管光密度(Ds)0.0021000.02=DuDs10血浆尿素氮血浆尿素氮(mg%)=（8 8 8 8）形态学观察）形态学观察）形态学观察）形态学观察将家兔处死（耳缘静脉注入空气将家兔处死（耳缘静脉注入空气将家兔处死（耳缘静脉注入空气将家兔处死（耳缘静脉注入空气510ml510ml）, , , ,取出肾脏；取出肾脏；取出肾脏；取出肾脏；观察并比较两组家兔肾脏的大体形态，如体积大小，表观察并比较两组家兔肾脏的大体形态，如体积大小，表观察并比较两组家兔肾脏的大体形态，如体积大小，表观察并比较两组家兔肾脏的大体形态，如体积大小，表面色泽，皮质条纹及色泽等。面色泽，皮质条纹及色泽等。面色泽，皮质条纹及色泽等。面色泽，皮质条纹及色泽等。实实 验验 流流 程程 概概 括括1. 复制模型复制模型（已完成）（已完成）(1) 称重麻醉称重麻醉: 腹腔注射腹腔注射20%乌拉坦，乌拉坦，5ml/kg2. 手术操作及检测指标手术操作及检测指标(2) 固定备皮：固定备皮：(3) (3) 膀胱插管收集尿液膀胱插管收集尿液膀胱插管收集尿液膀胱插管收集尿液(4) 左颈总动脉插管左颈总动脉插管(5) 尿液镜检，计录管型数和细胞数（尿液镜检，计录管型数和细胞数（ 10个视野）个视野）(6) 尿蛋白定性检查尿蛋白定性检查(7) 血浆尿素氮测定血浆尿素氮测定实验报告的书写实验报告的书写实验目的实验目的实验目的实验目的实验步骤（简明扼要）实验步骤（简明扼要）实验步骤（简明扼要）实验步骤（简明扼要）实验结果实验结果实验结果实验结果实验项目实验项目 中毒家兔中毒家兔 对照家兔对照家兔 尿尿液液检检查查 尿液镜检尿液镜检 尿蛋白检查尿蛋白检查尿量尿量血浆尿素氮测定血浆尿素氮测定 肾脏大体形态肾脏大体形态 分析讨论分析讨论分分 析析 讨讨 论论根据本实验结果，分析升汞引起急性肾功能衰竭的根据本实验结果，分析升汞引起急性肾功能衰竭的 机制机制结合本实验结果，分析各种现象产生的机理结合本实验结果，分析各种现象产生的机理